8
ko
г
сл Изобретение относитс к штаммай микроорганизмов-продуцентов биомассы и может быть использовано в микробио . логической промьшленности дл получени белка, в качейтве корма дл животных и рыб, в замкнутых экологических системах, в качестве субстрата дл культивировани других микроорганизмов . В качестве продуцентов биомассы используютс различные штаммы одноiклеточных зеленых водорослей рода Jchlorella, из которых наиболее близким к предлагаемому вл етс штамм Chlorella vulgaris Beijer 62/56 l и 2. Известные штаммы хлореллы обладаю обцр1ми недостатками: наличием трудно разрушаемой целлюлозной оболочки, что усложн ет их использование, а также прекращением роста и фотосинте за в услови х повьпленных концентраций солей, в частности NaCl, Цель изобретени - выделение и введение в культуру штамма одноклеточной зеленой водоросли Pedinomonas tenuis, отличительными признаками которого вл ютс отсутствие п-потной клеточной оболочки, широка амплитуда солевыносливости, толерантность к изменени м химического состава среды обитани . Предлагаемый штамм имеет каротиновьй комплекс, идентичный с таковым других растительных организмов . Дл достижени цели используют птам.; одноклеточной зеленой водоросл Pedinomonas tenuis Massjuk № 153 (коллекци института ботаники им. Н.Г. Холодного АН УССР) - продуцент биомассы. Предлагаемьй штамгт Pedinomonas .f.enuis Massjuk обладает следующими морфологическими признаками: клетки неправильно-овальные, уплощенные,-в {месте прикреплени жгутика слегка носиковидно отт нутые, с узкой сторо ны удлиненно-эллиптические, без дифференцированных клеточных покровов, окружены лишь плазмалеммой. Размеры клеток: длина 3,5-4,0 м, ширина 1,82 ,7,итолщина 0,7-1,0 мк. Подвижные, единственный жгутик, прикрепленньй сбоку и при движении направленный на зад, в 2-2,5 раза превьшгает длину клетки. Хлоропласт пристенный, лунообразный располагаетс на спинной стороне клетки и простираетс на боковые стороны почти до брюшной, занима более половины клетки, без пипеноида . Глазок эллиптический или круглый, сравнительно большой, ркий, хорошо заметный, посредине или слегка сбоку на спинной стороне клетки. Ядро с дрьш1ком, иногда заметное без специальной окраски, находитс в вырезке хлоропласта у основани жгутика . Пульсирующие вакуоли отсутствуют . Размножение - путем делени в подвижном состо нии. Физиолого-биохимические признаки: Pedinoraonas tenuis растет при рН 7,0, температуре 28-30 С, освещенности 2А,2 Вт/м, ФАР. Может развиватьс на средах как с низкой, так и с высокой концентрацией NaCl (10-116 г/л). Добавки мочи в питательную среду в соотношени х 1:200, 1:100, 1:50 оказывают стимулирующее действие на рост Pedinomonas tenuis. Источником азотного питани может служить KNOjH мочевина . Антибиотическа активность не обнарухсена. Сопутствующа микрофлора . Р. tenuis стабильна и ограничена в видовом отношении. Доминирующими в п ютс Pseudomonas mendocina и Pseudo- jmonas sp., которые не оказывают на рост водорослей- отрицательного вли Предлагаемый штамм Р. tenuis отличаетс высоким содержанием белка и липидов, что составл ет соответственно 29,8 и 29,0% на сухое вещество. Дл углеводов характерно высокое со1цержание водорастворимой фракции. В составе пигментов Р.tenuis обнаружены два хлорофилла (а и S), О - - -каротин и цис-транс-изомер р-каротина, ликопин, лютеин, зеаксантин , антераксантин, виолаксантин, неоксантин, а также три неидентифицированных пигмента. Основную часть пигментов Р. tenuis представл ют хлорофиллы , причем хлорофилл а преоб1 адает над хлорофиллом & . Относительное содержание пигментов (% к сумме пигментов): хлорофилл а - 47,42 + 3,15; хлорофилл 8 - 25,26± +1,82; лютеин + зеаксантин+антераксантин - 10,7+0,64; виолаксантин 3 ,78 + 0,63; неоксантин - 2,62 ± 0,44, Таким образом, по соотношению основных пигментов, и по их количественному составу Р. tenuis близок к другим представител м Chlorophycophyta . В отличие от насто щих зеленых водорослей (Chlorophycale), P.tenuis содержит j( -каротин, ликопин и три неидентифицированных пигмента. По составу каротиновой фракции: 0 -каро тин, fJ-каротин, ц 1С- транс-изомер р-каротина, Jf-каротин, Р. tenuis бли зок к таковой у моркови. При культивировании питательной средой дл вьфащивани в интенсивном режиме служит среда Артари в мод фикации Н.П. Масюк, включающа следу щие компоненты, г/л: KN03 2,5; К2НР04 0,2; 50, NaCl 29,0; раствор микроэлементов 1 МП/л; рН 7,0 (корректировка рН добавлением NaOH или NaHCO). Раствор микроэлементов содержит следующие компоненты: 2,86; 1,81; ZnS04-7H20 0,22 г/л и МоО 176,4; NH4NO 229,6; (№4)5 К4Н20 214,02 мг/10 л. Вместо KWOj в состав питательной среды можно вносить мочевину в количестве 0,744 г/л. Культивирование провод т при круглосуточном освещении люминесцент ными лампами ЛБ-40 (24,2 Вт/м, ФАР) при 28-30°С. Выращивание в экстенсив ном режиме позвол ет получить за 35 сут 0,56-0,84 сухой биомассы/ . Интенсивное культивирование (с принудительным перемешиванием и дополнительным снабжением углекислым газом) повьшает скорость роста культуры и его продуктивность. Предлагае мый штамм Pedinomonas tenuis хорошо развиваетс при интенсивном режиме культивировани . Дл этого может быт использована также среда Артари (в модификации Масюк Н.П.). Однако более продуктивный рост может быть по .лучен на питательной среде, приготов ленной на основе искусственной морской , воды следующего состава, г/л5 NaCl 27,65; MgS047HjO 6,92; MgClj 5,51; CaCl2-6H,0 1,45; КС NaHCOj 0,25; NaNOj 0,10; NaB 0,10; . Na2HP04 0,05; KI 0,005; 0,15; Дополнительно внос т, г/л: NaNOj 1,8; NaHjPOi)-.211/70 0,3 и микроэлементы, мг/л: Na ЭДТА 37; н,р 42j. MnCl24H20 8,0; Со(КОз)26-Н О 6,25; (NH4)feMo70244H50 1,83; KCrj(S04)4 х2Н,0 2,38; TiOj 0,58. рН 7,0-7,5. Вместо MaNO в состав среды можно вносить мочевину в количестве 296,47 мг/л. Культивирование в колбах на ностате: круглосуточное продувание воздуха, обогащенного до 3% СО и непрерывное освещение лампами типа ЛБ-40 (освещенность дна колб 28 Вт/м, ФАР). Такой режим культивировани позвол ет получить продуктивность Р. tenuis 1,5 г сухой биомассы на 1 л за 6 сут. Таким образом, Pedinomonas tenuis Massjuk представл ет интерес как . продуцент биомассы. Отсутствие плотных клеточных оболочек облегчает перевариваемость их животными, а также упрощает методы их промьшшенной обработки с целью извлечени биологически активных и других ценных органических веществ (белок, предшественники витамина А).