SE502820C2 - Filtering macromolecule soln. with specific salt content - Google Patents
Filtering macromolecule soln. with specific salt contentInfo
- Publication number
- SE502820C2 SE502820C2 SE9402254A SE9402254A SE502820C2 SE 502820 C2 SE502820 C2 SE 502820C2 SE 9402254 A SE9402254 A SE 9402254A SE 9402254 A SE9402254 A SE 9402254A SE 502820 C2 SE502820 C2 SE 502820C2
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- protein
- macromolecule
- solution
- factor
- soln
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
Abstract
Description
20 25 30 35 502 820 2 Beskrivning av uppfinningen En avsikt med föreliggande uppfinning, är att kraftigt reducera uppehållstiden vid filtrering av lösningar innehållande makromole- kyler. Description of the invention An object of the present invention is to greatly reduce the residence time when filtering solutions containing macromolecules.
En annan avsikt med föreliggande uppfinning, är att kraftigt reducera vätskemängderna vid filtrering av lösningar innehållande mala-omolekyler., En annan avsikt med föreliggande uppfinning, är att reducera behovet av filteryta vid effektiv filtrering av lösningar innehållande makromolekyler.Another object of the present invention is to greatly reduce the amounts of liquid in filtering solutions containing mala-molecules. Another object of the present invention is to reduce the need for filter surface in efficient filtration of solutions containing macromolecules.
En ytterligare avsikt med föreliggande uppfinning, är att utbytet av mal En ytterligare avsikt med föreliggande uppfinning, är att reduce- ra polymeriseringen över filterytan varigenom flödet kan ökas och processtiden minskas.A further object of the present invention is that the yield of grinding A further object of the present invention is to reduce the polymerization over the surface of the filter whereby the flow can be increased and the process time reduced.
Dessa och andra avsikter uppfylls av föreliggande uppfinning, vilken avser ett sätt att virusfiltrera en lösning innehållande minst en makromolekyl genom att den totala salthalten i lösningen ligger inom intervallet från ca 0,2 M upp till mättnad för saltet ifråga.These and other objects are fulfilled by the present invention, which relates to a method of virus filtering a solution containing at least one macromolecule in that the total salinity of the solution is in the range from about 0.2 M up to saturation of the salt in question.
Uppfinnaren av föreliggande uppfinning har sålunda funnit att virusfiltrering kan genomföras betydligt effektivare än vad som förut varit känt, genom att höja salthalten i lösningen. Detta är överraskan- de eftersom det vid virusfiltrering av proteiner, hittills endast varit känt att proteinkoncentrationen, flödet och pH påverkat processen.The inventor of the present invention has thus found that virus filtration can be carried out much more efficiently than has been previously known, by raising the salinity of the solution. This is surprising because in virus filtration of proteins, so far it has only been known that the protein concentration, fate and pH have affected the process.
Orsaken till den förhöjda filtreringseffektiviteten vid högre salt- halt, kan tänkas vara att proteinet dras ihop och därmed lättare passe- rar genom porerna i filtret. Vidare är det troligt att proteiner med många hydrofoba grupper påverkas i större utsträckning av en för- höjd salthalt.The reason for the increased filtration efficiency at higher salinity, may be that the protein contracts and thus passes more easily through the pores in the filter. Furthermore, it is likely that proteins with many hydrophobic groups are affected to a greater extent by an elevated salinity.
Vid genomförande av föreliggande uppfinning ligger den totala salthalten i lösningen lämpligen inom intervallet från 0,4 upp till 2,5 M, företrädesvis inom intervallet från 0,6 upp till 2,0 M. Det är spe- ciellt föredraget att den totala salthalten i lösningen lämpligen inom intervallet från 0,8 upp till 1,5 M.In carrying out the present invention, the total salinity of the solution is suitably in the range from 0.4 up to 2.5 M, preferably in the range from 0.6 up to 2.0 M. It is especially preferred that the total salinity in the solution suitably in the range from 0.8 up to 1.5 M.
Den totala salthalten kan vid behov justeras genom tillsats av vilket som helst accepterbart salt. Det är således möjligt att använda lösliga oorganiska salter, lösliga organiska salter eller kombinationer 10 20 25 30 35 502 820 3 därav. Det kan antas att större processmässiga fördelar erhålls med salter som uppvisar hög utsaltningseffekt enligt den s.k. Hofmeister- serien. Här till S. Glasstone, Textbook of Physical Chemistry, van Nostrand Co., Toronto, 2:a uppl., april 1946, sid. 1254-1259. De viktigaste exemplen på anjoner med hög sådan utsaltningseffekt är citrat, tartrat, sulfat, acetat och fosfat. Katjoner som med fördel kan användas i föreliggande uppfinning är monovalenta katjoner, såsom natrium, kalium och ammonium. Med hänsyn till fördelen med farma- ceutiskt accepterbara tillsatser, utgör natriumklorid, kaliumklorid, nat- riumacetat och natriumcitrat eller kombinationer därav, speciellt före- dragna salter i föreliggande uppfinning. Det är även möjligt att till- sätta ett eller flera salter i sekvens, då filtreringen genomförs i två eller flera steg.The total salt content can be adjusted if necessary by adding any acceptable salt. Thus, it is possible to use soluble inorganic salts, soluble organic salts or combinations thereof. It can be assumed that greater process benefits are obtained with salts which show a high salting-out effect according to the so-called Hofmeister series. Here to S. Glasstone, Textbook of Physical Chemistry, van Nostrand Co., Toronto, 2nd ed., April 1946, p. 1254-1259. The most important examples of anions with a high salting effect are citrate, tartrate, sulphate, acetate and phosphate. Cations that can be advantageously used in the present invention are monovalent cations, such as sodium, potassium and ammonium. In view of the advantage of pharmaceutically acceptable additives, sodium chloride, potassium chloride, sodium acetate and sodium citrate or combinations thereof, are particularly preferred salts in the present invention. It is also possible to add one or more of your salts in sequence, as the filtration is carried out in two or more steps.
Vid virusfiltrering rekommenderas ofta en proteinkoncentration inom intervallet från ca 5 upp till ca 10 mg/ ml lösning. Vid tillämp- ning av föreliggande uppfinning, har det överraskande visat sig att lösningar med en högre proteinkoncentration, ca 10 upp till ca 20 mg/ ml, med fördel kan processas över virusfiltret.For virus filtration, a protein concentration in the range from about 5 up to about 10 mg / ml solution is often recommended. In practicing the present invention, it has surprisingly been found that solutions with a higher protein concentration, about 10 up to about 20 mg / ml, can be advantageously processed over the virus filter.
