SK542015A3 - Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob ich využitia - Google Patents

Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob ich využitia Download PDF

Info

Publication number
SK542015A3
SK542015A3 SK54-2015A SK542015A SK542015A3 SK 542015 A3 SK542015 A3 SK 542015A3 SK 542015 A SK542015 A SK 542015A SK 542015 A3 SK542015 A3 SK 542015A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
lactobacillus plantarum
ccm
strain
strains
isolated
Prior art date
Application number
SK54-2015A
Other languages
English (en)
Inventor
Ladislav Strojný
Alojz Bomba
Original Assignee
Univerzita Pavla Jozefa Šafárika V Košiciach
Centrum Vedecko-Technických Informácií Sr
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Pavla Jozefa Šafárika V Košiciach, Centrum Vedecko-Technických Informácií Sr filed Critical Univerzita Pavla Jozefa Šafárika V Košiciach
Priority to SK54-2015A priority Critical patent/SK542015A3/sk
Priority to CZ2018-101A priority patent/CZ2018101A3/cs
Priority to SK50011-2018A priority patent/SK500112018A3/sk
Priority to PCT/IB2016/054600 priority patent/WO2017017662A1/en
Priority to CZ2018-34733U priority patent/CZ33363U1/cs
Publication of SK542015A3 publication Critical patent/SK542015A3/sk

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/169Plantarum
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225Lactobacillus
    • C12R2001/25Lactobacillus plantarum
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

Je opísaný kmeň mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob jeho využitia.

