SU1643612A1

SU1643612A1 - Medium for testing bactericidal potential of disinfecting agents

Info

Publication number: SU1643612A1
Application number: SU884418138A
Authority: SU
Inventors: Иван Андреевич Дудницкий; Татьяна Григорьевна Путина
Original assignee: Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии
Priority date: 1988-04-26
Filing date: 1988-04-26
Publication date: 1991-04-23

Abstract

Изобретение относитс к ветери-( нарии и касаетс отбора дезинфицирующих средств. Цель - повышение точности выделени атипичных микобактерий .. Среда дл определени бак- терицидности дезинфицирующих средств выделением микобактерий содержит1 агар-агар, хлористый натрий, пептон, картофельный отвар, глицерин, сыворотку крови лошадей и дистиллированную воду, вз тые в определенных количественных соотношени х. 3 табл.The invention relates to veterinary medicine (for example, and concerns the selection of disinfectants. The goal is to improve the accuracy of the release of atypical mycobacteria. The medium for determining bactericidal activity of disinfectants by secreting mycobacteria contains 1 agar-agar, sodium chloride, peptone, potato broth, glycerin, horse serum and distilled water, taken in definite quantitative ratios, table 3.

Description

Изобретение относитс к сельскому хоз йству и медицине и может быть использовано при определении бакте- рицидности химических препаратов в отношении микобактерий.The invention relates to agriculture and medicine and can be used in determining the bactericidal properties of chemicals against mycobacteria.

Целью изобретени вл етс повышение точности выделени атипичных микобактерий.The aim of the invention is to improve the accuracy of the secretion of atypical mycobacteria.

Пример 1.В чашки Петри разливают по 15 мл питательной среды, имеющей следующий состав при минимальном значении соотношени компонентов , г/л: агар-агар 16,0; хлорид натри 0,6; пептон 10,0j картофельный отвар 4,5; глицерин 1,0; сыворотка крови лошадей 150,0; дистилли рованна вода - до 1,0 л рН 6,7Example 1. In Petri dishes pour 15 ml of nutrient medium having the following composition with the minimum ratio of the components, g / l: agar-agar 16.0; sodium chloride 0.6; peptone 10,0j potato decoction 4.5; glycerol 1.0; horse serum 150.0; distilled water - up to 1.0 l pH 6.7

Дл приготовлени среды 300 г очищенных клубней картофел кип т т в 1 л дистиллированной воды в течение 10 мин. Затем отвар фильтруют через тонкий слой ваты или 2-3 сло марлиTo prepare the medium, 300 g of peeled potato tubers are boiled in 1 liter of distilled water for 10 minutes. Then the broth is filtered through a thin layer of cotton or 2-3 layers of gauze

К полученному Отвару добавл ют 1% хи- .мически чистого глицерина и к этому объему прибавл ют 16,0 г агар-агара, 0,6 г натри хлорида и 10,0 г пептона . Устанавливают рН 6,7. Стерилизуют автоклавированием 15 мин при 1 атм. Охлаждают до 45°С и асептически добавл ют 150 мл сыворотки крови лошадей , избега образовани пузырьков воздуха, тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. После этого среду подсушивают при 37°С 40-60 мин до полного удалени следов конденсата на ее поверхности, засевают суспензией 5-7-суточной взвесью тест- культур микобактерий: т.В-5 или т,fortuitum, или 12 суточной m.avium, в количестве О,1 мл, приготовленной по оптическому стандарту мутности ОСО ГНИИСК на 10 ед., что соответствует содержанию 6,1x10 бактериаль1 ных клеток в 1 мл. Засев тест-культуTo the resulting broth, 1% of chemically pure glycerol was added, and 16.0 g of agar-agar, 0.6 g of sodium chloride and 10.0 g of peptone were added to this volume. The pH is adjusted to 6.7. Sterilized by autoclaving for 15 minutes at 1 atm. The mixture is cooled to 45 ° C and 150 ml of horse serum are aseptically added, avoiding the formation of air bubbles, mixed thoroughly and poured into Petri dishes. After that, the medium is dried at 37 ° C for 40-60 minutes until the traces of condensate are completely removed on its surface, seeded with a suspension of 5-7 days suspension of mycobacterial test-cultures: TBB-5 or t, fortuitum, or 12 daily m.avium , in the amount of 0 ml, prepared according to the optical standard of turbidity of the CCA GNIISK per 10 units, which corresponds to a content of 6.1 x 10 bacterial cells per 1 ml. Sowing test cult

ры производ т сплошным равномерным газоном с помощью стекл нного шпате л до полного впитывани взвеси в толщу пластины среды в чашке Петри,They are made in a uniform uniform lawn with glass spar until the suspension is completely absorbed into the plate of the medium in a Petri dish,

Из обеззоленных стандартных фильт- ров с помощью сверл изготавливают диски диаметром 5-10 мм. Испытуемый препарат - натриева соль дихлоризо- циануровой кислоты (NaDXHHK) - раз- вод т на стерильной дистиллированной воде в лунках серологического макро- планшета с помощью микродозатора, В каждую лунку внос т стерильный диск (на 3-5 мин), извлекают и накладыва- ют его на засе нную тест-культурой микобактерий среду в чашке Петри,Дис- ки располагают по 3-6 шт в одной чашке на рассто нии 25 мм друг от друга. Посевы инкубируют 48-72 ч при 37°С в положении крышками вверх. Вокруг дисков с разведени ми препарата, обладающими бактерицидным или бакте- риостатическим эффектом, образуютс зоны подавлени (задержки) ростаDisks with a diameter of 5-10 mm are made from de-ashed standard filters using drills. The test preparation — sodium salt of dichloro-isocyanuric acid (NaDXHHK) —was diluted with sterile distilled water in the wells of a serological macro- plate using a microdosing unit. A sterile disk was added to each well (for 3-5 minutes), removed and applied; It is sown on the test-cultured mycobacterial medium in a Petri dish, Disks are placed on 3-6 pieces in one dish 25 mm from each other. Crops incubated for 48-72 h at 37 ° C in the position of the caps up. Around the discs with a dilution of the drug, having a bactericidal or bacteriostatic effect, zones of growth are inhibited.