Temperaturen i lösningen bör ligga inom intervallet från 0°C upp till temperaturen där proteinet ifråga denatureras. Lämpligen ligger temperaturen inom intervallet från 10 upp till 50°C , företrädes- vis från 20 upp till 35°C .The temperature of the solution should be in the range from 0 ° C up to the temperature at which the protein in question is denatured. Suitably the temperature is in the range from 10 up to 50 ° C, preferably from 20 up to 35 ° C.
Vid genomförande av uppfinningen bör pH i lösningen ligga inom intervallet från ca 3 upp till ca 9, lämpligen från 4 upp till 8.In carrying out the invention, the pH of the solution should be in the range from about 3 up to about 9, preferably from 4 up to 8.
Vidare bör pH i proteinlösningen inte ligga för nära isoelektriska pun- kten för proteinet i fråga. För t. ex. gammaglobulin uppnås således bätttre resultat vid ett pH av 5,5 än vid ett pH av 6,8.Furthermore, the pH of the protein solution should not be too close to the isoelectric point of the protein in question. For e.g. gamma globulin thus achieves better results at a pH of 5.5 than at a pH of 6.8.
Med lösning avses i föreliggande uppfinning en lösning inne- hållande minst 50 vikt-% vatten, eventuellt innehållande ett eller flera lösningsmedel, såsom metanol, etanol, aceton eller acetonitril.In the present invention, solution means a solution containing at least 50% by weight of water, optionally containing one or more solvents, such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile.
Föreliggande uppfinning är användbar för processoptimering vid virusfiltrering av lösningar innehållande ett stort antal olika typer av makromolekyler. Exempel på sådana är proteiner, polysackarider och polypeptider eller kombinationer därav. Mal ursprung har ingen betydelse för användningen av föreliggande upp- finning. Makromolekylema kan således komma från växt- eller djur- riket eller framställas industriellt från början. Mal 10 15 20 25 30 35 502 820 4 dock lämpligen av humant eller arlimalt ursprung eller framställda med genteknik (rekombinanta).The present invention is useful for process optimization in virus filtration of solutions containing a large number of different types of macromolecules. Examples of such are proteins, polysaccharides and polypeptides or combinations thereof. Mal origin has no significance for the use of the present invention. The macromolecules can thus come from the plant or animal kingdom or be manufactured industrially from the beginning. Mal 10 15 20 25 30 35 502 820 4 however suitably of human or arlimal origin or produced by genetic engineering (recombinant).
Speciellt lämpliga proteiner i föreliggande uppfinning är faktor VIII, faktor IX, antitrombin IH, gammaglobulin, albumin, streptoki- nase och apolipoproteiner.Particularly suitable proteins in the present invention are factor VIII, factor IX, antithrombin IH, gamma globulin, albumin, streptokinase and apolipoproteins.
En speciellt föredragen faktor IX-produkt är Nanotiv®, som levereras av Pharmacia AB, i Stockholm, Sverige. Fördelen med denna produkt är att den före filtreringen uppvisar så hög spedfik aktivitet, att filter med mycket fin struktur kan väljas. Härigenom kan víruskon- centrationen sänkas till en mycket låg nivå, samtidigt som själva filtre- ringssteget blir mycket snabbt och utbytet högt.An especially preferred factor IX product is Nanotiv®, which is supplied by Pharmacia AB, in Stockholm, Sweden. The advantage of this product is that before the filtration it shows such a high spedfik activity that filters with a very fine structure can be chosen. In this way, the virus concentration can be reduced to a very low level, at the same time as the filtering step itself becomes very fast and the yield is high.
Föredragna typer av faktor VHI utgörs av deleteringsderivat av rekombinant framställda faktor VIII-produkter. En speciellt föredra- gen faktor VIII-produkt är r-VIII SQ®, som levereras av Pharmacia AB, i Stockholm, Sverige. En fördel med denna produkt är att den rekombinant framställda molekylen saknar den inaktiva mellandelen av den naturliga faktor VIH-molekylen. Detta ger molekylen en medelmolekylstorlek av ca 170000. Denna molekylstorlek är synner- ligen lämplig för filtrering med sådana filter som möjliggör avsevärd virusreduktion.Preferred types of factor VHI are deletion derivatives of recombinantly produced factor VIII products. An especially preferred factor VIII product is r-VIII SQ®, which is supplied by Pharmacia AB, in Stockholm, Sweden. An advantage of this product is that the recombinantly produced molecule lacks the inactive intermediate portion of the natural factor VIH molecule. This gives the molecule an average molecular size of about 170,000. This molecule size is particularly suitable for filtration with such filters which enable considerable virus reduction.
Speciellt lämpliga polysackarider i föreliggande uppfinning är glykosaminoglykaner och bakteriepolysackarider. Exempel på glykos- arninoglykaner är hepariner, heparinfrag-rnent, heparinderivat, hepa- ransulfat och hyaluronsyra. En speciellt föredragen grupp av glykos- aminoglykaner utgörs av lågmolekylära hepariner med en medel- molekylstorlek upp till ca 10000, företrädesvis från 2000 upp till 8000.Particularly suitable polysaccharides in the present invention are glycosaminoglycans and bacterial polysaccharides. Examples of glucosarninoglycans are heparins, heparin fragment, heparin derivatives, heparan sulphate and hyaluronic acid. An especially preferred group of glycosaminoglycans is low molecular weight heparins having an average molecular size up to about 10,000, preferably from 2,000 up to 8,000.
Speciellt lämpliga polypeptider i föreliggande uppfinning är bio- aktiva polypeptider såsom humana tillväxthormoner. En speciellt föredragen sådan produkt är Genotropin®, som levereras av Pharmacia AB, i Stockholm, Sverige.Particularly suitable polypeptides in the present invention are bioactive polypeptides such as human growth hormones. An especially preferred such product is Genotropin®, which is supplied by Pharmacia AB, in Stockholm, Sweden.