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka izolovaného kmeňa mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07, zbierkové číslo CCM 7766, ktorý je zároveň prostriedkom pre prípravu preparátov a prídavkov do potravín pre účely preventívneho posilnenia črevnej bariéry. Kmeň Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 bol vykultivovaný zo stolice zdravého človeka.
Doterajší stav techniky
Zdravie ľudskej populácie je jedným z hlavných atribútov fungovania ľudskej spoločnosti. Vysoké spoločenské nároky kladené na človeka prinášajú veľa negatívnych dopadov na jeho celkové zdravie. Stres, nutrične nevyvážená potrava a nezdravé návyky majú nepriaznivý dopad na črevnú mikroflóru človeka, čo sa môže neskôr negatívne prejaviť v celkovom zdraví ľudskej populácie. Civilizačné choroby vznikajú v dôsledku dlhodobého pôsobenia uvedených faktorov. Liečba civilizačných chorôb je dlhodobá a finančne vysoko nákladná, preto sa v súčasnej dobe čoraz viac presadzuje prevencia v boji proti civilizačným chorobám. Použitie vyselektovaných probiotických kmeňov môže vo veľkej miere zabezpečiť stabilitu zdravej črevnej mikroflóry s následným pozitívnym efektom na zdravie jedinca.
V súčasnosti sa izolované kmene laktobacilov vo veľkej miere využívajú ako súčasť funkčných potravín, alebo výživových doplnkov. Niektoré probiotické kmene využívané ako súčasť výživových doplnkov majú priaznivý vplyv na mikroflóru tráviaceho traktu človeka, takýmito kmeňmi sú Lactobacillus plantarum 299 a Lactobacillus plantarum 299v DSM 9843, uvedené úzko súvisiace kmene boli izolované z črevnej sliznice zdravého človeka (Molin a kol. 1993 a Johanson akol. 1993).
Európsky patentový spis EP 1 904 074 opisuje použitie laktobacilov na zvýšenie absorpcie iónov železa, zinku a vápnika, týka sa použitia minimálne jedného špecifikovaného kmeňa Lactobacillus plantarum pre zvýšenie absorpcie ionov kovov u cicavcov a farmaceutickej kompozície, ktorá obsahuje aspoň jeden špecifikovaný kmeň Lactobacillus plantarum, pre použitie pri liečení anémie. V patente sa uvádza využitie úž známych patentovaných kmeňov Lactobacillus plantarum DSM 695, L. plantarum 299v, DSM 9843, L. Plantarum Heal 9, DSM 153121 L. plantarum, Heal 19, DSM 15 313, pre zvýšenie absorpcie iónov železa.
i
Patentový spis W02Q15067947 opisuje vynález týkajúci sa kmeňa Lactobacillus plantarum a kompozície pre použitie pri modifikácii absorpcie cholesterolu u jedinca, alebo pri liečbe srdcových ochorení, cukrovky alebo obezity.
RU 2491079 Cl Komplexný probiotický preparát a spôsob jeho užívania. Preparát pozostáva zo zmesi laktobacilov (Lacobacillus plantarum, L. fermentum, L. acidophilus a bifidobaktérií (Bifidobacterium bifldum, B. longum). Tieto kmene boli získané z rastlín.
ΕΡ230-9-870τ· Izolovaný kmeň Lactobacillus plantarum Tenšia DSM 21 380 ako antimikrobiálne a antihypertenzné probiotikum, potravinový produkt a kompozícia obsahujúca uvedený mikroorganizmus pre prípravu antihypertenzívneho lieku a spôsob potlačenia patogénov a neštartérových patogénov v potravinových produktoch. Tento kmeň bol izolovaný zo stolice zdravého dieťaťa v rámci porovnávacej štúdie vykonanej u estónskych a švédskych detí.
Podstata vynálezu
Vynález sa týka kmeňa mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 deponovaného v zbierke mikroorganizmov pod poradovým číslom CCM 7766 v Českej zbierke mikroorganizmov Brno dňa 2.7.2009 podľa podmienok Budapeštianskej zmluvy, ktorý metabolizuje zdraviu prospešné substancie, ktoré ho odlišujú od iných kmeňov mikroorganizmov rodu Lactobacillus izolovaných z človeka, zvierat a rastlín.
Nový izolovaný kmeň, podľa vynálezu, v laboratórnych testoch preukázal vysokú schopnosť antibakteriálnej aktivity voči patogénnemu kmeňu Escherichia coli (CNTC Eck 63/59 uložený v Československej zbierke mikroorganizmov Praha). Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 patrí do skupiny baktérií mliečneho kvasenia produkujúci kyselinu mliečnu a ďalšie organické kyseliny. Vykonané enzymatické testy poukázali na to, že kmeň Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 neprodukujeenzým β-glukuronidázu, ktorý sa u človeka považuje za dôležitý marker vývoja karcinogenézy.
Uvedený kmeň mikroorganizmov je aplikovaný ako samostatný výživový doplnok, výhodne vo forme toboliek alebo ako prídavok do výživových doplnkov pre účely preventívneho posilnenia čreynej bariéry a črevnej mikroflóry voči toxickým mutagénom a infekčným patogénom. Variantom vynálezu je, že Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 izolovaný z človeka a nie zo zvierat je aplikovaný do funkčných potravín ako sú energetické cereálne tyčinky, mliečne a mäsové výrobky, výhodne pasterizovaná bryndza. V prípade využitia Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM a » » * * · · tn
7766 do pasterizovanej bryndze je navrátený požadovaný probiotický účinok funkčnej potraviny, ktorá je pasterizáciou zbavená živej mikroflóry lactobacilov pochádzajúcich zo zvierat.
