SA08290426B1 - بروتينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السلية واستعمالاتها - Google Patents
بروتينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السلية واستعمالاتها Download PDFInfo
- Publication number
- SA08290426B1 SA08290426B1 SA08290426A SA08290426A SA08290426B1 SA 08290426 B1 SA08290426 B1 SA 08290426B1 SA 08290426 A SA08290426 A SA 08290426A SA 08290426 A SA08290426 A SA 08290426A SA 08290426 B1 SA08290426 B1 SA 08290426B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- antigens
- polypeptide
- tuberculosis
- fusion
- sequence
- Prior art date
Links
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title abstract description 127
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title abstract description 127
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title abstract description 126
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title abstract description 101
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title abstract description 101
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 title abstract description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 87
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 127
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 110
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 103
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 38
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 32
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 32
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 22
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 22
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 14
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 72
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 abstract description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 53
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 10
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 70
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 66
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 36
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 33
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 33
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 32
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 30
- 230000004044 response Effects 0.000 description 29
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 27
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 22
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 17
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 16
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 13
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 13
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 13
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 10
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 8
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 102100028626 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Human genes 0.000 description 6
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 6
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 6
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- -1 dextran sulfates Chemical class 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 4
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 4
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 4
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 3
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 101150108812 proC gene Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101100224410 Solanum tuberosum DPEP gene Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N cysteic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CS(O)(=O)=O XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 2
- 208000032922 susceptibility to mycobacterium tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-(cyclohexylazaniumyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1CCCCC1 BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- MRTPISKDZDHEQI-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-(tert-butylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(C)(C)C MRTPISKDZDHEQI-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- NPDBDJFLKKQMCM-SCSAIBSYSA-N (2s)-2-amino-3,3-dimethylbutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)[C@H](N)C(O)=O NPDBDJFLKKQMCM-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloro-1,1,2,2-tetrafluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(F)Cl DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-UHFFFAOYSA-N 1,25-Dihydroxy-vitamin D3' Natural products C1CCC2(C)C(C(CCCC(C)(C)O)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CC(O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical group O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 1H-imidazole Chemical compound C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 101150011812 AADAC gene Proteins 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241001103582 Aelia Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 101150019028 Antp gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000004434 Calcinosis Diseases 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000581364 Clinitrachus argentatus Species 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004338 Dichlorodifluoromethane Substances 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101100234002 Drosophila melanogaster Shal gene Proteins 0.000 description 1
- 244000182691 Echinochloa frumentacea Species 0.000 description 1
- 235000008247 Echinochloa frumentacea Nutrition 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241001522878 Escherichia coli B Species 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N Gly-Cys-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC([O-])=O CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 101100321817 Human parvovirus B19 (strain HV) 7.5K gene Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 125000000773 L-serino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])*)C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- UTGQNNCQYDRXCH-UHFFFAOYSA-N N,N'-diphenyl-1,4-phenylenediamine Chemical compound C=1C=C(NC=2C=CC=CC=2)C=CC=1NC1=CC=CC=C1 UTGQNNCQYDRXCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000795633 Olea <sea slug> Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 101150107341 RERE gene Proteins 0.000 description 1
- 108010003581 Ribulose-bisphosphate carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000166071 Shorea robusta Species 0.000 description 1
- 235000015076 Shorea robusta Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000001355 anti-mycobacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000007767 bonding agent Substances 0.000 description 1
- 238000011095 buffer preparation Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229960005084 calcitriol Drugs 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N calcitriol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019404 dichlorodifluoromethane Nutrition 0.000 description 1
- 229940087091 dichlorotetrafluoroethane Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- UJKWLAZYSLJTKA-UHFFFAOYSA-N edma Chemical compound O1CCOC2=CC(CC(C)NC)=CC=C21 UJKWLAZYSLJTKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000000799 fusogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000030414 genetic transfer Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003979 granulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000001634 microspectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000009377 nuclear transmutation Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000011022 opal Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000035409 positive regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000001814 protein method Methods 0.000 description 1
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029284 trichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
الملخص: يتعلق الاختراع الحالي ببروتينيات اندماج fusion proteins محتوية على اثنان على الأقل من مولدات ضد المتفطرة السلية mycobacterium tuberculosis antigens . بصفة خاصة ، يتعلق الاختراع بيروتينات اندماج ثنائية التي تحتوي على اثنان من مولدات ضد المتفطرة السلية المستقلة individual M. tuberculosis antigens وبروتينات اندماج ثلاثية tri- fusion proteins محتوية على ثلاثة من مولدات ضد المتفطرة السلية وبروتينات الاندماج الرباعية tetra-fusion proteins التي تحتوي على أربعة مولدات ضد المتفطرة السلية وبروتينات الاندماج الخماسية penta-fusion proteins التي تحتوي على خمسة مولدات ضد المتفطرة السلية M. tuberculosis antigens وطرق لاستعمالها في التشخيص وعلاج والوقاية من عدوي السل tuberculosis infection . شكل 1 .
