SU1329780A1 - Method of determining quality of spermatozoa - Google Patents
Method of determining quality of spermatozoa Download PDFInfo
- Publication number
- SU1329780A1 SU1329780A1 SU864035697A SU4035697A SU1329780A1 SU 1329780 A1 SU1329780 A1 SU 1329780A1 SU 864035697 A SU864035697 A SU 864035697A SU 4035697 A SU4035697 A SU 4035697A SU 1329780 A1 SU1329780 A1 SU 1329780A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- sperm
- acrosome
- fluorochrome
- head
- luminescence
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Description
Изобретение относитс к биологии размножени животных и предназначено дл лабораторных и клинических исследований в области криобиологии, ветеринарии и медицины .This invention relates to animal breeding biology and is intended for laboratory and clinical research in the field of cryobiology, veterinary medicine, and medicine.
Целью изобретени вл етс повышение точности определени .The aim of the invention is to improve the accuracy of determination.
Пример. В питательную среду ввод т тиазиновый красный и этидиум бромид в количестве 0,006 и 0,001 мае./о: соответстве- но. Затем отмеривают в пробирку в соотне- шении 1:10 сперму и питательную среду, содержащую флуорохром (например 0,01 мл спермы и 0,1 .мл среды), тщательно переме- 1пивают, нанос т на предметное стекло каплю смеси и плотно накрывают покровным стеклом так, чтобы движение спермиев было ограничено. После этого препарат помещают под люминесцентный микроскоп (МЛ-2 или МЛ-3). При этом используют возбуждающий свет с длиной волны 365 нм, а ф. 1у- оресценцию наблюдают в области 500-700 нм. Препарат рассматривают под иммерсией при увеличении не менее 90x15 в отраженном свете. В поле зрени учитывают число (процент) поврежденных и нормальных спермиев. При этом на темно-синем фоне четко просматриваютс более светлые спермин, которые относ т к нормальным (акросома нормальных спер.миев несколько темнее головки, но светлее фона). При повреждении акросомы, ко1 да нарушена проницаемость ее мемб)аны, тиазиновый красный , проника внутрь акросомы, вызывает ее свет. ю-салатное свечение. При более г.чу- боком повреждении акросомы, согфовождаю0Example. Thiazine red and ethidium bromide in an amount of 0.006 and 0.001 May / about are introduced into the nutrient medium: o. Then, sperm and nutrient medium containing fluorochrome (for example, 0.01 ml of sperm and 0.1 ml of medium) are measured in a test tube at a ratio of 1:10, carefully stirred, put a drop of the mixture on a glass slide and tightly covered with a cover slip. glass so that sperm movement is restricted. After that, the drug is placed under a fluorescent microscope (ML-2 or ML-3). In this case, excitation light with a wavelength of 365 nm is used, and f. 1- orescence observed in the region of 500-700 nm. The drug is considered under immersion with an increase of at least 90x15 in reflected light. The field of view takes into account the number (percentage) of damaged and normal sperm. At the same time, lighter spermatozoa, which are normal, are clearly visible on a dark blue background (acrosome of normal sperm is somewhat darker than the head, but lighter than the background). If the acrosome is damaged, the permeability of its membrane, thiazine red, penetrates into the acrosome, and causes its light to be damaged. yu-lettuce glow. When more than one person has acrosome damage, I congregate 0
5five
00
5five
00
щемс нарушением ее морфологического строени , чаще всего приобретением шаровидной формы, тиазиновый красный вызывает ее интенсивное рко-малиновое свечение . При повреждени х цитоплазматичес- кой мембраны спермиев этидиум бромид проникает в клетку и, св зыва сь с ДНК, вызывает рко-малнновое свечение головки сперми .This violation of its morphological structure, most often the acquisition of a spherical shape, thiazin red causes its intense, bright crimson glow. When the cytoplasmic membrane of sperm cells is damaged, ethidium bromide penetrates into the cell and, by binding to DNA, causes a bright luminescence of the sperm head.
