SU1451163A1

SU1451163A1 - Method of cultivating viruses in organ cultures of tubular organs

Info

Publication number: SU1451163A1
Application number: SU864137113A
Authority: SU
Inventors: Виктор Степанович Белоконь; Павел Тихонович Берус; Владислав Никифорович Коновалов
Original assignee: Украинский Научно-Исследовательский Институт Экспериментальной Ветеринарии
Priority date: 1986-10-17
Filing date: 1986-10-17
Publication date: 1989-01-15

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано в вирусологии. Целью изобретени вл етс упрощение способа культивир о- вани вирусов и повышение их титров. Указанна цель достигаетс за счет выращивани и использовани дл культивировани вирусов органных культур, при этом выращивание ведетс целыми сегментами трубчатых органов с сохранением цилиндрической формы. Особенностью вл етс использование сегментов с вывернутой наружу слизистой оболочкой. Выращивание осуществл етс в роллерных устройствах с последовательным погружением сегментов в питательную среду и аэрацией воздухом с 5% углекислого газа. (ЛThis invention relates to biotechnology and may be used in virology. The aim of the invention is to simplify the method of cultivating viruses and increasing their titers. This goal is achieved by growing and using organ cultures for cultivating viruses, while growing is carried out in whole segments of tubular organs with preservation of a cylindrical shape. A special feature is the use of segments with the mucous membrane turned outward. Growing is carried out in roller devices with sequential immersion of the segments in the nutrient medium and aeration with air with 5% carbon dioxide. (L

Description

ico ico

Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано в вирусологии .This invention relates to biotechnology and may be used in virology.

Цель изобретени - упрощение спо- соба культивировани вирусов и повышение их титров.The purpose of the invention is to simplify the process of cultivating viruses and increasing their titers.

Пример 1. Трубчатые органы, например кишечник, рассекают на сегменты одинаковой длины, обычно соот- ветствующей длине держателей. Сегмен- уы кишечника трехкратно промывают в растворе Хэнкса с антибиотиками. Затем один конец сегмента кишечника перев зывают шелком или кетгутом. Перев занный конец кишечника поднос т к держателю, укрепленному в крышке культурального сосуда, и нат гивают на него, одновременно выворачива чулком слизистой оболочкой наружу. Иерев занный конец кишечника отсекают ножницами.Example 1. Tubular organs, such as the intestine, are cut into segments of equal length, usually corresponding to the length of the holders. Intestinal segmenia are washed three times in Hanks' solution with antibiotics. Then, one end of the intestinal segment is tied up with silk or catgut. The transected end of the intestine is brought to the holder, which has been strengthened in the lid of the culture vessel, and is pulled on it, while simultaneously turning the mucous membrane out of the stocking. The cheekbone end of the intestine is cut off with scissors.

Укрепленные таким образом на держател х сегменты кишечника трехкратно промывают путем погружени в цилинд- рические сосуда с раствором Хэнкса и перенос т в роллерный культуральный сосуд, куда после герметизации крышек заливают через штуцеры питательную среду дл поддержани жизнеде тель- ности сегментов кишечника. При вращении роллерного культурного сосуда сегменты кишечника на держател х последовательно погружаютс в питательную среду и подвергаютс аэрации воздухом ,The intestinal segments so fastened on the holders are washed three times by immersion in cylindrical vessels with Hanks solution and transferred to a roller culture vessel, where, after sealing the lids, the nutrient medium is poured through the nipples to maintain the vitality of the bowel segments. During the rotation of the roller culture vessel, the intestinal segments on the holders are successively immersed in the nutrient medium and subjected to aeration with air,

П р и м е р 2. Культивирование вируса диареи штамм Oregon с 24V при выращивании ткани кишечника по предлагаемому -способу . Отбор, подготовка и посадка сегментов кишечника на держатели осуществл етс , как в примере 1. После герметизации сосуда через боковой штуцер внос т питательную среду без сыворотки, но содержащую вирус диареи из расчета 0,1 мл на 1 мл среды. Культуральный сосуд перенос т на роллер. Репродукцию вируса диареи в ткани кишечника контролирую по результатам про влени цитопати- ческого эффекта в монослойной культу ре перевиваемых клеток ПТ. При наступлении полной дегенерации клеток монослойной культуры сосуд с кишечными сегментами снимают с роллера, перенос т в бокс. Через нижний боко- вой штуцер сливают питательную среду содержащую вирус. Сн тые с сосуда крьш1ки размещают в горизонтальном поPRI mme R 2. Cultivation of diarrhea virus strain Oregon with 24V for growing tissue of the intestine according to the proposed method. Selection, preparation, and planting of the intestinal segments on holders is carried out as in Example 1. After sealing the vessel, nutrient medium without serum is introduced through the side fitting, but diarrhea virus is contained at a rate of 0.1 ml per ml of medium. The culture vessel is transferred to a roller. The reproduction of diarrhea virus in intestinal tissue is monitored by the results of the cytopathic effect in a monolayer culture of transplantable PT cells. Upon the onset of complete degeneration of the cells of the monolayer culture, the vessel with intestinal segments is removed from the roller, transferred to the box. The nutrient medium containing the virus is drained through the bottom side fitting. Discharged from the vessel Krsh1ki placed in a horizontal