Description
-Y - بروتينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السنية واستعمالاتها Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses الوصف الكامل خلفية الإختراع ا ان هذا الطلب عبارة عن طلب Aja من الطلب رقم 848 oY والذي تم إيداعه في المملكة العربية السعودية بتاريخ ٠١ /٠١ / 5771 ١ه الموافق Co Yeo [NY / ١١ ان هذا الطلب عبارة عن طلب a من الطلب رقم 57760784 والذي تم إيداعه في المملكة © العربية السعودية بتاريخ ٠١ /٠١ / 77 1ه الموافق Ca Yeo / ١١ / ١١ يتعلق الاختراع الحالي ببروتينات اندماج fusion proteins محتوية على اثنان على الأقل من مولدات مضاد المتفطرة السلية mycobacterium tuberculosis antigens . بصفة خاصة يتعلق الاختراع بيروتينيات اندماج ثنائية التي تحتوي على اثنان من مولدات ضد المتفطرة السلية المستقلة individual M. tuberculosis antigens وبروتينات اندماج ثلاثية tri- fusion proteins محتوية Ve على ثلاثة من مولدات ضد المتفطرة السلية وبروتينات الاندماج الرباعية tetra-fusion proteins التي تحتوي على أربعة مولدات ضد المتفطرة السلية وبروتينات الاندماج الخماسية penta-fusion proteins التي تحتوي على خمسة مولدات ضد المتفطرة السلية M. tuberculosis antigens وطرق لاستعمالها في التشخيص وعلاج والوقاية من عدوي السل tuberculosis infection يعد السل tuberculosis مرض معد مزمن تسببه العدوى بالمتفطرة السلية M. tuberculosis ويعد ٠ مرض رئيسي في البلدان النامية علاوة على انه مشكلة متنامية في مناطق متقدمة من العالم حيث يتم اكتشاف حوالي + مليون حالة جديدة كما يموت ؟ مليون كل عام على الرغم من ذلك قد تكون العدوى غير عرضية asymptomatic لفترة زمنية كبيرة وعلى النحو الأكثر شيوعا يظهر المرض
دا على هيئة التهاب ola بالرئتين acute inflammation of the lungs ؛ مما ينشأ عنه حمي fever وكحة غير مولده للبلغم nonproductive cough . اذا لم يعالج ؛ فأن المشاكل الصحية الخطيرة والموت هو النتيجة النموذجية . عموما على الرغم من إمكانية السيطرة باستعمال علاج ممتد بالمضاد الحيوي | extended antibiotic therapy © ؛ يعد هذا العلاج غير كاف لمنع lil المرض . من الممكن أن تكون الحالات المرضية الفردية المصابة غير عرضية ؛ إلا أنها ناقله بالعدوى ؛ لبعض الوقت ؛ أضف إلى ذلك ؛ على الرغم من الإذعان لنظام العلاج السائد حاسم ؛ من الصعب مراقبة سلوك المريض . بعض المرضي لا يكملون فترة العلاج ؛ الذي قد يؤدي إلى علاج غير فعال ineffective . وحدوث مقاومة للعقارالمستخدم treatment فأن التطعيم « order to control the spread of tuberculosis السيطرة على انتشار الل Jal من ٠ للمرض accurate early diagnosis والتشخيص الفعال المبكر effective vaccination الفعال من أكثر الطرق فعالية live bacteria يعد ذات أهمية قصوى . حاليا ؛ يعد التطعيم بالبكتريا الحية . لحث المناعة الوقائية من أكثر المتفطرة شيوعا المستخدمة لهذا الغرض هي عصية كلاميت ؛ سلالة لا فرعية من 14.6078 . على الرغم من Bacillus Calmette-Guerin (BCG) جورين مصدر جدل وخلاف في بعض البلدان + مثل الولايات المتحدة الأمريكية BCG أن الأمان الفعالية ٠ التي لا تطعم العامة بهذا العامل . من الشائع أجراء تشخيص لمرض السل باستعمال اختيار + مشتق منقي من البروتين ( tuberculin PPD للجلد ؛ الذي يتضمن تعريض الجلد الداخلي
