SU1604841A1 - Способ реверсии L-форм микобактерий туберкулеза - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии, в частности к диагностике туберкулеза. Цель изобретени  - упрощение и ускорение способа. Исследуемый материал подращивают в полужидкой питательной среде дл  микобактерий, затем культуру пересевают на плотную  ичную среду, например Левенштейна-Йенсена или Финна-П. Посев осуществл ют однократно, локально в центр среды, количество посевного материала 0,1-0,2 мл. Ежедневно готов т окрашенные микроскопические препараты дл  вы влени  кислотоустойчивых форм микобактерий туберкулеза. При исследовании свежей культуры, начина  с 2-4 сут, происходит реверси  L-форм. На 6-7 сут процесс реверсии завершаетс . 1 з.п.ф-лы.

Description

Изобретеиие относитс  к медицин- ;ской микробиологии, в частности к диагностике туберкулеза.

Цель изобрете1{и  - упрощение и ускорение способа.

Способ заключаетс  в следующем. На чашке Петри с плотной личной средой Левенытейна-Йенсена или Финна- II платиновой петлей очерчивают окружность диаметром приблизительно 1,5 см. Стерильной пипеткой набирают культуру L-форм, выращенную из патологического материала на модифицированной среде Школьниковой, и нанос т на очерченный круг в количестве 0,1-0,2 МП. Чашку Петри, помещают в - плотно закрытый полиэтиленовый мешок или пластиковый контейнер во избежание высыхани  среды и инкубируют при 37®С в течение 7 сут. Через кащ;ые сутки с поверхности среды в участке

посева, строго соблкща  правила асептики , берут мазок-отпечаток. Мазок окрашивают по- Цилю-Нильсену и микро- скопируют с иммерсионным объективом

чХ :7 )) ,

Начина  со 2 сут (иногда на 4- 6 сут) на фоне некислотоустойчи вых: синих шаров L-форм по вл ютс  ки- слотоустойчивы.е1о зерна и палочковидные ст-руктуры. В некоторых сл -ча х палочковидные формы сначапа могут быть некислотоустойчивыми (синий цвет), затем в них по вл ютс  красные кислотоустойчивые зерна и проис- ходит формирование кислотоустойчивых палочковидных микобактерий..

Дл  получени  культуры Т евертанта после недели культивировани  на чашке Петри соскоб с поверхности питательной среды в месте посева перенос т в жидкую среду Школьниковой с 10%

05

о

4;

оо

NU

сыворотки крупного рогатого скота или непосредственно на кос ки с  ичной средой Левенштейна-Йенсена или Финна-И.

Пример 1. Берут культуру L-форм микобактерий, выделенную из мокроты больного. Культуру выращивают на пол ужидкой среде Школьнико- вой в модификации Дорожковой. В мазке с исходной культуры при окраске по Цилю-Нильсену обнаружены зернистые шары L-форм микобактерий, пред- ставл юп 1е округлые образовани  синего цвета размером- около 5 мкм без  дра. Кислотоустойчивые микобактерий не обнаружены. Производ т посев культуры на чашку Петри с  ичной средой Левенштейна-Йенсена. Через каждые сутки готов т мазки-отпечатки с места посева. Уже через 24 ч в единичных шарах обнаруживают зернистые кислотоустойчивые микобактерий.

Дп  проверки воспроизводимости резуль тата способа опыт повторен через 2 мес: произведен повторно посев той же культуры, хранившейс  в хопо- дильнике, на чашку Петри со средой Левенштейна-Йенсена. Через 1 сут реверсии не наблюдалось, через 4 сут в зернистых шарах Ъ-форм обнаружены кислотоустойчивые зерна, а через 6 суТ и кислотоустойчивые палочки. Этот пример демонстрирует воспроизводимость результатов способа с не- которым удлинением времени реверсии, что может быть обусловлено длительным хранением культуры L-форм, приведшим к снижению ее жизнеспособности .

После пересева с чашки Петри на жидкую среду Школьниковой, а затем после недели культивировани  - на кос ки с плотной средой Левенштейна- Йенсена получена культура микобактерий , дающа  рост в виде гладких, пигментированных , оранжевых колоний, котора  быпа идентифицирована как скотохромогенна  атипична  культура

Одновременно из мокроты больного получен рост типичной культуры микрбактерий туберкулеза. Полученные даные о наличии у больного смешанной культуры микобактерий туберкулеза и L-форм микобактерий, реверсируюш х в атипичные микобактерий, позвол ют изменить тактику химиотерапии.

И р и м е р 2. Культуру L-форм, №1кобактерий, вьщеленную из лимфатического узла ребенка,засевают на чашку Петри с плотной  ичной средой Финна-11. При изучении мазков-от-- пёчатков, полученных через 1 и 2 сут, обнаружены лишь скоплени  синих некислотоустойчивых зернистых шаров. Через 3 сут зернистость тер ет четкость очертаний и распадаетс  на си- ние гомогенные облаковидные скоплени  , на фоне которых по вл ютс  кислотоустойчивые зерна. Через 4 сут в мазках вы вл ют кислотоустойчивые палочки. Через 20 дн,после пересева 5 на кос ки со средой Финна-11 получен типичный рост микобактерий, иденти- фицированных как микобактерий туберкулеза человеческого вида.

При гистологическом.исследовании 0 лимфатического узла, из которого получен рост L-форм микобактерий, реверсировавших затем в микобактерий туберкулеза, в нем обнаружены лишь казеозные массы без признаков актив-. 5 ного туберкулеза.

П р и м е р 3. Культуру L-форм, вьщеленную из экссудата больного (диагноз - плеврит не сной этиологии , ВК-), засевают на чашку Петри Of, со средой Левенштейна-Йенсена. .Последующей микроскопией мазков-отпечатков с чашки вы вл ют по вление кислотоустойчивых зерен и зернистых форм микобактерий на 4 сут после засева . После высека на  ичные среды получен рост бактерий туберкулеза человеческого вида. Реверси  подтверждает специфическую этиологию процесса, позвол ет уточнить диагноз дд и химиотерапевтическую тактику.

По сравнению с известным способом, предусматривающем проведение пассажей на куриных эмбрионах, предлагаемый способ более фост, не требует экспериментальных животных и позвол ет в более ранние сроки идентифи1щровать L-формы микобактерий.

50

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   1„ Способ реверсии L-форм микобактерий туберкулеза, включающий посев исследуемого материала в полужидкую питательную среду,пересев иинкубирова- ,55 1лие культуры,ежедневный бактериоскопи- х еский контроль инкубируемой- культуры и определение наличи  реверсии по по влению кислотоустойчивых форм.

   51604841 6

   отличающийс  тем, что,культуру внос т в количестве 0,1с целью упрощени  и ускорени  спосо-0,2 мл локально.

   ба, пересев культуры осуществл ют2. Способ по п. 1, о т л и ч а

   однократно на плотную элективнуюю щ и и с   тем, что в качестве

   среду дл  микобактерий, при этом элективной среды используют среду

   Левенштейна-Йенсена или Финна-.,