SU1534403A1

SU1534403A1 - Способ определени чувствительности организма к глюкокортикоидам при гломерулонефрите у детей

Info

Publication number: SU1534403A1
Application number: SU874237500A
Authority: SU
Inventors: Иван Григорьевич Шиленок; Диомид Владимирович Стефани; Ирина Харитоновна Бородинова
Original assignee: Горьковский медицинский институт им.С.М.Кирова; Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии
Priority date: 1987-04-27
Filing date: 1987-04-27
Publication date: 1990-01-07

Abstract

Изобретение относитс к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано дл определени эффективности глюкокортикоидной терапии у нефрологических больных. Целью изобретени вл етс повышение точности и упрощение определени чувствительности индивидуума к глюкокортикоидам при гломерулонефрите. Способ включает обработку лимфоцитов больного IN VITRO различными концентраци ми глюкокортикоида с последующей оценкой специфического св зывани гормона с лимфоцитами, о котором суд т по перераспределению под вли нием гормона IN VITRO известных субпопул ций лимфоцитов теофиллин-чувствительной и теофиллин-(ТФ)-резистетной. При увеличении ТФ-чувствительной субпопул ции лимфоцитов по сравнению с контролем (без обработки глюкокортикоидом) констатируют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам, а при отсутствии нарастани ТФ-чувствительной субпопул ции лимфоцитов констатируют резистентность индивидуума к гормону. Положительный эффект способа состоит в повышении точности определени чувствительности к глюкокортикоидам, котора доказываетс последующей гормональной терапией, и упрощении основных этапов выполнени способа.

Description

свидетельствует о чувствительное ги пациента к гормону, т.е. позвол ет предположить эффективность глюкокор- тикоиднон терапии, а отсутствие изменений количественного состава ТФ-чув- ствительной субпопул ции лимфоцитов свидетельствует о резистентности индивидуума к глюкокортикоидам.

Приме р. Кровь в количестве 3 мл берут натощак из локтевой вены в сбалансированный солевой раствор (3 мл) с гепарином (25ед./мл|, цент- ригЬугируют 20 мин при 3000 об/мин и 20 С; дважды отмывают по 15 мин при 1500 об/мин в среде 199, после чего подсчитывают концентрацию клеток в 1 мл и довод т ее до 2-10 в 1 мл средой 199. В 6 пробирок добавл ют по О,1 мл лимфоцитов и О,1 мл раство- ра преднизолона в разных концентраци х . Расчет дозы преднизолона осуществл ют исход из возможно-создаваемых концентраций его в крови при использовании терапевтических доз. Дл расчета был вз т произвольный вес (30 кг). Учитыва , что кровь составл ет 87% веса тела,объем (масса) ее будет равен 2,4 л. 45% составл ет клеточные элементы и 55% плазма, еле- довательно объем плазмы равен 1,3 л. Исход из дозы преднизолона 1 мг/кг его количество при весе 30 кг равно 30 мг. В 1,3л плазмы будет 0,03 г преднизолона (0,030:1300), в 1 мл

23-10 6, в 0,1 мл преднизолона . Готов т следующие разведени преднизолона в 1 мл 0,9%-ного раствора NaCl:

1 10

2-10 3-10 4-10 5-10

-5 -5

-s

1

2

3

4

5

66-10 S

После 45-минутной инкубации при 37°С лимфоциты отмывают средой 199, ресуспензируют и добавл ют 0,1 мл 5 мМ раствора ТФ. Инкубируют I ч при 37°С, дважды отмывают средой 199,

затем ресуспензируют, добавл ют 0,1 мл эритроцитов барана, инкубируют 10 мин при 37°С, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, затем оставл ют на 1 ч при 4 С, после чего фик- сируют 0,03 мл глютарового альдегида 20 мин, добавл ют избыток дистиллированной воды, центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин и делают мазки. Числ

с

0

5

Q

розеток подсчитывают в мазках посте фиксации в метиловом спирте и ки по Брате. За розетку принимаю лимфоцит, присоединивший 3 и более эритроцитов барана. Результаты выражают в процентах.

Если предварительна оСрлботка лимфоцитов преднизолоном in vitro приводит к уменьшению ТФ-резистентной субпопул ции с соответствующим возрастанием ТФ-чувствительной по сравнению с контролем (без обработки преднизолоном),констатируют чувствительность пациента к глюкокортикоидам . При отсутствии изменений соотношени ТФ-резистентной и ТФ-чувствительной субпопул ций констатируют ре- зистентность к глюкокортикоидной терапии .

Claims

Положительный эффект способа состоит в повышении точности определени чувствительности пациента к глюкокортикоидной терапии, о чем можно судить только после проведенного курса лечени . Кроме того, предлагаемый способ за счет использовани функционального подхода при оценке действи гормона на лимфоциты (путем регистрации перераспределени ТФ-резистентной и ТФ-чу твительной субпопул ций лимфоцитов ) значительно проще в исполнении в сравнении с известным. Формула изобретени

Способ определени чувствительности организма к глюкокортикоидам при гломерулонефрите у детей, включающий обработку лимфоцитов больного in vitro различными концентраци ми глмко- кортикоида с последующей оценкой изменени специфического св зывани гормона с лимфоцитами по сравнению с контролем, не содержащим глюкокор- тикоида, отличают ийс тем, что, с целью повышени точности и упрощени способа, оценку св зывани гормона с лимфоцитами провод т путем регистрации перераспределени под вли нием гормона субпопул иий лимфоцитов чувствительных и резистентных к теофиллину и при увеличении теофиллинчувствительной субпопул ции лимфоцитов определ ют чувствительность индивидуума к глюкокортикоидам , а при отсутствии нарастани теофиллинчувствительной субпопул ции лимфоцитов определ ют реэистентность индивидуума к глюкокортикоидам.