Antigen-specific T cell Tal عن استجابات Lan. (protein-purified derivative لدي موضع measurable induration النوعية لمولد الضد تصلب يمكن قياسه responses result الحقن بعد مرور حوالي 77-44 ساعة ؛ هذا يشير إلى التعرض لمولد الضد البكتيرية ٠
YAaYA
- ا Mycobacterial antigens . على الرغم من ذلك فأن الحساسية والنوعية هي مشكلة مصاحبة لهذا الاختبار ٠ ليس هناك امكانية لتمييز الإفراد المطعمون ب BCG من الأفراد المصابين . في حين ظهرت الملتقمات الكبيرة أنها تعمل كمستجيبات محيطية لمناعة المتفطرة السلية principal effectors of M. tuberculosis ؛ تعد خلايا T محثات سائدة لهذه المناعة . أن الدور الأساسي © لخلايا 7 في الحماية ضد عدوي المتفطرة السلية يتم توضيحة بالحدوث المتكرر للمتفطرة السلية في مرضي متلازمة نقص المناعة المكتسبة نتيجة لاستفاد خلايا 01004+7 المصاحب لعدوي فيروس نقص المناعة البشرية immunodeficiency virus (HIV) infection مقسنط. لقد أظهرت الخلايا CDA+T المتفاعلة البكترية أنها منتجات فعالة ل IFN-Y) gamma-interferon ) الذي بدوره ؛ يظهر أنه يطلق تأثيرات بكتيرية مضادة للملتقمات الكبيرة في anti- mice ofall .mycobacterial effects of macrophages in mice ٠ في حين أن دور J في الإنسان أقل وضوحا ؛ إلا أن الدرسات أطهرت أن : 3 1.25-dihydroxy-vitamin » سوا بمفردة أو في هيئة اتحاد كيميائي مع gamma-interferon أو عامل النخر الورمي-القا tumor necrosis factor-alpha ¢ ينشط الملتقمات البشرية لتتبيط جدوى المتفطرة activates human alu) macrophages to inhibit M . أضف إلى ذلك ؛ من المعروف أن 1711-5 تحت الملتقمات الكبيرة VO البشرية لتصنيع 1,25-dihydroxy-vitamin D3 . على نحو مماثل « أطهر interleukin-12 (IL- )12 أنه يلعب في حث المقاومة لعدوي المتفطرة السلية . لإجل مراجعة ale مناعة عدوي المتفطرة السلية ؛ أنظر Chan and Kaufmann « 1144 » السل Tuberculosis : التولد المرضي والوقاية والمكافحة « :81000 ( المحرر ) ¢ مطبعة ASM ؛ واشنطن ؛ مقاطعة كولومبيا . بالتالي توجد حاجة لتطعيمات محسنة ؛ وطرق محسنة لتشخيص والوقاية من وعلاج مرض السل treating tuberculosis ٠ . YaYA
- ها الوصف العام للاختراع يتعلق الاختراع الحالي ببروتينات اندماج fusion proteins مولدات ضد المتفطرة السلية mycobacterium tuberculosis antigens . عموماً ؛ أنه يتعلق بمتعدد ببتيدات اندماج fusion polypeptides التي تحتوي على اثنان أو اكثر من مولدات ضد المتفطرة السلية ؛ متعدد © نيكليوتيدات مشفرة polynucleotides encoding لهذه الببتيدات المتعددة polypeptides ؛ و طرق لاستعمال polypeptides ومتعدد نيكليوتيدات polynucleotides في التشخيص والعلاج والوقاية من عدوي المتفطرة السلية treatment and prevention of M. tuberculosis infection . يعتمد الاختراع الحالي ؛ جزبيا ؛ على اكتشاف المخترعون لمتعدد