Výhodou nového kmeňa mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766, na ktorý sa vzťahuje podstata vynnálezu, je modulačný efekt použitého kmeňa sa prejavuje zvýšením počtu baktérií mliečneho kvasenia a znížením počtu koliformných mikroorganizmov v črevnom obsahu hrubého čreva. Aplikácia kmeňa má vplyv nielen na črevnú mikroflóru, ale aj na metabolické aktivity s priaznivým účinkom na lipidový profil.
Laktobacilovýkmeň Lactobacillus plantarum LS/07 bol pôvodcami charakterizovaný v klinických štúdiách na potkanoch pričom boli zistené nasledujúce výhody kmeň podľa vynálezu:
Kmeň Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 nielen že neprodukuje enzým β-glukuronidáza, ktorý môže mať karcinogénne účinky, ale súčasne aj znižuje jeho aktivitu v črevnom obsahu pri experimentálne chemicky vyvolanom akútnom a chronickom zápale hrubého čreva u laboratórnych potkanov.
Histologické výsledky preukázali, že v skupinách zvierat, kde bol podávaný kmeň Lactobacillus plantarum LS/07, došlo k výraznému zníženiu a tlmeniu zápalu vo fixovanom tkanive kolónu potkanov v porovnaní s kontrolnou skupinou, kde uvedený kmeň nebol podávaný.
Aplikovaním kmeňa Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 došlo k signifikantnej inhibícii (P<0,05) prozápalových cytokínov IL-2, IL-17 a TNF-α, a miernemu nárastu protizápalových regulačných cytokínov IL-10 a TGF-β oproti pozitívnej kontrolnej skupine zvierat.
V skupinách zvierat, kde bol aplikovaný Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 bol zistený výrazne znížený počet populácie gramnegatívnych koliformných baktérií (4.96 ±0,32 CFU/g) v porovnaní s kontrolnou skupinou (5,45±0,l 1 CFU/g).
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
V jednom príklade uskutočnenia vynálezu je kmeň vo forme biologicky čistej kultúry.
Príklad 2
Uvedený kmeň mikroorganizmov je aplikovaný ako samostatný výživový doplnok, výhodne vo forme toboliek alebo ako prídavok do výživových doplnkov pre účely preventívneho posilnenia črevnej bariéry a črevnej mikroflóry voči toxickým mutagénom a infekčným patogénom.
Príklad 3
Uvedený kmeň Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 je aplikovaný do potravín ako sú energetické cereálne tyčinky, mliečne a mäsové výrobky alebo pasterizovaná bryndza.
Pracovný postup prípravy kmeňa:
Kultivácia mirkoorganizmov rodu Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 6677 podľa nasledujúceho postupu:
Pomocou sterilnej odberovej súpravy je prevedený výter z konečníka človeka. Odberový tampón je ponorený do zásobnej skúmavky s fyziologickým roztokom o objeme 5 ml. Zo zásobnej skúmavky je odobraná vzorka s objemom 1 ml pomocou pipety a prenesená pipetou do skúmavky s fyziologickým roztokom o objeme 9 ml. Výsledkom riedenia je 10 násobné zriedenie vzorky. Nasleduje pokračovanie tohto postupu do zriedenia vzorky od 10'2 až do stupňa zriedenia 10’5. Zo skúmaviek s jednotlivými riedeniami sú odobrané vzorky 0,1 ml a aplikované na Petriho misky so selektívnou pôdou pre laktobacily pre rast baktérií mliečneho kvasenia. Naočkované platne sú uložené do špeciálnych inkubačných nádob, v ktorých je vyvíjač zabezpečujúci anaeróbne kultivačné prostredie. Vzduchotesne uzavreté nádoby sú uložené v biologickom termostate. Kultivácia laktobacilov je realizovaná pri teplote 37°C počas 48 hodín. Po 48 hodinovej inkubácii je posúdená veľkosť a tvar porastených kolónií, pričom porast je tvorený drobnými, okrúhlymi, nízko vypuklými kolóniami bielej farby do veľkosti až 2 mm.
Izolácia laktobacilovévo kmeňa je vykonaná podľa postupu:
Sterilnou očkovacou kľučkou je opatrne (pod lupou) odobraná jedna kolónia baktérií z Pertiho misky a naočkovaná do skúmavky s laktobacilo-selektívnym LS bujónom v množstve 5 ml. uvedený postup je niekoľkokrát zopakovaný, pričom každá odobratá kolónia je naočkovaná do samostatnej skúmavky s bujónom. Preočkované kolónie sú inkubované v termostate pri teplote 37°C počas 18 hodín. Po inkubácii je z každej skúmavky odobraná porastená bujónová kultúra v množstve 0,1 ml a preočkovaná na Pertiho misky obsahujúce selektívny LS agar. Platne sú následne kultivované v termostate za anaeróbnych podmienok pri teplote 37°C počas 48 hodín. Po inkubácii je prevedené posudzovanie kolónií laktobacilov. Označené kolónie sú odobraté za účelom zistenia ich morfológie mikroskopicky farbiacou technikou Grama. Farbenie je vykonané nasledovne podľa schémy:
Nasadenie kultúry na podložné sklíčko Vysušenie a fixácia nad plameňom
Aplikácia
Kryštálvioleť - 30 sek
I
Opláchnutie destilovanou vodou Aplikácia
Lugolov roztok - 30 sekúnd
I
Opláchnutie destilovanou vodou Aplikácia
Etanol 96% - 20 sekúnd
Ψ
Opláchnutie destilovanou vodou Aplikácia
Karbolfuchsín - 30 sekúnd
I
Opláchnutie destilovanou vodou Vysušenie filtračným papierom
Očkovacie pôdy, spotrebný materiál a nástroje použité na izoláciu kmeňa sú sterilné. Všetky úkony týkajúce sa práce s mikrobiálnou kultúrou, sú vykonané v sterilnom očkovacom boxe.