0 5 0 5

5five

ложении. С помощью пинцетов с держателей снимают кишечные сегменты, перенос т в сосуд и хран т в замороженном состо нии. Инфицированную ткань кишечника используют в качестве исходного материала дл приготовлени диагностических -антигенов и других целей.lying. The tweezers are used to remove intestinal segments from the holders, transfer them to a vessel and store them in a frozen state. Infected intestinal tissue is used as a starting material for the preparation of diagnostic β-antigens and other purposes.

Титры накоплени вируса диареи в ткани кишечника определ ют методом раститровки на монослойной клеточной культуре ПТ. Накопление вируса диареи в ткани кишечника на 1±0,2 лог.пре-- вышает титр вируса в монослойной клеточной культуре.The titers of viral diarrhea accumulation in intestinal tissue are determined by growth on monolayer PT cell culture. The accumulation of diarrhea virus in intestinal tissue by 1 ± 0.2 log. Exceeds the virus titer in monolayer cell culture.

П р и м ер 3. Культивирование ко- ронавируса при выращивании ткани кишечника по предлагаемому способу. Отбор , подготовка и посадка ткани кишечника на держатели осуществл етс , как в примере 1, далее поступают, как в примере 2, только вместо вируса диареи берут коронавирус.Example 3: Cultivation of a coronavirus when growing intestinal tissue using the proposed method. Selection, preparation and planting of intestinal tissue on the holders is carried out as in example 1, then they proceed as in example 2, except that a coronavirus is taken instead of the diarrhea virus.

Контроль репродукции коронавируса провод т с помощью РГА (реакции ге- магглютинации), которую став т микро- методом в пластинах с луночками аппарата Токаччи. Титр коронавирусного гемагглютинина в инфицированной ткани сегментов кишечника превьш1ает титр коронавируса в исходном материале (суспензи фекалий от больных животных ) на 8-10 гемагглютинирующих единиц , что свидетельствует о накоплении биомассы вируса в ткани. Специфичность коронавирусной инфекции подверждают в РЗГА со специфической коронавирусной антисывороткой.The control of the reproduction of the coronavirus was carried out with the help of DGA (gemagglutination reaction), which was made micro by the method in the plates with the wells of the Tokacchi apparatus. The titer of the coronavirus hemagglutinin in the infected tissue of the segments of the intestine exceeds the titer of the coronavirus in the starting material (suspension of feces from sick animals) by 8-10 hemagglutinating units, which indicates the accumulation of the virus biomass in the tissue. Specificity of coronavirus infection is exposed to HGS with a specific coronavirus antiserum.

П р и м е р 4. Культивирование ротавируса при выращивании ткани кишечника по предлагаемому способу. Отбор, подготовку и посадку ткани кишечника на держатели осуществл ют, как в примере 1, далее как в примере 2, только вместо вируса диареи берут ротавирус .PRI me R 4. Cultivation of rotavirus in the cultivation of intestinal tissue by the proposed method. Selection, preparation and planting of intestinal tissue on the holders is carried out as in example 1, then as in example 2, only rotavirus is taken instead of diarrhea virus.

Репродукцию ротавируса в ткани сегментов кишечника контролируют с помощью РДП (реакции диффузионной преципитации) с антиротавирусной сывороткой . В качестве ротавирусного антигена берут жидкую часть суспензии , растертой в ступке ткани кишечника . РДП считают положительной при наличии четко выраженных полос между луночками с испытуемым материа31451163Reproduction of rotavirus in the tissue of the segments of the intestine is controlled by RDP (diffusion precipitation reaction) with anti-tavirus serum. As the rotavirus antigen, they take the liquid portion of the suspension, pounded in the mortar of intestinal tissue. RDP is considered positive if there are clearly defined bands between the holes with the test material31451163

лом (ткань инфицированного кишечни- в услови х периодической смены жидка ) и специфической антиротавирусной кой и воздушной фаз с последующим сывороткой,сбором вируссодержащей жидкости,scrap (tissue of an infected intestine, under the conditions of a periodic change of fluid) and specific anti-avirus virus and air phases, followed by serum, collection of a virus-containing fluid,

отличающийс тем, что. characterized in that.

Claims

In order to simplify the method and increase the titers of the virus, the claims of the Ganna culture virus cultivation are used in organ cultures of tubular organs of tubular organs of cylindrical Ghans, including infection of the Q form with an outwardly turned mucous organ culture, shell cultivation, and cultivation The cells with the virus in the nutrient medium are placed in a roller device.