SU1110799A1

SU1110799A1 - Method for preserving cells of fusarium moniliforme pg-7

Info

Publication number: SU1110799A1
Application number: SU813330302A
Authority: SU
Inventors: Алла Александровна Цуцаева; Людмила Николаевна Лаврова; Игорь Павлович Высеканцев; Вера Михайловна Маркова; Юрий Абрамович Иткин; Виктор Львович Бронштейн; Павел Гершевич Исерович; Галина Алексеевна Тренина
Original assignee: Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР
Priority date: 1981-08-14
Filing date: 1981-08-14
Publication date: 1984-08-30

Abstract

СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ КЛЕТОК FUSARIUM MONILIFORME Pg-7 путем замораживани в среде криопротектора , отличающийс тем, что, с целью повьшени жизнеспособности клеток, замораживание производ т со скоростью 1-2 С в мин от 1520&deg;С до (-70) - (-90)С, а в качестве криопротектора используют 1-3%-ный раствор сахарозы, или 1-5%-ный раствор диметилсульфоксида, или 1-3%-ньй раствор глицерина.A method of preserving the cells of FUSARIUM MONILIFORME Pg-7 by freezing in a cryoprotectant medium, characterized in that, in order to increase cell viability, freezing is performed at a rate of 1-2 C per minute from 1520 ° C to (-70) - 90) C, and as a cryoprotectant, use 1-3% sucrose solution, or 1-5% solution of dimethyl sulfoxide, or 1-3% solution of glycerol.

Description

о со соabout with so

1 111 11

Изобретение относитс к микробиологии и может найти применение при 1)роизводстве гиббереллина, используемого в качестве кормовой добавки в животноводстве.The invention relates to microbiology and can be used in 1) production of gibberellin used as a feed additive in animal husbandry.

Известен способ низкотемпературного консервировани микроорганизмов с помощью защитной среды, содержащей 10-50% глицерина, 5-20% сахарозы и 10% буфера 1 .The known method of low-temperature preservation of microorganisms using a protective environment containing 10-50% glycerol, 5-20% sucrose and 10% buffer 1.

Однако этот способ не обеспечивает высокой жизнеспособности клеток Pusarium moniliforme Pg-7, так как при наличии в защитной среде лимоннокислого натри и при некотролируемой скорости охлаждени жизнеспособность клеток снижаетс .However, this method does not provide a high viability of Pusarium moniliforme Pg-7 cells, since the cell viability decreases in the presence of sodium citrate in a protective environment and with an uncontrolled cooling rate.

Известен способ низкотемпературного консервировани бактерий, заключающийс в том, что микробные суспензии замораживают до -19бС со . скоростью 400С/мнн под защитой криопротекторов глицерина или полиэтиленоксида мол.в. 400 в концентраци х 5-10% 2 .A known method of low-temperature preservation of bacteria is that microbial suspensions are frozen to -19bC. 400C / mnn under the protection of cryoprotectants glycerin or polyethylene oxide mol.v. 400 in concentrations of 5-10% 2.

Однако известный способ не обеспечивает высокой жизнеспособности клеток Fusarium moniliforrae Pg-7. При консервировании под защитой ПЭО-400 жизнеспособность клеток 1,2% под защитой глицерина 50%.However, the known method does not provide a high viability of cells of Fusarium moniliforrae Pg-7. When canned under the protection of PEO-400 cell viability of 1.2% under the protection of glycerin 50%.

: Цель изобретени - повьшение жизнфспособности клеток Fusarium monili forme Pg-7.,: The purpose of the invention is to increase the viability of the cells of Fusarium monili forme Pg-7.,

Указанна цель достигаетс тем, что клетки Fusarium moniliforme Pg-7 замораживают со скоростью 1-2°С/мин от 15-20°С до (-70) - (-90)°С в среде криопротекторов 1 3%-ной сахарозы , или 1-3%-ного глицерина, или 1-5%-ного диметилсульфоксида.This goal is achieved by freezing the cells of Fusarium moniliforme Pg-7 at a rate of 1-2 ° C / min from 15-20 ° C to (-70) - (-90) ° C in the medium of cryoprotectants 1 3% sucrose, or 1-3% glycerol, or 1-5% dimethyl sulfoxide.

Способ осуществл ют следующим образом.The method is carried out as follows.

Клетки Fusarium moniliforme Pg-75 отмытые от ростовой среды, ресуспендИруют в 1-3%-ном растворе глицерина или в 1-5%-ном растворе ДМСО, или в 1-3%-ном растворе сахарозы. После 10-15-минутной экспозиции в защитной среде образец охлаждают от 15-20 0 до (-70) - (-90)°С со скоростью 12°С/мин . Затем образец погружают в жидкий азот. Отогревают образец на вод ной бане при 28-30°С.Fusarium moniliforme Pg-75 cells, washed from the growth medium, are resuspended in 1-3% glycerol solution or in 1-5% DMSO solution, or in 1-3% sucrose solution. After a 10-15 minute exposure in a protective environment, the sample is cooled from 15-20 0 to (-70) - (-90) ° C at a rate of 12 ° C / min. The sample is then immersed in liquid nitrogen. Heat the sample in a water bath at 28–30 ° C.

Пример 1. Образцы клеток Fusarium moniliforrae Pg-7 в объеме 1,5 мл, отмытые от ростовой среды (среды Чапека), ресуспендировали в 3%-ном водном растворе глицерина.Example 1. Samples of Fusarium moniliforrae Pg-7 cells in a volume of 1.5 ml, washed from the growth medium (Czapek's medium), were resuspended in 3% aqueous glycerin solution.

