RU2049391C1

RU2049391C1 - Agent for bone marrow cryopreserving

Info

Publication number: RU2049391C1
Authority: RU
Inventors: Е.П. Сведенцов; В.П. Архиреев; Д.С. Симкин; Е.В. Кузнецов
Original assignee: Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови
Priority date: 1981-01-20
Filing date: 1981-01-20
Publication date: 1995-12-10

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: agent has except for ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt hexamethylene-bis-tetrahydroxyethylurea and bidictilled water at the following ratio of components, wt.-% hexamethylene-bis-tetrahydroxyethylurea 30-50; ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt 0.08-0.18, and bidistilled water the rest. EFFECT: decreased toxicity.

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию и трансплантации биологических тканей. The invention relates to medicine, in particular to the preservation and transplantation of biological tissues.

Известны растворы, предложенные для криоконсервирования костного мозга и содержащие криопротекторы низкомолекулярный поливинилпирролидон и/или глицерин. Эти растворы при замораживании костного мозга позволяют сохранить репродуктивную, колониеобразующую способность столовых клеток в среднем в 37% (при колебаниях от 20 25% до 40 63%), т.е. они не обладают достаточно высоким хладоограждающим действием на костномозговые клетки. Применение глицерина в оптимальной для замораживания кроветворных клеток 15% концентрации ввиду ее токсичности для макроорганизма требует отмывания этого криофилактика от костного мозга перед трансплантацией и ведет к дополнительной потере гемопоэтических клеток. Known solutions proposed for cryopreservation of bone marrow and containing cryoprotectants low molecular weight polyvinylpyrrolidone and / or glycerin. When freezing bone marrow, these solutions preserve the reproductive, colony forming ability of table cells on average at 37% (with fluctuations from 20 25% to 40 63%), i.e. they do not have a sufficiently high cold-blocking effect on bone marrow cells. The use of glycerol in an optimal concentration for freezing blood-forming cells of 15% due to its toxicity to the macroorganism requires washing this cryophylactic from the bone marrow before transplantation and leads to additional loss of hematopoietic cells.

Цель изобретения заключается в том, чтобы раствор для криоконсервирования костного мозга создать из максимально нетоксичных составных частей и повысить его хладоограждающее действие на стволовые костномозговые клетки. The purpose of the invention is to create a solution for cryopreservation of bone marrow from the most non-toxic components and increase its cold-protecting effect on stem marrow cells.

Цель достигается тем, что хладоограждающий раствор содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующих соотношениях компонентов, мас. Гексаметиленбистетра- оксиэтилмочевина 30,0-50,0 Динатриевая соль эти- лендиаминтетрауксус- ной кислоты 0,08-0,18 Бидистиллированная вода Остальное
Раствор готовят следующим образом.The goal is achieved in that the cooling solution contains hexamethylenebistetraoxyethylurea and disodium salt of ethylenediaminetetraacetic acid in the following ratios of components, wt. Hexamethylene bistetra-hydroxyethylurea 30.0-50.0 Disodium salt of ethylenediaminetetraacetic acid 0.08-0.18 bidistilled water Else
The solution is prepared as follows.

Взвешивают требуемые навески динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и гексаметиленбистетраоксиэтилмочевины. Отдельно в бидистиллированной воде растворяют навески указанных веществ. Полученные растворы смешивают и, добавляя бидистиллированную воду, доводят до окончательного объема. The required weights of disodium salt of ethylenediaminetetraacetic acid and hexamethylene bistetraoxyethylurea are weighed. Separately, weighed portions of these substances are dissolved in double-distilled water. The resulting solutions are mixed and, by adding bidistilled water, brought to the final volume.

Приготовленный хладоограждающий раствор пропускают через ватно-марлевый фильтр, разливают в требуемые флаконы, закрывают их резиновыми пробками и завальцовывают. Перед стерилизацией завертывают в двойной слой пергаментной бумаги. The prepared cold-barrier solution is passed through a cotton-gauze filter, poured into the required bottles, closed with rubber stoppers and rolled. Before sterilization, wrap in a double layer of parchment paper.

