SU1121006A1 - Способ дифференциальной диагностики перинатальных поражений центральной нервной системы у новорожденных детей - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ путем исследовани  крови, отличающийс  тем, что, с целью раннего вы влени  гипоксических и травматических повреждений центральной нервной системы, в исследуемой крови определ ют уровень комплемента в первые сутки жизни и на 7-10 сут и при уровне комплемента 10-35 ед. диагностируют гнпоксическую энцефалопатию , а при 45-89 ед. - травматическую энцефалопатию.

Description

Изобретение относитс , к медицине, а именно к иммунологическим методам диагностики в неопатологии.

Известен способ дифференциальной диагностики перинатальных поражений центральной нервной системы (ЦНС) у новорожденных детей путем исследовани  крови по биохимическим показател м 1.

Однако известный способ не позвол ет осуществл ть раннюю дифференциальную диагностику гипоксических и травматических повреждений и требует дополнительных показателей: эхо - ЭГ электроэнцефалографических и реографических.

Цель изобретени  - раннее вы вление гипоксических и травматических повреждений ЦНС у новорожденных детей.

Цоставленна  цель достигаетс  тем, что согласно способу дифференциальной диагностики перинатальных поражений ЦНС у новорожденных детей путем исследовани  крови, в исследуемой крови определ ют уровень компле.мента в первые сутки жизни и на 7-10 сут и при уровне комплемента 10-35 ед. диагностируют гипоксическую энцефалопатию , а при 45-89 ед. - травматическую энцефалопатию.

Способ осуществл етс  следующим образом .

Принцип метода. Растворение в присутствии комплемента сенсибилизированных гемолизинов эритроцитов (гемолитической системы). Дл  приготовлени  последней используютс  эритроциты барана.

Необходимы следующие реактивы: исследуема  сыворотка, гемолитическа  система {гетеро.югичные эритроциты, сенсибилизированные соответствующей гемолитической сывороткой), физиологический (0,85°/оный NaCl) раствор.

Исследуема  сыворотка должна использоватьс  дл  определени  комплемента ие позднее, чем через сутки после вз ти  крови.

Приготовление взвеси эритроцитов.

Дефибринированную кровь барабана центрифугируют , трижды отмывают 5-10 объемами физиологического раствора, который после третьего отмывани  должен быть бесцветным . Из плотного осадка эритроцитов готов т 3%-ную взвесь в изотоническом растворе (3 мл эритроцитов на 100 мл физиологического раствора). Взвесь эритроцитов необходимо стандартизировать. Дл  этой цели используют фотоэлектроколориметр (ФЭК-М).

За 15-20 мин до начала исследовани  включают стабилизатор и устанавливают зеленый светофильтр. 1 мл из приготовленной 3°/о-ной взвеси отмытых бараньих эритроцитов добавл ют в пробирку К 9 мл дистиллированной воды. Полученную лизированную кровь вливают в 10-миллиметровую кювету, в другие две кюветы (такого же объема) наливают растворитель, т.е. смесь

из 1 мл физиологичесого раствора и 9 мл дистиллированной воды.

В левый кюветодержатель став т кювету с растворителем, в правый - кювету с ли5 зированной кровью. Включают гальванометр и вращением фотометрических клиньев устанавливают стрелку гальванометра на нуль, после чего гальванометр выключают. Затем вместо кюветы с лизированной кровью в правый кюветодержатель став т кювету с растворителем. Включают гальванометр и вращением левого измерительного барабана (который предварительно устанавливают на 0,00) стрелку гальванометра устанавливают на нуль, после чего гальванометр вы5 ключают. Величина оптической плотности раствора отсчитываетс  по левой части барабана . Определенной концентрации эритроцитов соответствует определенный показатель щкалы оптической плотности. Если 3°/о на  взвесь бараньих эритроцитов приготовлена правильно, то шкала оптической плотности показывает 0,4.

Приготовление гемолитической системы.

Гемолитическа  система это смесь равных объемов разведенной по троекратному 5 титру ге.молитической сыворотки и 3%-ной взвеси бараньих эритроцитов. Дл  приготовлени  гемолитической системы пользовались гемолитической сывороткой.

Перед приготовлением гемолитической системы рекомендуетс  проверить титр гемо0 литической сыворотки. Схема титровани  представлена в табл. 1.

