SU1442912A1 - Способ количественного определени аскорбиновой кислоты - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к химии водорастворимых витаминов и- касаетс  определени  аскорбиновой кислоты в пищевых продуктах. Целью изобретени  Я1зл етс  упрощение способа. Способ заключаетс  в тоМ; что к испытуемому образцуf -рН которого с помощью буферного раствора устанавливают в диапазоне 358-4 5, добавл ют избыток реагента в виде 2 б-дихлорфенолиндоше- нола и определ ют величину поглощени  последнего в водной среде при 540 ни непосредственно после добавлени  реагента. 2 ило табл.

Description

Изобретение относитс  к химии водорастворимых витаминов и касаетс  определени  аскорбиновой кислоты в пищевых продуктах.

Цель изобретени  - упрс цение способа .

Способ заключаетс  в следующем.

При определении аскорбиновой кислоты , предусматривающем добавление к исследуемому экстракту избытка 2,6- дихлорфенолиндофенола (2,6-ДХШФ или реактив Тилманса) и измерение поглощени  последнего, величину поглощени  2,6-ДХФИФ определ ют в водном экстракте при рН 3,8-4,5 и длине волны 540 нм,

Метод прост, имеет высокую чувст-. вительность (предел обнаружени  аскорбиновой кислоты 5 мкг) , позвол ет сократить врем  анализа до 10-15 мин.

Пригоден дп  анализа окрашенных и неокрашенных продуктов.

Выбор условий анализа основан на исследовании стабильности 2,6-ДХФИФ при различных рН. Как видно из фиг.1, при рН ниже 3,8 скорость обесцвечивани  реактива Тилманса возрастает, что делает метод колориметрического определени  мало пригодным.

При рН в интервале 3,8-4,5 2,6- ДХФИФ разлагаетс  достаточно медленно что дает возможность осуществл ть его колориметрическое определение При напичии редуцирую0рх примесей взаимодействующих с 2,6-ДХФИФ, интервал рН 3,8-4,5 также пригоден дп  определени  аскорбиновой кислоты, поскольку в этих УСЛОВИЯХ аскорбиновую кислоту можно дез активизировать обра- боткой формалином и определить количество фенол та, прореагировавшего с редуктонами.

При рН выше 4,5 разложение фенол та незначительно, а при рН 7,2 не наблюдаетс  совсем, однако в этих услови х измерение проводить нельз  из-за невозможности определени  редуцирующих примесей и малой устойчивости аскорбиновой кислоты, При.,5 св зывание аскорбиновой кислоты формалином становитс  неполным, что вносит ошмбку в определение истинного содержани  витамина С. Кроме того, при рН более 7 начинает про вл тьс  склонность аскорбиновой кислоты к окислению: при рН 7 витамин С разлагаетс  на 1,7% за 1 ч, при рН 8

Q 5

0

0

О

5 Q г

5

наблюдаетс  50%-ное разрушение в течение 10 мин.

На фиг.2 представлена зависимость степени разложени  2,6-дихлорфенолин- дофенол та натри  от рН среды при различных интервалах времени. На практике врем  от момента добавлени  фенол та до момента колориметрирова- ни , как правило, составл ет 2-3 мин. Интервал времени, равный 1 мин, обычно соблюдаетс  редко.

Как видно из приведенных данных, при рН в области 3,8-4,5 реактив Тилманса при выдерживании пробы в течение 2-3 мин разлагаетс  от 0,5 до 1,5%, При рН ниже 3,8 скорость разложени  фенол та значительно увеличиваетс . Следовательно, в выбранном интервале рН ошибка определени  не превысит I,5% при условии, если колориметрирование пробы осуществл ть непосредственно после добавлени  реактива Тилманса,

Таким образом, существенным в предлагаемом способе  вл етс  выбор рН, смещенный в более нейтральную область, при котором замедл етс  разложение фенол та, а аскорбинова  кислота устойчива и может быть легко дезактивирована формалином дп  определени  редуцирующих веществ, а также выбор водной среды, улучшающий услови  проведени  анализа. Проведение анализа в этой среде исключает необходимость экстракции ксилолом, в результате чего отсутствует ошибка определени , св занна  с неполным экстрагированием фенол та ксилолом.

Дл  осуществлени  анализа к исследуемому экстракту в 3%-ной метафос- форной кислоте или в 2%-ной сол ной кислоте добавл ют буфер, в количестве , -необходимом дл  доведени  рН до значени ., вход щего в выбранный интервал рН, Измер ют оптическую плотность полученного раствора после добавлени  избытка фенол та при 540 нм. В качестве контрольного (кювета сравнени ) .используют раствор, содержащий вместо фенол та равное ему по объему количество дистиллированной воды. Содержание аскорбиновой кислоты в пробе определ ют по формуле

- ВЙ-Е-2.1,Ь.10о , ,„

где D - величина поглощени ; фенол та в растворителе;

D - величина поглощени  фенол та в исследуемом растворе; D - величина поглощени  фенол та в растворе стандарта; m - количество аскорбиновой кислоты в пробе стандартного раствора, мг; V( - общий объем экстракта, мл; V - объем экстракта, вз тый на

определение, мл; g - навеска или объем пробы,

г (мл);

100 - пересчет на 100 г (мл) продукта .

