SU1218513A1

SU1218513A1 - Method of producing diagnostic fluorescent influenza immunoglobulin

Info

Publication number: SU1218513A1
Application number: SU843728252A
Authority: SU
Inventors: Л.Е. Камфорин; Н.А. Медведева; Л.Б. Потапенко; Б.И. Фейгельман
Original assignee: Всесоюзный научно-исследовательский институт гриппа; Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток
Priority date: 1984-04-18
Filing date: 1984-04-18
Publication date: 1986-10-15

Description

Изобретение относитс к медицине, в частности иммунологии, и может быть использовано в вакционно сьшо роточном деле при производстве флуоресцирующих антител дл экспресс- диагностики гриппа.The invention relates to medicine, in particular, immunology, and can be used in vaccine-based production in the production of fluorescent antibodies for the rapid diagnosis of influenza.

Целью изобретени вл етс уско рение способа и повыше1ше выхода конечного продукта.The aim of the invention is to accelerate the process and increase the yield of the final product.

Способ по сн етс следующим примером .The method is illustrated by the following example.

К 0,3%-ному водному ра:створу риванола при посто нном перемешивании добавл ют сьторртку кролика, и о4ун- ную к вирусу гриппа A(H3N2) и имеющую специ1 ч«сквй титр в РТГА 1 /640 На 500 МП раствора риванола берут 100 МП сьшЪротки. Через 1ч после добавле)ш сьворотки рН смеси довод т раствором едкого натри до 7,1 и выдерживают в течение 15 ч при , при этом выпадает плетшей рса- Д(Ж альбумина. Иадосадочную жид- kocTbf содержащую глобулины, отдел ют центрифугированием в течение 30 мин |фи факторе разделени F - 1000.To a 0.3% aqueous solution of rivanol with continuous stirring is added a rabbit pulp, and ounine to the influenza A virus (H3N2) and having a special “squay titer in rtga 1/640 Rimer of 500 MP rivanol is taken 100 megapixel downstream. After 1 hour after the addition, the pH of the mixture was adjusted to 7.1 with a solution of sodium hydroxide and maintained for 15 hours, and the psA-D (F albumin. Iadosadochny liquid cocTbf containing globulins fell out, and separated min | fi separation factor F - 1000.

Дл ОЧИСТКИ глобулина от риванола в надос щочную жидкость добавл ют 7% шорй :тог6 натри . После 30 мин перемешива1а{Я осадок отдел ют фильт- ровага ем через бумажный фильтр.For the CLEANING of globulin from rivanol, 7% of shortened sodium tog is added to the supernatant. After 30 minutes of mixing, the precipitate is separated by filtering through a paper filter.

Профильтрованный раствор охлаждают До 4 с, после чего в него добавл ют равный насыценного раствора сернокислого аммони и выдерживают ри той же температуре в течение 12ч. Осадок отдел ют центрифугированием в течение 45 мин при F в 2500, а затем разводат забуфе- рекнын физиологическим раствором рН 7,2 ДО объема, равного 1/3 исходного объема сыворотки, что составл ет 33 мл.The filtered solution is cooled to 4 s, after which it is added to an equal saturated solution of ammonium sulphate and maintained at the same temperature for 12 hours. The precipitate was separated by centrifugation for 45 minutes at F at 2500, and then diluted with buffered physiological solution pH 7.2 to a volume equal to 1/3 of the initial volume of serum, which is 33 ml.

