SU1044630A1

SU1044630A1 - Method for detecting mycoplasms in cell cultures

Info

Publication number: SU1044630A1
Application number: SU813281974A
Authority: SU
Inventors: Галина Романовна Михайлова; Александр Сергеевич Новохатский; Марианна Александровна Родова
Original assignee: Институт вирусологии им.Д.И.Ивановского
Priority date: 1981-04-28
Filing date: 1981-04-28
Publication date: 1983-09-30

Abstract

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКОПЛАЗМ В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК путем окраски фпюорохромами с последующим исследованием препаратов в люминесцентном микроскопе, отличающийс тем, что, с целью повышени точности, клеточные культуры обрабатывают оливомицином в разведении 1,0 - 4,0 мг/л в течение 1-8 ч.METHOD FOR DETECTING MYCOPLASM IN CULTURES OF CELLS by staining with phyroochromes followed by examining the preparations in a fluorescent microscope, characterized in that cell cultures are treated with olivomycin at a dilution of 1.0-4.0 mg / l for 1-8 hours.

Description

4 44 4

о: со Изобретение относитс к медицине, а именно вирусологии. Известен способ вы влени микоппаэ в культурах клеток путем окраски фпюоро фомами с последующим исследо ванием препаратов в люминесцентном микроскопе Cl3 Известный способ вл етс недостаточно точным. Цель изобретени г повышение точноои способа. Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу вы влени миколпаэм в культурах клеток путем окраски флюорохромами с последукнайм исследованием препаратов в люминесцентном 4 шкр6скопе клеточные культур обрабатывают оливомншном в раэведе .НИИ 1,О - 4,0 мГ/л в течение 1-8 ч. Пример 1. Культуры перевиваемых клеток выращивают на покровны стеклах в пёни1шллиновых флаконах и фиксируют после образовани моносло через 2-3 сут в охлажденном до 4° С 70° этиловом спирте в течение 1 ч. Готов т раствор антибиотика опивомицина в концентрации 1,0-40 Омкг/л (opt 20 мкг/мл) на дистиллированной воде с добавлением 20 мМ ионов (в виде солей Alg-50 или ), рН раствора 2,0 - 8,0. Рабочий раствор может длительное врем хранитьс в холодильнике npHi- 4°С. Этот раствор нанос т на препарат и помешают его в темную камеру. Окраска произвоЯитс при is 4 - 37° С в интервале 1-8 ч. Окрашенною стекла с культурой монтаруют Иа предметные стекла в глицерйне с дистиллированной водой (1:1), обвод т парафином и исследуют в люминесцентном микроскопе с увеличением об. Х9О (иммерси ). Дл анализа используют фильтрЬ1Фе 1-4; ОС 15-2 и.БС 8-2. При этом ДНК микоплазм и дер .светитс рким желточэеленым светом, цитоплазма не светитс . Результатьг исследовани перевиваемых клеточных культур приведены в таблице.o: This invention relates to medicine, namely virology. A known method for the detection of mycopae in cell cultures by staining with phyuoromas, followed by the study of preparations in a fluorescent microscope Cl3. The known method is not accurate enough. The purpose of the invention is to increase the accuracy of the method. This goal is achieved by the fact that according to the method of detecting mycolpam in cell cultures by staining with fluorochromes with a subsequent study of drugs in the luminescent 4 skr6skop cell cultures are treated with olivnomshnom ravedve .IIII, O - 4,0 mg / l for 1-8 hours Example 1. Cultures of transplantable cells were grown on coverslips in foam glass vials and fixed after forming a monolayer after 2-3 days in 70% ethanol cooled to 4 ° C for 1 hour. Preparing a solution of the antibiotic opivomycin at a concentration of 1.0-40 Ohm kg / l (opt 20 µg / ml) in distilled water with the addition of 20 mM ions (in the form of Alg-50 salts or), pH of the solution is 2.0 - 8.0. The working solution can be stored in the npHi-4 ° C refrigerator for a long time. This solution is applied to the preparation and is placed in a dark chamber. The color is produced at is 4–37 ° C in the range of 1–8 h. Colored glass with culture is mounted. The slides are fixed in glycerol with distilled water (1: 1), coated with paraffin and examined in a fluorescent microscope with an increase of about. H9O (immersi). For analysis, use filter 1-4; OS 15-2 and BS 8-2. In this case, the DNA of mycoplasmas and the luminous yellow light of green light, the cytoplasm does not shine. The results of the study of transplantable cell cultures are shown in the table.

Пример 2. Клеточные культуры выращиваемы в виде суспензии, исследуют на наличие микоппазм с помсхцью оливомицина. Дл этого на предметных стеклах Делают мазки культур клеток, которые после высушивани на воздухе фиксируют в охлажденном 70° спирте и окрашивают Ьливомнцином, как описано Bbmie, Псхзле опопаскивани в дистиллированной вопе и высушивани препараты просматривают под микроскопом.Example 2. Cell cultures grown as a suspension, examined for the presence of mycopathiasm with olivomycin. To do this, slides of cell cultures are made on slides, which, after drying in air, are fixed in chilled 70 ° alcohol and stained with Levomnocin as described by Bbmie, Sampled in distilled matter and dried under microscope.

В культурах, контаминированных микоппазмами, вы вл ютс рко свет щиес фокусы в Цитоплазме клеток, содержащих ДНК микоплазм. По величине и расположении) они идентичны микоплаз - мам, вы вл емым другими методами. В культурах, свободных от микоплазм, подобные фокусы не вы вл ютс .In cultures contaminated with mycoplasma, brightly focused foci in the cytoplasm of cells containing mycoplasma DNA are detected. In terms of size and location, they are identical to mycoplasmas detected by other methods. In mycoplasma-free cultures, such foci are not detected.

31044630 ,431044630, 4

Испс ьзование изобретени позволит. венных: клеточнык культурах, примеупростить технологию и повысить надеж-и емых в вирусологических исследоность вы влени микоппаэм в производст- вани х.The use of the invention will allow. use of cell cultures, simplify the technology, and improve myppaam detection in production.

Claims

METHOD FOR IDENTIFICATION OF MYCOPLASMS IN CELL CULTURES by staining with fluorochromes followed by examination of preparations in a luminescent microscope, characterized in that, in order to increase accuracy, cell cultures are treated with olivomycin in a dilution of 1.0 - 4.0 mg / l for 1-8 hours.

>