SU1123702A1 - Способ диагностики лептоспирозов - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЛЕПТОСПИРОЗОВ путем добавлени  лептоспирозной культуры к исследуемой сыворотке с последующим определением титров лептоспирозных антител, отличающийс  тем, что, с целью повышени  точности диагностики и упрощени  способа, к исследуемой сыворотке добавл ют убитые лептоспирозные культуры, далее образовавшийс  комплекс смешивают с комплементом и внос т резусположительные эритроциты человека, имеющего 1-ю группу крови.

Description

9

Iw

to

САЭ Изобретение относитс  к медицине, в частности к диагностике инфекционных заболеваний и может быть использовано дл  диагностики лептоспироза. Известен способ диагностики лептоспироза путем добавлени  лептоспирозной культуры к исследуемой сыворотке с последующим определением титров лептоспирозных антител 1. Однако известный способ недостаточно точен, поскольку он обладает невысокой чувствительностью и сложен в исполнении, а также требует использовани  парных сывороток и наличи  полного набора живых диагностических лептоспирозных культур. Цель изобретени  - повышение точноети диагностики и упрощение способа. Указанна  цель достигаетс  тем, что согласно способу диагностики лептоспирозов путем добавлени  лептоспирозной культуры к исследуемой сыворотке с последующим определением титров лептоспирозных антител, к исследуе.мой сыворотке добавл ют убитые лептоспирозные культуры, далее образовавшийс  комплекс смещивают с комплементом и внос т резусположительные эритроциты человека, имеющего 1-ю группу крови. Способ осуществл етс  следующим образо .м. У больного Д. с соответствующим эпиданамнезом и клинической картиной, подозрительной на лептоспироз, берут кровь в первые дни поступлени  в стационар и через 10 дней после первого забора крови. Сыворотки крови больного исследуют реакцией иммуноадизивной гемагглютинации РИАГА, которую став т в м.икротитрационных панел х в объеме 0,1 мл. Ингредиенты реакции: 1) буфер желатиновероналмединаловый (ЖВМБ), РН 7,5: 17,0 г NaCl; 0,75 медилала; 1,15 г веронала; 1 мл смеси 0,03 м СаСГ. и 0,1 м MgCl,; дистиллированна  вода до 400 мл. Дл  работы этот маточный раствор развод т дистиллированной водой в соотношении 1:4 и на каждые 100 мл раствора добавл ют 0,1 мл lQ/o-ной желатины. ЖВМБ примен ют дл  разведени  сывороток, антигенов, комплемента и эритроцитов; 2) исследуема  сыворотка , нрогрета  при 56°С в течение 3.0 мин; 3) комплемент - консервированна  (сернокислым натрием и борной кислотой) сыворотка морских свинок. Используют в разведении 1,50-1:75; 4) эритроциты человека 0(1) группы, резусположительные; хран т в, растворе Алсевера при 4°С до 45 дней; дл  реакции из них готов т 1,5%-ную взвесь; 5) лептоспирозные диагностикумы примен ют 2-х типов: антигены дл  диагностики лептоспироза реакцией микроагглютинации ТУ46-21-43-74 , которые производ тс  Ставропольской биофабрикой; используют в рабочем разведении 1:20-1:40; формалинизированные антигены, которые готов т по методи ке Стийнера (1954), примен ютс  в рабочем разведении 1:10-1:20. Техника реакции: двухкратные разведени  сывороток, начина  с 1:40, внос т в микротитрационные панели. Затем в каждую лунку добавл ют определенный лептоспирозный диагностикум в разведении 1:40. Панели встр хивают на вибраторе и помещают в термостат при t -37° на 30 мин. После этого в каждую лунку добавл ют 0,025 мл комплемента в разведении 1:75. Панель снова встр хивают на вибраторе и инкубируют в термостате 30 мин. Затем во все лунки внос т по 0,025 мл 1,5%-ной - взвеси эритроцитов человека. После очередноговстр хивани  на вибраторе панель оставл ют при комнатной температуре на 1 ч (до прохождени  контролей ). Положительной считают реакцию на 3 или 4 креста. В опыт включают контроли исследуемых сывороток, антигена и комплекмента . Гемагглютинации в контрольных лунках не наблюдалось. В первой сыворотке гемагглютинаци  с L. i terohaemorrhagiae отмечалась до титра 1:320, во второй до 1:10240. При параллельном исследовании данных сывороток в реакции аплютинации (РА) в первой сыворотке лептоспирозных антител не вы влено. Титр антител во второй сыворотке к L. icterohaemorrhagiae оказалс  равным 1:640. Многократное нарастание титра лептоспирозных антител в совокупности с соответствующим эпиданамнезом и клинической картиной позвол ет поставить больному Д. диагноз: лептоспироз, вызванный L icterohaemorrhagiae . Пример 1. У больного, подозрительного на лептоспироз, на 4-й день болезни исследована сыворотка крови параллельно при помощи РА и РИАГА. В РА лептоспирознь е антитела не вы влены, с помощью РИАГА определены антитела к лептоспирам Jcterohaemorrhagiae в титре 1:1280 и поставлен диагноз: лептоспироз.-На дев тые сутки больной при  влени х почечно-печеночной недостаточности умер. На вскрытии диагноз: лептоспироз подтвердилс  (характерные патологоанатомические изменени  в органах; обнаружение лептоспир при микроскопии срезов внутренних органов), Пример 2. У больного С. на второй день болезни произведен бактериологический посев крови на лептоспироз. С этого же дн  больной стал получать антибиотикотерапию: пенициллин со стрептомицином. Сыворотка крови больного исследована на 5-й и 14-й дни болезни. РА не вы вила лептоспирозных антител ни в первой, ни во второй сыворотке больного. С помощью РИАГА определены антитела к лептоспирам Hebdomadis в первой сыворотке в титре 1:320, во второй - 1:1280. Диагноз был подтвержден результатом бактериологического посева крови.