Detekcia laktobacilov svetelným mikroskopom:
Na posúdenie morfológie laktobacilov je použitý svetelný mikroskop Olympus s lOOOx násobným zväčšením. Laktobacily sú pozorované ako modré grampozitívne (G+) farbiace sa stredne silné a stredne dlhé nepohyblivé mikroorganizmy v tvare tyčinky.
Detekcia inhibičných zón kmeňa Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 proti patogénnemu Escherichia coli CNTC Eck 63/59 agar difúznym testom:
Pripravená bujónová kultúra kmeňa Lactobacillus plantarum LS/07 je inkubovaná približne 18 hodín a zmeraná jej turbidimetrická hodnota na stupeň 0,5 McFarlanda, čo zodpovedá hodnote 1,5x108 mikroorganizmov. Z bujónovej kultúry je mikropipetou odobratá bujónová kultúra o objeme 0,050 ml a aplikovaná do jamky o veľkosti 4 mm (vyrezanej do stredu platne) selektívného LS agaru. Naočkované Petriho misky sú uložené do inkubačných nádob (GASPAK patent USA) a inkubované v biologickom termostate pri teplote 37 °C počas 48 hodín. Po 48 hodinách je na povrch agarových platní navrstvený agar v zložení, pepton 0,5g, kvasničný autolyzát lg, glukóza lg, agar 1,8 g, 100 ml destilovaná voda, pH 6,9, o objeme 3 ml, v ktorom je rozpustený bujón o objeme 0,3 ml obsahujúci nočnú kultúru porasteného kmeňa Escherichia coli serotyp O6:K2:H1 ATC 1938 CNTC Eck 63/59. Po aplikácií kmeňa, sú Petriho misky vložené do termostatu a inkubované pri teplote 37°C počas 18 hodín. Po inkubácií je zmeraná veľkosť inhibičných zón, pričom priemerný výsledok je získaný súčtom nameraných hodnôt jednotlivých meraní vydelených počtom testovaných platní. V príklade uskutočnenia sú použité odčítané hodnoty merania z troch platní.
Molekulovo genetická detekcia kmeňa Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766:
Na molekulovo genetickú detekciu izolovaného kmeňa je použitá vysoko citlivá a špecifická metóda techniky polymerázovej reťazovej reakcie (PCR). PCR zmes, použité špecifické primery, amplifikácia templátu a elektroforéza v agarózovom géli sú uskutočnené podľa literárnych zdrojov (Berthier a Ehrlich. 1998). Amplifikačné PCR produkty sú ofarbené etídium bromidom a detegované ultrafialovým svetlom, pričom je získaný špecifický PCR produkt o veľkosti 265 bázových párov.
Stanovenie organických kyselín:
Koncentrácie organických kyselín (kyselina mliečna a octová) sú stanovené pomocou prístroja (CS ISOTACHOPHORETIC ANALYSER) technikou kapilárnej izotachoforézy. Izolovaný kmeň Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 najviac produkoval kyselinu mliečnu v porovnaní s kyselinou octovou. Hodnoty sú namerané po 24 hodinovej (kyselina mliečna - 78,66 mmol/1, kyselina octová - 7,91 mmol/1) a 48 hodinovej (kyselina mliečna - 226,31 mmol/1, kyselina octová 95,44 mmol/1) inkubácií v termostate pri teplote 37°C .
Stanovenie enzýmovej aktivity
Na štúdium enzýmovej aktivity kmeňa Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 je použitý komerčný kit API ZYM (BIOMÉRIEUX®SA, Francúzko). Z dosiahnutých výsledkov je zistené, že testovaný kmeň neprodukuje enzým β-glukuronidázu, ktorý sa považuje za dôležitý marker v procese vývoja karcinogenézy kolorektálného karcinómu.
Experimenty na animálnych modeloch
Izolovaný kmeň Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 je použitý v in vivo experimentálnych štúdiách na laboratórnych potkanoch. Experimentálne práce na laboratórnych zvieratách majú veľký význam pri štúdiu účinku izolovaných nových kmeňov laktobacilov v podmienkach in vivo. Nami izolovaný kmeň Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766 zo stolice zdravého človeka sme použili v pokuse s laboratórnymi potkanmi. Potkany použité v pokuse (počet 51) pochádzali z (5 ff f. it i
kmeňa Sprague Dawley boli vo veku štyroch mesiacov. Kmeň sme pripravovali denne čerstvý v rastovom bujóne pre laktobacily (priemerná koncentrácia 2,88 x 109 CFU/ml) a podávali sme ich denne potkanom 5 krát v týždni. Raz týždenne (tretí až siedmy týždeň) sme potkanom injekčné aplikovali chemický prokarcinogén 1,2 dymetylhidrazín-dyhidrochlorid (1,2 DMH). Počas celého experimentu (24 týždňov) sme nezaznamenali žiadne klinické zmeny (hnačky, úhyn) u pokusných skupín zvierat. Tým sa potvrdilo, že kmeň je bezpečný. Dosiahnuté výsledky pokusu potvrdzujú, že modulačný efekt použitého kmeňa sa prejavil zvýšením počtu baktérií mliečneho kvasenia a znížením počtu koliformných mikroorganizmov v črevnom obsahu hrubého čreva. Aplikácia kmeňa mala vplyv nielen na črevnú mikroflóru, ale aj na metabolické aktivity s priaznivým účinkom na lipidový profil. Sú zaznamenané pozitívne zmeny imunitných a histologických laboratórnych vyšetrení pokusných zvierat.
Priemyselná využiteľnosť
Vyššie uvedené účinky kmeňa Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 ho predurčujú na využitie pri modulácii črevnej mikroflóry ako aj pri prevencii zápalových chronických chorôb ľudí.

