SU1408374A1

SU1408374A1 - Способ определени НВ @ -антигена

Info

Publication number: SU1408374A1
Application number: SU864124767A
Authority: SU
Inventors: Людмила Михайловна Пинчук
Original assignee: Горьковский Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии И Микробиологии
Priority date: 1986-09-26
Filing date: 1986-09-26
Publication date: 1988-07-07

Abstract

Изобретение относитс к прикладной иммунологии, предназначено дл вирусологии и эпидемиологии при профилактике гепатита В. Цель изобретени - повышение чувствительности метода, удешевление и более широка его доступность дл клинических лабораторий. Дл этого провод т адсорбцию специфических иммуноглобулинов на твердой подложке. Затем провод т отмывку и инкубацию препарата с антигепом и конъюгатом специфических антител с пероксидазой. В качестве твердофазного и.ммуносорбепта примен ют целлофановые диски 01 ±0,2 см, на которые нанос т специфические иммуноглобулины в концентрации 1±0,2 мг/мл. Метод позвол ет обнаружить НВз-антиген в сыворотках и плазме больных вирусными гепатитами с целью определени этиологического фактора инфекции и установлени диагноза заболевани , а также дл контрол препаратов крови (гамма-глобулина, иммуноглобулина, протеина , альбумина и др.) с целью отбраковки образцов, контамированных вирусом гепатита В. € (Л

Description

СХ)

со

Изобретение относитс к прикладной им- viyiKXTornn и может найти 11ри1 1енение в ви- |зусологин и эпидемиологии дл диагностики и профилактики генатита В. Метод позво- ч ет обнаруживать НВ -антиген в сыворот- ах и нлазме больных вирусными генатита- ми с целью определени этиологического фактора инфекции и установлени диагноза заболевани , а также дл контрол прена- ратов крови (гамма-глобулина, иммуно- -лобулина, нротеина, альбумина и др.) с хелью отбраковки образцов, контамирован- ных вирусом генатита В.

Цель изобретени - новышение чувствительности метода, удец евление и более широка его достунность дл ,клинических тбораторий.

Поставленна цель достигаетс тем, что в качестве твердофазного иммуносорбента примен ют целлофановые диски диаметром 1±0,2 см, на которые нанос т специфические иммуноглобулины в концентрации 1 ± ±0,2 мг/мл.

Пример. Диски целлофана диаметром около 1 см (размер дисков зависит от диаметра емкостей, в которых нроизвод т манипул ции с ними) номещают в раствор специфических иммуноглобулинов (анти- IQs } в концентрации 1 в фосфатно- солевом буфере (ФСБ) рН 7,2-7,4 на ночь ( ч) при температуре (-f 2) -(+4)°С. После отмывки водой или ФСБ с 0,05%-ным твина-20 диски инкубируют в растворах антигена или с исследуемыми Пробами в течение 2-3 ч нри 37°С или в течение 18- 20 ч цри комнатной темнературе (дл этой цели могут быть иснользованы любые стек- ;1 нные или пластиковые емкости). После нромывки диски выдерживают в растворе конъюгата airrn-HBs-пероксидаза 1 ч при 37±1°С и после тщательной отмывки - в растворе энзимсубстрата (0,005°/о-на перекись водорода в 0,1 М фосфатно-цитрат- ном буфере рН 5,0 с 0,04% орто-фенилен- диамина). При наличии антигена в нробе диски тотчас окрашиваютс в рко-оранжевый или коричневый цвет, контрольные пробы остаютс бесцветными. Реакцию останавливают через 30-,40 мин 2 Л раствором серной кислоты. При необходимости количественного учета реакции измер ют он

5

O

0

О 5 Q 5

5

тическую плотность раствора с по.моцдью фо- тометрирующего устройства или на спектрофотометре при длине волны 490 нм. Дл подтверждени специфичности реакции провод т реакцию нейтрализации, в этом случае в конъюгат добавл ют 2% антисыворотки (в контроль - нормальной сыворотки). Уменьшение интенсивности окрашивани в 2-2,5 раза по сравнению с контролем указывает на специфический характер реакции.

Предлагаемый способ апробирован на участке по производству иммунодиагности- кумов дл определени НВ -антигена. Чувствительность анализа составл ла не менее 0,4-0,5 мг/мл HBjAg, в пробе по известному способу 0,5-1,0 мкг/мл. Сорбционна емкость целлофана превышала емкость но- листироловых планшетов не менее чем в 3 раза.

Метод высокоспецифичен и позвол ет получать четкие количественные данные. Кроме того, метод доступен, так как результаты могут учитыватьс визуально. Непрореагировавшие компоненты легко отмываютс с целлофана после каждого этапа анализа . Целлофан, цредставл юший собой отмытую от примесей гидратцеллюлозу, вл етс дешевым, прочным и широко доступным .материалом. Дл целей иммунофермент- ной реакции может быть использован целлофан любой марки, выпускаемый отечественной промышленностью.

Метод расшир ет возможности иммуно- ферментного анализа и позвол ет более широко использовать его в клинике - эпидемиологической и гематологической службе дл диагностики и профилактики гепатита В.

Claims

Формула изобретени

Способ определени НВ -антигена, вклю- адсорбцию специфических иммуноглобулинов на твердой подложке, отмывку, инкубацию с антигеном и конъюгатом специфических антител с нероксидазой, оценку результатов провод т по по влению специфического субстратферментного окрашивани , отличающийс тем, что, с целью повышени чувствительности способа, в качестве твердой подложки используют целлофановые диски.