النيكليوتيدات polynucleotides polynucleotides التي تحتوي على عدد من اثنان (A) خمسة تسلسلات تشفير المتفطرة السلية ٠ التي تنتج بروتينات اندماج ماشوبة all recombinant fusion proteins تحتفظ بتولد المناعة immunogenicity وتولد الضد antigenicity لهذه الأجزاء المستقلة . وصفت بروتينات الاندماج الموصوفة هنا في السياق كلا من استجابات الخلية 7 و خلية 3 ؛ وفقا لما تم وصفة بواسطة SS خلية cell proliferation 1 . وانتاج cytokine وإنتاج جسم مضاد antibody . علاوة على ذلك ؛ يستخدم بروتين اندماج fusion protein باعتباره جين مناعي immunogen مع ٠ مواد مساعدة في الجسم الحي SIS HEY adjuvants in vivo من المناعة الموسطة بالخلية cell- 1 والمناعة الخلطية للمتفطرة السلية humoral immunity to M. tuberculosis . إضافة لذلك ¢ يتم عمل بروتين اندماج بواسطة تركيب اندماج ثم يستخدم في صياغة لقاح vaccine مع مادة مساعدة adjuvant لكي تمنع حماية طويلة الأجل في حيوانات ضد تطور مرض السل animals against the of tuberculosis . يعد بروتين الاندماج fusion protein جين مناعي اكثر أ
= 1 - فاعلية more effective immunogen من خليط من مكونات بروتين mixture of the two proteins منفرد الخاصة به . في نموذج محدد للاختراع ؛ قد تصاغ متعددة الببتيدات polypeptides للمتفطرة السلية المفصولة أو المنقاة باعتبارها تركيبات صيدلية خاصة بالإعطاء إلى شخص خاضع للاختبار في حالة منع Ss © المعالجة من العدوى بالمتفطرة السلية . قد يتم تعزيز المولدة المناعية لبروتين الاندماج بتضمين مادة مساعدة adjuvant . في مظهر أخر للاختراع ؛ تستخدم متعدد نيكليوتيدات polynucleotides المفصولة أو المنقاة لإنتاج مولدات مضاد لمتعدد ببتيد اندماج مأشوب في أنابيب الاختبار recombinant fusion ا polypeptide antigens in vitro . على نحو بديل ؛ قد يتم إعطاء متعدد النيكليوتيدات polynucleotides ٠ مباشراً إلى شخص خاضع للاختبار باعتبارها لقاحات vaccines DNA لإحداث قدرةٍ على التعديل الجيني لمولد المضاد في الشخص الخاضع للاختبار ؛ و الحث التالي لذلك Gland منيعة ضد المتفطرة السلية anti-M. tuberculosis immune response . كذلك يعد هدف للاختراع الحالي أن يتم استخدام متعددة الببتيدات polypeptides في معايرات في أنابيب الاختبار بغرض كشف أجسام مضادة خلطية أو مناعة موسطة بالخلية ضد المتفطرة السلية ٠ لتشخيص العدوي أو مراقبة تقدم المرض . على نحو إضافي ؛ قد تستخدم متعددة الببتيدات باعتبارها عامل تشخيص في الجسم all في شكل اختبار للجلد عبر الأدمة . بديلا عن ذلك؛ قد يتم استخدام متعددة الببتيدات باعتبارها جينات مناعية لتوليد أجسام مضادة ضد المتفطرة السلية في حيوان غير بشري . يمكن استخدام الأجسام المضادة للكشف عن مولدات المضادة المستهدفة في الجسم الحي وفي أنابيب الاختبار . اه
0 =
شرح مختصر للرسومات شكل ١ أ و ١ب : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( برقم تعريف تسلسل : ١ ) وتسلسل حمض أميني amino acid sequence ( برقم تعريف تسلسل : (Y من ثلاثي- بروتين اندماج tri- fusion protein 5212 -35-10119م2 ) paras Mib2A ) .
