SU1331889A1

SU1331889A1 - Strain of bacillus sp.bacteria used for cleaning waste water from oxalate

Info

Publication number: SU1331889A1
Application number: SU853975253A
Authority: SU
Inventors: Сергей Петрович Коваленко; Геннадий Михайлович Зайцев; Ольга Владимировна Ласковнева; Сергей Леонидович Мурзин
Original assignee: Институт Микробиологии Ан Бсср
Priority date: 1985-11-05
Filing date: 1985-11-05
Publication date: 1987-08-23

Abstract

Изобретение относитс к микробиологической промьшшенности и касаетс нового штамма бактер ий, который может быть использован при биологической очистке сточных вод от оксала- та. Цель изобретени - штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-154вД, способный к полному разложению оксалата при концентрации его в среде до 40 г/л и росту при температуре до . В услови х аэрации при температуре 28 штамм разлагает 42,6 г/л оксалата за 40-42 ч. 3 табл. СО со сх 00 The invention relates to the microbiological industry and concerns a new bacterial strain that can be used in the biological treatment of wastewater from oxalate. The purpose of the invention is a bacterial strain Bacillus sp. VKM B-154VD, capable of complete decomposition of oxalate at a concentration in the medium up to 40 g / l and rising at temperatures up to. Under aeration conditions at a temperature of 28, the strain decomposes 42.6 g / l of oxalate for 40-42 hours. 3 table. CO cx 00

Description

13318891331889

Изобретейие относитс к микробиоогической промьппленности и касаетс ового штамма бактерий, который может ыть использован при биологической чистке сточных вод от оксалата.The invention relates to a microbiological industry and relates to an ovum strain of bacteria that can be used in the biological treatment of waste water from oxalate.

Цель изобретени - штамм бактерий acillus sp.j способный к полному азложению оксалата при концентрации го в среде до 40 г/л и росту при емпературе до 41 С.The purpose of the invention is the bacillus acillus sp.j strain capable of complete oxalate decomposition at a concentration of go in an environment of up to 40 g / l and a growth at a temperature of up to 41 C.

Штамм выделен из огородной почвы етодом накопительной культуры на инеральной среде следующего состаа , г/л:15 Аммоний щавелевокислыйThe strain was isolated from a garden soil by the method of a cumulative culture on an ineric medium of the following composition, g / l: 15 Ammonium oxalate

КН2Р04KH2P04

MgS04 7H OMgS04 7H O

12Н,012H, 0

46,86 3,0 6,0 0,0546.86 3.0 6.0 0.05

Триосульфа .натри 1,0 рН среды7,0Triosulfa. Sodium 1.0 pH 7.0

По 2 г почвы внос т в колбы объемом 250 мл, содержащие 50, мл среды, и вьщерживают при 28°С в течение 20 дней. Из тех колб, где происходит выделение аммиака, отбирают по 5 мл накопительной культуры и внос т в колбы со свежей средой. Культивирование провод т при 28°С на качалке (180 об/мин). Через 5 дней из колб, где наблюдают рост, потребление оксалата и вьзделение аммиака, делают пов- торньш пересев в колбы со свежей средой . Культивирование провод т в тех же услови х. Чистую культуру бактерий Bacillus -sp. ттамм ЛСМ-ОКС-1 выдел ют из отдельной, наиболее быстрорастущей колонии, полученной путем рассева накопительной культуры на чашки с агаризованной минеральной средой с оксалатом аммони .2 g of soil were added to 250 ml flasks containing 50 ml of medium and incubated at 28 ° C for 20 days. From the flasks where the ammonia is released, 5 ml of cumulative culture are taken out and added to the flasks with fresh medium. The cultivation was carried out at 28 ° C on a shaker (180 rpm). After 5 days from flasks where growth is observed, oxalate consumption and ammonia release, they are made to reseed in flasks with fresh medium. The cultivation was carried out under the same conditions. Pure Bacillus bacteria culture -sp. LSM-OKS-1 ttamm was isolated from a single, fastest growing colony, obtained by sieving the enrichment culture on plates with an agarized mineral medium containing ammonium oxalate.

Штамм сохран ет жизнеспособность в течение трек лет при хранении под слоем минерального масла на агаризованной среде с оксалатом аммони и в лиофильно высушенном состо нии.The strain remains viable for track years when stored under a layer of mineral oil on an agar medium with ammonium oxalate and in a lyophilized state.

Штамм Bacillus sp ЛСМ-ОКС-1 депонирован Всесоюзной коллекцией микроорганизмов ИБФМ АН СССР под номером ВКМ В-1548Д и имеет следующие куль- турально-морфологические и физиолого- биохимические характеристики.The strain Bacillus sp LSM-OKS-1 was deposited with the All-Union Collection of Microorganisms of the Academy of Sciences of the USSR Academy of Sciences under the number VKM B-1548D and has the following cultural-morphological and physiological-biochemical characteristics.

