SU1053803A1

SU1053803A1 - Method of preserving isolated liver cells

Info

Publication number: SU1053803A1
Application number: SU813347806A
Authority: SU
Inventors: Георгий Ефимович Островерхов; Владимир Григорьевич Бруслик
Original assignee: 2-Й Московский Ордена Ленина Государственный Медицинский Институт Им.Н.И.Пирогова
Priority date: 1981-11-05
Filing date: 1981-11-05
Publication date: 1983-11-15

Abstract

СИОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ИЗОЛИРОВАЙНЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ путем Помещени их в консервирующие растворы , охлажденные до , о т л и ч :Д ю щ и и с тем, что, .0 целью уветтче н срока храиениА и увеличени жизнеспособных клеток , взвесь изолированных клеток сначала помещают в отдельные емкости объемом 1,0-1,5 см из полупроницаемой мембран ы, смену среды провод т трижды через каждые 10COOLING CONSERVATION OF ISOLATING CELLS OF THE LIVER by Placing them in preservative solutions cooled to about 1 oz and h: DY s and so that, .0 the goal is to keep alive and increase viable cells, the suspension of isolated cells is first placed in separate containers with a volume of 1.0-1.5 cm from a semipermeable membrane, the medium is changed three times every 10

Description

9 19 1

СWITH

о ел :о эоo ate: oo

Изобретение, относитс к медицине и может быть использовано . при консервировании изолированных клеток печени.This invention relates to medicine and may be used. when canning isolated liver cells.

. Известе способ консервировани изолировануых клеток печени путем помещени в консервирующие растворы Тироде, Эрка, Хенса, Игла среды. 199 с последующим -выставлением их в холодильник при + 2-4 С и сменой средычерез определенные интервалы l . The method of preserving isolated liver cells is known by placing it in preservative solutions such as Tyrode, Erk, Hens, and Needle Medium. 199 followed by their exposure to the refrigerator at + 2-4 С and changing between certain intervals l

Однако известный способ характеризуетс тем, что клеточна взве при хранении в среде консервировани в нижних отделах флакона образует осадок - многослой клеточной взвеси толщиной lvO-1,.5 см и поэтому поверхностный слой клеток имеет хороший- контакт со средой, а нижние слои клеток - плохой что и определ ет значительное разpyuJёниe клеток и особенно в нижних сло х осадка, что подтверждаетс проведенными морфологическими исследовани ми. В результате этого способ позвол ет сохранить к 30 дню только 47% клеток, которые при окрашивании 0,2%-ным раствором трипановой срни остаютс светлыми, то есть жизнеспособнымиHowever, the known method is characterized by the fact that the cell suspension during storage in the preservation medium in the lower parts of the vial forms a precipitate — a multilayer cell suspension with a thickness of lvO-1 .5 cm and therefore the surface layer of cells has good contact with the medium, and the lower layers of cells have a bad contact. which determines a significant disruption of cells and especially in the lower layers of the sediment, which is confirmed by morphological studies. As a result of this method, by the 30th day, only 47% of the cells can be preserved, which, when stained with a 0.2% trypan solution, remain light, i.e. viable

Цель изобретени - увеличение срока сохранени и увеличение количества жизнеспособных клеток печенThe purpose of the invention is to increase the shelf life and increase the number of viable liver cells.

Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу консервировани изолированных клеток печени путем помещени их в кОнсервир тщие .растворы, охлажденные до 2-4°С взвесь изолированных клеток помещают в отдельные емкости объемом 1,0-1,5 см из полупроницаемой меМ браны, смену среды провод т трижды через каждые 10-12 дней.This goal is achieved by the fact that according to the method of preserving isolated liver cells by placing them in conserving solutions, cooled to 2-4 ° C, the suspension of isolated cells is placed in separate containers of 1.0-1.5 cm from a semipermeable membrane, changing medium is conducted three times every 10-12 days.

