SU1529122A1

SU1529122A1 - Method of determining the content of glucose in biological fluids

Info

Publication number: SU1529122A1
Application number: SU874305445A
Authority: SU
Inventors: Владимир Трофимович Ивашкин; Валерий Юрьевич Васильев; Александр Александрович Токмаков; Юрий Евгеньевич Беляев; Николай Владимирович Ефимов
Original assignee: Военно-Медицинская Краснознаменная Академия Им.С.М.Кирова; Ленинградский государственный университет
Priority date: 1987-09-16
Filing date: 1987-09-16
Publication date: 1989-12-15

Abstract

Изобретение относитс к медицине, в частности к способам определени содержани глюкозы в биологических жидкост х. Способ осуществл етс путем добавлени к пробе ферментной системы, содержащий глюкооксидазу, пероксидазу, буфер, глицерин и индикаторное вещество, причем соотношение пробы, ферментной системы и индикаторного вещества составл ет 0,5:1,0:0,02-0,1 по объему. В качестве индикаторного вещества используют люминол в концентрации 10^-4-2^.10^-5 М, а определение глюкозы провод т по интенсивности хемолюминесценции.The invention relates to medicine, in particular to methods for determining glucose in biological fluids. The method is carried out by adding to the sample an enzyme system containing glucooxidase, peroxidase, buffer, glycerin and indicator substance, and the ratio of the sample, enzyme system and indicator substance is 0.5: 1.0: 0.02-0.1 by volume . As an indicator of the substance used luminol at a concentration of 10 ^-4 -2 ^. 10 ^-5 M, and the determination of glucose is carried out according to the intensity of chemiluminescence.

Description

Изобретение относитс к медицине, в частности к биохимии, к способам определени содержани глюкозы в биологических жидкост х. The invention relates to medicine, in particular to biochemistry, to methods for determining the content of glucose in biological fluids.

Цель изобретени - повьшение чувствительности .The purpose of the invention is to increase the sensitivity.

На чертеже представлена зависи- - мость средних значений интенсивности хемилюминесценции от количества глюкозы в интервале 0,5-40 мкг субстрата (по оси ординат - log интенсивности люминесценции , по оси абсцисс - log концентрации глюкозы в интервале 0,5-40 мкг) .The drawing shows the dependence of average values of chemiluminescence intensity on the amount of glucose in the range of 0.5–40 μg of substrate (ordinate axis — log luminescence intensity, on the abscissa axis — log concentration of glucose in the interval 0.5–40 μg).

Цель достигаетс тем, что в качестве индикатора в глюкооксидазную систему добавл ют люминол в концентрации 1 0 М, а полученный раствор исследуют методом хемилюминомет- рии.The goal is achieved by adding luminol at a concentration of 10 M as an indicator to the gluco-oxidase system, and the resulting solution is examined by chemiluminometry.

Способ осуществл ют следующим образом .The method is carried out as follows.

С целью определени содержани глюкозы в биологических жидкост х готов т следующий раствор.In order to determine the glucose content in biological fluids, the following solution is prepared.

Глюкооксидазна система - трис- . буфер 36,6 г, 56,6 г растворить в 50 мл воды, профильтровать, проверить рН (7,0), добавить 400 мл глицерина и до 1 л, затем растворить 600 мг глюкооксидазы и 50 мг пе- роксидазы хрена (раствор хранитс при 4°С в течение полугода).Glucooxid system - Tris. Buffer 36.6 g, 56.6 g dissolve in 50 ml of water, filter, check pH (7.0), add 400 ml of glycerin and up to 1 l, then dissolve 600 mg of glucooxidase and 50 mg of horseradish peroxidase (the solution is stored at 4 ° C for six months).

Водный раствор люминола 1,5-10 М -265,5 мг люминола на 1 л воды (хранитс в темноте при 4°С в течение мес ца ) .An aqueous solution of luminol 1.5-10 M is -265.5 mg luminol per liter of water (stored in the dark at 4 ° C for a month).

При определении количества глюкозы в моче берут О, 1 мл мочи, добав- . л ют 0,4 мл физраствора, полученный раствор сначала нагревают до 90 С, охлаждают и к нему добавл ют 1 мл глюкооксидазной системы, а затем добавл ют 100 мкл 1,5-10 М раствора люминола (до концентрации 10 М). Провод т инкубацию пробы в хемилюми- нометре при 37 С и определ ют интенсивность хеми;шминесценции раствора в течение 10 мин. (пиковое значениеWhen determining the amount of glucose in the urine take O, 1 ml of urine, add -. 0.4 ml of saline is poured, the resulting solution is first heated to 90 ° C, cooled and 1 ml of gluco-oxidase system is added to it, and then 100 µl of a 1.5-10 M solution of luminol is added (to a concentration of 10 M). The sample is incubated in a chemiluminometer at 37 ° C and the chemotherapy intensity is determined; the solution is mixed for 10 minutes. (peak value

SS

(Л(L

определ ют примерно на третьей минуте ) . При определении концентрации глюкозы используют калибровочную пр мую построенную в двойных логарифмических координатах по стандартным растворам глюкозы, выражагацую зависимость интенсивности хемилзоминесценции от концентрации глюкозы (чертеж),determined at about the third minute). When determining the glucose concentration, use is made of a calibration direct plotted in double logarithmic coordinates using standard glucose solutions, expressing the dependence of the chemiline-memory intensity on glucose concentration (drawing),

При определении глюкозы к О,1 мл крови добавл ют 0,4 мл физраствора, нагревают до 90°С, после охлаждени к пробе добавл ют 1 мл оксидазной системы и 50 мкл раствора люминола до концентрации , Дальнейшее определение проводитс также, как описано,When determining glucose, 0.4 ml of saline solution is added to 1 ml of blood, heated to 90 ° C, after cooling, 1 ml of the oxidase system and 50 µl of luminol solution are added to the sample. Further determination is also carried out as described

При определении концентрации глюкозы в среде инкубации клеток отбирают О,1 мл среды, добавл ют р,4 мл физраствора, 1 мл глюкооксидазной системы и стандартный раствор люминола до концентрации . Дальнейшие операции как описано,When determining the glucose concentration in the cell incubation medium, O, 1 ml of the medium is taken, p, 4 ml of saline, 1 ml of gluco-oxidase system and standard solution of luminol are added to the concentration. Further operations as described,

Зависимость средних значений мак- симумов интенсивности хемилюминесцен- ,ции от количества глюкозы в пробе вDependence of average values of maxima of chemiluminescence intensity on the amount of glucose in the sample in

интервале 0,5-АО мкг субстрата приведена на чертеже, она используетс как калибровочна при определении глюкозы в исследуемых образцах. Чувствительность определени - 0,5 мкг в пробе. Дл сравнени чувствительность метода-Л .Лойда, прин того за прототип, ,5 мкг в пробе.In the range of 0.5-AO µg substrate is shown in the drawing, it is used as a calibration for determining glucose in the samples under study. The detection sensitivity is 0.5 µg per sample. For comparison, the sensitivity of the method — L. Loyd, adopted as a prototype, is 5 μg per sample.

Claims

Invention Formula

The method of determining the glucose content in biological fluids by adding to the test sample an enzyme system containing glucooxidase, peroxidase, buffer, glycerol and indicator substance, followed by registration of the reaction product, characterized in that, in order to increase the sensitivity, is- luminol is used in a concentration of 10 -2.10 M, registration is carried out by measuring chemiluminescence, and the volume ratio of components in the sample: enzyme system: the indicator substance is O, t:, 0: O, 02-0, I.

18 IffS (Wmz)