© شكل ؟ : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ) برقم تعريف تسلسل : ؟ ) وتسلسل حمض أميني amino acid sequence ( برقم تعريف تسلسل : 4 ) من ثلاثي- بروتين اندماج tri-fusion Mth39A ( 1111- protein DPV-End14 مصمم ) . شكل arly : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( برقم تعريف تسلسل : 0( وتسلسل حمض أميني amino acid sequence (برقم تعريف تسلسل ٠١ ) من ثلاثي- بروتين اندماج tri-
. fusion protein TbRa3-38 KD-Tb38-1 ٠ رقم تعريف التسلسل : 7 ) وتسلسل ( nucleotide sequence تسلسل النيكليوتيد : at شكل ؛ أ- fusion protein لبروتين اندماج (A : (رقم تعريف التسلسل amino acid sequence حمض أميني . TbH9-Tb38-1 ثنائي رقم تعريف التسلسل: 5 ) وحمض ( nucleotide sequence أ-دي : تسلسل النيكليوتيد o شكل 38KD-Tb38-1-DPEP رباعي fusion protein لبروتين اندماج )٠١ أميتى ( رقم تعريف التسلسل ٠ . ) 1701-2 مشار إليه اختصرا ب ) 3 (VY : رقم تعريف التسلسل ) nucleotide sequence و أب : تسلسل النيكلوتيد Js fusion protein لبروتين اندماج ) ١١ : amino acid sequence وتسلسل الحمض الأميني . (Mtb88f مشار إليه اختصارا ب ) Erd14-DPV-MSL-MTCC2 خماسي
AN = - شكل 7أ-لاب : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل ١١9 ) وتسلسل الحمض ١ لأميني amino acid sequence ( رقم تعريف التسلسل : (VE لبروتين اندماج fusion protein رباعي FRDI4-DPV-MTI-MSL (مشار إليه اختصارا ب 0016461 ) شكل 8 أ-/ ب: تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل (Vo: © والحمض الأميني amino acid (رقم تعريف التسلسل : ١١ ) لبروتين اندماج fusion protein
رباعي DPV ~MTI-MSL-MTCC2 ( مشار إليه اختصارا ب 140:716) . شكل 4أ-1ب : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم التعريف التسلسل: ١١7 ) وتسلسل الحمض الأميني amino acid sequence ( رقم التعريف التسلسل : ١8 ) لبروتين fusion leas) DPV-MTI-MSL 28 protein ( مشار إليه اختصارا ب 1105316 ) . ٍ
) ١4 رقم تعريف التسلسل: ( nucleotide sequence تسلسل النيكليوتيد : ب٠ “fre شكل ve لبروتين ) ٠١0 : رقم تعريف التسلسل ( amino acid sequence لأميني ١ وتسلسل الحمض ٠ ) 1405611" مشار إليه اختصارا ب ( T6H9-DPV-MTI Dl الاندماج ) 7١ : رقم تعريف التسلسل ( nucleotide sequence شكل ١١أ و ١١ب: تسلسل النيكليوتيد لبروتين (VY رقم تعريف التسلسل: ( amino acid sequence وتسلسل الحمض الأميني
٠ ) Mib36f مشار إليه اختصارا ب ( Erd14 ~DPV-MTI الاندماج ٠ (YY رقم تعريف التسلسل: ( nucleotide sequence تسلسل النيكليوتيد td Y-NY شكل رقم تعريف التسلسل: 4 * ) لبروتين اندماج ( amino acid sequence لأميني ١ وتسلسل الحمض ٠ ) 145598 مشار إليه اختصارا ب ( 71511985 fusion protein
YAY A
ا شكل “١أ-؟ اب : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل : (Yo وتسلسل الحمض ١ لأميني amino acid sequence ) رقم تعريف التسلسل : 7 ( لبروتين الاندماج الثنائي Ral2-DPPD ( مشار إليه اختصارا ب 141024 ) . شكل ؛١أ-؛ 1١و : استجابات تكاثر خلية T cell proliferation لستة من الخاضعين للدراسة
© موجبة الاختبار PPD عند الحث باثنان من بروتينات الاندماج و أجزائها المستقلة .
