SU103907A1

SU103907A1 - Способ получени поливалентного анатоксина дл иммунизации против анаэробных инфекций

Info

Publication number: SU103907A1
Application number: SU452933A
Authority: SU
Inventors: В.А. Благовещенский; И.В. Буланова; И.Н. Виноградова; Е.В. Власова; З.М. Волкова; Г.В. Выгодчиков; Е.А. Гильгут; С.А. Зелевинская; С.А. Зелевинска; Н.С. Кашинцева; А.П. Кузьмина; Л.Я. Мармалевская; Л.Я. Мармалевска
Original assignee: В.А. Благовещенский; И.В. Буланова; И.Н. Виноградова; Е.В. Власова; З.М. Волкова; Г.В. Выгодчиков; Е.А. Гильгут; С.А. Зелевинская; С.А. Зелевинска; Н.С. Кашинцева; А.П. Кузьмина; Л.Я. Мармалевская; Л.Я. Мармалевска
Priority date: 1955-06-02
Filing date: 1955-06-02
Publication date: 1955-11-30

Description

Известны способы изготовлени поливалентных анатоксинов дл иммунизации людей против возбудителей анаэробных раневых инфекций .

Особенность предлагаемого способа заключаетс в том, что культуры соответствующих патогенных анаэробов раздельно выращивают на казеиново-растительной питательной среде, полученной в результате гидролиза с помощью растительной (грибной) протеазы, после чего токсин фильтруют и детоксищтруют, как обычно, а затем освобождают от балластного белка и концентрируют повторным высаживанием в кислой среде. Образовавшийс остаток , содержащий анатоксин, отдел ют центрифугированием и раствор ют в фосфатном бзфере, адсорбируют на гидроокиси алюмини Н далее анатоксин охлаждают, элюируют , стерилизуют, провер ют на безвредность и иммуногенность, как обычно.

- Полученные таким путем анатоксины примен ютс дл приготовлени поливалентного (три, тетра и т. д.) анатоксина.

Предлагаемый способ позвол ет получать комплексный нрепарат-трианатоксин дл одновременной иммунитации против столбн ка и двух возбудителей газовой гангрены-перфрингенс и эдематиенс.

Дл осуществлени способа производитс раздельное выращивание патогенных анаэробов на казеиноBoii растительной среде, получаемой в результате гидролиза с помощью растительной (грибной) протеазы. Кажда культура выращиваетс при температуре 35° в течение нескольких часов или дней, после чего фильтруетс через стерилизующие пластинки фильтра Зейтца.

Токсин провер етс на стерильность высевом в аэробных и анаэробных услови х, затем к нему добавл етс 0,3 - 0,4% формалина (из расчета 40%-ного формальдегида ), после чего он обезвреживаетс в термостате при температуре .38° в течение нескольких дней. Выпутый из термостата ппатоксин провер етс на -стерильность, безвредщ). а тигенность. К нативному анатоксину добавл етс суха поваренна соль; после полного растворени которой анатоксин подкисл етс 1 нормальной сол ной кислотой до определенной рН.

Выпавший осадок определ етс центрифугированием, затем раствор етс в физиологическом растворе , после чего концентрат подщелачиваетс 5°o-HbiiM раствором щелочи до рН 6,8 - 7,2,

Далее концентрат разводитс фосфатным буфером до получени смеси с рН равной 5,9 - 6,0. Смесь адсорбируетс на гидроокисн алюмини л центрифугируетс . Полученный осадок промываетс фосфатным буфером, центрифугируетс , окрашенный промывной буфер отбрасываетс , а осадок обрабатываетс дл элюцин анатоксина.

Дл элюцни анатоксина осадок взмучиваетс в фосфатном буфере и в течение 2 часов выдерживаетс прн комнатной температуре с периодическим ггеремешиванием. Затем смесь центрифугируетс , 1-й элюат сливаетс н вс процедура элюции повтор етс еще трижды тем же буфером. Затем все элюаты сливаютс вместе, полученна смесь подкисл етс сол ной кислотой до рН 6,2 н поступает дл стерилизующего фильтровани .

Трнанатоксин получаетс смепи-шани моновалентных анатоксинов и должен содержать в 1 мл не менее 25 ед. ев, перфрингенс, 25 ед. св. эдиматиенс и 200 ед. св. столбн ка. Затем трианатоксин сорбируетс 60%-ной гидроокисью алюмини и д;г отстанвани помещаетс на 18 часов на ледник, после чего надосадочна жидкость декантируетс через сифон до первоначального объема и провер етс на стерильность путем высева на питательные среды.

Стерильный препарат разливаетс в амнуты и подвергаетс контролю на стери,л ьность, безвредность и иммуногенность.

Стерильность моновалентных анатоксинов и трианатоксина провер етс путем высева 3 ампул от каждой бутыли из питательной среды в аэробных и в анаэробных услови х: на 2 пробирки Тароцци и 2 пробирки полужидкого агара. Посевы выдерживаютс при ЗУ в течение 15 дней, кроме того, производитс посев из тех же 3 ампул на агар Сабуро и простой бульон. Последний выдерживаетс при температуре 20 - 22° в течение 8 дней.

Безвредность трианатоксина провер етс путем введени морским свинкам весом 300 - 350 г под кожу в три места 3 мл препарата по1 .0 Л1Л в каждое место и наблюдени за животными в течение 20 дней, У привитых животных на месте введени образуютс нлотные узлы - депо, сохран ющиес на прот жении 1 - 2 мес цев. У привитых животных не должно быть общей реакции или влени столбн ка .

H.viM HoreHHOcTb трианатоксина в отногаении столбн ка и эдематиенс провер етс на тех же свинках, на когорых провер етс безвредность препарата. Через 20 дней после введени 3 мл содержащего 0,3 мл столбн чного анатоксина и 0,3 мл анатоксина эде.матиенс (в два места по 1.5 мл в каждое) трем морским свинкам вводитс 100 ДУМ столбн чного токсина и трем свинкам 10 ДУМ токсина эдематиенс. Наблюдение за животными проводитс в течение 7 дней. Годным считаетс трианатоксин, предохран ющий больше 50% животных от заболевани столбн ком и газовой гангреной.

Иммунизирующие свойства трианатоксина в отношении газовой гангрены , вызванной В. perfringens, провер ютс на белых мышах путем введени под кожу 1,0 мл трианатоксина . Дл испытани беретс 10 мыщей. Через 30 дней после введени трианатоксина мыщам вводитс внутривенно или внутрибрюшинно DCL токсина перфрингенс.

Наблюдение за животными проводитс в течение 3 дней. Годными