SU1470271A1

SU1470271A1 - Способ оценки устойчивости картофел к микромицетам FUSаRIUм SамвUсINUм FUск

Info

Publication number: SU1470271A1
Application number: SU874302169A
Authority: SU
Inventors: Николай Афанасьевич Дорожкин; Валентина Иосифовна Домаш; Светлана Иосифовна Бельская; Лидия Матвеевна Новикова
Original assignee: Институт экспериментальной ботаники им.В.Ф.Купревича
Priority date: 1987-08-31
Filing date: 1987-08-31
Publication date: 1989-04-07

Abstract

Изобретение относитс к сельскому хоз йству и может быть использовано в селекции картофел на устойчивость к болезн м. Цель изобретени - ускорение оценки и снижение трудозатрат. Дл оценки устойчивости картофел к сухой фузариозной гнили навеску муки из клубн картофел экстрагируют 0,2 M NACL. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые белки. Определ ют протеолитическую активность фермента, выделенного из фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофел , без добавлени экстракта белков и в их присутствии. По способности солерастворимых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофел ингибировать активность ферментного препарата суд т об устойчивости картофел к сухой фузариозной гнили. Показатель активности в среднем 40 мкг/г воздушно-сухого вещества свидетельствует об устойчивости, 20 мкг/г - о восприимчивости к указанному заболеванию. 1 табл.

Description

1

Изобретение относитс к области сельского хоз йства и может быть использовано в селекции картофел на устойчивость к болезн м.

Цель изобретени - ускорение оценки и снижение трудозатрат.iСпособ осуществл етс следующим образом .

Навеску муки из клубн картофел экстрагируют 0,2 М NaCI. Экстракт центрифугируют и получают солерастворимые белки. Определ ют протеолитическую активность фермента, выделенного из фитопатогенного гриба, вызывающего сухую гниль картофел , без добавлени экстракта белков и в их присутствии. По способноти солераствори- мых белков из различных по устойчивости к болезни образцов картофел ингибиро- вать активность ферментного препарата суд т об устойчивости картофел к сухой фузариозной гнили.

Пример. Клубень картофел пробуравливают сверлом по вертикальной и горизонтальной ос м. Высечку высуш. Вают на воздухе , смалывают и среднюю навеску муки в 50 мг экстрагируют 20 мл 0,2 М NaCl. Экстракт центрифугируют при 8000 об/мин в течение 15 .мин и получают таким образом надосадочную жидкость (НЖ), содержащую солерастБоримые белки.

Ферментный препарат, |;еобхолимый дл анализа, получают из культуральной жидкости гриба возбудител сухой фузариозной гнили путем осаждени белка сульфатом аммони до 80% насьш ени , растворени осадка в дистиллированной воде и пропусканием через колонку с акрилексом Р-iOO. Активную ферментную фракцию лиофилизи- руют и используют дл работы. Из одного 1 л культуральной жидкости получают около 250 мт лиофилизированного фермента возбудител болезни. Дл анализа используют концентрацию 140 мкг/мл 0,2 М NaCl.

Дл осуществлени способа берут I мл ферментного препарата, 1 мл 0,06 М фосфатного буфера рХ 7,6. 1 мл 1% казеина в

О

to

0,06 М фосфатном буфере, рН 7,6 и инкубируют реакционную смесь в термостате при 37°С в течение 30 мин. Реакцию останавливают 3 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Смесь фильтруют и измер ют экстинкцию при 280 нм. Одновременно став т контрольную пробу на реактивы . Дл этого смешивают 1 мл фосфатного буфера, 3 мл 5%-ной ТХУ, 1 мл казеина и 1 мл фермента. Смесь фильтруют и измер ют экстинкцию при 280 нм. Таким образом получают активность ферментного препарата ().

Далее определ ют активность фермента в присутствии солерастворимых белков. Дл этого берут 1 мл ферментного препарата , 1 мл НЖ, 1 мл казеина и инкубируют реакциюнную смесь при 37°С в течение 30 мин. Реакцию останавливают 3 мл 5%-ной ТХУ. Смесь фильтруют и измер ют экстинкцию при 280 нм. Контрольна проба состоит из 1 мл НЖ, 3 мл 5%-ной ТХУ, 1 мл казеина и 1 мл ферментного препарата . Смесь фильтруют и измер ют экстинкцию . Получают Дол.

Ингибиторную активность солерастворимых белков из картофел выражают в микрограммах угнетенного фермента на грамм воздушно-сухой массы и определ ют по формуле

(Дт-До«)р

г 1 Li. ут )

Л,-т

где ИЕ - ингибиторна единица;

Д - экстинкци пробы с ферментом за вычетом контрол ;

До„ - экстинкци пробы со смесью фермент-надосадочна жидкость за вычетом контрол ; V - объем экстракта; т - навеска материала;

140 - содержание фермента в мкг/мл.

На основе экспериментальных данных вы влено , что существует тесна коррел ционна зависимость между активностью соле- растворимого белка по отношению к фер- 10 менту фитопатогенного гриба и устойчивостью сортообразцов картофел к инфекции. Показатель активности в среднем 40 мкг на г воздушно-сухого вешества свидетельствует об устойчивости, 20 мкг --о восприим- ,с чивости, 26 мкг - о средней восприимчивости (таблии,а).

Способ позвол ет оценить большое количество образцов за короткий промежуток времени (30 образцов в трехкратной пов- торнс)сти за 7-часовой рабочий день). Дл 20 определени требуетс незначительное количество материала (50 мг). Способ прост в исполнении, не требует дефицитных, а также вредных дл здоровь реактивов.

25

Claims

Формула изобретени

Способ оценки устойчивости картофел к микромицетам Fusarium sambucinum Fuck путем определени биохимическго показател , отличающийс тем, что, с целью уско- 30 рени оценки и снижени трудозатрат, в качестве биохимического показател используют активность протеолитических ферментов возбудител в присутствии солераство- римых белков картофел , по величине которой оценивают устойчивость картофел .

Формула изобретени

Способ оценки устойчивости картофел к микромицетам Fusarium sambucinum Fuck путем определени биохимическго показател , отличающийс тем, что, с целью уско- 0 рени оценки и снижени трудозатрат, в качестве биохимического показател используют активность протеолитических ферментов возбудител в присутствии солераство- римых белков картофел , по величине которой оценивают устойчивость картофел .