SU1597700A1

SU1597700A1 - Способ оценки содержани белка в семенах зерновых и зернобобовых культур

Info

Publication number: SU1597700A1
Application number: SU884419606A
Authority: SU
Inventors: Василий Дмитриевич Симинел; Илья Харлампиевич Киртока
Original assignee: Кишиневский Сельскохозяйственный Институт Им.М.В.Фрунзе
Priority date: 1988-05-04
Filing date: 1988-05-04
Publication date: 1990-10-07

Abstract

Изобретение относитс к биохимии растений и может быть использовано в работах по генетике и селекции зерновых и зернобобовых культур при оценке качества семенного материала. Целью изобретени вл етс повышение чувствительности анализа и обеспечение возможности сохранени жизнеспособности проанализированного материала. Основы предложенного способа оценки содержани белка составл ет нова совокупность методических приемов, включающа использование в качестве материала дл анализа эндосперма зерна на стадии 3-4-дневных проростков, экстракцию его спиртом и осуществление нингидриновой реакции в оптимальных дл развити окраски услови х. Указанна совокупность приемов позвол ет сократить количество эндосперма, необходимое дл проведени анализа до навески 20-40 мг, отбор которой из проросшего семени не сказываетс на его жизнеспособности. При этом результаты оценки содержани белка в зерновых и зернобобовых культурах новым способом четко коррелируют с данными аналогичных исследований, проведенных традиционными методами, не предусматривающими возможность последующего использовани проанализированных сем н дл получени урожа . Применение изобретени в практике селекционных работ позволит обеспечить надежный отбор высокобелковых сем н без дополнительной затраты на анализ ценного посевного материала. 5 табл.

Description

Изобретение относитс к биохимии растений и может быть использовано в работах по генетике и селекции зерновых и зернобобовых культур при оценке качества семенного материала.

Целью изобретени вл етс повышение чувствительности анализа и обеспе. чение возможности сохранени жизнеспособности .проанализированного материала .

Поставленна цель достигаетс благодар новой совокупности методичес- : ких приемов, включающей использование в качестве материала дл анализа эндосперма на стадии 3-4-дневных проростков , экстракцию его спиртом и осуществление нингидриновой реакции в строго определенных, специально подобранных услови х.

Предложенна совокупность приемов позвол ет сократить количество эндосперма , необходимое дл проведени анализа, до 20-40 мг, т.е. до количе- ства, отбор которого из проросшего семени не сказываетс на жизнеспособности проростка. Такие проростки после определени содержани белка могут быть использованы дл получени уро- жа .

Известные способы с применением нингидринового окрашивани не позвол ют провести четкую оценку степени белковости сем н при использовании количества эндосперма, достаточных дл анализа предлагаемым способом.

Результаты оценки содержани белка в. зерновых и зернобобовых предложенным и известным способами приведены в табл, 1,

Пример 1,В качестве объекта используют семена кукурузы ВИР-44, ВИР-237, сои Кишиневска 16 и Кировоградска Зо Семена высаживают в чашки Петри и проращивают в течение 3-4 дн. Затем при помощи стекл нной трубки с заостренным концом и нанесенной снаружи шкалой дл определени объема . отбирают часть эндосперма и помещают ее в пробирку, добавл ют 3 мл 80-70% него этанола и 1,5 мл 0,3-0,6%-ного раствора нингидрина в ацетоне. Смесь нагревают до кипени , охлаждают и вьг держивают при комнатной температуре 40 мин.

Интенсивность полученной фиолетовой окраски сопоставл ют с интенсивностью окраски эталона либо визуально , либо после измерени на ФЭКе.

Результаты исследовани вли ни отобранного количества эндосперма на интенсивность окрашивани и жизнеспособность сем н после анализа приведе- ны в табл. 2.

П р и м е р 2. Оценку содержани белка провод т как в примере 1, за исключением того, что во всех пробах используют 30 мг эндосперма, а коли- чество этанола дл экстракции .варьи- руют от 1,0 до 4,0 мл.

Результаты, иллюстрирующие зависимость интенсивности окрашивани от используемого дл экстракции объема спирта, приведены в табл. 3.

Пример 3. Определение содержани белка провод т как в приме- ре 1, за исключением того, что во вс

пробах используют 30 мг эндосперма, а количество добавл емого 0,3-0,6%-ного раствора нингидрина в ацетоне варьируют от 0,5 до 2,5 мл.

Результаты, демонстрирующие вли ние конечной концентрации нингидрина в пробе на интенсивность окрашивани , представлены в табл. 4.

Пример 4, Определение содержани белка в эндосперме .проросших сем н провод т по примеру 1, однако во всех пробах используют объем образца 30 мг, а врем выдержки после охлазвде- ни варьируют от 20 до 60 мин.

Зависимость интенсивности окраши- вани от времени приведена в табл, 5.

Из представленных экспериментальных данных следует, что благодар -ис- пользованшо семенного материала, обо- гащенного частично гидролизованным белком (сем н и зерновых после проращивани ), а также за счет подбора оптимальных условий дл проведени цветной реакции (табл. 2-5) достигаетс более высока интенсивность окрашивани материала., чем в известных методах с применением нингидриновой реакции ,. Это, в свою очередь, создает надежную осиобу дл повышени чувствительности анализа и обеспечивает воз- работы с малыми количествами эндосперма, отбор которых из проросшего семени не отражаетс на его жизнеспособности (табл. 2).

Применение изобретени в практике селекционных работ позволит обеспечить надежньй отбор высокобелковых сем н без дополнительной затраты на анализ ценного семенного материала.

Claims

Формулаизобретени

Способ оценки содержани белка в семенах зерновых и зернобобовых культур , включающий экстракцию семенного материала, обработку экстракта нингид риновым реактивом с последующим кип чением и охлаждением реакционной смеси и сравнение интенсивности окраски раствора с эталонными образцами, о т личающийс , тем, что, с целью повышени чувствительности способ и обеспечени возможности сохранени жизнеспособности проанализированного материала, экстракции подвергают пробу эндосперма пророщенных сем н в ко51597700g

личестве 20-40 мг, экстрагируют ее в рации нингидрина 0,060-0,24%, а после

кип чени и охлаждени пробу вьвдержи- вают при комнатной температуре 30 - 45 мин.

Таблица 1

2,5-3,5 мл 70-80%-ного этанола нинги дриновый реактив добавл ют в виде раствора в ацетоне до конечной концент

ла, мл

Количество нингид-

3,0

Количество этано-

Таблица 3

нингйдрина мл и его нцентра

эндоспер

этано

жки ран

0,50,028

(0,043-0,085)

1,0 .0,056

(0,06-0,12)

1,50,084

(0,1-0,2)

2,00,112

(0,12-0,24)

2,50,240

(0,136-0,27)

30.

3,040 .

Врем выдержки растТаблица 4

0,0240,13 0,14

0,045 . 0,26 0,24

0,0640,39 0,44

0,0850,52 0,59

0,2060,85 0,84

Таблица 5