Föreliggande uppfinning är således användbar för processopti- mering vid virusfiltrering av lösningar innehållande t.ex. proteiner, polysackarider och polypeptider. I det följande kommer dock uppfin- ningen att beskrivas med hänvisning till lösningar innehållande pro- teiner, närmare bestämt proteiner som naturligt förekommer i den mänskliga organismen.The present invention is thus useful for process optimization in virus filtration of solutions containing e.g. proteins, polysaccharides and polypeptides. In the following, however, the invention will be described with reference to solutions containing proteins, more specifically proteins that occur naturally in the human organism.
Virus som kan förekomma i proteinlösningar är normalt avsevärt större än proteinema själva. Separering med avseende på 10 15 20 25 30 35 502 820 5 storlek, t.e.x genom filtrering, har således förutsättningar att avlägsna virus från proteiner.Viruses that can occur in protein solutions are normally considerably larger than the proteins themselves. Separation with respect to size, e.g. by filtration, thus has the potential to remove viruses from proteins.
Virusfiltrering är en omvänd process jämfört med ultrafiltrering (UF). Sålunda pumpas proteinlösningen runt med ett konstant flöde på retentatsidan, medan en annan pump suger proteinlösningen igenom filtret. Då en viss bestämd volym erhållits på retentatsidan, tillsätts buffert på retentatsidan. Detta upprepas erforderligt antal gånger, varvid större delen av återstående protein passerar filtret, medan virus blir kvar på retentatsidan. En sådan process kallas för diafiltrering. Filtret kastas normalt efter en körning, för att undvika överföring av virus.Virus filtering is a reverse process compared to ultrafiltration (UF). Thus, the protein solution is pumped around with a constant flow on the retentate side, while another pump sucks the protein solution through the filter. When a certain fixed volume has been obtained on the retentate side, buffer is added on the retentate side. This is repeated the required number of times, with most of the remaining protein passing through the filter, while the virus remains on the retentate side. Such a process is called diafiltration. The filter is normally discarded after a run, to avoid virus transmission.
Virusfilter är kända och levereras av bl.a. Millipore från Massa- chusetts, USA och Asahi Chemical Industry Co., Ltd. från Japan. Milli- pore levererar filter med två olika membrantyper beroende på protei- nets storlek. Sålunda levererar Millipore bl.a. Virosolvem / 70 för proteiner med en molekylstorlek på upp till ca 70000, medan Virosolvem / 180 är avsedd för proteiner med en molekylstorlek på upp till ca 180000. Exempel på användning av det senare filtret är för monoklonala antikroppar. Asahi Chemical Industry levererar bl.a.Virus filters are known and are supplied by e.g. Millipore of Massachusetts, USA and Asahi Chemical Industry Co., Ltd. from Japan. Millipore supplies filters with two different membrane types depending on the size of the protein. Thus, Millipore delivers i.a. Virosolvem / 70 for proteins with a molecular size of up to about 70,000, while Virosolvem / 180 is intended for proteins with a molecular size of up to about 180,000. Examples of the use of the latter filter are for monoclonal antibodies. Asahi Chemical Industry delivers i.a.
Planovam 35- och Planovam 15-filter, där det senare filtret används för mindre virus såsom polio.Planovam 35 and Planovam 15 filters, where the latter filter is used for minor viruses such as polio.
Valet av filter är som ovan sagts bl.a. en funktion av storleken hos proteinet. Faktor D(, antitrombin III och human serum albumin (HSA) har samtliga en molekylstorlek av ungefär 60000-70000, varvid t.ex. Virosolvem / 70 utgör ett lämpligt alternativ. Gammaglobulin har en molekylsmrlek av ungefär lsoooo, varvid t.ex. virosalvef" /1so utgör ett lämpligt alternativ. Det senare filtret är även lämpligt för den rekombinant framställda faktor VIH-produkten, r-VIII SQ®, vilken som ovan sagts har en medelmolekylstorlek av ca 170000.The choice of filter is, as stated above, i.a. a function of the size of the protein. Factor D (, antithrombin III and human serum albumin (HSA) all have a molecular size of about 60,000-70,000, with, for example, Virosolvem / 70 being a suitable alternative. Gamma globulin has a molecular size of about 1000,000, e.g. "/ 1so is a suitable alternative. The latter filter is also suitable for the recombinantly produced factor VIH product, r-VIII SQ®, which, as stated above, has an average molecular size of about 170,000.
Möjligheten att välja filter med fin struktur förutsätter vidare att proteinlösningen har en hög renhet före filtrering. Användning av filter med en fin struktur utgör i sin tur en förutsättning för att kunna producera proteinlösningar med en mycket låg halt av virus i slutpro- dukten. För att kunna reducera koncentrationen av virus till en mycket låg nivå, krävs sålunda filter med en mycket fin struktur, t.ex.The possibility of choosing filters with a fine structure further presupposes that the protein solution has a high purity before filtration. The use of filters with a fine structure is in turn a prerequisite for being able to produce protein solutions with a very low content of virus in the end product. In order to be able to reduce the concentration of virus to a very low level, filters with a very fine structure are thus required, e.g.
Virosolvem / 70. Vid användning av Virosolvem /180 kan inte kon- centrationen sänkas lika lågt. 10 20 25 30 35 6 Effektiviteten över filtreringssteget påverkas av renheten hos proteinlösningen som tillförs filtret. Härvid ger en hög specifik aktivi- tet före filtrering ett högre utbyte över filtreringssteget. Vid föredragna utföringsformer med filtrering av lösningar innehållande faktor IX, har det sålunda visat sig att utbytet av protein över filtreringssteget kan höjas från ca 70 % till över 95 %. Föreliggande uppfinning möjlig- gör dock framställning av protein med ett utbyte av över 90 %, även vid användning av lösningar med låg specifik aktivitet.Virosolvem / 70. When using Virosolvem / 180, the concentration cannot be lowered as low. 10 20 25 30 35 6 The efficiency of the filtration step is affected by the purity of the protein solution fed to the filter. In this case, a high specific activity before filtration gives a higher yield over the filtration step. Thus, in preferred embodiments with filtration of solutions containing factor IX, it has been found that the yield of protein over the filtration step can be increased from about 70% to over 95%. However, the present invention enables the production of protein with a yield of over 90%, even when using solutions with low specific activity.