شكل gh o-Tre : إنتاج 1771-7 لسنة من الخاضعين للاختبار + PPD عند الحث باثنان من lif اندماج fusion proteins وأجزائها المستقلة . شكل H&S : با١ 1-1 ١١ خلية T cell proliferation لفئران محصنة ببروتين اندماج fusion protein أو أجزائه المستقلة ومادة مساعدة adjuvant .
٠ شكل ١7 : إنتاج TFN-Y لفئران محصنة ببروتين اندماج fusion protein أو أجزائه مستقلة ومادة مساعدة adjuvant . شكل YA : إنتاج 11-4 لفئران محصنة ببروتين اندماج fusion protein أو أجزائه المستقلة ومادة مساعدة adjuvant . شكل ya أ 5 او : تركيزات جسم مضاد antibody لامصال old محصنة بيروتين اندماج وأجزائه المستقلة ومادة مساعدة adjuvant .
Yo شكل ١؟أ-10ج : نسبة الباقين على قيد الحياة من الخنازير الهندية بعد اختبار aerosol المتفطرة السلية . يتم صياغة بروتينات الاندماج C(20A) mtb629A,mt632 A 1 أو SBAS2(20B) أو SBAS7(20C) واستعماله كمواد مناعة في الخنازير الهندية قبل الاختبار بالبكتيريا immunogen in guinea pigs prior to challenge with bacteria . تعد BCG مجموعة مقارنة موجبة the positive control .
YAYA
ةل شكل ( iY) )و )=<( : حث تكائر Stimulation of proliferation إنتاج 1777-7 في خلايا 1 النوعية لمولد الضد TBH بواسطة بروتين الاندماج 70119-7638-1 . شكل ؟؟أ- "اب : حث Stimulation of proliferation fl وانتاج 1777-7 في خلايا 1 نوعية ل 1538-1 بواسطة بروتين الاندماج TOHO-T638-1 . © شكل 3؟7؟أ-اب: cas تكائر Stimulation of proliferation وانتاج IFN-y في خلايا T من الواضح في السابق أنها تستجيب مولدات الضد antigens 1611-9 و 1038-1 بواسطة بروتين الاندماج TbH9-Tb38-1 . الوصف التفصيلى يتعلق الاختراع الحالي بمولدات الضد antigens المفيدة لعلاج والوقاية من مرض السل treatment and prevention of tuberculosis ٠ « متعدد النيكوتيدات المشفرةٍ لموالدات الضد polynucleotides encoding such antigens وطرق خاصة باستعمالها . تعد مولدات الضد antigens للاختراع الحالي عبارة عن متعدد ببتيدات اندماج fusion polypeptides لمولدات الضد antigens للمتفطرة السلية ومتحولات منها . بدرجة أكثر نوعية ؛ مولدات ضد الاختراع الحالي تتضمن اثنان على الأقل من polypeptides للمتفطرة السلية التي يتم ادماجها في جزئ متعدد ببتيد اندماج fusion polypeptide molecule Vo اكبر . قد تتضمن مولدات الضد للاختراع الحالي ؛ بصورة إضافية ؛ أجراء أخري مصممة لتعزيز تولد المناعة immunogenicity الخاصة بمولدات الضد أو لتحسين مولدات all هذه في alae أخري ؛ مثل عزل مولدات الضد هذا عبر إضافة الصورة الممتدة من بقايا histidine لدي طرف Age الضد . -١ fo مولدات الضد النوعية للمتفطرةٍ السلية -M. tuberculosis specific antigens
