SU1081208A1

SU1081208A1 - Способ выращивани ортомиксовирусов

Info

Publication number: SU1081208A1
Application number: SU813393261A
Authority: SU
Inventors: Назира Бадретдиновна Ахматуллина; Майя Хажетдиновна Шигаева; Нина Михайловна Деревцова; Дильнар Алимжановна Абдукаримова; Кайрат Габбасович Мустафин
Original assignee: Институт Микробиологии И Вирусологии Ан Казсср; Казахский Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.С.М.Кирова
Priority date: 1981-12-23
Filing date: 1981-12-23
Publication date: 1984-03-23

Abstract

СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ОРТОМИК: СОВИРУСОВ в среде культивировани в, ; присутствии стимул тора репродукции вирусов, отличающийс I teM, что, с целью повышени выхода i вирусов, в качестве стимул тора ре; продукции вирусов используют 1,4-бис-диазоацбтш1бутан или нитрозомётилмочевину в концентрации 125 или 1-20 мкг/мл соответственно, при этом вирусы обрабатывают стимул тором до внесени в среду культивировани . (Л С

Description

Изобретение относитс к вирусологии и касаетс способа выращивани ор томике овирус о в. Известен способ вьфащивани виру сов в присутствии стимул тора репро дукции вируса, в частности полисахаридов , продуцируёмых Escherichia соП , вьфащениой в услови х лимитировани по лизинуС 1. Известен таклгё способ выращивани рртомиксовирусов в среде куль™ тивировани в присутствии стимул тора репродукции вирусов - липидньпс экстрактов печени и почек крыс 23. Однако известные способы не обеспечивают высокого выхода вирусов. Целью изобретени вл етс повышение выхода вирусов. Указанна цель достигаетс тем, что согласно способу выращивани ортомиксовирусов в среде культивиро вани в присутствии стимул тора реп родукции вирусов, в качестве стимул тора репродукции вирусов используют 1,4-бис-диазоацетилбутан или нитрозометилмочевину в концентрации 1-25 или 1-20 мкг/мл соответственн ;1ри этом вирусы обрабатьшают стимул тором до внесени в среду культивировани . Способ осуществл ют следующим об разом. Пример. Вирусы гриппа, штамм WSN и штамм Вейбридж(ВПЧ ) размножают в хорионаллантоисной полости 10-J1 дневных куриных эмбрионов. Вирус перед заражением обрабатывают 1,4-бис-диазоац тилбутан (ДАВ) в конечной концентрации 25 20, 16, 14, 12, 10 и 1 мкг/мл. Навески ДАБ раств ор ют в фосфатном буфере с рН 6,0 соедин ют с суспензией вируса и инкубируют при комнатной температуре, периодически встр хива . Контакт вируса с ДАБ длитс 1 и 2 ч. Затем обработанный и необработанный вирус титруют до Id и по 0,2 мл WSN и 0,1 мл ВПЧ каждого разведени ввод т в аллантоисную полость 10-11 дневного куриного эмбриона. Через 48 ч WSN и 24 ч ВПЧ инкубации при 37°С эмбрионы вскрывают и по характеру , агглютинации эритроцитов на дне пробирки суд т о наличии вируса. Гемагглютинирующую активность учитывают по реакции гемагглютинации на плексигласовых пластинках с куриными эритроцитами. Инфекционные титры вируса рассчитывают по методу Рида и Менча и вьфажают в . О стимул ции репродукции суд т по соотношению титров инфекционности обработанного и необработанного вируса. Результаты вли ни ДАБ на размножение ортомиксовируссзв в куриных эмбрионах приведены в табл.I. Таблица 1

Продолжение табл. I

Продолжение табл.

512 512 512

Наибольший стимул циойный эффект обнаружен при обработке 10 мкг/мл 1IMM в течение 2 ч, когда выход вируса превьшаетс в 32 ВПЧ и 25 WSN раз.

Приме р 3. Вирусы штаммов и Вейбридж размножают в культуре клеток куриных фибробластов. Обработку вируса провод т ДАВ в кон- ; центрации 25, 20 и 26 мкг/мп в течение 2 ч при комнатной температуре , периодически встр хива .

Двухсуточные культуры куриных фибробластов в матрасах объемом

ВПЧ

25 20 16

2 2 2

1,6

7.6

7,4 3,2 7,9 7,4

4,0 8,0 7,4

эО мл заражают по 0,5 мл соответст- , вующих разведений обработанного и необработанного вируса, вьщерживают при комнатной температуре 1 ч. Затем инокул нт удал ют, а клеточный пласт промывают раствором Хэнкса и покрывают средой 199 с 1,8% агаром Дифко инкубируют при 37С в течение 3 5 сут и подсчитьшают количество бл шек . Титр вируса выражаеч-с в единицах бл шкообразовани (ВОЕ/мл ),

Результаты вли ни ДАВ на репро- дукцию ортомиксовирусов в культуре куриных фибробластов приведены в табл.3.

ТаблицаЗ

6

10

12,2 -10

234,6

10® 1,3 10°

92,9 10 2,0 Ш

142,8

; Обработка вируса низкими концентраци ми ДАВ повьшает выход вируса и в услови х заражени культуры клеток . Наибольвшй эффект ДАБ оказьшает в концентрации 25 мкг/мл при экспозиции 2ч. Бл шкообразующа способность такого вируса превышает контроль в 234 ВПЧ и 304 WSN раза.

П р и м е р 4. Вирус получают аналогичным образом, обрабатывают

1081208

8,

Продолжение табл« Д

НММ в концентрации 16, 20 и 25 мкг/мл 2 ч при комнатной температ е периодически встр хива . Дальнейший I ход экспериментов с обработанным и I необработанным вирусом сходен с примером 3.

Результаты вли ни НММ иа репродукцию ортомиксовирусов в культуре куриных фибробластов приведены в

|табл.4.

Таблнца4

Claims

' СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ОРТОМИК: СОВИРУСОВ в среде культивирования в, ; присутствии стимулятора репродукции‘ вирусов, отличающийся (Тем, что, с целью повышения выхода ί вирусов, в качестве стимулятора репродукции вирусов используют 1,4-бис-диазоацбтилбутан или нитрозометилмочевину в концентрации 1— 25 или 1-20 мкг/мл соответственно, при этом вирусы обрабатывают стимулятором до внесения в среду культивирования .

Q

Изобретение относится к вирусологии и касается способа выращивания ортомиксовирусов.

Известен способ выращивания вирусов в присутствии стимулятора репро- 5 дукции вируса, в частности полисахаридов, продуцируемых Escherichia coll, выращенной в условиях лимитирования по лизину Ό1 J. *

Известен также способ выращивания ортомиксовирусов в среде культивирования в присутствии стимулятора репродукции вирусов - липидных экстрактов печени и почек крыс С
2 J. 15

Однако известные способы не обеспечивают высокого выхода вирусов.

Целью изобретения является повышение выхода вирусов. ²⁰