со Изобретение относитс к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано при диагностике болезни птицеводов. Цель изобретени повьцпение точности диагностики, Пример. Больна К-а, 46 лет-, работает в течение 30 лет птичницей, имеет посто нный и массивный контакт с курами, В течение последних 3 лет отмечает резкую слабость, вечерние подъемы температуры до 39 , выраженную одышку, В последние несколько лет до 3 раз в год страдает пневмони ми с выраженным геморрагическим компонентом. При исследовании сыворотки крови контриммуноэлектрофорезом (известный способ) специфические антитела вы влены не были. Было проведено также иммунодиагностическое исследование сыворотки этой больной предлагаемым способом. Куринна сыворотка (тестантиген ) , предварительно диализованна в течение 24 ч физиологическим раствором хлористого натри и хран ща с до дальнейшего ее использовани в замороженном состо нии, была разморожена и разведена физиологическим раствором в соотношении 1:4 (к 0,25 мл куриной сыворотки добавили 0,75 мл О,9%-ного физиологическо го раствора). Подготовленную таким образом куриную сыворотку затем агрегировали добавлением 0,05 мл 2,5%-ного глютаральдегида в течение 1 ч при 37°С, после чего добавили I мл агрегированной сыворотки к осад ку из 1 мл-отмытых эритроцитов (пред варительно приготовленных обработко глютаральдегидом и хран ющихс в хо лодильнике), инкубировали (сенсибилизировали ) при в вод ной бане в течение 1,5 ч. Затем отмыли приго товленный эритроцитарный диагностикум 4 раза физиологическим растворо от несв завшегос белка, приготовили его 0,8%-ную рабочую взвесь. Пос ле адсорбции исследуемой сыворотки больной К. эритроцитами человека дл удалени гетерогемаглютининов готовили последовательные разведени это сыворотки в диапазоне 1:16-1:2048 в объеме 0,05 мл и добавл ли к каждом разведению 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Выраженна агглютина ци эритроцитов наблюдалась до разведени исследуемой сыворотки (тит1 9 ра) 1:2048. Контроли сыворотки и антигена были oтpицaтeль &I, контроль реакции положителен. При клиническом дообследовании, проведенном в стационаре ЦНИИТ МЗ СССР в 1982 г,, на основании клиникорентгенологических данных, функциотелей внутрилегочной биопсии, факта обнаружени специфических антител был установлен диагноз: экзогенный аллергический альвеолит, вызванный контактом с курами. По рекомендации ЦНИИТ МЗ СССР администрацией птицефабрики больна была переведена на работу в теплицы птицефабрики, контакт с курами был практически исключен . Проведенное через 1,5 года контрольное обследование вы вило стойкую ремиссию заболевани , подтвержденную положительной динамикой рентгенологических и функциональных показателей , Повторное иммунологическое исследование вы вило антитела предлагаемым способом в меньшем, но, тем не менее, в высоком титре - 1:512, Результаты согласно известному способу бьши по-прежнему отрицательными. Пример 2, Больна Ф, 56 лет, сельска жительница. Посто нно в течение многих лет в домашнем хоз йстве держит 200 кур, С но бр 1981 года беспокоит нарастающа одышка, кашель со слизисто-гнойной мокротой. Лечение по месту жительства по поводу острых респираторных заболеваний , хронической пневмонии было неэффективным . Рентгенологически в окт бре 1982 г вы влена мелкоочагова диссеминаци на фоне выраженных интерстициальных изменений. При функциональном исследовании легких обнаружены рестриктивные и обструктивные нарушени вентил ции. При уточнении анамнеза вы влен контакт с курами . Заподозрен экзогенный аллергический альвеолит. Дл уточнени диагноза больна поступила в ЦНИИТ МЗ СССР в мае 1983 г. Известным способом антитела к куриной сьгооротке обнаружены не были, . В.