SU1133518A1

SU1133518A1 - Method of finding and counting living microorganisms in liquid media

Info

Publication number: SU1133518A1
Application number: SU833633951A
Authority: SU
Inventors: Валентин Константинович Яковлев; Александр Сергеевич Юрченко; Лев Алексеевич Шемякин; Александр Иванович Петров; Владимир Антонович Якимов
Original assignee: Всесоюзный научно-исследовательский институт биологического приборостроения
Priority date: 1983-08-12
Filing date: 1983-08-12
Publication date: 1985-01-07

Abstract

СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ И ПОДСЧЕ ТА ЖИВЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ЖИДКИХ СРЕДАХ, включающий витальное окрашивание микроорганизмов красителем, облучение светом потока жидкой среды, регистрацию излучени под углом к направлению распространени облучающего света и обнаружение и подсчет микроорганизмов в жидкой среде по интенсивности регистрируемого излучени , отличающийс тем, что, с целью повышени избирательности обнаружени и подсчета живых микроорганизмов на фоне примесных частиц, в качестве красител используют соли тетразолиев, a облучение 1 жидкой среды и регистрацию излучени СП С провод т в диапазоне длин волн от 680 до 740 нм.METHOD OF DETECTION AND ASSESSMENT OF LIVING MICROORGANISMS IN LIQUID ENVIRONMENTS, including the vital staining of microorganisms with a dye, the irradiation of light from a flux of a liquid medium, the registration of radiation at an angle to the direction of propagation of the irradiating light and the detection and counting of microorganisms in a liquid medium according to the intensity of the detected radiation. in order to increase the selectivity of the detection and counting of living microorganisms against the background of impurity particles, tetrazolium salts are used as a dye, and o The irradiation of 1 liquid medium and the registration of the radiation of the CP C are carried out in the wavelength range from 680 to 740 nm.

Description

д САЭd SAE

:д: d

XX

Изобретение относитс к микробиологии и может быть использовано дл обнаружени и подсчета живых микробных клеток в жидких средах в ускоренном автоматизированном режиме. This invention relates to microbiology and can be used to detect and count living microbial cells in liquid media in an accelerated automated mode.

Известен способ обнаружени живых микроорганизмов, включающийокрашивание живых микроорганизмов, облучение светом среды, содержащей микроорганизмы , и определение количества живых микроорганизмов по интенсивности флюоресценции красител на длине волны 580 нм lj .There is a method for detecting living microorganisms, including dyeing living microorganisms, irradiating the medium containing microorganisms with light, and determining the number of living microorganisms by the fluorescence intensity of the dye at a wavelength of 580 nm lj.

Однако регистраци полезного сигнала флуоресценции может быть резко ват руднена. за счет флуоресценции сопутствующих примесей, имеющих флюоресценцию в той же спектральной области. 3to приводит к ошибкам в анализе, в р де случаев делает его вообще невозможным .However, registration of the useful fluorescence signal can be abruptly observed. due to the fluorescence of related impurities having fluorescence in the same spectral region. 3to leads to errors in the analysis, in some cases makes it impossible at all.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту вл етс способ обнаружени и подсчета живых микроорганизмов в жидких средах, включающий витальное окрашивание микроорганизмов красителем , облучение светом потока жидкой среды, регистрацию излучени под углом к направлению распространени облучающего света, обнаружение п. подсчет микроорганизмов в жидкой среде по интенсивности регистрируемого излучени 2j .The closest to the invention in its technical essence and the effect achieved is a method for detecting and counting living microorganisms in liquid media, including vital staining of microorganisms with a dye, irradiating light with a stream of liquid medium, detecting radiation at an angle to the direction of propagation of the irradiating light, detecting the count of microorganisms in the liquid medium according to the intensity of the detected radiation 2j.

Однако известному способу присуща недостаточно высока избирательность обнаружени и подсчета живых микроорганизмов на фоне примесных частиц.However, the known method is not inherently high in the selectivity of the detection and counting of living microorganisms against the background of impurity particles.

Целью изобретени вл етс повышение избирательности обнаружени и подсчета живых микроорганизмов на фоне примесных частиц.The aim of the invention is to increase the selectivity of the detection and counting of living microorganisms against the background of impurity particles.

Поставленна цель достигаетс тем что согласно способу обнаружени и подсчета живых микроорганизмов в жидких средах, включающему витальное окрашивание микроорганизмов красителем, облучение светом потока жидкой среды, регистрацию излучени под углом к направлению распространени облучающего света и обнаружение и подсчет микроорганизмов в жидкой среде по интенсивности регистрируемого излучени , в качестве красител используют соли тет- разолиев, а облучение жидкой среды и регистрацию излучени провод т в диапазоне длин волн от 680 до 740 нм.The goal is achieved according to the method for detecting and counting living microorganisms in liquid media, including vital staining of microorganisms with a dye, irradiating a stream of liquid medium with light, registering the radiation at an angle to the direction of propagation of the irradiating light, and detecting and counting microorganisms in a liquid medium according to the intensity of the detected radiation, Tetrasolium salts are used as a dye, and the irradiation of a liquid medium and radiation detection are carried out in the wavelength range from 68 0 to 740 nm.