Клетки - одиночные, пр мые, короткие палочки размером 1,63x0,92 - 1,21х хО,74 мкм, подвижные; движутс при помопщ перитрихально расположенных жгутиков. Грамположительные, Образуют эндоспоры.Cells - single, straight, short sticks with a size of 1.63 x0.92 - 1.21 x XO, 74 μm, motile; moving with the help of peritrichly flagella. Gram-positive, Form endospores.

2020

2525

30thirty

3535

4040

4545

5050

5555

н n

5 five

00

5five

00

5five

00

5five

00

5five

На минеральной агаризованной среде с оксалатом колонии выпуклые гладкие, блест щие, с ровными кра ми, в центре светло ;;коричнавого цвета, по кра м - прозрачные, 3-5 мм в диаметре. Пигмент в среду не выдел ют.On the mineral agar medium with oxalate, the colonies are convex, smooth, shiny, with even edges, light in the center; brown color, transparent along the edges, 3-5 mm in diameter. No pigment is isolated on Wednesday.

На жидкой минеральной среде с оксалатом штамм растет, образу муть, осадок, который при взбалтывании легко взмучиваетс . Пигмент в среду не выдел етс .In a liquid mineral medium with oxalate, the strain grows, forming a haze, a precipitate, which is easily stirred up when agitated. No pigment is released on Wednesday.

Аэроб. Дает положительную оксидаз- ную реакцию, имеет каталазу. Ростна минеральной среде, содержащей окса- лат, ингибируетс хлористым трифенил- тетразолием в конпентрации 0,02% и хлористым натрием в концентрации 5,0%. Растёт при , не растет при 9 и 41°С. Оптимальна температура дл роста 28-35°С. Пределы рН дл роста 6,8-9,0.Aerobe. Gives a positive oxidase reaction, has a catalase. Growth in the mineral medium containing oxalate is inhibited by triphenyltetrazolium chloride in a concentration of 0.02% and sodium chloride in a concentration of 5.0%. It grows at, does not grow at 9 and 41 ° C. The optimum temperature for growth is 28-35 ° C. The pH range for growth is 6.8-9.0.

Ацетоин и индол не образует. Лакмусовое молоко не измен ет. Желатину не разжижает. Крахмал не гидролизует.Acetoin and indole does not form. Litmus milk does not change em. Gelatin does not dilute. Starch does not hydrolyze.

Отношение к источникам углерода: штамм вл етс облигатным оксалотро- фом, т.е. использует в качестве источника углерода только оксалат. Этот вывод сделан на основании данных, полученных при изучении способности штамма использовать различные органические соединени в качестве единственного источника углерода. Проверено 65 соединений из группы Сахаров, спиртов, аминокислот, органических кислот. Ни одно из проверенных соединений , кроме оксалата, не обеспечивает рост штамма.Attitude to carbon sources: the strain is an obligate oxalotroph, i.e. uses only oxalate as a carbon source. This conclusion is made on the basis of the data obtained in the study of the ability of the strain to use various organic compounds as the sole carbon source. 65 compounds from the group of sugars, alcohols, amino acids, organic acids were tested. None of the tested compounds, except oxalate, provides growth of the strain.

Штамм способен расти в среде, содержащей высокие концентрации оксалата , вплоть до насьщени , при этом разложение оксалата происходит в присутствии многих органических соединений .The strain is able to grow in a medium containing high oxalate concentrations, up to saturation, with the decomposition of oxalate occurring in the presence of many organic compounds.

Отношение к источникам азота: усваивает аммонийньш азот. Не усваивает нитритньй, нитратньй азот и мочевину.Relation to nitrogen sources: assimilates ammonium nitrogen. Does not assimilate nitrite, nitrate nitrogen and urea.

Не нуждаетс в факторах роста. Не Цатогенен. Признаки штамма устойчивы.Does not need growth factors. Not Tsatogenen. Signs of strain resistant.

Пример 1 о Разложение оксалата в услови х аэрации в колбах.Example 1: Oxalate decomposition under aeration conditions in flasks.

Культуру штамма Bacillus sp ВКМ В-1548Д, вьфащенную при 28°С в течение 3 сут на агаризованной среде следующего состава, г/л: ( (оксалат аммони ) 10i NaHCOJ 9,8; NaH2P04-2H20 12,1j NaCl 0,7; KCIO.,57 MgCl2.-6H2,0 0,1; CaClo-6HtO 0,01;. тио 1331889The culture of the strain Bacillus sp VKM B-1548D, boosted at 28 ° C for 3 days on an agar medium of the following composition, g / l: ((ammonium oxalate) 10i NaHCOJ 9.8; NaH2P04-2H20 12.1j NaCl 0.7; KCIO., 57 MgCl2.-6H2.0 0.1; CaClo-6HtO 0.01; thio 1331889

сульфат 1,6, петлей высевают в колбуsulfate 1.6, loop seeded into the flask

со воwith in

емкостью 250 мл, содержащую 50 мл посевной среды того же состава. Колбу помещают на круговую качалку (180 об/мин). Посевной материал вьфа щивают в течение 30 ч при 28 С. Приготовленным посевным материалом в количестве 10 мл засевают колбы емкостью 500 мл, содержащие 90 мл среды того же состава. Выращивание культуры провод т на качалке (180 об/мин) при 28°С. Врем полного разложени окса- лата в зависимости от его концентрации в среде приведено в табл.1. capacity of 250 ml, containing 50 ml of inoculum medium of the same composition. The flask is placed on a circular rocking chair (180 rpm). The seed material is stored for 30 hours at 28 C. A prepared seed in the amount of 10 ml is seeded with a flask with a capacity of 500 ml containing 90 ml of medium of the same composition. Growing the culture is carried out on a rocking chair (180 rpm) at 28 ° C. The time of complete decomposition of oxalate, depending on its concentration in the medium, is given in Table 1.