предлагаемом способе, техническое воспроизведение которого осзпцествл лось по примеру 1, были получены положительные результаты, титр антител к куриной сыворотке (антигену) был 3, равен разведению исследуемой сыворотки 1:5I2. Учитьгоа -данные анамнеза, а также результаты комплексного стационарного обследовани , в этом случае также был установлен диагноз экзоген ного аллергического альвеолита, протекающего по типу фиброзирующего аль веолита. При этом только иммунологическое исследование позволило определить этиологический фактор заболевани . Результаты рентгенологического исследовани липть уточнило характер и стадию заболевани . Вместе с тем, поздн верификаци диагноза при выраженных фиброзных изменени х и значительных нарушени х функции легких потребовало проведени гормональной терапии в течение 1,5 мес. Состо ние больной улучшилось, наблюдалась также стабилизаци рентгенологической картины. Больной было рекомендовано исключить контакт с курами, продолжить гормональную терапию с постепенным снижением дозы преднизолона, она находитс на диспансерном наблюдении в диагностическом отделении ЦНИИТ МЗ СССР. Приведённые примеры свидетельст1вуют о диагностической эффективности предлагаемого способа в тех случа х , когда с помощью именно этого способа бьт идентифицирован этиологический фактор заболевани , в то врем как результаты известного способа были отрицательными. Наиболее прогностически ценной в л етс диагностика заболевани на его ранних стади х. Это возможно осу ществл ть лишь с помощью способов, о личающихс высокой чувствительностью в частности, использу предлагаемый способ при массовых обследовани х больших контингентов, имеющих профес сионально обусловленный контакт с этиологическими факторами экзогенных аллергических альвеолитов (работников птицефабрик). Возможность проведени таких массовых иммунологических обследований предлагаемым способом обеспечиваетс также, помимо высокой чувствительности, значит ельной его производительностью (80-100 анализов исследуемых сьтороток за рабочий день) и минимальным количеством . исследуемой сыворотки (0,1-0,2 мл) 49 дл анализа, что позвол ет исключить внутривенное вз тие крови. Устранение или даже хронические контакты с этиологическим фактором на ранних стади х заболевани экзогенным аллергическим альвеолитом, приводит к стойкой клинической ремиссии заболевани , регрессированию рентгенофункциональных изменений легочных нарушений без медикаментозного лечени (пример 1). Однако и на поздних стади х заболевани при выраженных фибриозных изменени х и значительном ограничении легочной функции идентификаци этиологического фактора также необходима, так как устранение его в сочетании с медикаментозными меропри ти ми позвол ет достигнуть определенной стабилизации легочного процесса (пример 2) . Предлагаемый способ может быть также использован дл длительного динамического наблюдени за больными экзогенным аллергическим альвеолитом, так как он остаетс положительным и при значительном ограничении контакта с этиологическим фактором заболевани и свидетельствует о сохранении специфической сенсибилизации (пример 1). Проведение специфического иммунологического контрол в таких случа х необходимо дл .предупреждени рацидивов заболевани . Быпо проведено клинико-иммунологическое обследование работников птицефабрики (308 человек), у 34 из них был установлен диагноз экзогенного аллергического альвеолита. Предлагаемый способ дал положительные результ;аты у 29 больных (из 34) с верифицированным диагнозом, причем антитела были вы влены в высоких титрах исследуемьк сывороток (1:256-1:8192). Известньм способом (контриммуноэлектрофорезом ) антител бьти обнаружены лишь у 15 больных и даже при положительных результатах титры антител были низкими - не более 1:4-1:8. Формула изобретени Способ диагностики экзогенного алергического альвеолита путем вы вени в исследуемых сыворотках антител к сыворотке кур, отличаюийс тем,-ЧТО, с целью повыени точности диагностики, антитела ы вл ют путем разведени исследуемых
S17.72249«
сывороток 1:256 и иьппе и добавлени физиологическом растворе сывороткой к ним сенсибилизированных при 37- кур, разведенной в соотношении 1:253 С эритроцитов, при этом эритроци- 1:5 и агрегированной при помощи глуты сенсибилизируют диализованной в таральдегида.