Очистку выделенного IgG осуществл ют гельхроматографией на колонке с сефадексом G-25 при помощи абРедактор Т. ЯноваPurification of the isolated IgG was performed by gelchromatography on a Sephadex G-25 column using abReditor T. Janova

Составитель Т. КозловаCompiled by T. Kozlova

Техред А.Кравчук Корректор 0. Лугова Tehred A. Kravchuk Proofreader 0. Lugov

5588/25588/2

Тираж 660 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССРCirculation 660 Subscription VNIIPI USSR State Committee

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска наб., д. 4/5for inventions and discoveries 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk nab., 4/5

Й оизводственно-полиграГфи геское предпри тие, г Ужгород, ул. Проектна ,4I production and printing plant, Uzhgorod, st. Project, 4

сррбциометра. Дл дальнейшей работы отбирают фракции IgG максимального светопоглощени при длине волны 280 нм. Всего собирают 80% иммуноглобулинов- , иммунологическа активность которых в РТГА с гомологичным антигеном составл ет 1/640. По результатам электрофоретического контрол установлено, что вьоделенна srrbtsiometry. For further work, IgG fractions of maximum light absorption at a wavelength of 280 nm are selected. A total of 80% of immunoglobulins are harvested, the immunological activity of which is 1/640 in RTGA with a homologous antigen. According to the results of electrophoretic control, it has been established that

фракци не содержит других сывороточных белков, кроме IgG, при этом концентраци белка в собранном растворе составл ет 2,4 об.%.the fraction does not contain other whey proteins, except IgG, while the protein concentration in the collected solution is 2.4 vol.%.

В полученный раствор добавл ютIn the resulting solution is added

0,5 М карбонатный буферный раствор до рН 9,3.0.5 M carbonate buffer solution to pH 9.3.

Операцию коныогации IgGсфлуоре- сцеинизотиоцианатом (ФИТЦ), исполь- зуемы м в качестве флуорохрома дл The operation of konyogatsiya IgGfluorececeinisothiocyanate (FITC), used as a fluorochrome for

метки иммуноглобулина, провод т добавлением 24 мг ФИТЦ к 50 мл 2,4%-ного раствора IgG.Смесь выдерживают в течение 2 ч при 22 С.Immunoglobulin labels are carried out by adding 24 mg of FITC to 50 ml of a 2.4% IgG solution. The mixture is kept for 2 hours at 22 C.

Полученный контлогат подвергаютThe received contrate is subjected to

очистке от несв завшегос Ш1и, на колонке с гелем сефадекса G-50,После этого производ т фракционирование мечешлх шшуноглобулинов на ДЕАЕ-целлюлозе по известной метоДике .After cleansing from a gel with Sephadex G-50, after that, the mashins of shushonoglobulins were fractionated on DEAE-cellulose according to a well-known method.

В конъюгат внос т консервант - 1%-ный раствор мертиол та натри в соотношении 1:10000, замораживают до -20°С и лиофшшзируют.A preservative is added to the conjugate — a 1% solution of merthiol sodium in a ratio of 1: 10,000, frozen to -20 ° C and freeze-dried.

В данном примере получают флуоресцирующий И1в1уноглобулин с об- ратньш крас щим титром, равным 32, и обратным титром неспецифической активности, равным В.In this example, a fluorescent I1v1unoglobulin is obtained with a reverse dye titer of 32 and a reverse titer of nonspecific activity equal to B.

Таким образом, за сч$т сокращени экспозиции при проведении конъюгации происходит ускорение способа в 10 раз (2 ч против 20 ч по прототипу ) и повышение выхода конечногоThus, at the expense of reducing the exposure during the conjugation, the method is accelerated by a factor of 10 (2 h versus 20 h of the prototype) and the yield of the final

продукта за счет повышени крас щего титра в 4 раза (16-32 против 4-8 по прототипу).product by increasing the coloring titer by 4 times (16-32 versus 4-8 of the prototype).

Claims

METHOD FOR PRODUCING A DIAGNOSTIC FLUORESCING INFLUENZA IMMUNOGLOBULIN by sequential treatment of influenza serum with rivanol, ayunium sulfate, followed by purification and conjugation with fluorochrome, characterized in that, in order to accelerate the method and increase the yield of the final product by 6% sodium chloride, and conjugation is carried out for 1-3 hours at 18-2b * C.

Yu

SI

X

1 ‘1218513