SU1508151A1

SU1508151A1 - Способ определени активности трипсина в биопсионном материале желудочно-кишечного тракта

Info

Publication number: SU1508151A1
Application number: SU864099846A
Authority: SU
Inventors: Ольга Ивановна Яхонтова
Original assignee: Yakhontova Olga
Priority date: 1986-07-18
Filing date: 1986-07-18
Publication date: 1989-09-15

Abstract

Изобретение относитс к медицине , в частности, гастроэнтерологии, и может быть использовано дл диагностики нарушени пищеварени . Цель изобретени - повышение точности способа за счет дополнительной оценки состо ни мембранного пищеварени . Дл этого биоптат слизистой оболочки тонкой кишки (5-12 мг) помещают в 3 мл охлажденного раствора Рингера и провод т последовательную десорбцию ферментов в шюттель-аппарате. К 0,5 мл полученного смыва биопсионного материала добавл ют 1 мл веронал-мединалового буфера с рН 8,6 и 2 мл 40 мг% раствора бензоил-DL-аргинин-п-нитроанилида в буферном растворе (вероналовом) с рН 9,2. Эту смесь инкубируют при 37°С в течение 1 ч., после чего добавл ют 0,5 мл 0,5 N раствора HCL дл прекращени реакции. С помощью спектрофотометра определ ют оптическую плотность на длине волны 410 нм. В качестве контрол вместо смыва берут 0,5 мл раствора Рингера и 0,5 мл 0,5 N HCL добавл ют сразу после раствора субстрата. Далее биоптат гомогенизируют, отдел ют супернатант, инкубируют в тех же услови х и определ ют состо ние мембранного пищеварени . Активность трипсина определ ют по формуле, приведенной в описании изобретени . Активность трипсина рассчитывают как сумму полученных активностей. Предлагаемый способ позвол ет повысить точность определени активности трипсина в биопсионном материале желудочно-кишечного тракта по сравнению с известным на 50% за счет дополнительной оценки состо ни мембранного пищеварени , что, в свою очередь, позвол ет улучшить диагностику целого р да гастроэнтерологических заболеваний и оценить эффективность лечени .

Description

1

(21)4099846/28-14

(22)18.07.86

(46) 15.09.89, Бюл. № ЗА (75) О.И.Яхонтова

(53)616.07(088.8)

(56)Масевич Ц.Г., Уголев A.M. и За- белинский Э.К. Методика изучени пристеночного пизцеварени в клини-:- ческих услови х, - Тер. арх. 1967, № 8, с. 53-57.

(54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ. ТРИПСИНА В БИОПСИОНЫОМ МАТЕРИАЛЕ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА

(57)Изобретение относитс к медицине , в частности гастроэнтерологии,

и может быть использовано дл диагностики нару1иени пищеварени . Цель изобретени - повышение точности способа за счет дополнительной оценки состо ни мембранного пищеварени . Дп этого биоптат слизистой оболочки тонкой кишки (5-12 иг) помещают в 3 мл охлажденного раствора Рингера и провод т последовательную деЬорб- цию ферментов в 111нз,ттель-аппарате. К 0,5 мл полученного смыва биопсион- ного материала добавл ют 1 мп веронал-мед ин ал о во г о буфера с рН 8,6 и 2 мл 40 мг% раствора бензоил-DL-apгинин-п-нитроанилида в буферном растворе (вероналоБОм) с рН 9,2. Эту смесь инкубируют при 37°С в течение 1 ч, после чего добавл ют 0,5 мл .0,5 N раствора НС1 дл прекращени реакции. С помощью спектрофотометра определ ют оптическую плотность на длине волны 410 нм. В качестве контрол вместо смыва берут 0,5 мл раствора Рингера и 0,5 мл 0,5 N НС1 добавл ют сразу после раствора субстрата . Далее биоптат гомогенизируют , отдел ют супернатант, инкубируют в тех же услови х и определ ют состо ние мембранного пищеварени . Активность трипсина определ ют по формуле, приведенной в описании изобретени . Активность трипсина рассчитывают как сумму полученных активностей . Предлагаемый способ позвол ет повысить точность определени активности трипсина в биопсинном материале желудочно-кишечного тракта по сравнению с известным на 50% за счет дополнительной оценки состо ни мембранного пищеварени , что, в свою очередь, позвол ет улучшить диагностику целого р да гастроэнтерологических заболеваний и оценить эффективность лечени .