Экспозици  1гпри 37° (+) после приготовлени  р да разведений из пробирок 1 и 2 дл  выравнивани  объемов удал ют по 0,4 мл смеси; (+ +) после приготовлени  р да разведений из пробирки 7 дл  выравнивани  объемов удал ют 0,5 мл смеси, стрелка (-)означает смещивание и перенесение определенного объема смеси в следующую пробирку.

За титр гемолитической сыворотки принимают то ее наибольщее разведение, в котором она еще способна в присутствии комплемента вызывать полное растворение эритроцитов барана (гемолиз на 4 креста).

После этого сыворотку развод т в физиологическом растворе так, чтобы 1 .мл ее содержал три рабочие дозы (т.е. три дозы, кажда  из которых в присутствии стандартного комплемента способна вызвать полный гемолиз эритроцитов барана).

0 Наиболее удобна дл  этой цели гемолитическа  сыворотка с титром 1:3000 или с титром кратным этой величине,.

Дл  приготовлени  50 мл разведенной сыворотки с исходным титром 1:3000 необходимо на 50 мл физиологического раствора

S прибавить 0,05 мл гемолитической сыворотки. Если же сыворотка имеет титр 1:1500, то на 50 мл, физиологического раствора следует вз ть О, мл этой сыворотки и т.д.

Разведенную таким образом сыворотку иногда называют сывороткой, разведенной по тройному титру.

Равные объемы 3°/о-ной по осадку взвеси эритроцитов и разведенной по тройному титру гемолитической сыворотки смешивают, влива  разведенную сыворотку во взвесь эритроцитов («белое в «красное) и инкубируют в течение 30 мин в термостате при 37°, после чего система готова к употреблению . Готов т систему непосредственно перед опытом.

Испытуема  активна  сыворотка.

Дл  определени  комплемента в испытуемой сыворотке брали кровь из пуповины у новорожденных детей и из черепных вен у детей в возрасте 7-10 сут (при строгом соблюдении правил асептики).

Титрование комплемента по 50% гемолизу (CHso).

За бО /о-ную гемолитическую единицу активности комплемента (CHso) принимают количество комплемента, способствующее бО /о-ному лизису определенного количества (0,5-1,0 мл) сенсибилизированных эритроцитов в течение 45-60 мин при 37°.

Методика титровани  комплемента.

Активную исследуемую сыворотку, разведенную 1:10, разливают в 11 пробирок дозами 0,05-0,5 мл с разницей между отдельными объемами 0,05 мл. Сыворотку довод т физиологическим раствором до 1,5 мл (табл. 2), после чего в каждую пробирку прибавл ют 1,5 мл гемолитической системы, т.е. сенсибилизированных бараньих эритроцитов . После 45 мин сто ни  пробирок в термостате их охлаждают 10 мин в холодильнике , затем Ш мин центрифугируют при 1500 об/мин.

За 100%-ный гемолиз принимаетс  гемолиз 1,5 мл сенсибилизированных эритроцитов , к которым прибавл ют 1,5 мл дистиллированной воды.

Степень гемолиза определ ют преимущественно колориметрическим методом (колориметр , электрофотоколориметр). Колориметрируют в фотоэлектроколориметре (ФЭК) в кюветах (3 мм) с зеленым светофильтром против воды.

Пример . Ребенок Т-ов, родилс  18.11. 1981 г, первые роды. Предыдущие четыре беременности закончились медицинскими абортами. Беременность протекала с угрозой прерывани  в первой половине, по поводу чего женщина лечилась в стационаре (отделение патологии беременных), втора  половина протекала без особенностей. Роды срочные, зат нувщиес . Первый период 36 ч. второй - 2 ч. 30 мин. Дородовое излитие околоплодных вод. Безводный период 26 ч. 30 мин. Упорна  первична  и вторична  слабость родовой де тельности, внутриутробна  асфикси  плода, вследствие чего были

наложены щипцы по Иванову, вакуум-экстрактор и полостные акущерские щипцы. Ребенок родилс  с оценкой по шкале Апгар 5 баллов, после реанимационных меропри тий 3 баллов. Вес. 3800,0; длина 55 см. Параллельно была вз та кровь из пупочной вены и определен уровень комплемента в сыворотке, который оказалс  равным 56,4 ед. что соответствует уровню комплемента при травматической энцефалопатии.

