со а f Изобретение относитс к способам исследовани молока и мозюет быть ис пользовано дл проверки его качеств при приемке на молочных предпри ти х , а также да проверки его на молочных фермах. Известен способ определени коли чества лейкоцитов в молоке, предусматривающий отбор проб молока, смешивание их с реактивом Фелинга и визуальное анализирование получен ной смеси J. Недостатками этого способа вл ютс низка чувствительность и пло ха воспроизводимость. Наиболее близким к изобретению вл етс способ определени количества лейкоцитов в молоке, предусмат ривающий отбор проб молока, смешива ние их с аналитическим реагентом и анализирование полученной смеси. -При этом в качестве аналитического реагента используют щелочной раство фосфина 3R гидрохлорида 2. Недостатками известного способа вл ютс низкд чувствительность и высока погрешность. Целью изобретени вл етс повышение чувствительности и точности способа. . Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу определени количества лейкоцитов в молоке, предусматривающему отбор проб молореагентом и анализирование полученн смеси, в качестве аналитического реагента используют раствор флуорес цеиндиацетата с концентрацией м, полученную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 30-50 мин, и затем измер ют интенси ность ее флуоресценции, а определение количества лейкоцитов осуществ1 л ют по уровню интенсивности флуоресценции . Способ осуществл ют следующим образом . Отбирают пробу молока и разбавл ют ее буферным раствором (рН 7,5, ионна сила 0,15 М) . К пробе добавл ют раствор флуоресцеиндиацетата и вьщерживают смесь в течение 30-50 мин, а затем на флуориметре определ ют интенсивность флуорес- . ценции, по которой суд т о количестве лейкоцитов в молоке. Интенсивность флуоресценции нормального молока принимают- за нулевую. С увеличением концентрации лейкоцитов в молоке интенсивность флуоресценции увеличиваетс . Пример. Отбирают пробу исследуемого молока в количестве 1 мл, смешивают ее с 2 мл фосфатного буфера (рН 7,5, /и. 0,15 М), приливают 20 мкл раствора флуоресцеиндиацетата с концентрацией 5-10 М и вьщерживают в течение 40 мин при 1820 0 . По истечении этого времени 50 мкл смеси смешивают с 2 мл фосфатного буфера и определ ют интен :ивность флуоресценции на флуориметре . При этом длину волны возбуждающего излучени устанавливают равной 470 нм, а длину волны анализируемого излучени (флуоресценции) - 530 нм. Дл определени числа лейкоцитов стро т график зависимости интенсивности флуоресценции от числа лейкоцитов , анализиру пробы молока с известным числом лейкоцитов (последнее определ ют путем подсчета числа лейкоцитов под микроскопом). Результаты определени количества лейкоцитов путем подсчета под микроскопом по известному и предлагаемому способам приведены в таблице.p a f The invention relates to methods for examining milk and can be used to check its qualities when taken at dairy plants, and also to check it at dairy farms. A known method for determining the number of leukocytes in milk involves sampling milk, mixing it with Fehling's reagent, and visually analyzing the resulting mixture J. The disadvantages of this method are low sensitivity and reproducibility. Closest to the invention is a method for determining the number of leukocytes in milk, involving the sampling of milk, mixing them with an analytical reagent and analyzing the resulting mixture. In this case, an alkaline solution of phosphine 3R hydrochloride 2 is used as an analytical reagent. The disadvantages of this method are low sensitivity and high error. The aim of the invention is to increase the sensitivity and accuracy of the method. . The goal is achieved in that according to the method for determining the number of leukocytes in milk, which involves sampling with a moloreagent and analyzing the resulting mixture, the fluorescent solution of the caindiate acetate with a concentration of m is used as an analytical reagent, the mixture is kept at room temperature for 30-50 min the intensity of its fluorescence is measured, and the number of leukocytes is determined by the level of fluorescence intensity. The method is carried out as follows. A sample of milk is taken and diluted with a buffer solution (pH 7.5, ionic strength 0.15 M). A fluorescein diacetate solution is added to the sample and the mixture is held for 30-50 minutes, and then the fluorescence intensity is determined on the fluorimeter. The assessment is based on the number of leukocytes in milk. The fluorescence intensity of normal milk is taken as zero. With increasing concentration of leukocytes in milk, the fluorescence intensity increases. Example. A sample of the test milk is taken in an amount of 1 ml, mixed with 2 ml of phosphate buffer (pH 7.5, / and 0.15 M), 20 μl of a solution of 5-10 M fluorescein diacetate are added and held for 40 min at 1820 0 After this time, 50 µl of the mixture is mixed with 2 ml of phosphate buffer and the intensity of fluorescence is determined on a fluorimeter. In this case, the wavelength of the exciting radiation is set to 470 nm, and the wavelength of the analyzed radiation (fluorescence) is set to 530 nm. To determine the number of leukocytes, a graph of fluorescence intensity versus the number of leukocytes is plotted, analyzing milk samples with a known number of leukocytes (the latter is determined by counting the number of leukocytes under a microscope). The results of determining the number of leukocytes by counting under a microscope according to the known and proposed methods are given in the table.
1109641411096414
Продолжение таблицыTable continuation
Количество знаков + пропорционально концентрации суспензии в смеси пробы молока с аналитическим реагентом. The number of characters + is proportional to the concentration of the suspension in the mixture of milk samples with analytical reagent.
„Представленные данные показьгеают, способа в 2 раза, а точность в 3,5 что чувствительность предлагаемого раза вьппе, чем у известного способа.“The data presented shows a 2-fold method, and an accuracy of 3.5, which is the sensitivity of the proposed time than the known method.