Virusfiltrering enligt föreliggande uppfinning genomförs lämp- ligen i slutet av en sekvens för framställning av protein, eftersom en hög specifik aktivitet före filtrering ger ett högre utbyte över filtre- ringssteget. Företrädesvis används föreliggande uppfinning som sista reningssteg, eventuellt följt av ett steg för justering av t.ex. proteinkon- centration, salthalten eller pH hos slutprodukten. Ett efterföljande steg med diafiltrering med ett UF-membran kan också användas för att avlägsna salter som kan vara processmässigt eller ekonomiskt fördel- aktiga, men som inte bör ingå i slutprodukten. Proteinlösningar fär- diga för administrering innehåller en fysiologisk lösning, t.ex. 0,15 M natriurnklorid vid ett pH av 7. Virusfiltrering kan även genomföras i två eller flera steg, med eller utan andra mellanliggande processteg.Virus filtration according to the present invention is conveniently carried out at the end of a sequence for the production of protein, since a high specific activity before filtration gives a higher yield over the filtration step. Preferably, the present invention is used as a final purification step, possibly followed by a step of adjusting e.g. protein concentration, salinity or pH of the final product. A subsequent step of diafiltration with a UF membrane can also be used to remove salts which may be process-wise or economically advantageous, but which should not be included in the final product. Protein solutions ready for administration contain a physiological solution, e.g. 0.15 M sodium chloride at a pH of 7. Virus filtration can also be performed in two or more steps, with or without other intermediate process steps.
Föreliggande uppfinning reducerar effektivt innehållet av virus med lipidhöljen såväl som virus utan lipidhöljen. Exempel på virus utan lipidhölje är hepatit A och polio, vilka är relativt små virus.The present invention effectively reduces the content of viruses with lipid envelopes as well as viruses without lipid envelopes. Examples of viruses without lipid envelope are hepatitis A and polio, which are relatively small viruses.
Exempel på virus med lipidhölje är hepatit B, hepatit C och Human Immunodeficiency Virus (HIV).Examples of lipid-enveloped viruses are hepatitis B, hepatitis C and Human Immunodeficiency Virus (HIV).
Exemplen avser att illustrera uppfinningen, utan att begränsa densamma.The examples are intended to illustrate the invention, without limiting it.
EXPERIMENTELLT Vid försöken bestämdes först proteingenomsläpplígheten (eng. siev- ing coefficient) vid olika filtratflöden. Proteingenornsläppligheten är angiven som P/ R, där P är proteinkoncentrationen på permeatsidan (filtratsidan) uppmätt genom absorption vid 280 nm (A230) och R är proteinkoncentrationen uppmätt på retentatsidan (R) uppmätt genom absorption vid 280 nm (A230). Därefter valdes det filtratflöde som gav högst proteingenomsläpplighet utan att polymerisering erhölls över filtret. Med några makromolekyler gjordes även en utbytesoptimering. 20 25 30 502 820 Eztemneü Försök utfördes med faktor D( som makromolekyl, för att visa inver- kan av två salthalter på proteingenomsläppligheten, díafiltrefings- mängden och utbytet. En kommersiell lösning med faktor IX, Nanotiv® , levererades av Pharmacia AB i Stockholm, Sverige.EXPERIMENTAL In the experiments, the protein coefficient at different filtrates was first determined. The protein gene permeability is given as P / R, where P is the protein concentration on the permeate side (filtrate side) measured by absorption at 280 nm (A230) and R is the protein concentration measured on the retentate side (R) measured by absorption at 280 nm (A230). Thereafter, the fate of the filtrate was chosen which gave the highest protein permeability without polymerization being obtained over the filter. With some macromolecules an exchange optimization was also done. 20 25 30 502 820 Eztemneü Experiments were performed with factor D (as a macromolecule, to show the effect of two salts on protein permeability, diafiltration amount and yield. A commercial solution with factor IX, Nanotiv®, was supplied by Pharmacia AB in Stockholm, Sweden.
Lösningen med faktor IX erhållen från humant blodplasma hade före filtreringen behandlats i en sekvens med anjonbytare, kemisk virus- inaktivering, affinitetslcromatografi och katjonbytare. Lösningen ultra- filtrerades mellan varje steg förutom mellan den kemiska virusinaktí- veringen och afñnitetslaomatografin.The factor IX solution obtained from human blood plasma had before treatment been treated in a sequence with anion exchangers, chemical virus inactivation, affinity chromatography and cation exchangers. The solution was ultrafiltered between each step except between the chemical virus inactivation and affinity lithography.
Försöksbetingelser: ingående renhet på proteinlösriingen: hög. buffert: 0,144 M NaCl+0,0055 M natriumcitrat. Total salthalt: ca 0,15 M proteinkoncentration: O,5-1,0 A230-enheter proteinlösriingens pH: 7 försökstemperatur: rumstemperatur (ca 2.3 grader). virusavskiljande filter: Virosolvem / 70 filteryfa: 1 /3 ft2 retentatflöde: 41 l /h pump: Watson-Marlow 504 TABELL 1 Bestämning av proteingenorrisläppligheten Försök Fillratflöde, m1/ min P/ R, % 1 3,5 35,0 2 6,9 39,6 3 10,7 45,8 4 14,1 56,2 5 17,6 55,6 6 20,8 58,3 7 24,3 61,7 Bestämning av proteingenomsläppligheten gav ett optimalt filtrat- flöde av 20,8 m1/ min. - 502 820 20 30 8 TABELL 2 Utbytesoptimering. Filtratflöde: 20,8 m1/ min. Ingående renhet på proteinlösningen: hög. Buffert: 0,144 M NaCl + 0,0055 M natriumcilrrat.Experimental conditions: thorough purity of the protein solution: high. buffer: 0.144 M NaCl + 0.0055 M sodium citrate. Total salinity: about 0.15 M protein concentration: 0.5-1.0 A230 units pH of the protein solution: 7 test temperature: room temperature (about 2.3 degrees). virus-separating filter: Virosolvem / 70 fa lteryfa: 1/3 ft2 retentate fl fate: 41 l / h pump: Watson-Marlow 504 TABLE 1 Determination of protein gene permeability Attempt Fillrat fl fate, m1 / min P / R,% 1 3,5 35,0 2 6, 9 39.6 3 10.7 45.8 4 14.1 56.2 5 17.6 55.6 6 20.8 58.3 7 24.3 61.7 Determination of protein permeability gave an optimal atltrate- av fate of 20 .8 m1 / min. - 502 820 20 30 8 TABLE 2 Yield optimization. Filtration fl fate: 20.8 m1 / min. Ingredient purity of the protein solution: high. Buffer: 0.144 M NaCl + 0.0055 M sodium citrate.