١١ - مولدات الضد antigens للاختراع الحالي عبارة عن صورة تمثيلية للأشكال ١ أ حتى CT متضمنة متجانسات homologues ومتحولات لمولدات الضد variants of those antigens . قد يتم تعديل مولدات المضاد هذه ؛ على سبيل المثال ؛ بإضافة تسلسلات ببتيد رابطة linker peptide sequences كما هو موصوف أعلاه . يمكن إدخال الببتيدات الرابطة linker peptides © هذه بين واحدة أو اكثر من متعددة الببتيدات polypeptides التي تجمع كل واحدة من بروتينات الاندماج الموجودة في الأشكال ١أ و ١ب . تكون مولدات مضاد أخري خاصة بالاختراع الحالي Ble عن مولدات مضاد موصوفة في الأشكال ١ أ و ١١ب التي تم ترابطها بمولد مضاد معروف من المتفطرة السلية ؛ مثل مولد المضاد 38KD الموصوف مسبقا (برقم تعريف تسلسل : 37 ) Andersen and Hansen) ¢ 1189 ؛ ple المناعة من العدوي . #7 : الصفحات VEA-YEAY Genband Accession No.M30046 « 0٠ ) . 0[ ؟- معايرات المولدة المناعية immunogenicity assays تتميز مولدات المضاد الموصوفة في السياق الحالي ؛ وبروتينات مولدة المناعة منها immunogenic portions thereof ¢ بالقدرة على حث استجابة مولدة المناعة immunogenic response . على نحو أكثر تخصيصا ؛ تتميز مولدات المضاد بالقدرة على حث تكائر Stimulation of proliferation ٠ و أو إنتاج cytokine ) أي إنتاج interferon-y 5 [ أو interleukin-12 ) في LA 7 و WA 111 وخلايا 8و / أو ملتهمات الجراثيم الكبيرة المشتقة من شخص ( ذو (Aelia للمتفطرة السلية macrophages derived from an M. tuberculosis- immune individual . سوف يعتمد أختيار نوعية الخلية الخاصة بالاستخدام في تقييم استجابة مولدة المناعة لمولدة المضاد على الاستجابة المرغوبة . على سبيل المثال ؛ يتم تقييم interleukin- Yo 12 على النحو الأكثر سهولة باستخدام مستحضرات محتوية على خلايا 3 و / أو ملتهمات جراثيم حا ay
كبيرة macrophages . يكون الشخص ذو المناعة للمتفطرة السلية هو الشخص الذي يدرك على أنه مقاوم لتطور مرض السل بمقتضي احتوائه بمقدار فعال من استجابة خلية 1 للمتفطرة السلية ( بمعني ؛ خالي بشكل جوهري من أعراض المرض ) . يتم تمييز هولاء الأشخاص بناءا على استجابة إيجابية لاختبار الجلد داخل الأدمة بشكل قوي لبروتينيات السل tuberculosis proteins ) (PPD © ( أي ؛ ما تزيد عن حوالي ٠ مم قطر تصلب ) و غياب أي علامات أو أعرارض لمرض السل . قد يتم تحضير T WDA وخلايا NK وخلايا 8 وملتهمات جراثيم كبيرة مشتقة من أشخاص
