SU1273769A1

SU1273769A1 - Способ окраски нервной ткани на гистологическом препарате

Info

Publication number: SU1273769A1
Application number: SU833536152A
Authority: SU
Inventors: Михаил Георгиевич Хижняк
Original assignee: Научно-Исследовательский Институт Экспериментальной Медицины Амн Ссср
Priority date: 1983-01-10
Filing date: 1983-01-10
Publication date: 1986-11-30

Abstract

Изобретение относитс к области медицины, а именно к гистохимии, может быть прймеТнено при гистологическом исследовании срезов биологических тканей, содержащих миелиновые волокна. Цель изобретени - прокрашивание клеточных элементов в демиелинизированной ткани -за счет экспонировани биологического материала в растворе бихромата кали в разра- ботанных временных интервалах. Кусочки нервной ткани размером 2,53 ,5 мм фиксируют в 10%-ном растворе формалина 12-48 ч, затем экспо1шруют 45-50 ч в 3%-ном растворе бихромата кали . Кусочки споласкивают в нескольких порци х бихромата кали и помещают на 24-48 ч в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бикромата кали . Затем образцы промывают в течение 12-24 ч в водопро&amp; водной воде. Далее материал в зависимости от задач исследовани подвергают резке на замораживающем микротоме либо уплотн ют в парафине или целлоидине. Срезы докрашивают толуидиновым синим и исследуют светооптически .

Description

« Изобретение относитс а именно к гистохимии, и

применение при гистологическом исследовании срезов биологических тканей, содержащих миелиновые волокна.

Целью изобретени вл етс прокрашивание клеточных элементов в демиелинизированной нервной ткани путем экспонировани биологического материала в растворе бихромата кали , в растворе осмиевой кислоты на бихромате кали в разработанных вре .манных интервалах.

Способ осуществл ют следующим образом .

КусоЧки нервной ткани размером 2,5-3,5 мм фиксируют в 10%-ном растворе формалина в течение 12-48 ч и затем экспонируют в течение 45-50 ч

в 3%-ном растворе бихромата кали . Кусочки споласкивают в нескольких

порци х бихромата кали и помещают на 24-48 ч в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бихромата кали .

Затем .образцы промывают в течение i 2-24 ч в проточной водопроводной воде.

Далее материал в зависимости от задач исследовани либо подвергают резке на замораживающем микротоме, либо уплотн ют в парафине или целлоидине . Полученные срезы докрашивают толуидиновым синим и исследуют светооптически .

Пример 1. Образцы нервной ткани от животных с демиелинизирующим заболеванием нервной системы разрезают на кусочки толщиной 3,5 мм, помещают на плотную бумагу с отверсти ми (наподобие перфокарты) и опускаю-т в 10%-ный формалин на 24 ч-,

Экспонируют в течение 45 ч в 3% .ном растворе бихромата кали с ежедневной сменой раствора.

Снимают кусочки с бумаги и помещают в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бихромата кали на 24 ч в плотно закрытые банки , обернутые темной бумагой. Раствор осмиевой кислоты сливают, образцы помещают в марлю, зав зывают и промьгоают в проточной водопроводной воде в течение 12 ч. Затем материал помещают на 15 мин в дистиллированную воду и подвергают резке на замораживающем микротоме. Толщина получаемых срезов 10-15 мкм, а при резке на криокате - 3,5-5 мкм.

ним, дифференцируют в 96 -ном спирте , просветл ют в эвкалиптовом масле , промывают в ксилоле и заключают в бальзам.

Полученные препараты исследуют под микроскопом при максимальных увеличени х с использованием иммерсии.

На препаратах видны рко-синие дра гематогенных макрофагов с бледно-голубой цитоплазмой, нейтрофильные гранулоциты, лимфоциты, глиальные клетки среди фрагментов дезинтегри5 рованного миелина в виде отчетливопрослеживаемого черного цвета осмиофильной зернистости. В отдельных клетках хорошо виден фагоцитоз продуктов распада миелина.

0 Пример 2. Кусочки нервной ткани размером 2,5 мм обрабатывают аналогично примеру 1, но врем экспозиции в растворе бихромата кали 47 ч, а в растворе осмиевой кисло5 ты - 35 .4. После этого материал обезвоживают этиловым спиртом восход щей крепости (70, ВО, 90, 96, ЮО). Врем экспозиции в каждом спирте

1сут. Затем материал помещают (не 0 менее 2 сут) в смесь, состо щую из

40 мг сухого целлоидина, растворенного в 100 мл абсолютного спирта, 100 мл -эфира и 200 г касторового масла,

Экспонирование по 45 мин в трех порци х хлороформа. Далее образцы вьздерживают в течение не более 12 ч в смеси равных частей парафина и хлороформа и экспонируют при 56° С в термостате по 1,5 ч в двух порци х парафина с последующей заливкой в парафин.

Парафиновые срезы депарафинируют и докращивают толуидиновым синим. - На препаратах видны клеточные элементы (гематогенные и глиальные), среди которых локализуютс продукты распада миелина.

Пример 3. Кусочки нервной 0 ткани размером 3,5 мм после фиксации и экспонировани в бихромате кали в течение 50 ч, в осмиевой кислоте в течение 48 ч и промывки в проточной водопроводной воде подвергают 5 обезвоживанию в спиртах восход щей крепости: в 1 ч, в

2ч, в абсолютном спирте 2,5 ч, в спирт-эфире 1,5 ч. После этого матек медицине, может найти 1273769 Полученные срезы докрашивают на предметном стекле толуидиновым сириал экспонируют в целлоидинах возрастающей густоты (целлоидины 1, 2, 3) по 3-5 сут, периодически встр хива .

Образцы нервной ткани в загустевтем целлоидине заливают в чашки Петри и после его затвердевани наклеивают на дерев нные блоки, которые хран т в 7и-ном спирте.

Через сутки материал подвергают резкЁ на санном микротоме (толщина среза 4,5-5 мкм) и докрашивают дел.1 лоидиновые срезы толуидиновым синим.

При заливке -материала в целлоидин достигаетс наилучшее качество докрашенных гистологических препаратов: видны рко окрашенные дра гематогенных макрофагов и глиальньпс клеток с блеДно-голубой цитоплазмой и осмиефильна ,черного цвета, зернистость.

Способ позвол ет вы вить одновременно с продуктами распада миелина клеточные элементы (лимфоциты, гематогенные макрофаги, нейтрофилоциты, эозинофилы, олигодендроциты, астроциты и микроглию), что вл етс необходимым дл излучени патогенеза демиелинизирующих заболеваний нервной системы.

Способ значительно сокращает сро ки диагностики демиелинизации (при целлоидиновой проводке в 2 раза, при парафиновой в 5 раз, при полуIчении замороженных срезов более чем в 10 раз).

Способ может -быть использован дл изучени патоморфологии различных форм рассе ного склероза, а также при исследовании патологических изменений в нервной системе на экспериментальных модел х профессиональных заболеваний (отравлени сол ми свинца, бари и др.).

Claims

Формула изобретени

Способ окраски нервной ткани на гистологическом препарате путем ее обработки бихроматом кали и осмиевой кислотой с последующей докраской в красителе, отличающийс тем, что, с целью прокрашивани kfie точных элементов в демиелинизированной нервной ткани, обработку бихроматом кали провод т в течение 45-50 ч, ав осмиевой кислоте 24-48 ч, при этом докраску провод т толуидиновым синим.