При анализе во все пробы добавл ют одинаковое количество фенол та и ацетатного буфера (рН 4,5), количество растворител  в стандартном и исследуемом растворах таково, что общий объем проб одинаков.

Дл  учета редуцирующих примесей к пробе, содержащей экстракт, после добавлени  буфера припивают формалин в количестве, равном 1/4 полученного объема. Через 10 мин добавл ют установленное количество фенол та и определ ют поглощение при 540 нм против соответствующего раствора, содержащего вместо фенол та равное ему по объему количество воды. Количество акорбиновой кислоты определ ют по формуле

X мг%

ul 2i Y 1 Yi2i li Ун 122

(D - D,).Vi-V4-g

5

V, v где D, - величина поглощени  фенол т в пробе дл  определени  редуцирующих примесей; объем .пробы дл  определени  редуцирующих примесей после добавлени  фенол та, мп; объем остальных проб после добавлени  фенол та, мл, Пример 1: рНЗ,8. 10 мл витаминизированного морковного сока разбавл ют 2%-ной сол ной кислотой до 100 МП, раствор фильтрую 25 мл полученного экстракта повторно разбавл ют 2%-ной сол ной кислотой до 100 мл.

Готов т четыре пробы:

1) 5 мл 2%-ной сол ной кислоты +

5 мл ацетатного буфера, рН 4,5 (49,75 г трехводного ацетата натри  70 мл воды + 150 мл лед ной уксусной кислоты) + 1 ,5 мл фенол та (0,2 г фе нол та в 500 кп воды);

429124

2)0,5 стандартного раствора аскорбиновой кислоты (1 мкг/мл) +

+ 4,5 мл 2%-ной сол ной кислоты + g 5 МП ацетатного буфера 1,5 мл фенол та;

3)5 мл полученного экстракта + 5 МП ацетатного буфера 1 ,5 мл фенол та;

10 4) 5 нл полученного экстракта + + 5 мл ацетатного буфера + 2 ,5 мл формалина , через 10 мин добавл ют 1,5 мл фенол та.

Определ ют величину поглощени 

15 указанных растворов на колориметре КФК-2 при 540 нм. В качестве растворов сравнени  используют соответствующие растворы (1-4) с добавлением вместо фенол та равного объема дис20 тиллированной воды. Содержание аскорбиновой кислоты, определенное по формуле (2)(среднее из двух определений ), составл ет 54,5 мг%.

Результаты определени  аскорбино25 вой кислоты колориметрическим методом , методом индофенол-ксилольной экстракции (известный способ) и пр мым титрованием (общеприн тый метод анализа) представлены в таблице,

30

35

.

40

Как видно из таблицы, метод удобен дл  анализа как окрашенных, так и неокраь енных продуктов. Более высокие значени  концентрации аскорбиновой кислоты, полученные колориметрическим методом, по сравнению со значени ми дл  индофенол-ксилольной экстракции св заны с частичным удерживанием фенол та водным раствором в про- .-цессе экстракции.

Пример 2 (известный). Готов т экстракт витаминизированного морковного сока в 3%-ной метафосфорной кис45 лоте аналогично примеру 1,84 колбы с притертыми пробками добавл ют по 5 мл ацетатного буфера, рН 4,0 (49,75 г тригидрата ацетата натри  + + 70 мл воды + 225 мл уксусной кисло5Q ты), В первую колбу добавл ют 5 мл экстракта, во вторую 5 мл 3%-ной метафосфорной кислоты, в третью 0,5 мп стандартного раствора аскорбиновой кислоты ( мкг/мл) и 4,5 мп 3%gg ной метафосфорной кислоты, в четвертую 5 мл экстракта и 2,5 мл формалина , В колбы 1-3 добавл ют 1,5 мл фенол та, в колбу 4 - фенол т добаж- л ют через 10 мин.

514429

Содержимое энергично встр хивают, приливают по 25 мл ксилола и снова встр хивают. Дают отсто тьс  в темноте 20 мин. Измер ют оптическую плотность сло  ксилола при 490 нм. Содержание аскорбиновой кислоты, определенное по формуле

тГВ,- D,.L- 100

Л МГ/0 -

(D - D)

составл ет 46,3 мг%,

ПримерЗ. рН4,5,

Экстракт витаминизированного морковного сока и 4 пробы дл  анализа готов т аналогично примеру 2, использу  1,5 МП ацетатного буфера с рН 5,5 (30 г трехводного ацетата натри  + 70 мл воды + 15 мл лед ной уксусной кислоты). Определ ют поглощение водных растворов при 540 нм. Содержание аскорбиновой кислоты 54,4 мг

