SU1490156A1

SU1490156A1 - Method of producing zimosan

Info

Publication number: SU1490156A1
Application number: SU874225992A
Authority: SU
Inventors: Давид Исаакович Островский; Андрей Николаевич Клюквин; Игорь Вадимович Кручина-Богданов; Александр Борисович Воронков; Сергей Иосифович Ржепницкий; Михаил Лазаревич Суханов; Сергей Викторович МАЛЯРЧУК; Олег Иванович Киселев; Игорь Михайлович Голубков; Александр Митрофанович Ищенко; Сергей Васильевич Андреев
Original assignee: Научно-Производственное Гидролизное Объединение "Гидролизпром"; Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Особо Чистых Биопрепаратов
Priority date: 1987-04-07
Filing date: 1987-04-07
Publication date: 1989-06-30

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии и представл ет собой способ получени зимозана из дрожжей. Цель изобретени - увеличение выхода зимозана и ускорение процесса получени . Водную суспензию дрожжей инкубируют при температуре от 35 до 55°С в течение 1-7 сут. После инкубации суспензию пропускают через колонку с сульфокатионитом, центрифугируют. Полученный осадок обезвоживают спиртом и вакуумной сушкой. Выход зимозана составл ет 34% в пересчете на сухие дрожжи. 2 табл.This invention relates to biotechnology and is a method for producing zymosan from yeast. The purpose of the invention is to increase the yield of zymosan and accelerate the process of obtaining. Aqueous suspension of yeast is incubated at a temperature of from 35 to 55 ° C for 1-7 days. After incubation, the suspension is passed through a column of sulfonic cation, centrifuged. The precipitate is dehydrated with alcohol and vacuum drying. Zymosan yield is 34% based on dry yeast. 2 tab.

Description

Изобретение относитс к биот .хно- логии, а именно к способу получени зимозана, который находит применение в иммунологии и медицине дл определени уровн пропердина в сыворотке крови.The invention relates to biotology, namely to a method for producing zymosan, which is used in immunology and medicine for determining the level of properdin in the blood serum.

Цель изобретени - увеличение выхода и повышение активности зимозана .The purpose of the invention is to increase the yield and increase the activity of zymosan.

Способ осуществл ют следующим образом.The method is carried out as follows.

Дрожжи в виде водной суспензии инкубируют при 35-55 С в течение 1-7 сут. В этих услови х происходит процесс лизиса клеток с помощью их ферментативных систем с накоплением в осадке зимозана. При времени инкубации , большем или меньшем указанного интервала, и температуре нижеYeast in the form of an aqueous suspension is incubated at 35-55 ° C for 1-7 days. Under these conditions, the process of lysis of cells takes place with the help of their enzymatic systems with accumulation of zymosan in the sediment. When the incubation time is greater or less than the specified interval, and the temperature is below

35 С выход зимозана снижаетс . Увеличение температуры инкубации приводит к дезактивации ферментативных систем, и зимозан не образуетс . Длительность процесса более 7 сут нецелесообразна, так как не приводит к дальнейшему увеличению выхода и активности зимозана. По окончании инкубации суспензию подкисл ют до рН 3 и фильтруют через сульфокатио- нит. Зависимость выхода зимозана от режима инкубировани представлена в табл.1.35 C output of zymosan is reduced. An increase in incubation temperature leads to deactivation of enzyme systems, and zymosan is not formed. The process takes more than 7 days to be impractical because it does not lead to a further increase in the yield and activity of the zymosan. At the end of the incubation, the suspension is acidified to pH 3 and filtered through sulfo cation resins. The dependence of the zymozan yield on the incubation mode is presented in Table 1.

После пропускани через сульфо- катионит суспензию центрифугируют, осадок обезвоживают спиртом и вакуумной сушкой.After passing through the sulfonate cation, the suspension is centrifuged, the precipitate is dehydrated with alcohol and vacuum drying.

Дл испытани зимозана в качестве иммунологического агента образцы.For testing zymosan as an immunological agent, samples.

полученные по предлагаемому способу, фирмы Сигма (США) и Реахим Г.Олайне (СССР) подвергаютс кип чению на вод ной бане в течение 1 ч и 6-8- кратному центрифугированию при 10000 g в забуференном физиологическом растворе.Sigma (USA) and Reahim G. Olaine (USSR) obtained by the proposed method are boiled in a water bath for 1 h and centrifuged for 6-8 times at 10,000 g in buffered saline.