Total salthalt: ca 0,15 M . ” Försök Filtreringstid P/ R, % 1 _ 3 min 10 s 55,1 2 6 min 25 s 52,1 3 10 min 40 s 44,5 4 13 min 20 s 34,0 Diafiltlering med utspädning av ca 1 volymsenhet per volymsenhet ingående proteinlösning (1 + 1) gav ett utbyte av ca 90 %. x m I Samma betingelser som i Exempel 1, bortsett från att bufferten i detta fall utgjordes av 1,0 M NaCl + 0,01 M natriumcitrat, vilket gav en total salthalt av ca 1,0 M.Total salinity: about 0.15 M. Attempt Filtration time P / R,% 1 _ 3 min 10 s 55.1 2 6 min 25 s 52.1 3 10 min 40 s 44.5 4 13 min 20 s 34.0 Diafiltration with dilution of approx. 1 volume unit per volume unit constituent protein solution (1 + 1) gave a yield of about 90%. x m I In the same conditions as in Example 1, except that the buffer in this case consisted of 1.0 M NaCl + 0.01 M sodium citrate, which gave a total salinity of about 1.0 M.
TABELL 3 Bestämning av proteingenomsläppligheten Försök Filtratflöde, m1/ min P/ R, % 1 3,5 55,2 2 6,9 g 55,7 3 10,7. 61,4 4 14,1 68,4 5 17,6 74,2 6 20,8 77,0 7 24,3 80,5 Bestämning av proteingenomsläppligheten gav ett optimalt ñltrat- flöde av 24,3 m1/ min. 20 30 502. 820 9 TABELL 4 Utbytesoptimering. Filtratflöde: 24,3 ml/min.TABLE 3 Determination of protein permeability Experiment Filtrate fl fate, m1 / min P / R,% 1 3,5 55,2 2 6,9 g 55,7 3 10,7 61.4 4 14.1 68.4 5 17.6 74.2 6 20.8 77.0 7 24.3 80.5 Determination of protein permeability gave an optimal filtrate value of 24.3 m1 / min. 20 30 502. 820 9 TABLE 4 Yield optimization. Filtrate fl fate: 24.3 ml / min.
Försök Frltreñngstid P/ R, % 1 2 min 30 s 72 2 -- 68 3 7 min 14 s 65 4 9 min 38 s' 55 Diafiltrering med utspädning av ca 0,3 volymsenheter per volymsenhet ingående lösning (1 + 0,3) ger ett utbyte av > 95%. xml Samma betingelser som i Exempel 1, bortsett från att renheten på ingående proteinlösning var lägre. ~ Diafiltrering med utspädning av ca 3 volymsenheter per volymsenhet ingående proteinlösning (1 + 3) gav ett utbyte av ca 65%.Attempt Frequency P / R,% 1 2 min 30 s 72 2 - 68 3 7 min 14 s 65 4 9 min 38 s' 55 Filtering with dilution of approx. 0.3 volume units per volume unit solution included (1 + 0.3) gives a yield of> 95%. xml Same conditions as in Example 1, except that the purity of the constituent protein solution was lower. ~ Diafiltration with dilution of about 3 volume units per unit volume of protein solution (1 + 3) gave a yield of about 65%.
Ezemneli Samma betingelser som i Exempel 2, bortsett från att renheten på ingå- ende proteinlösning var Diafiltrering med utspädning av ca 3 volymsenheter per volymsenhet ingående proteinlösning (1 + 3) gav ett utbyte av 89 %. Utbytet av faktor D(:C var samtidigt 87%. xml Försök utfördes med faktor D( som makromolekyl, för att visa inver- kan av fyra salthalter på proteingenomsläppligheten, diafiltrerings- mängden och utbytet vid i övrigt konstanta försöksbetingelser. Den använda Nanotiv®-lösningen, levererad av Pharmacia AB i Stock- holm, Sverige, var en annan än i exempel 1-4. Försöksbetingelsema var de samma som i exempel 1, bortsett från att det virusavsldljande filtret, Virosolvef" / 70, var något använt. 25 30 502 820 10 TABELL 5 Bestämning av proteingenornsläppligheten. Bufferten utgjordes av 0,144 M NaCI + 0,0055 M natriumcitrat. Total salthalt: ca 0,15 M.Ezemneli The same conditions as in Example 2, except that the purity of the constituent protein solution was Diafiltration with dilution of about 3 volume units per unit volume of constituent protein solution (1 + 3) gave a yield of 89%. The yield of factor D (: C was simultaneously 87%. Xml Experiments were performed with factor D) as a macromolecule, to show the effect of four salinities on the protein permeability, the amount of diafiltration and the yield under otherwise constant experimental conditions. The solution, supplied by Pharmacia AB in Stockholm, Sweden, was different from that of Examples 1 to 4. The experimental conditions were the same as in Example 1, except that the virus-repellent filter, Virosolvef "/ 70, was slightly used. 502 820 10 TABLE 5 Determination of protein gene permeability The buffer consisted of 0.144 M NaCl + 0.0055 M sodium citrate Total salt content: about 0.15 M.
Försök Filtratflöde, m1/ min P/ R, % 1 3,5 25 2 6,9 28 3 14,1 43 4 20,8 49 5 24,3 50 TABELL 6 Bestämning av prcteíngenonxsläppligheten. Bufferten utgjordes av 0,5 M NaCI + 0,01 M natriumcitrat. Total salthalt: ca 0,5 M.Experiment Filtrate fl fate, m1 / min P / R,% 1 3,5 25 2 6,9 28 3 14,1 43 4 20,8 49 5 24,3 50 TABLE 6 Determination of prcteiningenxxleadability. The buffer consisted of 0.5 M NaCl + 0.01 M sodium citrate. Total salinity: about 0.5 M.
