SU1339434A1

SU1339434A1 - Method of lifetime colouring of mitochondria

Info

Publication number: SU1339434A1
Application number: SU853891395A
Authority: SU
Inventors: Анатолий Григорьевич Белякович
Original assignee: Институт биологической физики АН СССР
Priority date: 1985-04-23
Filing date: 1985-04-23
Publication date: 1987-09-23

Abstract

Изобретение относитс к цитологии . Цель изобретени - более полное вы вление митохондрий. Стекло с культурой фибробластов перенос т в чашку Петри со средой, содержащей п-нитро- тетрозолий фиолетовый, и инкубируют. Затем стекло помещают в чашку с ростовой средой и изучают в темном поле микроскопа. После инкубации образец вновь подвергают микроскопированию. После окрашивани клетки продолжают размножатьс и при необходимости их можно повторно окрасить. 00 со со 4 СО 42This invention relates to cytology. The purpose of the invention is more complete detection of mitochondria. Glass with fibroblast culture is transferred to a Petri dish with medium containing p-nitro-tetrozolium violet and incubated. Then the glass is placed in a cup with growth medium and examined in the dark field of the microscope. After incubation, the sample is again subjected to microscopy. After staining, cells continue to multiply and, if necessary, can be repainted. 00 with co 4 CO 42

Description

1313

Изобретение относитс к медицине, а именно к цитологии, в частности дл прижизненного вы влени митохондрий ,, и может быть иснользовано дл изучени количественных и структурных изменений митохондрий в отдельной клетке как в норме, так и после воздействи на нее, а также в эксне- риментальной медицине и ветеринарии ,дл характеристики функционального состо ни изучаемых объектов и в клеточной биологии дл оценки энергетического состо ни клеток.The invention relates to medicine, namely to cytology, in particular for the lifetime detection of mitochondria, and can be used to study the quantitative and structural changes in mitochondria in a single cell, both in normal conditions and after exposure to it, as well as in the extraterrestrial medicine and veterinary medicine, to characterize the functional state of the objects under study and in cell biology to assess the energy state of the cells.

Целью изобретени вл етс более полное вы вление митохондрий нутем повьш ени его специфичности и уменьшени токсичности.The aim of the invention is to more fully detect mitochondria by increasing its specificity and reducing toxicity.

Пример, Прижизненное вы вление митохондрий в клетках культуры фибробластов китайского хом чка. Дл исследовани используют суточную культуру фибробластов китайского хом чка линии В-1 1-dL-ii-FAF-ZS (Клон 431), выращенную непосредственно на предметном стекле, помещенном в чашк Петри, в присутствии ростовой среды, состо щей из среды Игла и 199 (1:1) с добавлением 10%-ной сьшоротки крупного рогатого скота и антибиотиков, 100 ед/мл пенициллина и 50 ед/мл стрептомицина при 37 С. Дл окрашивани стекло с клетками перенос т в другую чаижу Петри ,со средой Игла, со- держгндую 2 мМ п-нитротетрозолий фиоExample: Lifetime mitochondrial expression in Chinese hamster fibroblast culture cells. For the study, a daily culture of Chinese hamster fibroblasts of the B-1 1-dL-ii-FAF-ZS line (Clone 431) grown directly on a slide glass placed in a Petri dish, in the presence of a growth medium consisting of Eagle's medium and 199, is used. (1: 1) with the addition of 10% cattle and antibiotics, 100 units / ml of penicillin and 50 units / ml of streptomycin at 37 C. For staining, the glass with cells is transferred to another Petri gel, with Eagle's medium, with - holding 2 mM p-nitroetrozolium fio

летовьш (п-НТФ), и инкубируют при 37°С в течение 15 мин,, Hocj ie этого стекло вновь помещают в чашку Петри с ростовой средой без п-НТФ, Дл последующего анализа стекло с клетками накрывают покровными стеклами и изучают в темном поле микроскопа при увеличении . При визуальном наблюдении в клетках четко видны свободlet (p-NTF) and incubate at 37 ° C for 15 minutes, Hocj ie this glass is again placed in a Petri dish with growth medium without p-NTF. For subsequent analysis, the glass with cells is covered with cover glasses and studied in a dark field microscope with magnification. When visually observed in the cells clearly visible freedoms

Редактор И. ШуллаEditor I. Shulla

Составитель М. Позн кCompiled by M. Pozn to

Техред м.Ходанич Корректор М, ДемчикTehred M. Khodanich Proofreader M, Demchik

Заказ 4213/33 Тиргш 776ПодписноеOrder 4213/33 Tirgsh 776Subscription

ВНИШ1И Государственного комитета СССРVNISH1I USSR State Committee

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска наб., д. 4/5for inventions and discoveries 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk nab., 4/5

Производственно-полиграфическое предпри тие, г. Ужгород, ул. Проектна , 4Production and printing company, Uzhgorod, st. Project, 4

22

но перемещающиес оранжевые гранулы - большие митохондрии диаметром OKOJJO 1 мкм. При этом сделаны фотографии.but the moving orange granules are large mitochondria with an OKOJJO diameter of 1 µm. At the same time photos were taken.

Затем исследуемый образец культуры фибробластов дополнительно инкубируют в среде Игла, содержащей 2 мМ п-НТФ при 37 С в течение 60 мин и вновь подвергают микроскопированию вThen, the studied sample of the fibroblast culture is additionally incubated in Eagle's medium containing 2 mM p-NTF at 37 ° C for 60 minutes and again subjected to microscopy in

темном поле. При визуальном наблюдении видно, что нар ду с большими митохондри ми, про вившимис после первого окрашивани , в клетках окрасились в желтый цвет малые митохондрии диаметром около 0,5 мкм. При этом также сделаны фотографии. После 15 мин инкубации клеток с п-НТФ окрашенные митохондрии наблюдают в течеdark field. Upon visual observation, it can be seen that, along with large mitochondria that developed after the first staining, small mitochondria with a diameter of about 0.5 µm stained in cells in yellow. At the same time photos are also taken. After 15 min of incubation of cells with p-NTF, stained mitochondria are observed during

пие 8 ч, а после 75 мин инкубации - в течение 30 ч, что свидетельствует о малой скорости окислени формаза- на - крас щей формы п-НТФ в живой клетке.8 hours, and after 75 minutes of incubation - for 30 hours, which indicates a low rate of formazan oxidation — a colored form of p-NTF in a living cell.

Поскольку после окрашивани пред- лагаемым способом клетки полностью сохран ют свою жизнеспособность и продолжают размножатьс , их можно в случае необходимости окрашивать вторично по сравнению с окрашиванием митохондрий, напри1чер, кусом зеленым , при котором нервные клетки можно изучать не более 2 ч.Since after staining by the proposed method, cells retain their viability and continue to multiply, they can, if necessary, be stained for the second time as compared to mitochondrial staining, for example, with green cousins, in which nerve cells can be studied for no more than 2 hours.

Claims

Invention Formula

The method of intravital mitochondrial staining by incubating cells with a dye and detecting mitochondria under a microscope, characterized in that, in order to more fully detect mitochondria, staining is carried out for 5-60 minutes, while p-nitroetrozolium is used as the dye Violet.