SU1296011A3

SU1296011A3 - Способ выделени @ @

Info

Publication number: SU1296011A3
Application number: SU833637905A
Authority: SU
Inventors: Йорма-Кески-Ойа; Партанен Поль; Суованиеми Осмо
Original assignee: Лабсистемз Ой (Фирма)
Priority date: 1981-12-15
Filing date: 1983-08-12
Publication date: 1987-03-07
Also published as: EP0097196A1; FI63778C; WO1983002122A1; JPS58502083A; FI63778B

Abstract

Изобретение относитс к медицинской микробиологии и может быть использовано дл изучени экспериментальной хламидиальной инфекции клеток эпители . Цель изобретени - упрощение и ускорение способа за счет использовани чувствительной клеточной культуры. Пробы подвергают гомогенизации и центрифугируют. Каждую пробу дел т на две равные части и прививают на клетки Мак-Ко и Mus musculus cas- taneous (MMC-E). В качестве контрол используют пробы, привитые на буфер с сахарозой и фосфатом. Затем клетки инкубируют, после чего питательную среду удал ют из культуральных трубок . В каждую трубку добавл ют метанол и выдержибают в течение 10 мин. После этого метанол удал ют, добавл ют раствор Люгол . Через 20 мин этот раствор удал ют и подсчитывают окрашенные включени . СО с ьо со О5 О см

Description

Изобретение относитс к медицинской микробиологии и может быть использовано дл выделени Chlamydia trachomatis и изучени экспериментальной хламидиальной инфекции клеток эпители .

Цель изобретени - .упрощение и ускорение способа за счет использовани чувствительной клеточной культуры , не требующей дополнительной подготовки перед заражением.

Кратка характеристика чувствительной к Chlamydia trachomatis клеточной культуры эпители эмбриона мьгаш Mus musculus castaneous (ММС-Е).

.20

25

В ММС-Е-культуре обнаруживаютс плотные сочленени и десмосомные структуры, небольшое количество фиб- ронектипа на поверхности клеток, нити кератина. Клетки ШС-Е не вл ютс опухо- леродными и на них вы вл ютс значительные количества рецепторов зпидер- мального фактора роста.

Культура клеток ММС-Е известна и. может быть получена в Национальном Институте рака, Фредерик, М,ц. у доктора Раппа, Клетки ММС-Е восприимчивы к Chlamydia trachomatis без допол- нйтельной обработки перед заражением.

Пример 1. Клетки ММС-Е выращивают на гибких тканевых пластинках в ВНК-среде, содержащей 10% фетальной

J5

Использование клеток ММС-Е вместо облученных клеток Мак-Ко позвол ет

тел чьей плазмы и 50 jjg гентамицина

на.I мл среды. Высевают 3x10 клеток 5 Ускорить выделение Chlamydia trachomatis от 4-5 до 1-2 дней и значительно упростить способ, так как используема культура клеток не требует предварительного облучени или обработки другими физико-химическими факторами ,

в 10 мл питательной среды в широкую пластиковую трубку с плоским дном, имеющую иокровнбе стекло диат етром 13 мм, к которому прекрепл ютс вьфа- щиваемые клетки. Трубки инкубируют , при 35 °С в 5%-ном Со и используют дл И1в)кул ции через 1-2 дн , когда количество клеток составл ет 10 на покровное стекло.

45 Способ выделени Chlamydia trachomatis путем заражени исследуемым материалом клеточной культуры с последующим инкубированием, окрапмвани- ем препаратов и учетом включений

Клетки Мак-Ко выращивают так же, как и клетки ММС-Е, Пластиковые трубки с клетками Мак-Ко подвергают облучению до 4500 раз от Со-источника . Питательна среда замен етс све- 50 Chlamydia trachomatis в клетках тка- жей и клетки, инкубируют при 37 С 72 ч, ни, отличающийс тем, Затем их рассеивают в пластиковые что, с целью упрощени и ускорени трубки в количестве 10 клеток на способа, исследуемым материалом зара- трубку. После инкубировани в течение жают клетки эпители эмбриона мьшги 24 ч отбирают жизнеспособные клетки 55 Mus musculus castaneous (ММС-Е) не- дл выделени Chlamydia trachomatis, посредственно после их получени .

ВНИИПИ

Заказ 631/64

Произв.-полигр. пр-тие, г, Ужгород, ул. Проектна , 4

0

5

-

Пример 2, В качестве исследуемого материала используют пробы из мочеиспускательного канала и из шейки матки пациентов, проход щих амбулаторное лечение. Пробы оттаивают, если они были заморожены, и подвергают гомогенизации при перемешивании в течение 20 с, центрифугируют со скоростью 3000 g в течение 1 ч при 37 С, Кажда проба делитс на две равные части и прививаетс на клетки Мак-Ко и ММС-Е. В качестве контрол используютс пробы, привитые на буфер , содержащий 0,2 М сахарозу и J5 05,02 М фосфат. Затем клетки инкубируют 3 течение двух дней при 37°С, пос- ле чего питательную среду удал ют из культуральньк трубок, в каждую трубку добавл ют 1 мл метанола и выдерживают клетки 10 мин при комнатной температуре . После этого метанол удал ют, добавл ют 1 мл раствора Люгол и клетки оставл ют на 20 мин при комнатной температуре. После этого Люголь удал ют и производ т подсчет окрашенных включений на покровном стекле под микроскопом. Включени в клетках ММС-Е имеют размер, соответствующий включени м в клетках Мак-Ко и легко обнаруживаютс . Однако точные размеры включений не определ ютс из-за их неправильной формы.

5 Ускорить выделение Chlamydia tracho40

matis от 4-5 до 1-2 дней и значительно упростить способ, так как используема культура клеток не требует предварительного облучени или обработки другими физико-химическими факторами ,

Claims

Формула изобретени

45 Способ выделени Chlamydia trachomatis путем заражени исследуемым материалом клеточной культуры с последующим инкубированием, окрапмвани- ем препаратов и учетом включений

50 Chlamydia trachomatis в клетках тка- ни, отличающийс тем, что, с целью упрощени и ускорени способа, исследуемым материалом зара- жают клетки эпители эмбриона мьшги 55 Mus musculus castaneous (ММС-Е) не- посредственно после их получени .

Тираж 500

Подписное