Пример 2. Разложение оксалата в услови х аэрации в ферментере.Example 2. Oxalate decomposition under aeration conditions in a fermenter.

. Посевнвм материалом в количестве . 100 мл, приготовленным, как описано в примере 1,, засевают ферментер емко- стью 3,0 л, содержащий 900 мл среды. Режим культивировани : перемешивание --250 об/мин; аэраци - 1 л/л. Crop material in quantity. 100 ml prepared as described in example 1, are seeded with a 3.0 liter fermenter containing 900 ml of medium. Cultivation mode: mixing --250 rpm; aeration - 1 l / l

среды, мин; температура . Врем полного разложени оксалата в зависимости от концентрации его в среде приведено в табл.2. Wednesday, min; temperature . The time of complete decomposition of oxalate, depending on its concentration in the medium, is given in Table 2.

П р и м е р 3. Разложение оксалата в услови х аэрации в ферментере при разных температурах.Example 3: Oxalate decomposition under aeration conditions in a fermenter at different temperatures.

Вьфащивание культуры провод т при различной температуре в Среде, содер жащей 7,1 г/л оксалат-иона. Остальные операции провод т так же, как в примере 2. Врем полного разложени оксалата в зависимости от температуры выращивани приведено в табл.3.The culture was removed at various temperatures on Wednesday, containing 7.1 g / l of oxalate ion. The remaining operations are carried out as in Example 2. The time for the complete decomposition of oxalate, depending on the growth temperature, is given in Table 3.

Врем полногоFull time

разложени 26-28 27-30 30-32 33-35. 36-38 40-42 43-45decomposition 26-28 27-30 30-32 33-35. 36-38 40-42 43-45

оксалата, чoxalate, h

Врем полногоFull time

разложени 17-19 18-20 20-22 23-25 28-30 34-36 40-42decomposition 17-19 18-20 20-22 23-25 28-30 34-36 40-42

оксалата, чoxalate, h

Q Q

о about

5five

00

5five

Пример 4. Разложение юксалата, содержащегос в промьшшенных сточных водах.Example 4. Decomposition of yuxalate contained in industrial wastewater.

Штамм выращивают на сточньпс водах гидролизного завода, содержащих следующие компоненты, г/л:The strain is grown on wastewater hydrolysis plant containing the following components, g / l:

Редуцирующие вещества 1,2 Монокарбоновые кислоты (в пересчете на уксусную кислоту)2,0 Щавелева кислота 7,0 Летучие кислоты 0,3 Азот 0,12 Фосфор 0,07 Сточную воду засевают посевным материалом в количестве 10%, полученным при вьфащивании штамма бактерий на качалке (180 об/мин) в течение 30 ч при 28°С в колбах объемом 250мл с 50 МП среды, следующего состава, г/л: NaHCOj 9,8j NaH2P04 2HjO 12,1; NaCl 0,7; KCl 0,57; MgClj-бН О 0,1; CaClj-SHjO 0,01; тиосульфат 1,6, ок- салат аммони 10. .Reducing substances 1,2 Monocarboxylic acids (in terms of acetic acid) 2,0 Oxalic acid 7,0 Volatile acids 0.3 Nitrogen 0.12 Phosphorus 0.07 Sewage water is inoculated with seed material in the amount of 10% obtained by increasing the strain of bacteria on a rocking chair (180 rpm) for 30 hours at 28 ° C in 250 ml flasks with 50 MP of medium, of the following composition, g / l: NaHCOj 9.8j NaH2P04 2HjO 12.1; NaCl 0.7; KCl 0.57; MgClj-bH 0 0.1; CaClj-SHjO 0.01; thiosulfate 1.6, ammonium oxydate 10..

Claims

The cultivation is carried out in 500 ml flasks containing 100 ml of wastewater, on a rocking chair (180 rpm) at. Under these conditions, the Bacillus sp VKM B-1548D strain completely decomposes 7.0 g / l oxalate. for 25 hours. Formula of the invention

The strain of bacteria Bacillus sp. VKM B-1248D used to clean oxalate from wastewater. Table 1

Full time

decomposition. 29-31 18-20 19-21 20-22 25-27 No growth

oxalate, h

Editor N.Egorova

Compiled by L. Mineeva

Tehred V.Kadar Proofreader V.Girn to

Order 3770/23 Circulation 99 Subscription

VNIIPI USSR State Committee

for inventions and discoveries 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk nab., 4/5

Production and printing company, Uzhgorod, st. Project, 4

Table3