Claims (4)

  1. PATENTOVÉ
    NÁROKY • *”» * · « * 4 « * * * * « * · » · - * * ’ * ♦ * · » · β · * · · « .
    7ľ 57 ~5cír Λ « * 'í 9 9 « « · (17 Kmeň mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766, izolovaný z človeka, r ktorý je uložený v Českej zbierke mikroorganizmov Prírodovedeckej fakulty Masarykovej univerzity, Bmo, Česká Republika.
  2. 2. Spôsob využitia kmeňov mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že spomínaný kmeň je využitý pre moduláciu črevnej mikroflóry a pri prevencii zápalových chronických chorôb ľudí.
  3. 3. Spôsob využitia kmeňov mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že je samostatný výživový doplnok, výhodne vo forme toboliek.
  4. 4. Spôsob využitia kmeňov mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že kmeň Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 je aplikovaný do potravín ako sú energetické cereálne tyčinky, mliečne a mäsové výrobky, výhodne pasterizovaná bryndza.
SK54-2015A 2015-07-30 2015-07-30 Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob ich využitia SK542015A3 (sk)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SK54-2015A SK542015A3 (sk) 2015-07-30 2015-07-30 Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob ich využitia
CZ2018-101A CZ2018101A3 (cs) 2015-07-30 2016-07-30 Kmeny mikroorganismů Lactobacillus plantarum LS/07 CCM 7766, výrobek obsahující tyto kmeny
SK50011-2018A SK500112018A3 (sk) 2015-07-30 2016-07-30 Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766, výrobok obsahujúci tieto kmene
PCT/IB2016/054600 WO2017017662A1 (en) 2015-07-30 2016-07-30 Microorganism strain lactobacillus plantarum ls/07 ccm 7766, method of its use and food product
CZ2018-34733U CZ33363U1 (cs) 2015-07-30 2016-07-30 Potravinářský výrobek nebo výživový doplněk obsahující kmen mikroorganismu Lactobacillus plantarum

