SU152543A1

SU152543A1 -

Info

Publication number: SU152543A1
Application number: SU767595A
Authority: SU

Description

Известны способы выделени лейкоцитов из крови при помощи фитогемагглютинина, полученного из бобов, и синкола или поливинила .Methods are known for isolating leukocytes from the blood using phytohemagglutinin derived from beans and syncol or polyvinyl.

Указанные способы не обеспечивают достаточно высокого выхода лейкоцитов с небольшой примесью эритроцитов и низкой повреждаемостью .These methods do not provide a sufficiently high yield of leukocytes with a small admixture of erythrocytes and low damage.

В данном изобретении, с целью увеличени выхода лейкоцитов, снижени степени их повреждаемости, а также уменьшени примеси эритроцитов, к крови предварительно добавл ют раствор цитрата натри , а дл получени осадка лейкоцитов примен ют центрифугирование .In the present invention, in order to increase the yield of leukocytes, reduce the degree of their damageability, as well as reduce the admixture of erythrocytes, sodium citrate solution is added to the blood, and centrifugation is used to obtain a leukocyte sediment.

Фитогемагглютинин получают из бобов фасоли экстракцией 0,851%-ным раствором хлористого натри .Phytohemagglutinin is obtained from beans of beans by extraction with a 0.851% solution of sodium chloride.

Дл выделени лейкоцитов из крови в соответствии с предлагаемым способом в центрифужные пробирки наливают по 1 мл 2%-ного раствора цитрата натри и по 5 мл крови. После перемешивани прибавл ют рабочий раствор фитогемагглютикина в количестве 0,1 мл дл крови человека и 0,15 мл дл крови кроликов. (Дл получени рабочего раствора фитогемагглютинлна 10 мг препарата раствор ют в 1 мл подогретого до температуры 35-40° физиологического раствора). Затем в пробирки приливают по 1 мл синкола или поливинила, тщательно перемешивают и центрифугируют 1-2 мин при 1000 об/мин. К надосадочному слою прибавл ют физиологический раствор из расчета 1 ,: 3 и центрифугируют 7-8 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость отбрасывают, а оставшийс на дне осадок лейкоцитов про .мывают три раза физиологическим раствором и используют.In order to isolate leukocytes from the blood in accordance with the proposed method, 1 ml of 2% sodium citrate solution and 5 ml of blood are poured into centrifuge tubes. After mixing, a working solution of phytohemagglutinin is added in an amount of 0.1 ml for human blood and 0.15 ml for rabbit blood. (To obtain a working solution of phytohemagglutinln 10 mg of the drug is dissolved in 1 ml of saline heated to a temperature of 35-40 °). Then, 1 ml of syncol or polyvinyl is poured into the tubes, mixed thoroughly and centrifuged for 1-2 min at 1000 rpm. A physiological solution is added to the supernatant at the rate of 1,: 3 and centrifuged for 7-8 min at 1000 rpm. The supernatant is discarded, and the leukocyte sediment remaining at the bottom is washed three times with physiological saline and used.

№ 152543- 2 -No. 152543-2 -

Пример. 100 г бобов фасоли замачивают в 500 мл 0,85%-ногораствора хлористого натри и оставл ют при температуре 4° на сутки. Набухшие бобы тщательно измельчают в гомогенизаторе и полученную кашеобразную массу в течение трех часов энергично перемешивают при комнатной температуре. Плотные частицы отжимают через ткань, а жидкость центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость в течение 30 мин встр хивают с 5-10 г кцзельгура , затем после предварительного центрифугировани фильтруют через воронку Бюхнера и довод т рН раствора до 7,3-7,6 прибавлением 20%-ного раствора едкого натра. Операцию осветлени кизельгуром повтор ют и полученный в зкий сильно оналесцирующий раствор подвергают диализу (24 час в проточной водопроводной воде и 24 час в дистиллированной воде при температуре 4°). После центрифугировани бесцветную опалесцируюшую жидкость сушат из замороженного состо ни . Выход - 2%.Example. 100 g of beans of beans are soaked in 500 ml of a 0.85% solution of sodium chloride and left at 4 ° for a day. The swollen beans are thoroughly ground in a homogenizer and the resulting slurry mass is vigorously stirred for three hours at room temperature. Dense particles are squeezed through a cloth, and the liquid is centrifuged for 15 minutes at 3000 rpm. The supernatant is shaken for 5 minutes with 5-10 g of ksselgur, then after pre-centrifugation it is filtered through a Büchner funnel and the pH of the solution is adjusted to 7.3-7.6 by adding 20% sodium hydroxide solution. The operation of clarification with kieselguhr is repeated and the resulting viscous strongly onalescent solution is dialyzed (24 hours in running tap water and 24 hours in distilled water at 4 ° C). After centrifugation, the colorless opalescent liquid is dried from the frozen state. Yield - 2%.

Предлагаемый способ позвол ет достаточно быстро и с высоким выходом (до 70%) выдел ть из крови лейкоциты с низкой повреждаемостью и примесью эритроцитов, не превышающей 2-3%.The proposed method allows fairly quickly and with a high yield (up to 70%) to isolate from the blood white blood cells with low damage and an admixture of red blood cells not exceeding 2-3%.

Предмет изобретени Subject invention

Способ выделени лейкоцитов из крови при помощи фитогемагглютинина (полученного из бобов) и синкола или поливинила, отличающийс тем, что, с целью увеличени выхода лейкоцитов и уменьшени их повреждаемости, а также уменьшени примеси эритроцитов, к. крови предварительно добавл ют раствор нейтрального цитрата натри и примен ют дл получени осадка лейкоцитов центрифугирование .A method of isolating leukocytes from the blood using phytohemagglutinin (obtained from beans) and syncol or polyvinyl, characterized in that, in order to increase the yield of leukocytes and reduce their damage, as well as reduce the admixture of erythrocytes, neutral blood citrate solution is added to the blood. centrifugation is used to obtain leukocyte sediment.