SU1116395A1

SU1116395A1 - Способ определени концентрации общего холестерина в плазме крови

Info

Publication number: SU1116395A1
Application number: SU833581650A
Authority: SU
Inventors: Эдуард Павлович Цыганов
Original assignee: Tsyganov Eduard P
Priority date: 1983-02-22
Filing date: 1983-02-22
Publication date: 1984-09-30

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ путем экстракции холестерина органическими растворител ми и последующего проведени цветной реакции, о т- , личающийс тем, что, с целью повьш1ени точности, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавл ют 0,950 ,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4% формалина, холестерин экстрагируют из плазмы 6-10 объемами смеси хлороформа и метанола

Description

(/)

С

в

О)

со со ел

Изобретение относитс к медицине и биологической химии, в частности к способам определени концентрации общего холестерина в плазме крови.

Известен способ определени концентрацин общего холестерина в плазм или сыворотке крови flJ.

Недостатком известного способа вл етс использование венозной крови дл последующего получени плазмы или сыворотки, что создает трудности при обследовании больных, особенно при повторном вз тии крови дл наблюдени динамики процессов и при обследовании детей.,

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемо результату вл етс способ определени концентрации общего холестерина в малых объемах сыворотки крови, вклго- -, чающий омыление липидов, экстракцию холестерина петролейным эфиром, промывку экстракта водой и последующее фотометрирдвание 2.

Недостатком данного способа вл етс длительность выполнени анализа необходимость использовани специаль 1ого оборудовани дл микроанализа и невысока точность.

Цель изобретени - повышение точности .

Поставленна цель достигаетс тем, что при определении концентраци общего холестерина в плазме крови согласно способу, включшощему экстрак-; дню холестерина органическими раство .рител ми и последующее проведение цветной реакции, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавл ют 0,950 ,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4% формалина, холестерин экстрагируют из плазмы 6-10 объемами смеси хлороформа и метанола (1:1), экстракт промывают водой и спектрофотометрически определ ют концентрацию холестерина в плазме .

Способ по сн етс следующими примрами .

Пример 1. Кровь в количестве 0,05 мл берут и5 пальца, внос т в центрифужную пробирку с 0,95 мл физиологического раствора, содержащего 0,35% формалина, перемешивают, центрифугируют при 1500 об/мин, отбирают 0,7 мл в центрифужную пробирку , приливают 4,5 мл смеси хлороформа и метанола (1:1) и 1,5 мл воды.

перемешивают, центрифугируют, верхни слой удал ют, хлороформный слой перенос т в другую пробирку, хлороформ отгон ют, к сухому остатку приливают 1,5 мл 0,1%-ного раствора хлорного железа в лед ной уксусной кислоте и концентрированной серной кислоты , перемешивают, нагревают на кип щей вод ной бане 1 мин. Оптическую плотность раствора измер ют с помощью ФЭК при длине волны 560 нм против цветного реактива. Стандартны пробы обрабатьгаают аналогичным образом . Одновременно определ ют величину гематокрита с помощью микрометода Концентрацию холестерина в плазме рассчитывают по формуле:

Концентраци общего

от Ьоп X К холестерина, мг% i

: -

где и Е - оптическа плотност,

оп опытных и контрольны проб, соответственно;

ТГ

коэффициент, рассчитанный дл данной величины гематокрита по формуле:

OiJ

0,7

+ V

где 0,1 - содержание холестерина в

стандартной пробе, мг; V - объем плазмы, мл, соответствующий объему полученной крови (рассчитывают по величине гематокрита); 0,7 - величина аликвоты. При вз тии крови у 70 мужчин и 74 женщин различных возрастных групп получают следующие результаты, мг %: 17-29 лет - 196±9 и 204±7; 30-39 лет220±12 и 237+14; 40-49 лет - 205±17 и 239+7 и старше 50 лет - 232±6 -и 229+23 соответственно.

Пример 2. При параллельных определени х концентрации общего I холестерина в плазме крови двух обследуемых с помощью предлагаемого способа получены следующие результаты 196 , 194, 188, 190, 194, 188, 186 и 190 мг % и 282, 286, 290, 292, 296, 280, 280 и 286 мг %. Точность метода, рассчитанна дл первого и второго случа , составл ла ±2,1 и ±2,5% соответственно .

Пример 3. При определении концентрации общего холестерина в

плазме крови одних и тех же обследуе мых (определени проводили с интервалом 4-7 дней) d помощью предлагаемого способа получены следующие результаты , мг %: 280 и 287; 204 и 212; 196 и 178; 238 и 244; ЗОЗ. 296 и 308; 348, 296 и 323; 194 и 188; 164 и 172; 296, 300 и 304; 170 и 176 при первом .и повторных определени х соответственно .

Способ дает хорошую воспроизводимость результатов.

Пример 4. При определении концентрации холестерина в плазме крови 6 интактных кроликов по предлагаемому способу и способу-прототипу получены следующие результаты, мг %: 77,5 и 75,0; 67,8 и 7.0,6; и 81,5; 52,3 и 52,0; 72,0 и 70,0; 110,0 и 113,О соответственно. Средние значени равны 76,6 и 77,0 мг % соответственно , т.е. результаты, полученные с помощью предлагаемого способа и способа-прототипа, хорошо со гласуютс .

Врем , затраченное на проведение 6 анализов по предлагаемому способу, юоставило 75 мин, а по способу-прототипу более 3ч.

/

Claims

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ путем экстракции холестерина органическими растворителями и последующего проведения цветной реакции, о т- . личающийся тем, что, с целью повышения точности, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавляют 0,950,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4% формалина, холестерин экстрагируют из плазмы 6-10 объемами смеси хлороформа и метанола (1:1), экстракт промывают водой и спектрофотометрически определяют концентрацию холестерина в плазме.

0Э 00 ς© СП >

ί