II р и м е р 4, рН 3,4,

Экстракт витаминизированного морковного сока и 4 пробы дл  анализа готов т аналогично примеру 1, использу  по 3,5 мл ацетатного буфера с рН 4,5 (см,выше). Содержание аскорбиновой кислоты - 54,00 мг%,

П р и м е р 5, рН 5,0,

Экстракт витаминизированного морковного сока и 4 пробы дл  анализа готов т аналогично примеру 2, использу  .по 2,0 мл ацетатного буфера с рН 5j5 (приготовление буфе- ра по примеру 3), Содержание аскорбиновой кислоты - 53,90 мг%, I

Пример бо рН4,2,

Экстракт витаминизированного мор- ковного сока и. 4 пробы дл  анализа готов т аналогично примеру 2, использу  10 мл буфера с рН 5,2 (100 мл 1 ,0 М сол ной кислоты- + 500 мл 1 ,0 М ацетата натри  + дистиллированной

воды до 2,5 л). Содержание аскорбиновой кислоты, определенн,ое аналогично примеру 1, - 54,40 мг%.

Пример, Экстракт и 4 пробы дл  анализа готов т аналогично примеру 2. Как до, так и после добавлени  фенол та растворы остаютс  мутными и пр мое колориметрирование невозможно (рН 3,6).

ПримерВ, К смеси, состо ще из .0,5 мл витаминизированного газированного напитка Са ны (после дегазации пробы) и 4,5 мл сол нокислого буфера (пример 6), добавл ют

29

0

°

35

40

Q

126

0,5 мл реактива Тилманса и определ ют величину поглощени  D , использу  в качестве кюветы сравнени  раствор, содержащий 0,5 мл напитка, 4,5 мл буфера и 1 мл дистиллированной воды. Аналогично определ ют величину поглощени  0,5 мл реактива Тилманса в смеси, состо щей из 4,5 мл буфера и 0,5 мл дистиллированной воды (D), Содержание аскорбиновой кислоты в мг/л напитка определ ют по формуле

X 0.225.(рВ, 450(D-DJ,

где 0,225 - коэффициент, найденный

экспериментально и соответствующий величине M/(D-D2) формулы, приведенной в примере 2; 0,5 - величина пробы напитка,

вз той на анализ, мл; 1000 - коэффициент, учитывающий

перевод на 1 л напитка. При сравнении определени  аскорбиновой кислоты в витаминизированных газированных напитках методами колориметрического анализа и визуального титровани  получено хорошее совпадение результатов, мг/л: колориметрирование 121,50; 130,39; 113,40| 128,70; 119,84; 117,60; титрование 121,98; 129,47; 113,42; 126,26; 121,5; 113,42 соответственно

Анализ газирОБан1- ых напитков не требует осуществлени  стадии экстрак- 1ЩИ и определени  редуцирующих примесей из-за их отсутстви . Это обеспечивает существенное упрощение анализа: повьщ1ает чувствительность метода- в 2 ,раза (2,5 мкг по сравнению с 5 мкг), так как исключает дополнительное разведение пробы,, при этом проведение анализа ускор етс  приблизительно в 3 раза по сравнению с методом визуального титровани , дела  реальным осуществление автоматизации процесса.

Таким образом, как видно из примеров 1,3 и 6, колориметрический метод анализа аскорбиновой кислоты дает практически одинаковые результаты при рН в области 3,8-4,5, При рН ниже 3,8 наблюдаетс  некоторое занижение результата .(пример 4). При рН 5,0 (пример 5) результаты также отличаютс  от результатов в интервале 3,8-4,5. Как видно из примера 7, услови  метода индофенол-ксилольной

714429

экстракции непригодны дл  пр мого колориметрировани  из-за мутности водной фазы. Пример 6 иллюстрирует . также возможность использовани  в анализе других буферных систем. Me-- тод индофенол-ксилольной экстракции (пример 2) сложнее предлагаемого способа и дает заниженные результаты .10

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ количественного определени  аскорбиновой кислоты, предусматривающий приготовление испытуемого образ- 5

   128

   ца, добавление к нему реагента в виде 2,6-ди5шорфенолиндофенола, определение величины поглощени  образца с последующим пересчетом полученных результатов по количеству восстановленного аскорбиновой кислотой реагента , отличающийс  тем, что, с целью упрощени  способа, перед добавлением реагента устанавливают рН образца буферным раствором до 3,8-4,5, при этом определение величины поглощени  ведут в области 540 нм непосредственно после добавлени  реагента .

   Картофельные хлопь  длительного хранени  6,20

   Аскорбинова 

   Черна  смородина486 ,0

   Витаминизиро- ; ванный томатный сок94,60

   Вит аминизиро- ванньй  блочно- морковный сок48,00

   Витаминизированный мор- I ковный сок 54,50 46,30

   460,0 Определению мешают природные пигменты

   89,40

   94,60

   44,04 45,60

   52,80

   5Ю

   , t-iuH

   Фче-1

   т w

   S7

   95

   9

   Фиг. 2

   Pff

   0