Оптимальное соотнои ение в смеси тиа- зинового красного и этидиум бромида определ ют следующим образом. В питательную среду (разбавитель спермы петухов ЛКС-1) ввод т различные навески красителей, а также детергент дигитанин в конечной концентрации 1 мМ с цельк) повреждени у всех спермиев мембран головок и акросомThe optimum ratio in a mixture of thiazine red and ethidium bromide is determined as follows. Various samples of dyes, as well as detergent digitalanin at a final concentration of 1 mM per target, are injected into the nutrient medium (diluent of sperm of cocks LKS-1) damage to all sperm head membranes and acros
Результаты исследований представлены в таблице.The research results are presented in the table.
Дл удобства учета интенсивности свечени поврежденных органелл спермиев при применении той или иной концентрации красителей в таблице приведена характеристика по 5-балльной , где 5 баллов отражают наиболее интенсивное свечение по врежденных акросомы и головки сперми ; 4 балла - интенсивное свечение одной поврежденной органеллы (например акросомы ) и ме}|ее интенсивное, но еще четко различимое свечение другой (например головки ); 3 балла - недостаточно интенсивное свечение головки и акросомы или же достаточно интенсивное свечение одной органеллы при еле различимом свечении другой; 2 балла - слабое свечение г оловки и акро- 1 балл - еле различимое свечение спермиев.For the convenience of taking into account the intensity of luminescence of damaged sperm organelles when using one or another concentration of dyes, the table shows a 5-point characteristic, where 5 points reflect the most intense luminescence of damaged acrosomes and sperm heads; 4 points - intense luminescence of one damaged organelle (for example, acrosomes) and me} its intense, but still clearly distinguishable luminescence of another (for example, head); 3 points - insufficiently intense luminescence of the head and acrosome, or sufficiently intensive luminescence of one organelle with a faint luminescence of the other; 2 points - a weak luminescence of the tin and acro-1 point - a barely perceptible luminescence of the sperm.
Представленные в таблице данные сви детельствуют о том, что тиазоновый красный и этидиум бромид можно эффективно использовать в смеси в довольно широких пределах (0,003-0,012 мас.% и 0,0005- 0,002 мас.% соответственно). При этом оптимальна концентраци тиазинового красного в данной смеси составл ет 0,005- 0,008 мас.%, а этидиум бро.мида - 0,0008- 0,0015 мас.%. Недостаточна концентраци красителей (или одного из них) в смеси , т.е. меньше нижнего предела, не обеспечивает четкой дифференциации структур сперми в св зи со слабым свечением, а избыток (выше верхнего предела) приводит к увеличению интенсивности фонового свечени , что затрудн ет наблюдение. Избыток одного красител (например тиазинового красного ) маскирует люминесценцию другого (этидиум бромида), введенного в недостаточной концентрации.The data presented in the table indicate that tiazon red and ethidium bromide can be effectively used in a mixture within fairly wide limits (0.003-0.012 wt.% And 0.0005- 0.002 wt.%, Respectively). The optimal concentration of thiazin red in this mixture is 0.005-0.008% by weight, and ethidium brome is 0.0008- 0.0015% by weight. Insufficient concentration of dyes (or one of them) in the mixture, i.e. less than the lower limit, does not provide a clear differentiation of sperm structures due to weak luminescence, and an excess (above the upper limit) leads to an increase in the intensity of the background luminescence, which makes it difficult to observe. The excess of one dye (for example, thiazine red) masks the luminescence of another (ethidium bromide), introduced in insufficient concentration.
Таким образом, предлагаемый способ позвол ет при необходимости дифференцировать в препарате спермии на нормальные (несвет щиес темно-син головка и акро- сома); с нормальной головкой (несвет ща с , темно-син ) и поврежденной акросо- мой (светло-салатное или рко-малиновое свечение); с поврежденной головкой ( рко- малиновое свечение) и неповрежденной ак- росомой (несвет ща с , темно-син ); с поврежденной головкой и поврежденной акросомой (свет ща с светло-салатна акросома и рко-малинова головка или же рко-малиновое свечение акросомы иThus, the proposed method allows, if necessary, to differentiate in the sperm preparation to normal ones (unlit dark blue head and acrosome); with a normal head (dark light, dark blue) and damaged acrosome (light salad or bright crimson luminescence); with a damaged head (a bright crimson glow) and intact acrosome (inconspicuous, dark blue); with a damaged head and a damaged acrosome (light schA with a light salad acrosome and a bright crimson head or a bright crimson glow of the acrosome and
головки); с нормальной головкой (несве- т ща с , темно-син ) и отсутствием акросомы; с поврежденной головкой ( рко-малиновое свечение) и отсутствием акросомы;heads); with a normal head (lighter, dark blue) and the absence of an acrosome; with a damaged head (a bright crimson glow) and the absence of an acrosome;
отдельно расположенные друг от друга све- т цщес органеллы сперми (акросома, головка , хвостик).separately located from each other are the light of the center of sperm organelles (acrosome, head, tail).