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SK54-2015A SK542015A3 (sk) 2015-07-30 2015-07-30 Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob ich využitia

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK542015A3 true SK542015A3 (sk) 2017-02-02

Family

ID=56943878

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK54-2015A SK542015A3 (sk) 2015-07-30 2015-07-30 Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob ich využitia
SK50011-2018A SK500112018A3 (sk) 2015-07-30 2016-07-30 Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766, výrobok obsahujúci tieto kmene

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK50011-2018A SK500112018A3 (sk) 2015-07-30 2016-07-30 Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766, výrobok obsahujúci tieto kmene

Country Status (3)

Country Link
CZ (2) CZ2018101A3 (sk)
SK (2) SK542015A3 (sk)
WO (1) WO2017017662A1 (sk)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2369777B (en) * 2000-10-05 2004-10-27 St Ivel Ltd Food products with antimicrobial lactic acid bacteria
EP1997499A1 (en) * 2007-05-31 2008-12-03 Puleva Biotech, S.A. Mammalian milk microorganisms, compositions containing them and their use for the treatment of mastitis
KR101255050B1 (ko) * 2009-07-14 2013-04-16 씨제이제일제당 (주) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
CZ33363U1 (cs) 2019-11-12
CZ2018101A3 (cs) 2018-10-31
WO2017017662A4 (en) 2017-03-16
WO2017017662A1 (en) 2017-02-02
SK500112018A3 (sk) 2018-12-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9585922B2 (en) Lactic acid bacteria that co-aggregate with pathogenic bacteria
CN112358999B (zh) 一种罗伊氏乳杆菌及其应用
CN110144304B (zh) 干酪乳杆菌菌株及其应用
RU2564127C2 (ru) Композиция палочковидных бактерий, устойчивых к желчи и секретирующих высокие уровни незаменимых аминокислот
CN110191945A (zh) 乳酸菌及其在细菌生物膜形成的预防性、抑制性和/或减少性处理中的应用
CN113040390B (zh) 一株益生、耐盐约氏乳杆菌及其在畜禽水产养殖中防治病原菌的应用
Horáčková et al. Stability of selected lactobacilli in the conditions simulating those in the gastrointestinal tract
Battah et al. Differential effects of thiobencarb toxicity on growth and photosynthesis of Anabaena variabilis with changes in phosphate level
KR101665334B1 (ko) 축산악취의 감소 및 면역활성 효과를 가지는 로도박터 스페로이데스 cb 8521 및 이를 이용한 미생물제
SK542015A3 (sk) Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob ich využitia
KR20190058898A (ko) 아시네토박터 바우마니의 박테리오파아지 pbab25
ES2927904T3 (es) Lactobacillus amylovorus SGL 14: actividad probiótica y reducción de oxalato entérico
KR102262646B1 (ko) 락토바실러스 플란타룸 v135 균주의 사균체를 유효성분으로 함유하는 숙취 예방 또는 해소용 조성물
KR20080051798A (ko) 바실러스 서브틸리스 및 이를 이용한 생균제
KR100720025B1 (ko) 프로바이오틱 유산균 및 이를 포함하는 조성물
Phillips A sporulation medium for Clostridium perfringens
Jaber et al. Genetic and Morphological Effects of Lactobacillus Acidophillus on Some Virulence Factors of Proteus Mirabilis That Isolated From Diabetic Foot Ulcers
Saddiq Potential effect of natural musk and probiotic on some pathogens strain
RU2393214C1 (ru) Иммунобиологическое противоаллергическое средство (варианты), штамм lactobacillus acidophilus nkjc, штамм lactobacillus acidophilus jch, штамм lactobacillus acidophilus kaa
El-Sherbiny et al. Enhancement of Streptomyces sp. Mh-133 activity against some antibiotic resistant bacteria using biotic elicitation
Kumari et al. Isolation of Microorganism from Stool Sample of Diarrhea Patient and Effect of Antibiotics and Herbal Extract
KR20200104130A (ko) 클렙시엘라 뉴모니아의 박테리오파아지 pbkp05 및 그 용도
RU2813754C1 (ru) Способ стимуляции антагонистической активности лактобактерий
RU2822363C1 (ru) Штамм бактерий Sporosarcina psychrophila - продуцент антимикробных соединений
Raju et al. Isolation, Characterization and Sequencing of Lactobacillus from the Oral and Fecal Samples of Healthy Dogs

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Assignment and transfer of rights

Owner name: UNIVERZITA PAVLA JOZEFA SAFARIKA V KOSICIACH, , SK

Free format text: FORMER OWNER: CENTRUM VEDECKO-TECHNICKYCH INFORMACII SR, BRATISLAVA, SK

Effective date: 20220613

FC9A Refused patent application