Försök Fuuamöae, ml/mm P/R, % 1 3,5 se 2 6,9 44 a 14,1 61 4 20,8 67 s 24,3 s 69 TABELL 7 Bestämning av proteingenomsläppligheten. Bufferten utgjordes av 1,0 M NaCI + 0,01 M natriumciuat. Total salthalt: ca 1,0 M.Experiment Fuuamöae, ml / mm P / R,% 1 3,5 see 2 6.9 44 a 14.1 61 4 20.8 67 s 24.3 s 69 TABLE 7 Determination of protein permeability. The buffer consisted of 1.0 M NaCl + 0.01 M sodium citrate. Total salinity: about 1.0 M.
Försök Filtratflöde, m1/ min P/ R, % 1 3,5 49 2 6,9 60 3 14,1 72 4 20,8 74 5 24,3 76 20 502 820 ll TABELL 8 Bestämning av proteingenoinsläppligheten. Bufferten utgjordes av 1,5 M NaCl + 0,01 M natriumcitrat. Total salthalt: ca 1,5 M.Experiment Filtrate de fate, m1 / min P / R,% 1 3,5 49 2 6,9 60 3 14,1 72 4 20,8 74 5 24,3 76 20 502 820 ll TABLE 8 Determination of protein genome inlet. The buffer consisted of 1.5 M NaCl + 0.01 M sodium citrate. Total salinity: about 1.5 M.
Försök Filtratflöde, m1/ min P / R, % 1 3,5 48 2 6,9 56 3 14,1 73 4 20,8 76 5 24,3 74 Det framgår av tabell 5 till 8 att användning av föreliggande uppfin- ning innebär en märkbar förbättring av process betingelserna vid virusfiltrering av faktor D(-lösningar, jämfört med tidigare känd teknik där låg salthalt använts. hrmnelj Försök utfördes med faktor D( som makromolekyl, för att visa inver- kan av tre olika salter på proteingenonxsläppligheten, diafiltrerings- mängden och utbytet vid i övrigt konstanta försöksbetingelser. Den använda N anotiv®-lösningen, levererad av Phannacia AB i Stock- holm, Sverige, var densamma som i exempel 5. Försöksbetingelsema var de samma somi exempel 1, bortsett från att det virusavskiljande filtret, Virosolvem / 70, var något använt.Experiment Filtrate fl fate, m1 / min P / R,% 1 3,5 48 2 6.9 56 3 14.1 73 4 20.8 76 5 24.3 74 It appears from Tables 5 to 8 that the use of the present invention involves a marked improvement in the process conditions in virus filtration of factor D (solutions, compared to prior art where low salinity was used. hrmnelj Experiments were performed with factor D (as a macromolecule, to show the effect of three different salts on the protein inability), diafiltration The amount and yield under otherwise constant test conditions The N anotiv® solution used, supplied by Phannacia AB in Stockholm, Sweden, was the same as in Example 5. The test conditions were the same as in Example 1, except that the virus-separating filter , Virosolvem / 70, was slightly used.
TABELL 9 g Bestämning av proteingenornsläppligheten. Bufferten utgjordes av 0,5 M kaliumdivätefosfat. Total salthalt: 0,5 M.TABLE 9 g Determination of protein gene permeability. The buffer consisted of 0.5 M potassium dihydrogen phosphate. Total salinity: 0.5 M.
Försök Filtratflöde, m1/ min P/ R, % 1 3,5 34 2 6,9 48 3 14,1 57 4 20,8 55 20 30 502 820 12 TABELL 10 Bestämning av proteingenontsläppligheten. Bufferten utgjordes av 0,5 M NaC1. Total salthalt: 0,5 M.Experiment Filtrate fl fate, m1 / min P / R,% 1 3,5 34 2 6,9 48 3 14,1 57 4 20,8 55 20 30 502 820 12 TABLE 10 Determination of protein inseparability. The buffer consisted of 0.5 M NaCl. Total salinity: 0.5 M.
Försök Filtratflöde, m1/ min P/ R, % 1 3,5 27 2 6,9 43 3 14,1 50 4 20,8 46 TABELL 11 Bestämning av proteingenornsläppligheten. Bufferten utgjordes av 0,5 M bariumldorid. Total salthalt: 0,5 M.Test Filtrate flow, m1 / min P / R,% 1 3.5 27 2 6.9 43 3 14.1 50 4 20.8 46 TABLE 11 Determination of protein genome permeability. The buffer consisted of 0.5 M barium chloride. Total salinity: 0.5 M.
Försök Filtratflöde, ml /min P/ R, % 1 3,5 24 2 6,9 36 3 14,1 34 4 20,8 - Det framgår av tabell 9 till ll att ett flertal olika salter med fördel kan användas vid genomförandet av föreliggande uppfinning. Det fram- går vidare att proteingenomsläppligheten ökar vid användning av salt med hög utsaltningseffekt enligt Hofmeister-serien (kaliumdiväte- fosfat) jämfört med ett salt med låg utsaltningseffekt (bariumklorid). fixempeLZ Försök utfördes med gammaglobulin som ntalcomolekyl, för att visa inverkan av salthalten på proteingenomsläppligheten, diafiltrerings- mängden och utbytet. Lösningen med gammaglobulin var en kom- mersiell produkt erhållen från blodplasma, Gammonativ®, levererad av Pharmacia AB i Stockholm, Sverige. Lösningen med gammaglo- bulin hade före filtreringen renats genom en inledande Cohn-fraktio- nering med efterföljande krornatografisteg.Experiment Filtrate flow, ml / min P / R,% 1 3,5 24 2 6,9 36 3 14,1 34 4 20,8 - It appears from Tables 9 to 11 that a number of different salts can be used to advantage in the implementation of present invention. It also appears that the protein permeability increases when using salt with a high salting effect according to the Hofmeister series (potassium dihydrogen phosphate) compared with a salt with a low salting effect (barium chloride). emp xempeLZ Experiments were performed with gamma globulin as the ntalcom molecule, to show the effect of the salt content on the protein permeability, the amount of filtration and the yield. The gamma globulin solution was a commercial product obtained from blood plasma, Gammonativ®, supplied by Pharmacia AB in Stockholm, Sweden. The gamma globulin solution had been purified before filtration by an initial Cohn fractionation with subsequent chromatography steps.