0

В детское отделение ребенок был переведен в т желом состо нии: болезненный крик, резко снижен мыщечный тонус, отсутствуют спонтанные движени , угнетены рефлексы периода новорожденности. Отмечалс  резко выраженный спонтанный кло5 нус стоп с генерализацией. Голова выраженной долихоцефалической конфигурации. В теменной области справа кефалогематома, кровоточащие ранки, перелом правой ключицы , снижена двигательна  активность в

0 правой ручке. В последующие дни состо ние ребенка оставалось т желым.

На 7 сут ребенок был переведен в специализированное отделение патологии новорожденных в состо нии средней т жести.

Были проведены функциональные методы исследовани . На реограмме отмечалось снижение пульсового наполнени , особенно в левом полущарии мозга. На эхоэнцефалограмме никаких особенностей не отмечено , внутренние структуры не смещены.

В результате анализа акушерского анамнеза , клинической картины, данных функциональных методов обследовани  был поставлен клинический диагноз: перинатальна  гипоксически-травматическа  энцефалопати , острый период, т желое течение. Одновременно проводилась оченка уровн  комплемента , на 10 сут он составил 77,8 ед.

На основании высокого показател  уровн  комплемента в сыворотке крови был поставлен окончательный клинический диагноз: перинатальна  травматическа  энцефалопати , острый период, т желое течение.

Проведено направленное лечение с акцентом на рассасывающую терапию. В конце лечени , на 30 сут уровень комплемента сыворотки крови был 35,3 ед. Ребенок выписан домой на 34-е сут в удовлетворительном состо нии, регул рно наблюдалс  в поликлинике педиатром и невропатологом. Развивалс  соответственно возрасту, хорошо прибавл л в весе. В психомоторном развитии отставаний не отмечалось. В возрасте двух лет ребенок практически здоров.

Пример 2. Ребенок М-нев родилс  от первой переношенной беременности, первых запоздалых родов, на сроке 42-43 недели у возрастной первород щей.

Беременность протекала с токсикозом в первой половине, нефропатией, пиелонефритом и анемией во второй половине.

Роды крупным плодом. Задний вид. Вторична  слабость родовой де тельности. Проводилась родостимул ци , наложен полостной вакуум-экстрактор и выходные акушерские щипцы. Оценка по шкале Апгар 2 балла ()), через 5 мин - 5 баллов (2+14

+ 14-1+0).

После родов был проведен весь комплекс реанимационных меропри тий. Параллельно вз та кровь из пупочной вены и определен уровень комплемента, который оказалс  довольно низким - 12,4 ед.

В отделение новорожденных ребенок посгупил в крайне т желом состо нии. На осмотр реагировал болезненным монотонным криком, взгл д был «плавающим, рефлексы периода новорожденности не вызывались, мышечный тонус был резко усилен. В легких дыхание резко ослаблено, выслушивались проводные хрипы, тоны сердца были глухими. Был выражен синдром общего угнетени , самосто тельно ребенок не сосал, кормилс  через зонд. На шестые сутки состо ние немного улучшилось, по вилась двигательна  активность, по вились рефлексы Бабкина, Бабинского. Гипертонус сменилс  гипотонией . По вилась паретичность кистей. Со стороны сердца и легких патологии не отмечалось . В роддоме ребенок находилс  10 сут, затем с диагнозом перинатальна  гипоксически-травматическа  энцефалопати , острый период, т желое течение - переведен в отделение патологии новорожденных дл  дальнейшего лечени  и выхаживани .

В отделении ребенок был обследован методами функциональной диагностики. На реограмме отмечалось снижение кровотока в бассейне a.vertaBralis с обеих сторон, особенно выраженное справа. Затруднен венозный отток. На эхоэнцефалограмме внутренние структуры не смещены, признаки ликворной гипертензии.

На электроэнцефалограмме доминирующие ритмы отсутствовали, особых изменений не отмечалось.

На основании анамнеза, клинической картины и обследовани  с помощью методов функциональной диагностики не было возможности выделить этиологический фактор и уточнить диагноз. Был поставлен диагноз: перинатальна  гипоксически-травматическа  энцефалопати , острый период, т желое течение. Уровень комплемента в сыворотке крови на 10 сут был 10,1 ед., что соответствует уровню комплемента у детей гипоксической энцефалопатией. После оценки уровн  комплемента был поставлен диагноз: перинатальна  гипоксическа  энцефалопати , острый период, т желое течение.