тест-культуры.test culture.

Результаты сравнени базовых (Ле- венштейна-Йенсена Петрань ни, Гель- берга), и предлагаемой сред при определении эффективности препарата МаДХИЦК представлены в табл,:1The results of the comparison of the baseline (Leenstein-Jensen Petrani, Gelberg) and the proposed media in determining the efficacy of the MADHICC preparation are presented in the table: 1

шадей 200,0; дистиллированна вода до 1-л, рН 7,0, Приготовление питательной среды, препарата ЫаДХИЦК и тест-культур микобактерий провод т аналогично описанному в примерах 1 и 2,Shadey 200.0; distilled water up to 1-l, pH 7.0. Preparation of the nutrient medium, the preparation of NaHYCC and mycobacterial test cultures is carried out as described in examples 1 and 2,

Результаты сравнени базовых (Левенштейна-Йенсена, Петрань ни, Гельберга) и предлагаемой сред при определении эффективности препарата ЫаДХИЦК представлены, в табл, 3,The results of the comparison of the baseline (Levenshteyn-Jensen, Petrani, Helberg) and the proposed media in determining the effectiveness of the drug NaHICC are presented in Table 3

Из табл,1-3 видно, что точность выделени тест-культур и определени степени бактерицидности в среднем в 1,6 раза выше, ускорение роста мико- бактерий (получение ответа) в 2-Tables 1–3 show that, on average, the accuracy of isolating test cultures and determining the degree of bactericidal activity is 1.6 times higher, accelerating the growth of mycobacteria (obtaining a response) in 2–

3,5 раза быстрее, а выход биомассы в 1,5 раза больше в предлагаемой среде , чем в известной.3.5 times faster, and biomass yield is 1.5 times more in the proposed environment than in the known one.

На осуществление эксперимента (работы ) с применением предлагаемой среды затрачиваетс на 2-3 ч меньше, чем с применением базовых ичных сред. Кроме этого, предлагаема среда позвол ет удешевить определение бактерицидности химических препаратов в отношении микобактерий в 5 раз.The implementation of the experiment (work) with the use of the proposed medium is spent for 2-3 hours less than with the use of basic test media. In addition, the proposed environment makes it possible to reduce the cost of determining the bactericidal behavior of chemicals in relation to mycobacteria by 5 times.

Claims

Formula of invention

Example 2, In Petri dishes poured into 15 ml of nutrient medium having the following composition with the maximum number of components, g / l: agar-agar 30,0; sodium chloride 5.5; peptone 20.0; potato broth 10.0; glycerin 4.0; horse serum 300.0; distilled water - up to 1 l, pH 7;

2. Preparation of the medium, KADHYCC preparation and mycobacterial test cultures is carried out as described in Example 1, Comparison results of the use of baseline (Leveystein-Jensen, Petrani Ne, Gelberg) and the proposed media when determining the effectiveness of NaHITCC preparation are presented in Table 2.

An example. 3, In a Petri dish poured into 15 ml of nutrient medium having the following composition with the optimum content of the components, g / l: agar agar 20.0; peptone 15.0; sodium chloride 5.0; potato broth 5,0; glycerin 3.0; blood serum

The medium for determining the bactericidal properties of disinfectants by the secretion of mycobacteria, containing the product of potatoes, glycerin, sodium chloride, and distilled water, which means that, in order to improve the accuracy of the secretion of atypical mycobacteria, the medium additionally contains peptone, agar-agar and horse blood serum, and potato broth is used as a potato product in the following ratio of components, g / l water: Agar-Agar 16.0-30.0

Chloride

sodium 0.6-5.5

Pepto 10.0-20.0

Potato decoction4.5-10.0 GlycerolI, 0-4.0 Horse serum 150.0-300.0 Distilled water. Up to 1 l

44,244.3 44,062,263,3

62.0

-J4

Biomass yield of the test culture with 1 medium, mg Growth of the test culture (response time), days The magnitude of the bactericidal dilution of the test preparation (NADHYTSK) (degree of bactericidal). mg /% 4.439 4,439 4,4396,214 6,214 6,214

Note. I - test culture of t.V-5, II - m0fortuiturn,

III - m.avium.

table 2

.

44.2 44,344.0

14

3.171 3.571 3.171

Note I - test-class & tour of t.V-5, II - m.foruitum,

III - m.avium.

Table I

62.0

6.214

-J4

4.4

63.2 63.3

63.0

14

6,214 6,2146,214

44,244,544,0

7714

4,4394,439 4,439

Note. I - test culture ga.V-5, II - m.fortuitum,

III - m.avium.

Table 3

63,263.3 63.0

227 6.214 6.214 6.214