Försöksbetingelser i enlighet med exempel 1-, bortsett från att det virusavskiljande filtret var ett Viroso1veT"/180-fi1ter, lösningens pH 20 30 13 5021820 var 6,8 och proteinkoncentrationen var 0,Z5-0,5 Azßo-enheter. Buffer- ten utgjordes av 2,2% albumin + 0,15 M N aC1 + 0,02 M NaAc + 0,075 M glycin. Total salthalt: 0,17 M.Experimental conditions according to Example 1, except that the virus-separating filter was a Viroso1veT "/ 180-ter1 ter, the pH of the solution was 6.8 and the protein concentration was 0, Z5-0.5 Azßo units. The buffer consisted of 2.2% albumin + 0.15 MN aCl + 0.02 M NaAc + 0.075 M glycine Total salt content: 0.17 M.
TABELL 12 Bestämning av proteingenomsläppligheten Försök Filtratflöde, m1/ min 1 3,5 2 6,9 3 10,7 4 14,1 5 17,6 6 20,8 7 24,3 P/ R, % 32 35 41 51 59 63 69 Bestämning av proteingenomsläppligheten gav ett optimalt filtrat- flöde av 20,8 ml/min. xml Samma betingelser som i Exempel 7, bortsett från att bufferten i detta fall utgjordes av 2,2% albumin + 1,0 M NaCl + 0,02 M NaAc + 0,075 M ' glycin. Total salthalt: ca 1,0 M.TABLE 12 Determination of protein permeability Experiment Filtrate flow, m1 / min 1 3.5 2 6.9 3 10.7 4 14.1 5 17.6 6 20.8 7 24.3 P / R,% 32 35 41 51 59 63 69 Determination of protein permeability gave an optimal atltrate fl of 20.8 ml / min. xml Same conditions as in Example 7, except that the buffer in this case consisted of 2.2% albumin + 1.0 M NaCl + 0.02 M NaAc + 0.075 M 'glycine. Total salinity: about 1.0 M.
TABELL 13 Bestämning av proteingenoinsläppligheten Försök Filtratflöde, ml/ min 1 3,5 2 6,9 3 10,7 4 14,1 5 17,6 6 20,8 7 24,3 P/R, % 38 ääâïï 80 20 30 502 820 14 _ Bestämning av proteingenomsläppligheten gav ett optimalt filtrat- flöde av 20,8 m1/ min.TABLE 13 Determination of Protein Genome Intensity Experiment Filtrate de fate, ml / min 1 3.5 2 6.9 3 10.7 4 14.1 5 17.6 6 20.8 7 24.3 P / R,% 38 ääâïï 80 20 30 502 820 14 _ Determination of protein permeability gave an optimal atltrate- fl of 20.8 m1 / min.
Utbytesoptimering vid ett fillratflöde av 20,8 m1/ min och en uppe- hållstid av upp till 10 min, gav en P/ R-kvot av mellan 60 och 68%.Yield optimization at a full range of 20.8 m1 / min and a residence time of up to 10 minutes gave a P / R ratio of between 60 and 68%.
Diafiltrering med utspädning av ca 1 volymsenhet per volymsenhet ingående proteinlösning (1 + 1) gav ett utbyte av 90%. kempslfl Samma betingelser som i Exempel 7, bortsett från pH i detta fall var 5,5. i TABELL 14 Bestämning av proteingenomsläppligheten Försök Filtratflöde, m1 /min P/ R, % 1 3,5 41 2 6,9 47 3 14,1 t 62 4 20,8 72 5 24,3 74 Samma betingelser som i Exempel 9, bortsett från att bufferten i detta fall utgjordes av 2,2% albumin + 1,0 M NaCl + 0,02 M NaAc + 0,075 M glycin. Total salthalt: ca 1,0 M.Filtration with dilution of about 1 unit of volume per unit of volume of protein solution (1 + 1) gave a yield of 90%. kempsl fl The same conditions as in Example 7, except that the pH in this case was 5.5. in TABLE 14 Determination of Protein Transparency Experiment Filtrate fl fate, m1 / min P / R,% 1 3.5 41 2 6.9 47 3 14.1 t 62 4 20.8 72 5 24.3 74 Same conditions as in Example 9, except that in this case the buffer consisted of 2.2% albumin + 1.0 M NaCl + 0.02 M NaAc + 0.075 M glycine. Total salinity: about 1.0 M.
TABELL 15 Bestämning av proteingenornsläppligheten Försök Fnn-afflöde, :fu/mm P/R, % 1 3,5 57 2 6,9 67 3 14,1 78 4 20,8 88 5 28,1 90 20 30 502 820 xm 1 Försök utfördes med albumin som makromolekyl, för att visa inver- kan av salthalten på proteingenomsläppligheten, diafiltreringsmäng- den och utbytet. Den 4%-iga lösningen med Human Serum Albumin (HSA) erhállen från blodplasma, levererades av Pharmacia AB i Stock- holm, Sverige. Lösningen med albumin hade före filtreringen renats genom en kombinerad Cohn-fraktioneríng och lcomatografisteg.TABLE 15 Determination of protein gene permeability Experiment Fnn-af fl öde,: fu / mm P / R,% 1 3,5 57 2 6,9 67 3 14,1 78 4 20,8 88 5 28,1 90 20 30 502 820 xm 1 Experiments were performed with albumin as a macromolecule, to show the effect of the salinity on the protein permeability, the amount of filtration and the yield. The 4% solution of Human Serum Albumin (HSA) obtained from blood plasma was supplied by Pharmacia AB in Stockholm, Sweden. The solution with albumin had been purified before the filtration by a combined Cohn fractionation and lcomatography step.
Försöksbetingelser i enlighet med exempel 1, bortsett från att protein- koncentrationen var 1-2 A230-enheter. Bufferten utgjordes av 0,15 M NaCl + 0,02 M NaAc, vilket gav en total salthalt av 0,17 M.Experimental conditions according to Example 1, except that the protein concentration was 1-2 A230 units. The buffer consisted of 0.15 M NaCl + 0.02 M NaAc, giving a total salinity of 0.17 M.
TABELL 16 Bestämning av proteingenomsläppligheten Försök Filtratflöde, m1 /min P / R, % 1 3,5 34 2 6,9 39 3 14,1 50 4 20,8 51 5 24,3 50 Bestämning av proteingenomsläppligheten gav ett optimalt filtrat- flöde av 20,8 m1/ min.TABLE 16 Determination of protein permeability Experiment Filtrate fl fate, m1 / min P / R,% 1 3,5 34 2 6,9 39 3 14,1 50 4 20,8 51 5 24,3 50 Determination of protein permeability gave an optimal filtrate fl fate of 20.8 m1 / min.
