SU1397813A1 - Способ определени воды в биологических объектах - Google Patents

Description

(21)4019670/31-25

(22)10,02,86

(46) 23,05,88,Кюл. № 19

(71)Институт проблем криобиологии и криомедицины АИ УССР

(72)В,А,Моисеев, С,Х.Межидов и О.А,Нардид

(53)538,113 (088,8)

(56) Керова И,К, Применение мочевины в офтальмологической практике, - Вестник офтальмологии, 1965, № 6, с,65-68,

Авторское свидетельство СССР № 830212, кл, G 01 N 24/10, 1981,

(54)CnOCOR СП1РЕДЕЛ :НИЯ ВОЛЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ

(57) Изобретение относитс  к биологии и может быть использовано дл  изучени  вли ни  физико-химических факторов на биологические объекты. Цель изобретени  - определение изменени  количества внутриклеточной воды , В контрольный и опытный образцы суспензии клеток ввод т иминоксиль- ный радикал в конечной концентрации 10 моль/л и парамагнитную соль К,Fe(CN)g в конечной концентрации 0,09-0,11 моль/л, после чего регистрируют спектры ЭПР контрольного и опытного образцов и по соотношению интенсивностей спектров радикалов определ ют изменение количества внутриклеточной воды.

с

(Л

со

00

Изобретение относитс  к биологии и может быть использовано дл  изучени  вли ни  физико-химических факторов на биологические объекты.

Цель изобр-гтени  - определение изменени  количества внутриклеточной воды.

Способ осуществл ют следующим образом .

В контрольный и опытный образцы суспензии клеток ввод т имино- ксильный радикал 2,2,,6-тетраме- тил-4-оксопиперидин-1-оксил в конечной концентрации 2 10 - 10 моль/л и парамагнитную соль К,Ре(СН) в конечной концентрации 0,09-0,, 11 моль/л и снимают спектры ЭПР. Затем сравнивают интенсивность спектров в контрольном и опытном образцах. Интенсивность спектра ЭПР радикала пропорциональна кс-.ичеству радикала внутри клеток и, соответственно , количеству воды в них. Поэтому изменение количества воды определ ют по формуле

D

100%,

,

ho,h, - интенсивность спектров

ЭПР радикала дл  контрольного и опытного образцов, соответственно.

ввод т дополнительно иминоксильный

Пример. Суспензию зритроцитовзз радикал 2,2,6,6-тeтpaмeтил-4-oкco- oтмыли от лейкоцитов физраствором пиперидин-1-оксил в конечной кон- путем центрифугировани  в течение 20 мин при 3000 об/мин. После зтого к части суспензии добавили 1:1 раствор , содержащий 41 О моль/л имино- 40 ксильного радикала 2,2,6,6-тeтpaмe- тил-4-oкcoпипepидин-l - оксила и

центрации 10 моль/л, а па магнитную соль К ii I FeCCN) ввод т в конечной концентрации 0,09 - 0,11 моль/л и по соотношению интен- сивностей спектров ЭПР контрольного и опытного образцов определ ют изме нение количества воды.

0,1 моль/л парамагнитний соли.

0

5

0

5

0

Образец в капилл ре поместили в

О

резонатор спектрометра ЭПР и при 4 С сн ли спектр контрольного образца. Затем к другой части суспензии в таком же соотношении добавили раствор, содержащий кроме иминоксильного радикала (4-10 моль/л) и парамагнитной соли (0,1 моль/л) 30% ПЗО-1500, и аналогичным образом сн ли спектр ЭПР радикала. Интенсивность спектра контрольного образца h 86 отн.ед., опытного h, 57 отн.ед. Таким образом , количество воды в клетке уменьшилось на .

Испытани  показали, что предложенный способ позвол ет определить изменение количества воды внутри клетки с достаточно высокой точностью (i:15%)

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  воды в биологических объектах, заключающийс  во введении в контрольный и опытный образцы парамагнитной соли (СЫ) и сн тии спектров ЭПР радикалов, путем определени  соотношени  количества воды в контрольном и опытном образцах , отличающийс  тем, что, с целью определени  изменени  количества внутриклеточной воды, в контрольный и опытный образцы, представл ющие собой суспензии клеток.

   радикал 2,2,6,6-тeтpaмeтил-4-oкco- пиперидин-1-оксил в конечной кон-

   центрации 10 моль/л, а парамагнитную соль К ii I FeCCN) ввод т в конечной концентрации 0,09 - 0,11 моль/л и по соотношению интен- сивностей спектров ЭПР контрольного и опытного образцов определ ют изменение количества воды.