Пример 3. У больного М. подозрительного на лептоспироз, исследована сыворотка крови на 3-й и 12-й день болезни. В первой сыворотке лептоспирозные антитела с помощью РА не вы влены, в РИАГА их титр оказалс  равным 1:320.

Это свидетельствует о более высокой точности диагностики способом РИАГА уже в первые дни заболевани . (Комплементсв зывающие антитела, определ емые РИАГА, по вл ютс  в крови на 2-4 день болезни, а агглютинины, вы вл емые РА, - только на 6-7 день).

Во второй сыворотке этого больного титр антител в РИАГА был равен 1:20480, в РА только 1:640. Чувствительность РИАГА в данном случае в 32 раза превосходит чувствительность РА. Причем РА вы вила антитела к трем серогруппам лептоспир: Hcterohaemorrhagiae (1:640), Hebdornadis (1:640), Canicola (1:320) (перекрестные серологические реакции). РИАГА оказалась более специфичной и вы вила антитела только к лептоспирам Hebdomadis, что позвол ет поставить точный диагноз.

При исследовании сывороток 84 больных лептоспирозом людей диагноз подтвержден с помощью известной реакции агглотинации (РА) в 73 случа х (86,9%), а с помощью предлагаемо.й реакции иммуноадгезивной гемагглютинации (РИАГА) во всех 84 случа х (). При этом титры антител , вы вл емые в РИАГА, были в 10-50 раз выше, чем в РА. Уровень вырабатываемых антител у больных лептоспирозом невысок р св зи с ранним применением антибиотиков . Высока  чувствительность РИАГА позвол ет вы вл ть небольилие количества антител и тем самым повышает точность диагностики (пример 2). Важное преимущество РИАГА состоит в способности вы вл ть ранние комплементсв зывающие антитела, что обеспечивает точность диагностики в первые дни болезни, когда агглютининов, вы вл емых с помощью РА, в крови еще нет. Кроме того, облада  более высокой специфичностью , РИАГА позвол ет поставить точный серогрупповой диагноз (пример 3).

Нар ду с этим, точность диагностики при использовании РИАГА повышаетс  за счет

объективности учета результатов реакции. При применении РА учет субъективен, осуществл етс  путем микроскопии « в темном поле. При этом возможна неправильна  5 интерпретаци  результатов вследствие неспецифической агглютинации лептоспир. Тогда как учет РИАГА, осуществл емый визуально по феномену гемагглютинации,  вл етс  просты.м и четким.

Преимущества предлагаемого способа диагностики лептоспирозов: значительное упрощение диагностики заболевани  благодар  применению убитых щтаммов лептоспир , вследствие чего устран ютс  больщие трудности, св занные с необходимостью под5 держани  и использовани  в диагностических лаборатори х полного набора живых лептоспирозных культур. Упрощаетс  также учет полученных результатов реакции, который проводитс  визуально, а не «в темном поле зрени  микроскопа, как при РА, когда возможна неправильна  интерпретаци  результатов. Высока  чувствительность способа . РИАГА по своей чувствительности в 2-10 раз превосходит РА, считающуюс  самой чувствительной реакцией дл  диагности5 ки лептоспироза. Это было показано при исследовании сухих агглютинирующих лептоспирозных сывороток, нативных гипериммунных сывороток кроликов и сывороток больных людей. Высока  чувствительность РИАГА позвол ет вы вл ть лептоспирозные

0 антитела в более ранние сроки после начала заболевани  по сравнению с РА и другими серологическими реакци ми. Многократное увеличение объема производимых исследований в св зи с устранением необходимости просматривать под микроскопом и оценивать результаты реакции каждого разведени  сыворотки с каждым из 13-ти сероваров лептоспир. Цо вл етс  возможность одномоментно исследовать большое количество сывороток благодар  использованию микро0 титрационных панелей. Обеспечение безопасности работы персонала благодар  использованию убитого диагностикума вместо живых культур лептоспир. Это имеет большое значение, так как в соответствии с положением Министерства здравоохранени  СССР лептоспироз включен во вторую группу инфекций , требующих особых мер предосторожностей при работе.

Claims (1)

1. СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЛЕП-

   ТОСПИРОЗОВ путем добавления лептоспи розной культуры к исследуемой сыворотке с последующим определением титров лептоспирозных антител, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики и упрощения способа, к исследуемой сыворотке добавляют убитые лептоспирозные культуры, далее образовавшийся комплекс смешивают с комплементом и вносят резусположительные эритроциты человека, имеющего 1-ю группу крови.