Samma betingelser som i Exempel 11, bortsett från att bufferten i detta fall utgjordes av 1,0 M NaCl + 0,02 M NaAc, vilket gav en total salt- halt av ca 1,0 M. 10 502 820 16 TABELL 17 Bestämning av proteingenomsläppligheten Försök Filtratflöde, m1 /min P / R, % 1 3,5 39 2 6,9 57 3 14,1" 62 4 20,8 64 5 24,3 60 Diafiltrering med utspädning av ca 1 volymsenhet per volymsenhet ingående proteinlösning (1 + 1) gav ett utbyte av 85%.The same conditions as in Example 11, except that the buffer in this case consisted of 1.0 M NaCl + 0.02 M NaAc, which gave a total salt content of about 1.0 M. TABLE 17 Determination of protein permeability Test Filtrate fl fate, m1 / min P / R,% 1 3,5 39 2 6,9 57 3 14,1 "62 4 20,8 64 5 24,3 60 Diafiltration with dilution of about 1 unit of volume per unit of volume of protein solution ( 1 + 1) gave a yield of 85%.
Claims (10)
Priority Applications (22)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9402254A SE502820C2 (en) | 1994-06-23 | 1994-06-23 | Filtering macromolecule soln. with specific salt content |
| SE9500724A SE9500724D0 (en) | 1994-06-23 | 1995-02-24 | Filtration |
| EP95923651A EP0796269B1 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | Filtration method for removing viruses from virus-contaminated aqueous solutions |
| DK95923651T DK0796269T3 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | Filtration method for removing viruses from virus-contaminated aqueous solutions |
| CA002192683A CA2192683C (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | Filtration |
| MX9606639A MX9606639A (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | Filtration. |
| US08/750,664 US6486306B1 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | Filtration |
| AU28132/95A AU682274C (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | Filtration |
| PCT/SE1995/000777 WO1996000237A1 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | Filtration |
| DE69525176T DE69525176T2 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | FILTRATION METHOD FOR DETECTING VIRUSES FROM VIRUS-CONTAMINATED WATER SOLUTIONS |
| PT95923651T PT796269E (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | FILTRATION PROCESS FOR THE REMOVAL OF VIRUSES FROM AQUEOUS SOLUTIONS CONTAMINATED WITH VIRUSES |
| JP50306296A JP3676370B2 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | filtration |
| NZ288789A NZ288789A (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | Virus filtration solution |
| AT95923651T ATE212354T1 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | FILTRATION METHOD FOR REMOVING VIRUSES FROM VIRUS-CONTAMINATED AQUEOUS SOLUTIONS |
| ES95923651T ES2105992T3 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | FILTRATION PROCEDURE FOR THE ELIMINATION OF VIRUSES FROM A WATER SOLUTION CONTAMINATED WITH VIRUSES |
| DE0796269T DE796269T1 (en) | 1994-06-23 | 1995-06-22 | FILTRATION |
| FI965145A FI965145A0 (en) | 1994-06-23 | 1996-12-20 | filtration |
| NO19965523A NO320952B1 (en) | 1994-06-23 | 1996-12-20 | Process for virus filtration of a solution containing at least one macromolecule |
| GR970300038T GR970300038T1 (en) | 1994-06-23 | 1997-11-28 | Filtration |
| US09/511,953 US6399357B1 (en) | 1994-06-23 | 2000-02-23 | Filtration |
| US10/304,902 US20030191292A1 (en) | 1994-06-23 | 2002-11-26 | Filtration |
| US11/064,770 US20050203285A1 (en) | 1994-06-23 | 2005-02-23 | Filtration |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9402254A SE502820C2 (en) | 1994-06-23 | 1994-06-23 | Filtering macromolecule soln. with specific salt content |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE9402254D0 SE9402254D0 (en) | 1994-06-23 |
| SE9402254L SE9402254L (en) | 1995-12-24 |
| SE502820C2 true SE502820C2 (en) | 1996-01-22 |
Family
ID=20394525
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE9402254A SE502820C2 (en) | 1994-06-23 | 1994-06-23 | Filtering macromolecule soln. with specific salt content |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SE (1) | SE502820C2 (en) |
-
1994
- 1994-06-23 SE SE9402254A patent/SE502820C2/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE9402254D0 (en) | 1994-06-23 |
| SE9402254L (en) | 1995-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3676370B2 (en) | filtration | |
| JP2000510701A (en) | Purification of biologically active peptides from milk | |
| JP3771935B2 (en) | Method for purifying water-soluble plasma proteins | |
| US5250662A (en) | Albumin purification | |
| FI72143C (en) | Process for producing human interferon. | |
| AT391808B (en) | METHOD FOR PRODUCING A FACTOR VIII (AHF) CONTAINING FRACTION | |
| ATE39618T1 (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF A PREPARATION CONTAINING FACTOR VIII(AHF). | |
| JP2002508396A (en) | Method for preparing a virally safe factor VIII solution by filtration | |
| US4327182A (en) | Purification of influenza sub-unit vaccine | |
| SE502820C2 (en) | Filtering macromolecule soln. with specific salt content | |
| NO834346L (en) | PROCEDURE FOR CLEANING AND FRACTIONING HEPARIN | |
| US4222934A (en) | Preparation of albumin using ethanol | |
| EP0422769B1 (en) | Albumin purification | |
| JPH0725898A (en) | Homogeneous human immunointerferon subtype 26k and its production | |
| US4507205A (en) | Process for the purification of glucosaminoglucans | |
| EP0146107A2 (en) | Process for the successive preparation of human leucocytes interferon and of human gamma-interferon | |
| JP3025346B2 (en) | Method for producing heparin calcium | |
| US4164496A (en) | Preparation of albumin using PEG and EDTA | |
| CN1055095C (en) | Purification of white protein | |
| AU682274C (en) | Filtration | |
| JP2723169B2 (en) | Method for producing hemagglutinin | |
| Homer | An Improved Method for the Concentration of Antitoxic Sera | |
| Friedli et al. | Application of Ultrafiltration Techniques to the Production of Human Plasma Protein Solutions for Clinical Use | |
| JPH01281097A (en) | Production of human interferon | |
| JPH05222091A (en) | Separation of protein |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |