SU1553904A1 - Способ определени концентрации белка - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к биохимии, в частности к способам определени  концентрации белка в исследуемых жидкост х. Цель изобретени  - повышение точности способа. Дл  определени  концентрации белка готов т водный раствор бромфенольного синего, содержащий 10 - 13,5 об.% этанола, и к нему добавл ют 1/5 - 1/20 объемную часть раствора белка. Реакцию провод т в цитратном буфере при PH 3,0 - 3,2 и концентрации красител  5 - 8^.10^-5М. Содержание белка определ ют путем измерени  оптического поглощени  комплексов белка с красителем при λ 610 нм. Величина поглощени  линейно зависит от концентрации белка в диапазоне 10 - 100 мкг/мл (по сывороточному альбумину человека).

Description

Изобретение относитс  к биохимии, в частности к методам определени  концентрации белка в исследуемых жидкост х .

Цель изобретени  - повышение точности способа.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в реакции используют бромфеноло- вый синий в концентрации 5-8х10 М и цитратный буфер с рН 3,0-3,2.

На чертеже изображена зависимость величины оптической плотности от концентрации белка.

Пример 1. К 2,7 мл реактива (5 мг БФС + 11 мл этанола + 89 мл 0,05 М цитрат-буфера, рН 3,0) добавл ют 0,3 мл раствора сывороточного альбумина человека. Интенсивно перемешивают и через 1-2 мин измер ют поглощение при Л 610 нм. D х 0,475

против контрольной пробы (2,7 мл реактива + 0,3 мл ). Затем измер ют поглощение стандартной пробы, к которой было добавлено 0,3 мл сывороточного альбумина человека с концентрацией 0,5 мг/мл - стандарт (С cr). DCT 0,264. Определ ют концентрацию белка в исследуемом растворе по уравнению Сх DKCCT/DCT 0,475-0,5/0,264 0,90 мг/мл.

Пример 2. Процесс ведут аналогично примеру 1, за исключением того , что используют следующие концентрации сывороточного альбумина человека (САЧ): 10,20,40,60,80,100 мкг/мл.

При увеличении концентрации САЧ от 10 до 100 мкг/мл оптическа  плотность Dt1e линейно возрастает от 0,053 до 0,528.

ел

СП

Со со

Таким образом, линейна  зависимос оптического поглощени  от концентрации белка сохран етс  в диапазоне 10МОО мкг/мл.В то же врем  в спосо- беКпрототипе линейна  зависимость D и Cf|A(t аблюдаетс   только дл  узкого диапазона концентраций бецка (10-20 мкг/мл) и при СввАК„ 40 мкг/мл отклонение D от линейной зависимости составл ет уже 12%.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  -концентрации белка путем добавлени  к пробе с белком бромфенолового синего, растворенного в 10- 13,5%-ном подкисленном этаноле с последующим спектрофотометри- рованием при длине волны 610 нм, о т- личающийс  тем, что, с целью увеличени  точности способа, реакцию провод т в цитратном буфере с рН 3,0-3,2, а бромфенолоный синий добавл ют в концентрации 5-8x1О 5М.

   80 ЮОмкд/ы

   CfwKQ,