0799207992

Исходна концентраци жизнеспособных клеток в пробе составила (1,7 + 1 0,1425) to клеток/мл. После 15-минутной экспозиции в защитной среде 5 образец охлаждени от 20 до -90°С со скоростью 1 с/мин. Затем образец погрузили в жидкий азот. После хранени в жидком азоте в течение 2 лет образцы отогрели на вод ной приThe initial concentration of viable cells in the sample was (1.7 + 1 0.1425) to cells / ml. After a 15-minute exposure in a protective environment 5, the sample is cooled from 20 to -90 ° C at a rate of 1 s / min. Then the sample was immersed in liquid nitrogen. After being stored in liquid nitrogen for 2 years, the samples were warmed up in water at

10 , Оценку качества клеток Fusari- urn moniliforme Pg-7 проводили по. количеству жизнеспособных клеток в образцах , морфологической сохранности клеток чашечным методом. Количество10, Fusarium moniliforme Pg-7 cell quality assessment was performed according to. the number of viable cells in the samples, morphological preservation of cells by the plate method. amount

15 жизнеспособных клеток Fusarium moniliforme Pg-7 после хранени в течение 2 лет (1,7iO,2234)10 клеток/мл, т.е. 100%-на жизнеспособность клеток .15 viable Fusarium moniliforme Pg-7 cells after storage for 2 years (1.7iO, 2234) 10 cells / ml, i.e. 100% cell viability.

20 Пример 2. Клетки Fusariun moniliforme Pg-7 в объеме 1,5 мл, отмытые от ростовой среды, ресуспендировали в 3%-ном растворе сахарозы. Исходна концентраци клеток в об25 разце (1 ,710, t435)-10 клеток/мл.20 Example 2. Fusariun moniliforme Pg-7 cells in a volume of 1.5 ml, washed from the growth medium, were resuspended in a 3% sucrose solution. The initial cell concentration in the sample (1, 710, t435) is 10 cells / ml.

После 10 минутной экспозиции .образец охлаждали от 15 до -70°С со скоростью 1°С/мин. Затем образец погрузили в жидкий азот. После хранени в жвдQ ком азоте в течение 2 лет образцы отогрели: на вод ной бане при 28°С. Количество жизнеспособных клеток (1,7±0,3013)10 клеток/мл.After a 10 minute exposure, the sample was cooled from 15 to -70 ° C at a rate of 1 ° C / min. Then the sample was immersed in liquid nitrogen. After being stored in a liquid nitrogen unit for 2 years, the samples were warmed: in a water bath at 28 ° C. The number of viable cells (1.7 ± 0.3013) 10 cells / ml.

Пример 3. Образцы клеток Example 3. Cell samples

Fesarium moniliforme Pg-7 в объеме 1,5 мл, отмытые от ростовой среды (среды Чапека), ресуспендировали в 5%-ном водном растворе диметилсульфок;сида (ДМСО). Исходна концентраци Fesarium moniliforme Pg-7 in a volume of 1.5 ml, washed from the growth medium (Czapek's medium), was resuspended in 5% aqueous solution of dimethyl sulfone sid (DMSO). Initial concentration

д клеток в образце (1 ,710,2661) «Ю клеток/мл . После t2-минутной экспозиции образец охладили от 18 до -85°С со скоростью 2 С/мин, Затем образец погрузили в жидкий азот. После хранени образца в жидком азоте в течение 2 лет его отогревали на вод ной бане при 28°С. Количество жизнеспособных клеток в образце после хранени 1,7 0,2804 10 клеток/МП или 100%.d cells in the sample (1, 710.2661) "Yu cells / ml. After t2-minute exposure, the sample was cooled from 18 to -85 ° C at a rate of 2 C / min. Then the sample was immersed in liquid nitrogen. After storing the sample in liquid nitrogen for 2 years, it was warmed in a water bath at 28 ° C. The number of viable cells in the sample after storage is 1.7 0.2804 10 cells / MP or 100%.

В таблице показано вли ние скорости охлаждени и концентрации криопротекторов на жизнеспособность клеток Fusarium moniliforme Pg-7 Исходна 5 концентраци клеток 1,7.-10.The table shows the effect of cooling rate and cryoprotectant concentration on the viability of Fusarium moniliforme Pg-7 cells. Initial 5 cells concentration 1.7.-10.

Из таблицы видно, что высока жизнеспособность достигаетс при охлаждении со скоростью 1-2 С в MHHyrv при концентрации 1-3% глицерина, либо 1-3% сХарозы, либо 1-5% диметилсульфоксида .The table shows that high viability is achieved by cooling at a rate of 1-2 ° C in MHHyrv at a concentration of 1-3% glycerol, or 1-3% with Charose, or 1-5% dimethyl sulfoxide.

Таким образом, преимуществом предлагаемого способа вл етс то, что оН обеспечивает 100%-ную жизнеспособность клеток.Thus, the advantage of the proposed method is that OH provides 100% cell viability.

Claims

METHOD FOR CONSERVING FUSARIUM MONILIFORME Pg-7 CELLS by freezing in a cryoprotectant medium, characterized in that, in order to increase cell viability, freezing is performed at a rate of 1-2 ⁶ C per min from 1520 ° C to (-70) - (~ 90) ° C, and as a cryoprotectant use a 1-3% solution of sucrose, or 1-5% solution of dimethyl sulfoxide, or 1-3% solution of glycerol.