Данна дифференциаци с 1ермиев дает возможность более точно установить, а затем и устранить причину тех или иных повреждений . Это особенно важно при разработке режимов замораживани и оттаивани спермы, изучени токсичности криопро- текторов, разработке сред дл хранени и замораживани спермы, режимов эксплуатаThis differentiation from terms allows you to more accurately determine and then eliminate the cause of these or other damages. This is especially important in the development of freezing and thawing of sperm, the study of the toxicity of cryoprotectants, the development of media for storing and freezing of sperm, and operating conditions.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU864035697A SU1329780A1 (en) | 1986-03-24 | 1986-03-24 | Method of determining quality of spermatozoa |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU864035697A SU1329780A1 (en) | 1986-03-24 | 1986-03-24 | Method of determining quality of spermatozoa |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1329780A1 true SU1329780A1 (en) | 1987-08-15 |
Family
ID=21225886
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU864035697A SU1329780A1 (en) | 1986-03-24 | 1986-03-24 | Method of determining quality of spermatozoa |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1329780A1 (en) |
-
1986
- 1986-03-24 SU SU864035697A patent/SU1329780A1/en active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bantle | FETAX—A developmental toxicity assay using frog embryos | |
Daley et al. | Direct counts of aquatic bacteria by a modified epifluorescence technique 1 | |
JP4913722B2 (en) | Method for evaluating freshness of fish fillets | |
Clemmesen | A RNA and DNA fluorescence technique to evaluate the nutritional condition of marine fish larvae | |
US5437980A (en) | Phenanthridium dye staining of nucleic acids in living cells | |
WO2008099385A2 (en) | Methods and kits for qualifying sperm cells | |
SCHLÜTER et al. | Female preference for symmetrical vertical bars in male sailfin mollies | |
Sukardi et al. | Simultaneous detection of the acrosomal status and viability of incubated ram spermatozoa using fluorescent markers | |
Marza et al. | Histochemistry of the ovary of Fundulus heteroclitus with special reference to the differentiating oocytes | |
Villanueva et al. | Embryonic life of the loliginid squid Loligo vulgaris: comparison between statoliths of Atlantic and Mediterranean populations | |
CN1898552B (en) | Harmful substance evaluating method and harmful substance evaluation kit | |
KR101034993B1 (en) | Agent for detecting malondialdehyde, method of making the same, and test kit for use thereof | |
ALDRICH et al. | Gonyaulax monilata: population growth and development of toxicity in cultures | |
SU1329780A1 (en) | Method of determining quality of spermatozoa | |
Martin‐Partido et al. | Differential staining of dead and dying embryonic cells with a simple new technique | |
Mobbs et al. | Techniques for dye injection and cell labelling | |
Cook | Quantitative measurement of paramylum in Euglena gracilis | |
Adekunle et al. | Preservative effects of cysteine on sperm viability of West African dwarf goat bucks chilled at 4oC | |
Peters | Heterodera schachtii (Schmidt) and soil acidity | |
RU2050128C1 (en) | Fresh water reservoir environmental condition assessment method | |
BISHOP et al. | Differentiation of the acrosome in living mammalian spermatozoa and spermatids by fluorescence microscopy | |
NO317169B1 (en) | Mixing and method of labeling fish | |
SU1445634A1 (en) | Method of assessing shadow-endurance of plants | |
Solberg et al. | Effects of low levels of Ekofisk Crude oil on eggs and yolksac larvae of cod (Gadus morhua L.) | |
SU1066552A1 (en) | Method of prostatectomy |