SU1255136A1

SU1255136A1 - Способ получени тимозина из тимусов млекопитающих

Info

Publication number: SU1255136A1
Application number: SU843824833A
Authority: SU
Inventors: Геннадий Константинович Коротаев; Ольга Михайловна Тепелина; Вадим Аронович Лившиц; Татьяна Ивановна Жеребова; Иева Карловна Шпрунка; Элеонора Александровна Калнина; Наталья Ивановна Колкина; Арвид Янович Степка; Омар Григорьевич Саканделидзе; Евгений Семенович Гиршович; Наталия Сергеевна Дрожжина; Александр Олегович Ружицкий
Original assignee: Предприятие П/Я Г-4740; Всесоюзный научно-исследовательский институт технологии кровезаменителей и гормональных препаратов
Priority date: 1984-12-18
Filing date: 1984-12-18
Publication date: 1986-09-07

Description

11

Изобретение относитс к медицине, в частности к получению гормонального фактора тимуса.

Цель изобретени - повышение выхода целевого продукта и упрощение спо соба путём использовани определенного режима клеток и приемов очистки.

Пример 1. Получение сырца тимозина.

500 г слегка дефростированных же- лез (тимуса тел т) измельчают на м сорубке . Измельченный тимус порци ми гомогенизируют в размельчителе

тканей РТ-1, добавл част ми (1,5 л 0,15 М раствора хлористого натри . Каждую порцию гомогенизируют в течение 3 мин. Полученный гомогенат перемешивают в течение 1 ч с помощью ме- ханическор мешалки при 8-10 С скорость перемешивани 500 об/мин . По окончании экстракции жмых отдел ют центрифугированием при 2500-3000 об/ мин в течении 30 мин при А С. Суперна тант нагревают в вод ной бане с температурой до в течение 15 мин. Гор чую смесь охлаждают в бане со льдом, осадок термолабильных белков отдел ют центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 30 мин при 4°С, а супернатант фильтруют через асбесто-целлюлозную пластину типа ЕКС.

Прозрачный, охлажденный экстракт (1,24 л) вливают при посто нном перемешивании в 5 объемов .(6,2 л) хо- , лодного (-10°С) ацетона, помещенного в фарфоровую емкость и оставл ют в холодильнике.

Через 12-16 ч надосадочный раствор сифонируют. Осадок высушивают на воронке Бюхнера, промыва 3-4 раза аце- тоном (около 1 л). Высушенный порошок тщательно растирают в течение 2-3 ч, сушат на воздухе до полного удалени ацетона. Получают 9,0 г сырца тимозина.

Получение субстанции тимозина.

1) Солевое фракционирование.

Полученный сырец раствор ют в 0,01 М натрий-фосфатном буфере с рН 7,0 в соотношении 1:10 - 9,0 г сырца в 90 мл буфера - и в течение 30 мин перемешивают на магнитной мешалке при комнатной Температуре.

Полученный раствор центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин и 4 С.

К супернатанту добавл ют насыщенный раствор сульфата аммони из рас

5 0 5 0

5

362

чета 3 объема супернатанта и 1 объем насьш1енного раствора, в котором предварительно установлен рН 7,0 с помощью водного раствора аммиака. Смесь перемешивают при 6-8 С в течение 1 ч. Центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин при 4°С.

Затем в супернатанте устанавливают рН 4,0-4,05 с помощью 10%-ного раствора уксусной кислоты. В полученный раствор добавл ют 15,8 г сульфата аммони из расчета 14,6 г сульфата аммони на 100 мл раствора. Смесь перемешивают в течение 1 ч при 6-8°С и оставл ют в холодильнике на ночь (18-20 ч). Осадок отдел ют центрифугированием в течение 15 мин при 3000 об/мин и 4 С.

2) Обессоливание и лиофильное высушивание .

Влажный осадок раствор ют в 90 мл 0,01 М трис -НС1 буфере (рН 8,0) в течение 30 мин, перемешива на магнитной мешалке при 6-8°С, нерастворившуюс часть отдел ют центрифугированием при 3000 об/мин и 4°С. Раствор нанос т на колонку (50«1000 мм), заполненную сефадексом Г-25 и элюируют 0,05 М раствором бикарбоната аммони со скоростью 100 мл/ч. Фракции, соответствующие первому пику поглощени , объедин ют и лиофильно высушивают Получают 0,65 г тимозина.

Выход тимозина из тимуса тел т составл ет 1,3 г из 1 кг железы.

Пример 2. Аналогично примеру 1. Экстракцию провод т 1,5 ч.

Выход тимозина 1,35 г из 1 кг железы .

Пример 3. Аналогично примеру 1. Экстракт после отделени жмыха термостатируют 20 мин. Выход тимозина 1,35 г из 1 кг железы.

Пример 4. Аналогично примеру 1. Химозин получают из свежезамороженных вилочковых желез гн т. Выход тимозина 1,4 г.

Пример 5. Аналогично примеру 8. Тимозин получают из вилочковых желез тюленей. Выход тимозина 1,2 г из 1 кг железы.

Пример 6. Аналогично примеру 1 . Экстракт перемешивают со скоростью 2000 об/мин. Выход тимозина 1,35 г из 1 кг железы.

Положительный эффект заключаетс в повышении выхода целевого продукта Б 5-6 раз.

Claims

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТИМОЗИНА ИЗ ТИМУСОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ,включающий гомогенизацию тимусов, разрушение клеток, экстракцию раствором хлористого натрия, осаждение твердых частиц ткани центрифугированием, удаление из супернатанта термолабильных белков при нагревании, освобождение от пигментных и пирогенных веществ, осаждение целевого продукта ацетоном с последующей его очисткой путем солевого фракционирования, гель-хроматографии, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения выхода целевого продукта, разрушение клеток проводят при перемешивании гомогената со скоростью 500-2000 об/мин в течение 1-1,5 ч, термолабильные белки удаляют при нагревании в течение 15-20 мин, в качестве элюента при гель-хроматографии используют бикарбонат аммония .

«καί сл

СП

ФО

1 1255