SU1322153A1

SU1322153A1 - Method of determining hyperoxides of lipids

Info

Publication number: SU1322153A1
Application number: SU853892842A
Authority: SU
Inventors: Вадим Зиновьевич Ланкин; Алла Карловна Тихазе; Юрий Гунарович Осис; Анатолий Михайлович Вихерт
Original assignee: Всесоюзный Кардиологический Научный Центр
Priority date: 1985-04-30
Filing date: 1985-04-30
Publication date: 1987-07-07

Abstract

Изобретение относитс к биохимии . Цель изобретени - ускорение способа. Анализируемый образец внос т в инкубационную смесь и регистрируют скорость падени оптической плотности. Добавл ют глутатион-S- трансферазу, отмечают оптическую плотность, регистрируют скорость ее уменьшени и рассчитывают количество гидропероксидов в пробе. (Л с со tsD Is: ел соThis invention relates to biochemistry. The purpose of the invention is the acceleration of the method. The sample to be analyzed is introduced into the incubation mixture and the rate of drop in optical density is recorded. Glutathione-S-transferase is added, optical density is noted, the rate of its decrease is recorded and the amount of hydroperoxides in the sample is calculated. (L with with tsD Is: ate with

Description

Изобретение относитс к экспери-- ментальной биохимии, конкретно к ме- торам анализа биологически активных веществ, и может быть использовано в клинической биохимии и медицине при диагностике р да заболеваний.The invention relates to experimental biochemistry, specifically to the methods of analysis of biologically active substances, and can be used in clinical biochemistry and medicine in the diagnosis of a number of diseases.

Целью изобретени вл етс ускорение способа за счет использовани в качестве фермента - восстановител глутатион-8-трансферазы.The aim of the invention is to accelerate the process by using glutathione-8-transferase as a reducing enzyme.

Способ осуществл етс следующим образом.The method is carried out as follows.

Анализируемьш образец в количестве не более половины конечного объема испытуемой жидкости внос т в инкубационную смесь, содержащую (конечные концентрации) 5 ммоль ЭДТА, 1 ммоль восстановленного глутатиона, 0,2 ммоль восстановленной формы нико тинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ-Н) и 1 ед/мл глутатион-редук- тазы,An analyzed sample in an amount of not more than half the final volume of the test liquid is introduced into the incubation mixture containing (final concentrations) 5 mmol EDTA, 1 mmol reduced glutathione, 0.2 mmol reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) and 1 U / ml glutathione -reductases,

В течение 5 мин регистрируют скорость падени оптической плотности при 340 нм (VQ). Затем добавл ют 5 ед. глутатион-З-трансферазы, отмечают оптическую плотность при 340 нм (А) и, регистриру скорость ее умен шени , отмечают врем (Т), необходимое дл достижени скорости V - величину оптической плотности при 350 нм (А) в момент времени Т.A drop in optical density at 340 nm (VQ) is recorded for 5 minutes. Then add 5 units. glutathione-3-transferases, the optical density at 340 nm is noted (A) and, by registering its rate of decrease, the time (T) necessary to achieve speed V is noted — the value of optical density at 350 nm (A) at the time point T.

Количество гйдропероксидов (М|., ) в пробе (моль) рассчитывают по формулеThe number of hydroperoxides (M |.) In the sample (mol) is calculated by the formula

A-r-Ao-Vo Т Тп 340;500 где Е 340 - коэффициент мол рной.A-r-Ao-Vo T Tp 340; 500 where E 340 is the molar coefficient.

экстинкцииextinction

при 340 нм (339 нм), равньм 6,3 ,at 340 nm (339 nm), equal to 6.3,

Пример 1. Определение содержани гйдропероксидов линолевой кисМ .Example 1. Determination of hydroperoxide content of linoleic acid.

Составитель И.Емель ненко Редактор С.Патрушева Техред А.Кравчук Корректор И,.МускаCompiled by I.Emel Nenko Editor S.Patrusheva Tehred A.Kravchuk Proofreader I, .Muska

Заказ 2856/39 Тираж 776ПодписноеOrder 2856/39 Circulation 776 Subscription

ВНИИПИ Государственного комитета СССР.VNIIPI USSR State Committee.

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска наб., д. 4/5for inventions and discoveries 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk nab., 4/5

Производственно-полиграфическое предпри тие, г.Ужгород, ул.Проектна , 4Production and printing company, Uzhgorod, Projecto st., 4

лоты, к 16,9 нмоль гидропероксида линолевой кислоты добавл ют 10 мкмоль ЭДТА, 2 мкмоль восстановленного глутатиона , 0,4 мкмоль НАДФ-Н, 2 ед. глутатионредуктазы. Объем довод т буфером (50 ммоль К, Na-фосфатный, рН 7,4 и 50 ммоль СаС) до 2,0 мл и провод т определение.lots, to 16.9 nmol of linoleic hydroperoxide add 10 µmol EDTA, 2 µmol reduced glutathione, 0.4 µmol NADPH, 2 units. glutathione reductase. The volume was adjusted with buffer (50 mmol K, Na-phosphate, pH 7.4 and 50 mmol CaC) to 2.0 ml and determined.

Результаты рассчитывают по указанной формуле ,054; Vo 0,0002; мин; ,8-Ю моль. Коэффициент коррел ции 95%. Процент ошибки 0,5%.The results are calculated according to the formula, 054; Vo 0.0002; min; , 8 th mole. The correlation coefficient is 95%. Error percentage 0.5%.

Таким образом, способ обладает большей точностью и чувствительностью , чем известный ферментативный способ с использованием глутатион- перокСидазы и в то же врем вл етс более специфичным, что существенно расшир ет область его применени . В инкубационной смеси не требуетс присутстви фермента каталазы, а количество основного (восстанавливающего гидроперекиси) фермента требуетс в 50 раз меньше дЛ проведени анализа готового образца за меньшее врем . Кроме того, не требуетс гидролиз этерифицированнЫх гйдропероксидов жирных кислот до свободных жирных кислот, что значительно ускор ет провод имьй анализ.Thus, the method has greater accuracy and sensitivity than the known enzymatic method using glutathione peroxidase and at the same time is more specific, which significantly expands its scope. In the incubation mixture, the presence of the catalase enzyme is not required, and the amount of the main (reducing hydroperoxide) enzyme is required 50 times less than DL for analyzing the finished sample in less time. In addition, hydrolysis of esterified fatty acid hydroperoxides to free fatty acids is not required, which significantly speeds up the wire analysis.

Claims

Invention Formula

The method for determining lipid hydroperoxides by their enzymatic reduction followed by spectrophotometry of the sample is different in that glutathione-S-transferase is used as a reducing enzyme.