00 Q1

Изобретение относитс к медицине, в частности гастроэнтерологии, и может быть использовано дл диагностики нарушений пищеварени . ° Цель изобретени - повьшгение точности способа за счет дополнительной

оценки состо ни мембранного пищеварени .

Способ осуществл етс следующим образом.

Получают биоптат слизистой оболочки тонкой кишки, последний помещают

315

в охлажденный раствор Рингера (3 мл, Т ) и производ т десорбцию ферментов в шготтель-аппарате, К 0,5 мл полученного смьгоа приливают 1 мл веронал-мединалового буфера с рН 8,6 и 2 мл 40 мг% раствора бензо- ил-ВЬ-аргинин-п-нитроанилида в веро- наловом буферном растворе с рН 9,2 и смесь инкубирз т при 37°С в тече- иние часа. После этого в смесь добавл ют 0,5 мл 0,5 N раствора НС1 дл прекращени реакции и спектрофо- тометрируют при длине волны 410 им н спектрофотометре СФ-4, В качестве контрольной пробы вместо смыва берут 0,5 мл раствора Рингера и 0,5 мл 0,5 N раствора НС1 добавл ют сразу после раствора -субстрата. Расчет производ т по формуле

Р

(A;:B)2jK

мг-Kg

1000 мед/мг.

где А - оптическа плотность опытного

раствора;

В - оптическа плотность контрольного раствора; 2 - пересчет на 1 мл смыва; К, - коэффициент оптической плотности , равный 0,6; . К коэффициент разведени смыва,

равный 0,16; мг - пересчет на 1 мг ткани биоптата; 1000 - пересчет на миллиединицы.

Активность трипсина определ ют как сумму полученных активностей.

Пример 1, При определении активности трипсина (вес биоптата 9 мг, коэффициент разведени ,1Ь) получены результаты ,032; ,,01I; ,5 мед.

П р. и м е р 2, При определении активности трипсина: вес биоптата 6 мг; К 0,16; ,003; ,001; ,5 мед.

Дл 1 1 здоровых .(добровольцев) и 23 больных с поражением тонкой кишки I

было проведено определение активности трипсина по предлагаемому способу. В результате получены следующие данные: активность трипсина на уровне 12-перстной кишки в норме 4,110,4 и при патологии 3,,3; дл проксимального отдела тощей кишки в норме 3,710,3 и при патологии 2,,2.

Использование предлагаемого способа позвол ет повысить точность определени активнос-ти трипсина в биопсионном материале желудочно-кишечного тракта по сравнению с известным на 50% за счет дополнительной оценки состо ни мембранного пищеварени , что приводит к улучшению диагностики целого р да гастроэнтерологических заболеваний и дозвол ет оценить эффективность проводимого ле чени о

Claims

Формула изобретен и

Способ определени активности трипсина в биопсионном материале желудочно-кишечного тракта, включающий инкубацию биоптата в физиологическом растворе с добавлением бензоил- DL-аргинин-п-нитроанилида, обработку пробы сол ной кислотой с последзгющим фотометрированием продуктов реакции при длине волны 410 нм, отличающийс тем, что, с целью пов.ьппе ни точности способа за счет дополнительной оценки состо ни мембранного пищеварени , биоптат предварительно обрабатывают дл десорбции трипсину, полученный после обработки раствор инкубируют при рН 8,6 в течение 1 ч и определ ют в нем активность трипсина, далее биоптат гомогенизи- pjTOT, отдел ют супернатант, инкубируют в тех же услови х, определ ют состо ние мембранного пищеварени , а активность трипсина рассчитывают как сумму полученных активностей.