Способ осу|;5ествл ют следующим образом.;The way the wasp |; is listed as follows;

В стерильных услови х провод т заготовку изолированных клеток печени путем использовани ферментномеханического способа. Полученную клеточную взвесь развод т в среде 199 до концентрации 20 млн/мл иUnder sterile conditions, isolated liver cells are harvested by using an enzyme-mechanical method. The resulting cell suspension was diluted in medium 199 to a concentration of 20 ppm / ml and

заполн ют ими стерильный шприц с точной градуировкой и стерильной системой гибких силиконовых трубок. . Одновременно провод т подготовкуfill them with a sterile syringe with precise graduations and a sterile system of flexible silicone tubes. . At the same time conduct training

пoлyпpoн цaeмoй целлофановой плен5 ки (.30, 100) , которую помещают в физиологический раствор, затем перенос т в раствор дирцида 1 : .2000 дл стерилизации, а зат.ем промывают целлофан дистиллированной 0 водой.The cellophane film (.30, 100) polyamide film, which is placed in a physiological solution, is then transferred to a 1: .2000 solution for sterilization, and then washed with distilled water and cellophane.

В услови х операционной участок пленки надевают на конец силиконово .го шланга и, отсупив на 1,0 см от его конца, накладывают лигатуру,Under the operating conditions of the film, the silicone end of the hose is put on the end and, having lost 1.0 cm from its end, a ligature is applied,

5 после чего в эту полость ввод т 1. мл клеточной взвеси и, зат гива лигатуру , удал ют, силиконовый шланг. Таким образом, образуетс замкнута полость, в ко горой находитс клеточQ на взвесь. В стерильный флакон . (500 мл) помещают 350-400 гранул, которые дополнител ьно заливают средой 199, и флакон вновь герметично закрывают в холодильник с темпера5 турой -ь 4°С. Гранулы во флаконе наход тс как бы во взвешенном состо нии . За флаконом с гранулами провод т динамическое наблюдение (10-12, 20-24, 30-36 дн), след т за окраской среды изме,н ют рН среды, через определенные временные цнтервалы провод т забор гранул, вскрытие их, приготовление мазка клеток с последующим подсчетом клеток в поле зр,ени . после обработкиих витальными тел ми. Через каждые 1о-12 дн провод т смену среды путем удалени старой и заливки флакона новой средой 199.Гранулы сохран ют в течение 30-J6 дн.5, after which 1. ml of cell suspension is injected into this cavity, and the ligature is tightened, the silicone hose is removed. Thus, a closed cavity is formed, in the mountain there is a cell on the suspension. In a sterile vial. (500 ml) are placed 350-400 granules, which are additionally filled with medium 199, and the vial is again sealed in a refrigerator with a temperature of 4 ° C. The granules in the vial seem to be in a suspended state. A bottle of granules is dynamically monitored (10–12, 20–24, 30–36 days), the color of the medium is monitored, the pH of the medium is changed, the granules are sampled, opened, and the cells are smeared out at certain time intervals. followed by counting cells in the field of sp, eni. after treating them with vital bodies. Every 1 to 12 days, the medium is changed by removing the old one and filling the vial with a new medium 199. The granules are kept for 30-J6 days.

0 Использование предлагаемого способа консервировани изолированных клеток печени позвол ет увеличить срок сохранени и количество жизнеспособных клеток 9 47 до 76%, прб5 водить просто и быстро смену среды, сохран ть гранулы, а соответственно и изолированные клетки во взешенном состо нии и, обеспечива хороший кон т а.ктклеток со средой, упрощает0 Using the proposed method of preserving isolated liver cells allows you to increase the storage time and the number of viable cells 9 47 up to 76%, lead simply and quickly change the medium, keep the granules and, accordingly, the isolated cells in the suspended state and providing a good finish. a.cc cells with medium simplifies

Q их использованиеQ their use

Claims

METHOD FOR CONSERVATION OF ISOLATED LIVER CELLS by • placing them in preserving solutions cooled to 2-4 ° С, with the exception that, in order to increase the shelf life and increase viable cells, suspension isolated cells are first placed in separate capacious ty with a volume of 1.0-1.5 cm * from a semi-permeable membrane, the medium is changed three times every 1Οι 12 days.