Дл осуществлени данного способа могут быть использованы различныеVarious methods can be used to implement this method.

устройства дл . определени концентрации и дисперсного состава частиц в жидких средах.devices for determine the concentration and dispersion composition of particles in liquid media.

Способ осуществл ют следующим образом.The method is carried out as follows.

Микроорганизмы исследуемой порции жидкости подвергают непосредственно в пробе витальной окраске солью тетразоли , например МТТ-метилтиазолилтет разолием бромида .. Дл чего в пробу внос т с помощью дозатора 0,15%-ный раствор соли, который готов т на фосфатном буфере Зеренсена в рН 8,2. Раствор соли внос т в пробу в соотношении 1:4 по объему, что вл етс достаточным дл витальной окраски микроорганизмов с исходной концентрацией клеток в 1мл Избыток соли тетразоли не вли ет на ход реакции витального окрашивани и не требует удалени (отмьшки пробы). Смесь перемешивают, прогревают , 2-5 мин при 39-42с и направл ют в проточную кювету устройства дл определени дисперсного состава частиц в жидких средах.The microorganisms of the test portion of the liquid are directly subjected in the sample to the vital coloring by the tetrazol salt, for example, MTT-methylthiazolyltet will be diluted with bromide. For this, a sample of 0.15% salt solution is prepared using a dosing unit, which is prepared in Zerensen phosphate buffer at pH 8, 2 Salt solution is introduced into the sample at a ratio of 1: 4 by volume, which is sufficient for vital staining of microorganisms with an initial cell concentration of 1 ml. Excess tetrazolium salt does not affect the course of the vital staining reaction and does not require removal (removal of the sample). The mixture is stirred, heated, for 2-5 min at 39-42 s, and sent to a flow cell of the device for determining the dispersed composition of particles in liquid media.

Облучение жидкой среды и регистрацию издучени под углом к нг-лравлению распространени облучающего света провод т в диапазоне длин волн 680740 нм.The irradiation of a liquid medium and the recording of radiation at an angle to the irradiation of the propagation of irradiating light are carried out in the wavelength range of 680,740 nm.

В этих услови х интенсивность излучени от живых микроорганизмов, прошедших витальное окрашивание, значительно превьш1ает интенсивность излучени от примесных частиц неорганической и органической природы .Under these conditions, the intensity of radiation from living microorganisms that have undergone vital staining significantly exceeds the intensity of radiation from impurity particles of inorganic and organic nature.

Экспериментальную проверку способа проводили на различных жидких средах (физраствор, дистиллированна вода, водопроводна вода, натурные воды поверхностных водоемов и водостоков , сточна жидкость, смывные воды с поверхностей, концентрирующие жидкости импинджеров) с бактериальными нагрузками в диапазоне от единичных клеток в 1 мл до 10 - 10 кл/мл.Experimental verification of the method was carried out on various liquid media (saline, distilled water, tap water, natural water of surface water bodies and drains, waste liquid, flushing water from surfaces, concentrating impinger liquids) with bacterial loads ranging from 1 ml to 10 ml in individual cells 10 cells / ml.

Эксперименты проводили с помощьЪ фотоэлектрического анализатора механических примесей ФС-112.Experiments were performed with the help of a photoelectric analyzer of mechanical impurities FS-112.

Как показали результаты экспериментов , использование предлагаемого способа позвол ет повысить избирательность обнаружени и подсчета живых микроорганизмов в жидких средахAs shown by the results of the experiments, the use of the proposed method makes it possible to increase the selectivity of the detection and counting of living microorganisms in liquid media.

Результаты подсчета микроорганизнов предлагаемым способом совпадали с результатами подсчета независимыми методами - путем подсчета окрашенных микроорганизмов в камере Гор ева и методом посевов на твердые питательные среды по Коху, что указывает наThe results of counting microorganisms by the proposed method coincided with the results of counting by independent methods — by counting stained microorganisms in the Gorev chamber and the method of culture on solid nutrient media according to Koch, which indicates

достоверность измерений данным способом .reliability of measurements in this way.

II

Таким образом, предложенный способ позвол ет увеличить избирательность обнаружени и подсчета живых микроорганизмов.Thus, the proposed method allows to increase the selectivity of the detection and enumeration of living microorganisms.

Claims

METHOD FOR DETECTING AND CALCULATING THOSE LIVING MICROORGANISMS IN LIQUID MEDIA, including the vital staining of microorganisms with a dye, irradiation of the liquid flow with light, registration of radiation at an angle to the direction of propagation of irradiating light, and detection and counting of microorganisms in a liquid medium by the intensity of the detected radiation, characterized in that in order to increase the selectivity of detection and counting of living microorganisms against the background of impurity particles, tetrazolium salts are used as a dye, and irradiated liquid medium and radiation registration are carried out in the wavelength range from · 680 to 740 nm.

Q

FROM