SU1556678A1

SU1556678A1 - Способ выделени гликозаминогликанов из мочи

Info

Publication number: SU1556678A1
Application number: SU874353310A
Authority: SU
Inventors: Дмитрий Владимирович Косягин
Original assignee: Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии
Priority date: 1987-12-30
Filing date: 1987-12-30
Publication date: 1990-04-15

Abstract

Изобретение относитс к клинической биохимии и может быть использовано дл косвенной оценки степени т жести тканевых повреждений путем количественного определени очищенных гликозаминогликанов, выделенных из мочи. Цель изобретени - повышение выхода целевого продукта за счет более полного осаждени гликозаминогликанов. Образец мочи довод т до PH 6,0-6,5, обрабатывают этанолом в конечной концентрации 60%, выдерживают не менее 6 ч, определ ют осадок, раствор ют в 1-3 М водном растворе хлорида натри и повторно обрабатывают этанолом. Способ позвол ет повысить на 10-15% выход гликозаминогликанов и обеспечивает упрощение и ускорение выделени гликозаминогликанов. Способ можно использовать как диагностический тест дл косвенной оценки степени т жести повреждени соединительной ткани при различных заболевани х.

Description

Изобретение относитс к клинической биохимии и может быть использовано дл косвенной оценки степени т жести тканевых повреждений при различных заболевани х путем количественного определени выделенных и очищенных гликозаминогликанов (ГАГ) мочи.

Целью изобретени вл етс повышение выхода целевого продукта за счет более полного осаждени ГАГ.

Способ осуществл ют следующим образом .

Кислотно-щелочное состо ние мочи кор- регируют, довод до значени рН 6,0-6,5, при котором происходит максимальное осаждение ГАГ.

1 объем мочи смешивают с 1,6 объемами 96° этанола и оставл ют при температуре +4°С на срок не менее 6 ч дл образовани осадка. Сформировавшийс хлопьевидный осадок отдел ют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Осадок раствор ют в 1-3 М водном растворе хлористого натри , ГАГ переход т в раствор,

нерастворившиес частицы удал ют с помощью центрифугировани или фильтровани через среднепористый фильтр

Дл вторичного осаждени ГАГ к 1 объему центрифугата или фильтрата, содержащего ГАГ, прибавл ют 1,6 объема 96° этанола, смешивают и оставл ют не менее чем на 6 ч при температуре +4°С дл формировани осадка Осадок отдел ют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Определ ют в осадке ТАГ по концентрации вход щих в их состав углеводов или изучают их качественный состав.

Пример 1 При исследовании суточной мочи здорового человека из 1050 мл отобрали 20 мл, измерили рН, составивший 6,0 5 мл мочи смешали с 8 мл 96° этанола, оставили при +4°С На 6 ч Осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин на обычной лабораторной центрифуге в течение 30 мин. Осадок растворили в 4 мл 3 М водного раствора хлорида натри Нерастворенные частицы удалили с поСП СД

О5 С&

ч

00

мощью фильтровани через среднепористый фильтр. К 2 мл фильтрата добавили 3,2 мл 96° этанола, смешали и оставили при +4°С на 18 ч. Образовавшийс осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. В осадке определили содержание вход щих в состав ГАГ уроновых кислот карбазоловым способом. Пересчитали содержание уроновых кислот в ГАГ на всю суточную мочу, которое составило 2,2 мг. (При определении содержани ГАГ в моче известным способом оказалось 2,0 мг, т. е. выход по предлагаемому способу выше на 10%).

Пример 2. Больному с .переломом левой голени проведено исследование мочи предлагаемым способом. Из 1400 мл суточной мочи отобрали 20 мл, измерили рН, составивший 5, 7, добавлением 1 н раствора едкого натра и 1 н раствором сол ной кислоты довели рН мочи до 6,2. Вс дальнейша процедура выделени ГАГ проводилась по примеру 1, за исключением того, что осадок ГАГ раствор ли в 4 мл 1 М водного раствора хлорида натри и нерастворимые частицы удал ли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. За сутки выделено больным 4,3 мг. (При определении содержани ГАГ в моче известным способом оказалось 3,7 мг, выход по сравнению с прототипом выше на 16%).

Пример 3. При исследовании суточной мочи больного с переломом бедра из 1000 мл мочи отобрали 20 мл, измерили рН, который составил 6,5. Вс дальнейша процедура выделени ГАГ проводилась по примеру 1. Осадок ГАГ раствор ли в 4 мл 2 М водного раствора хлорида натри . За сутки выделено больным 5,4 мг. (При определении содержани ГАГ в моче известным способом оказалось 4,9 мг, т. е. выход повышен на 10%).

Предлагаемый способ выделени ГАГ из мочи позвол ет более полно получить целевой продукт (выход ГАГ повышаетс на 10-15%), ускорить и упростить процедуру

выделени ГАГ. Кроме того, в предлагаемом способе не используютс дефицитные реактивы , в частности цетил пиридин и йхлорид и цетилтриметиламмонийбромид.

Разработанный способ выделени ГАГ

из мочи позвол ет проводить исследовани количественного содержани ГАГ, их состава в моче человека и животных.

Claims

Формула изобретени

Способ выделени гликозаминогликанов из мочи путем коррекции рН образца осаждени гликозаминогликанов органическим соединением, выдерживани на холоде, отделени осадка, растворени осадка в водном

растворе соли, повторного осаждени этанолом , выдерживани на холоде и отделени целевого продукта, отличающийс тем, что, с целью повышени выхода целевого npot дукта, рН в образце мочи устанавливают 6,0-6,5, первое осаждение провод т добавлением этанола в конечной концентрации 60%, выдерживают смесь не менее 6 ч, а растворение осадка осуществл ют в 1-3 М водном растворе хлорида натри .