Стерилизацию флаконов с раствором для криоконсервирования костного мозга производят в автоклаве в течение 30 мин при 1,2 атм. Готовый раствор хранят в сухом прохладном темном месте во флаконах, завернутых еще до стерилизации в пергаментную бумагу, не более 6 мес. Коррегируют рН раствора до 7,0-7,2 с помощью 2 н. раствора химически чистой соляной кислоты. Sterilization of vials with a solution for bone marrow cryopreservation is carried out in an autoclave for 30 minutes at 1.2 atm. The finished solution is stored in a cool, dry, dark place in vials, wrapped even before sterilization in parchment paper, for no more than 6 months. The pH of the solution is adjusted to 7.0-7.2 with 2 N. a solution of chemically pure hydrochloric acid.

Готовый хладограждающий раствор бесцветен, прозрачен, не имеет запаха. Он хорошо смешивается с нативной костномозговой взвесью, а также стабилизированной цитратом натрия и содержащей среду 199 и аутологичную сыворотку, предупреждает агрегацию клеток костного мозга и обеспечивает их высокую жизнеспособность при положительных температурах. Ready refrigerant solution is colorless, transparent, odorless. It mixes well with native bone marrow suspension, as well as stabilized with sodium citrate and containing 199 medium and autologous serum, prevents the aggregation of bone marrow cells and ensures their high viability at positive temperatures.

Раствор обладает очень выраженным хладограждающим действием: при замораживании до -196^оС по двухэтапной программе (со скоростью охлаждения 1^о в мин до -9 и 10^о в мин до -196^оС) и размораживании в течение 50 с при 39^оС в водяной ванне сохраняется весьма высокий процент стволовых кроветворных клеток от 75,4 до 94,1 в среднем 83,3±2,7.The solution has a very pronounced effect hladograzhdayuschim: during freezing to -196 ^{° C} by-step program (at a cooling rate ^of 1 per minute and 10 -9 to ^about a minute to -196 ° ^C) and thawed for 50 s at 39 ^C. the water bath retains a very high percentage of hematopoietic stem cells from 75.4 to 94.1, an average of 83.3 ± 2.7.

Эти данные получены в исследованиях, проведенных на 905 мышах имбредной линии (СВА + С₅₇ВI_б) с клонированием гемопоэтических стволовых клеток в селезенках смертельно облученных мышей по принятому в отечественных и зарубежных работах методу Till T.E. Mc Culloch E.A. A direct meаsurement of the radiation sensivity of normal mouse bone marrav cells. "Red"at.Ros v 14, р. 213.These data were obtained in studies conducted on 905 mice of the imbred line (CBA + C ₅₇ VI _b ) with cloning of hematopoietic stem cells in spleens of deadly mice according to the Till TE Mc Culloch EA A direct mesurement of the radiation sensivity method adopted in Russian and foreign studies of normal mouse bone marrav cells. "Red" at.Ros v 14, p. 213.

Предлагаемый раствор обладает очень выраженным хладограждающим действием, апирогенен, нетоксичен. Последнее обстоятельство позволяет трансплантировать размороженный костный мозг без отмывания от криофилактика, что делает удобным использование данного хладограждающего раствора в практической работе. The proposed solution has a very pronounced cooling effect, pyrogen-free, non-toxic. The latter circumstance allows transplanted thawed bone marrow without washing off cryophylaxis, which makes it convenient to use this cold-enclosing solution in practical work.

Claims

MEANS FOR CRYOPreservation of BONE MARROW, containing disodium salt of ethylenediaminetetraacetic acid, characterized in that, in order to reduce toxicity, it additionally contains hexamethylene bistetraoxyethylurea and bidistilled water in the following ratios of ingredients, wt.

Hexamethylene bistetraoxyethylurea 30.0 50.0
Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt 0.08 0.18
Bidistilled water rest