Полученный реагент добавл ют к сыворотке крови человека до концент- The resulting reagent is added to human serum to a concentration of

рации 2 мг/мл. Смесь инкубируют 1 ч при 37°С, после чего реагент удал ют центрифугированием 20 мин при 5000 g. О степени активации пропердинового комплемента суд т по его остаточной активности и путем определени им- мунохимическим методом образовавшегос белка С За. Результаты 1спытани в сравнении с имеющимис коммерческими препаратами представлены в табл„2.walkie-talkie 2 mg / ml. The mixture is incubated for 1 hour at 37 ° C, after which the reagent is removed by centrifuging for 20 minutes at 5000 g. The degree of activation of the properdin complement is judged by its residual activity and by determining, using the immunochemical method, of the resulting C For protein. The results of testing in comparison with existing commercial preparations are presented in Table 2.

Пример 1. В промытый и про- стерилизованный аппарат заливают 250 мл дистиллированной воды, загружают 1 кг свежих прессованных пекарских дрожжей, инкубируют при 35 С в течение 7,0 сут при непрерывном перемешивании.Example 1. 250 ml of distilled water is poured into the washed and pro-sterilized apparatus, 1 kg of fresh pressed baker's yeast is loaded, and incubated at 35 ° C for 7.0 days with continuous stirring.

По окончании времени инкубации водную суспензию подкисл ют до рН 3 и пропускают снизу вверх через колонку с катионитом КУ 2x8 в Н -форме (1,9x10,5 см) со скоростью 75 мл/ч.At the end of the incubation time, the aqueous suspension is acidified to pH 3 and passed upwards through a column with KU 2x8 cation exchanger in H-form (1.9x10.5 cm) at a rate of 75 ml / h.

Нерастворимый зимозан, прошедший через колонку, отдел ют от элюата центрифугированием в течение 10 мин при 10000 об.мин. Препарат промывают 5 раз 96%-ным этиловым спиртом (2л), экстрагируют в экстракторе Соксклета 8 ч абсолютным спиртом, сушат на вакуумсушилке.The insoluble zymosan that passed through the column is separated from the eluate by centrifuging for 10 minutes at 10,000 rpm. The preparation is washed 5 times with 96% ethyl alcohol (2l), extracted in an extractant of Soxlet for 8 hours with absolute alcohol, and dried on a vacuum dryer.

Из 1 кг прессованных дрожжей получают 83 г зимозана, что составл ет 33,3% в пересчете на сухие дрожжи.Of 1 kg of compressed yeast, 83 g of zymosan is obtained, which is 33.3% based on dry yeast.

Т T

5five

00

5five

00

5five

П р и м е р 2. Способ осуществл ют согласно примеру 1, но инкубацию ведут при 55 С в течение 1 сут.PRI mme R 2. The method is carried out according to Example 1, but incubation is carried out at 55 ° C for 1 day.

Выход зимозана 68 г, что составл ет 27,2% в пересчете на сухие дрожжи .Zymosan yield 68 g, which is 27.2%, calculated on the dry yeast.

ПримерЗ. В промытый аппарат заливают 60 мл дистиллированной воды, загружают 250 г прессованных некондиционных пекарских дрожжей, содержащих 65% дрожжей Candida micoderma, и инкубируют 36 ч при 48°С и непрерывном перемешивании. Последующую обработку провод т согласно примеру 1. Получают 21 г зимозана, что составл ет 33% в пересчете на сухие дрожжи.Example 60 ml of distilled water are poured into the washed apparatus, 250 g of pressed non-conforming Baker's yeast containing 65% of Candida micoderma yeast are charged and incubated for 36 hours at 48 ° C with continuous stirring. Subsequent processing is carried out according to Example 1. 21 g of zymosan is obtained, which is 33%, calculated on the dry yeast.

П р и м е р 4. Способ осуществл ют согласно примеру 1, но инкубацию ведут в течение 1,5 сут при 50°С, а в качестве сульфокатионита используют Амберлит ИР-120.Example 4. The method is carried out according to Example 1, but incubation is carried out for 1.5 days at 50 ° C, and Amberlite IL-120 is used as the sulfonic cation exchanger.

Выход зимозана 85 г, что составл ет 34% в пересчете на сухие дрожжи.The yield of zymosan is 85 g, which is 34%, calculated on the dry yeast.

Таким образом, предлагаемый способ позвол ет более чем в 10 раз увеличить выход зимозана и более чем в 2 раза сократить врем получени . Активность полученного препарата на 5-10% выше известных коммерческих препаратов.Thus, the proposed method allows to increase the yield of zymosan by more than 10 times and to shorten the time of production by more than 2 times. The activity of the preparation obtained is 5-10% higher than the known commercial preparations.

Claims

Invention Formula

A method for producing zymosan, which involves lysis of yeast cells with subsequent allocation of the target product, characterized in that, in order to increase the yield of zymosan and speed up the process, lysis of yeast cells is carried out by incubating the yeast water suspension at a temperature of 35-55 ° C for 1-7 days , and the selection of the target product is carried out by filtering the suspension through sulfonic cation.

c a 1

b l and

Table 2

Serum

of blood

Zimosan

Reahim Zimozan

Sigma Zimozan on the proposed method

3

thirty

35

38