Была проведена патогенетическа  терапи . Ребенок был выписан из стационара

через 38 сут с остаточными  влени ми энцефалопатии . Уровень комплемента в возрасте 32 сут был 18,5 ед., т.е. не достиг уровн  нормального здорового ребенка. Через 10 мес. ребенок значительно отставал в развитии от своих сверстников {не сидел, не фиксировал взгл .а, не улыбалс ).

Пример 3. Ребенок П-ов родилс  от первой беременности, котора  протекала без осложнений. Матери 21 год, отцу 25 лет.

Родители здоровы. Роды в срок, вес при рождении 3880,0, длина 51 см. Закричал сразу, оценка по шкале Апгар 8 баллов, через 5 мин - 10 баллов. Период адаптации протекал без особенностей. К груди приложен

5 на вторые сутки, сосал активно. Выписан

из роддома на 10 сут в хорошем состо нии.

Уровень компле.мента сыворотки крови в

первые сутки 44,2 ед, на 10 сутки - 37,8 ед.,

на 30 сутки - 41,6 ед.,

Рос и развивалс  нормально соответ0 ственно возрасту. В возрасте одного года ребенок практически здоров.

Проведены исследовани  на 101 новорожденном , из которых 50 родились с перинатальными поражени ми ЦНС,и на 76 боль5 ных в специализированном отделении патологии новорожденных.

Комплемент сыворотки определ лс  в сыворотке крови, вз той из пупочной вены новорожденного в момент рождени , до перев зки пуповины и на 7-10 сут (кровь брали

0 из черепных вен). Одновре.менно дети обследовались общеклиническими методами и методами функциональной диагностики.

Полученные данные приведены в табл. 3. Из приведенных данных видно, что по известной диагностике в первые 10 сут жизни вы вл ютс  только нарушени  ЦНС, характерные дл  обоих видов энцефалопатии, без их дифференциации. При определении количественных показателей уровн  комплемента по предлагаемому способу очевидно,

что уровень комплемента у детей с травматической энцефалопатией в 3-5 раз превышает уровень комплемента у детей с гипоксической энцефалопатией, что впоследствии энцефалопатии гипоксического или травматического характера влекут за собой инвалидизацию ребенка в будущем или вызывают развитие различных состо ний, пограничных интеллектуальной недостаточности . Сложность заключаетс  в то.м, что нарушени  интеллекта обнаруживаютс  слиш0 ком поздно.

Таки.м образом, предлагаемый способ позвол ет в ранние сроки осуществл ть дифференциальную диагностику перинатальных поражений ЦНС у новорожденных детей, что важно дл  своевременного применени  па5 тогенетической терапи.и.

Таблица 1

Физиологиче0 ,9 0,9 0,5 ский0,9 0,1 0,1 0,5 Сыворотка 0,1 Физиологиче1 ,0 - 1,0 - 1 ,0 ский1 ,0 Комплемент 0,5 0,5 0,5 1:10 . 0,5 2,5% по осадку взвесь эритро0 ,5 0,5 0,5 цитов барана 0,5 Полученное раз1:100 1:1000 1:2000 ведение 1:10 Титрование комплемента активной сыворотки

ванные эритроциты + гемолизу 0,5 0,5 0,51,5 0,5 0,5 0,5 1 ,0 - 1 ,0 - 1,00 ,5 0,5 0,50,5 0,5 0,5 0,50,5 :4000 1:8000 1:16000 Таблица 2 по 50% Гипоксически-травматическа  12,5 энцефалопати 

5-7

То же 30

1

5-7 30

1

5-7 30

1

5-7 30

Таблица 3

10,2 То же

10,

10, 1 10,4 30,2

62,5 Травматическа  энцефалопати 

37,9 То же

48,9

60,6 - 49 ,4 То же 55,6 - 70 ,2 Гипоксическа  энцефалопати 

Claims (1)

1. СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью раннего выявления гипоксических и травматических повреждений центральной нервной системы, в исследуемой крови ' определяют уровень комплемента в первые сутки жизни и на

   7-10 сут и при уровне комплемента 10-35 ед. диагностируют гипоксическую энцефалопатию, а при 45-89 ед. — травматическую энцефалопатию.