SU1446571A1

SU1446571A1 - Способ определени церулоплазмина в крови

Info

Publication number: SU1446571A1
Application number: SU864103543A
Authority: SU
Inventors: Юрий Владимирович Руль; Дмитрий Анатольевич Базыка; Игорь Викторович Савицкий; Татьяна Ивановна Анистратенко; Галина Николаевна Яндуловская; Людмила Ивановна Скрипка
Original assignee: Киевский Медицинский Институт Им.Акад.А.А.Богомольца
Priority date: 1986-07-25
Filing date: 1986-07-25
Publication date: 1988-12-23

Abstract

Изобретение относитс к медицине , а именно к биохимии. Целыо изобретени вл етс повьаиение точности и чувствительности способа нар ду с его упрощением. Дл этого к раствору субстратно-буферной смеси добавл ют жидкость, содержапсто фермент пропускают слабый высокочастотный ток и по величине сопротивлени этому току объективно определ ют скорость накоплени продуктов ферментативной реакции . 1 табл.

Description

Изобретение относитс к медицине, конкретно к биохимии.

Целью изобретени вл етс повышение чувствительности и упрощени способа.

Способ осуществл етс следующим образом,

0,,0 мл исследуемой биологической жидкости разбавл ют в 50- 500 раз. В кювету прибора внос т 1- 2 мл (в зависимости от количества исследуемой жидкости) раствора субстратно-буферной смеси, состо щей из ацетатного буфера и парафенилендиа- мина, при включенном термостате прибора t 37°С + 1°С. Кювету с элект- родами подсоедин ют к прибору. Через отверстие в электроде ввод т раствор биологической жидкости, исследуемой на активность фермента. Регистрируют ход накоплени продуктов ферментативной реакции при помощи самописца (КСП-4, Н-39, Н-339),

Активность фермента оценивают как по количеству, так и по скорости максимального накоплени продуктов реакции .

Субстратно-буферную гмесь готов т |Путем растворени 0,125 г парафени лендиамина сол нокислого (х/ч или чда) в 25 мл дистиллированной воды, Затем к 5 мл полученного раствора до бавл ют 5 мл 0,1 М ацетатного буфера Н 6,0 и 40 мл дистиллированной воды

Полученна субстратно-буферна смесь Содержит субстрат-парафенилендиамин в концентрации 4,62 мМ/л.

В соответствии с инструкцией к прибору АФ-1, на котором проводилось измерение, характеристики тока следующие: частота тока 880 кГц, сила тока 20 мкА.

Частота тока вл етс стабильной характеристикой прибора, не подлежа- щей коррекции. Сила тока вл етс оптимальной.

Дл индикации используетс типовой датчик с двум серебр нными электродами, покрытыми керамической пористой оболочкой.

Активность церулоплазмина рассчитывают по формуле

h 1.3-10-1000 .- , X М Т5ТООО (мкмоль/л-ч),

где h - отклонение пера самописца (мВ);

Q 5 0

5

0

..

5

1,3 - коэффициент перехода от

показаний милливольтметра при предлагаемом способе на концентрацию церуло - плазмина при условии строгого соблюдени всех параметров опыта (мг-%); 10 - коэффициент пересчета

100 мг на 1 л; 1000 - коэффициент пересчета мг в

, мкг;

1 - длительность реакции (ч); 151000 - мол. м церулоплазмина.

Пример. 0,1 мл.сыворотки крови разбавл ют в 100 раз 0,9%-ным раствором натри хлорида, В кювету анализатора внос т 2 мл субстратно- буферной смеси, состо щей из оО,1 М ацетатного буфера рН 6,0, раствора парафенилендиамина, приготовленного из расчета 0,125 мг парафенилендиамина на 23 МП дистиллированной воды, и дистиллированной воды, Ингредиенты субстратно-буферной смеси берут в соотношении 1:1;8 соответственно . Полученна субстратно-буферна смесь содержит субстрат-парафенилендиамин в концентрации 4,62 мм/л, Кюветы помещают в термостат прибора Т 37°С, вставл ют датчики с электродами и при достижении посто нной температуры подключают к прибору. Через отверстие в крышке датчика ввод т 0,1 мл разведенной в 100 раз сыворотки крови белой крысы. Ход ферментативной реакции регистрируют на диаграммной ленте самописца.

Параметры работы приборного комплекса: сила тока 20 мкА; напр жение 50 мВ; скорость движени ленты самописца Н-339 180 мм/ч.

Результаты эксперимента представлены в таблице.

Оценку точности измерений провод т с помощью среднего арифметического единичных отклонений отдельных измерений от среднего арифметического. Показатель точности способа S- при коэсЬфициенте надежности 0,95 и k - 9601 0,2.71,

Таким образом, ,Е, и полностью определ ют точность (воспроизводимость и правильность) анализа.

В примере точность предлагаемого способа характеризуетс следующими показател ми; х Ь,М1} 0,271; +т + 0,12.

Показатели точности известного способа X 1,146} 1,7 при k 7; tm ± 0,.

Чем вьппе величина показател точности Sj тем ниже точность способа. Таким образом, известный способ вл етс менее точным (воспроизводимым и правильным) по сравнению с предлагаемым способом.

Статистические параметры рассе ни данных активности церулоппазмина выше при использовании известного способа в св зи с тем, что в нем не

1446571.

мани исследовани одной пробы в 4 раза в сравнении с известным способом . Чувствительность повьшаетс до

10 при равенстве ее в известном способе 10.

Claims

Формула изобретени

Способ определени церулоплазми- на в крови путем внесени ее в субстратно-буферную смесь, содержащую парафенилендиамин и ацетатный буфер с последующей инкубацией исследуемой

учитываетс фактическа продолжитель- 15 пробы и учетом результатов реакции.

ность индивидуальных реакций, а используетс один и тот же показатель продолжительности реакций, определенный методикой (1ч).

Таким образом, предлагаемый способ позвол ет получить более точ ные и объективные данные об активности церулоппазмина, чем известш способ. Достигаетс еньшение вреотличаю щийс тем, что, с целью повьшени чувствительности и упрощени способа, после внесени крови в субстратно-буферную смесь через исследуемую пробу пропускают слабый высокочастотный ток, а учет результатов активности церулоплазми- на провод т по величине сопротивлени этому току.