kvl
ел
ч1
00
1 Изобретение относитс к области сельскохоз йственной микробиологии и защиты растег ий, в частности к способам определени пестицидов. Фунгицид каптан (М(трихлормет1-1лтио )-циклогексен-г1дикарбоксимид вл етс одним из препаратов, часто используемых дл борьбы с фитопатогelп ьiми микроорганизмами путем обра ;ботки им сем н и опрысклвагш вегетирующих р астeiiHji. Определение остаточпг гх количеств каптааа в различных объектах окружа щей среды и в част х растений имеет большое значение дн вы снени р да вопросов его применени . Существуют различные способы определени каитана, заключающшс в подхотовке образцов; предваритель ной экстракции каптана органическими растворител 1--а1 и последующем опр делен п-1 каптана метода.1И колориметрии Tj. Способ В1счючает, как уже было ук зано, предварительную экстракцию калгана оргапичс-ским растворителем, что обусловливает вЕ) стоимость апа.. Кроме того, дл работы требуетс дорогосто ща аппаратура. 1звестен также способ определспии биологически активных пещестн с помощью тест-организмои 2Т. Дл этого устанавливают зависимость угнетени развит 1 одноклеточных организмов от концентрации токсическо го вещества. Недостатком этого спос ба вл етс невозможность использовани его дл определени фунгицида каптана. Целью изобретени вл етс упрощение определени содержании (|jyHгицида . Это достигаетс тем, что исследуемый материал помещают на поверхность твердо) питатслтию среды, за се 1пюй двухсуточной культурой Saccharomyces cerevisiae, инкубируют в термостате при 25-2/ С в течение 20-28 ч, а aiiajnia провод у по зонам угпетени роста дроижей вокруг обрг1зцов. Подготовка культуры Saccharomyce cerevisiae. Saccharomyces cerevisia выращивают в пробирках па скоиюнном сусло-агаре в термостате при 2527 С в течение 2 суток и далее хран т при комнатной температуре. Через каждые 20-30 дней производ т 4 пересевы культуры. В пред/гагаемом способе используют 2-х суточную культуру . , 71одготовка питательной среды. В работе используют минеральную среду Риде11а след ощего состава, %: сахароза 2,0; (МН,,) SO,, 0,3; MgSO,, О, 07 I NaC,l, 0,05; CaCNOj) 0, KH,PO,, 0,1 KjHPO 0,01; дрожжепо 1 экстракт 0,01; агар-агар 0,8. Среду стерилизуют в автоклаве 20 мин . .при. дазлен1-н-1 1 ати. Подготовка материала к анализу. Семена растений, протравленные фунгьп.идом, отбирают из средней пробы и без стерилизации перенос т п чаипси Петри на поверхность среды Ридера, засе нно: культу1 о) Saccliarorayces cerevisiae. Из листьев вы-резают диски дтгаметром 10-20 M-, которые немедленно нак:ьад ;шают на поверхность среды Ридера, слегка прижима их к агару. Построение стандартно кривой, BeiMia 1П11енип,ы протравливают каитгиюм 1з форме порошка с таким расчетом, чтобы на а;чт;ое зерно прихо/п- лось 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 8,,0;| 16,0 мкг каптана, и раскладывают в чашки Петри па пове 5хность агаризова1И1ой среды Ридера, засе пной культурой Saccharomyces cerevisiae. Чашкп выде лсивают при 27 С в течение 24 ч. Затем стро.чт г)афик,. где на оси ординат от1;ладыва ст количество каптана, а на оси абсцпсс величину стер;1льной т.; Аналогично стро т стандартную крпвую дл определени каптана в листь х и других вегетатгпзиых част х pacTeHijii. В этоь; случае теже возl acTaFjuqie концентрации каптаиа naiioс т на диски фIiJПJTpo 5aльнoйбумаги диаметром 10 мм. Ход анализа. Двухсут()Ч1;ую культуру Saccharomyces cerevisiae в пробирках на скоше1П1ом сусло-агаре c :ывaют стерштьной водой и развод т в 100 мл 1 мп суспензип дролокей, внос т в 250 ьш расплавленно и охлажденной до 40 50 С агаризованной среды Ридера, Среду тщательно перемешивают и разливают по 10 мл ц чашки Петри. После застывани на поверхность среды раскладывают исследуеьшй материал, Чашки и}1кубируют при 25-27 С в течение 20-28 ч. После этого измер ют диаметр стерильных ,зон вокруг иссле дуемого материала. Затем определ ют количество каптана с помощью стандартной кривой. П р -и м е р 1. Семена пшеницы непосрздственно после обработки кап танЬм, а также спуст различные сро ки после обработки раскладывают на поверхность агаризованной среды Ридера , засе нной Saccharomycas cerev siae. Через 24 ч инкубации в кажуЧой чашке определ ют величину стерильной зоны вокруг сем н и определ ют количество каптана по стандартной кривой. Результаты показывают, что, как об этом свидетельствуют и другие методы, каптан -сохран етс на семенах более 17 мес цев, однако количество его уменьшаетс приблизи тельно в 6 раз, что также хорошо согласуетс с да1П1ыми других исследователей , полуг1енными с использова нием известных способов. Пример 2. Диски, вырезанны из листьев картофел , обработанного каптаном, непосредственно после обработки , а также спуст различные сроки после обработки, раскладывают так же, как и в примере 1. Через 24 ч инкубации при 27 С определ ют величину стерильной зоны вокруг дисков и определ ют количество каптана с помощью стандартнойкривой. Результаты показывают, что кантан удерживаетс на листь х практически в течение всего вегетационного периода , причем на листь х нижних русов его стабильность вдвое выше, чем на верхних, что согласуетс с данны ми других исследователей, полученными с использованием известных способов . В молодых, вновь отрастающих листь х каптан не обнаруживаетс Чувствительность метода составл ет 1-2 мкг в пробе. Стандартна ошибка измерений не вьше 10%. Пример 3. Определение каптана на листь х картофел . В вегетационных опытах растени картофел опрыскивают водной суспензией препарата каптана из расчета 1,5 кг/га. Спуст определенное врем после обработки из листовой пластинки картофел верхнего н нижнего русов пробочником вырезают диски диаметром 10 мм. Диски раскладывают на поверхность агаризованной питательной среды, засе нной S.cerevisiae . Через 20-24 ч измер ют ве/н1чину стерильной зоны вокруг дисков . Концентрацию каптана рассчитывают по стандартной кривой. Результаты измерений и расчеты содержани каптана на листь х представлены в таблице. Из данных таблицы В1ЗДно, что способ позвол ет определ ть ничтожно малые количества каптата в образцах