ذوي مناعة للمتفطرة السلية باستخدام طرق معروفة لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال . على سبيل المثال ؛ قد يتم استخدام مستحضر من PBMCs ( بمعني ؛ خلايا دم أحادية النواة محيطية ) بدون فصل إضافي لخلايا المكون . عموما يمكن تحضير 7133408 ؛ على سبيل ٠ المثال؛ باستخدام الطرد المركزي للكثافة خلايا ' 210017 " ( معامل وينفروب ؛ نيويورك ) . كذلك قد تتم تتقية خلايا 7 للاستخدام في المعايرات الموصوفة في السياق Mall مباشرا من PBMCs + على نحو بديل ¢ قد يستخدم خط خلية 7 معزز الفعال ضد بروتينات متفطرة ٠ أو نسائل خلية 7 الفعالة بالنسبة لبروتينات متفطرة مستقلة . قد يتم تكوين نسائل خلية 1 هذه بواسطة ؛ على سبيل المثال » زراعة PBMCs من أفراد ذوي مناعة للمتفطرة السلية باستخدام بروتينات متفطرة لمدة -١ ٠5 ؟؛ أسابيع © ويسمح ذلك فقط بتمدد خلايا 7 محددة بالبروتين المتفطر ؛ مؤديا إلى خط مؤلف فحسب من هذه الخلايا . بعد ذلك قد يتم تشكيل نسائل لهذه الخلايا ثم اختبارها بالبروتينات المستقلة ؛ بطرق معروفة لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال ¢ بغرض تحديد نوعية خلية 1 بشكل مضبوط بدرجة أكثر . على وجه العموم ؛ أن مولدات المضاد التي كانت ايجابية الاختبار في المعايرات الخاصة بتكائر و/ أو إنتاج cytokine ( أي ؛ إنتاج interferon-y و / أو (interleukin-12 ٠ التي أجريت باستخدام Wa 7 وخلايا NK وخلايا 8 و / أو ملتهمات الجراثيم
١٠“ - الكبيرة macrophages المشتقة من شخص ذو Aelia المتفطرة السلية تدرك على انها مولدات لمناعة . قد يتم أجراء معايرات كهذه ؛ على سبيل المتال ؛ بالإجراءات التمثيلية الموصوفة أدناه . قد يتم تمييز أجزاء مولدة المناعة من مولدات المضاد المذكورة باستخدام معايرات مشابهة ؛ وقد يتم عرضها في نطاق متعددة الببتيدات polypeptides الموضحة في السياق الحالي . © يتم تقييم قدرة متعدد الببتيد ( على سبيل المثال ؛ مولد المضاد أو ha أو أشكال متغايرة أخر wie
( بغرض حث تكائر Stimulation of proliferation الخلية بواسطة تلامس الخلايا ( على سبيل المثال ؛ خلايا T و/أو (NK WA بالببتيد وقياس تكاثر الخلايا . على وجه العموم ؛ يتراوح مدى كمية متعدد الببتيد التي تعد كافية لتقييم حوالي ٠١ م خلايا من حوالي ٠١ نانوجرام / مل إلى حوالي ٠٠١ ميكروجرام/ مل og نحو مفضل يقدر بحوالي على نحو نموذجي تجري حضانة
٠ متعدد الببتيد incubation of polypeptide مع الخلايا في درجة حرارة TV درجة مئوية لمدة تقدر بحوالي ستة أيام . تلي الحضانة بمتعدد الببتيد ؛ معايرة الخلايا للاستجابة التكاثرية ؛ التي قد يتم تقييمها بطرق معروفه لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال ؛ مثل خلايا كاشفة لنبضة تيميدين موسوم بالأضعة exposing cells to a pulse of radiolabeled thymidine و قياس اندماج الوسم في DNA خلوي measuring the incorporation of label into cellular DNA . عموما ¢
VO يتم إدراك متعدد الببتيد polypeptide الذي يؤدي إلى زيادة مقدرةٍ بثلاثة إضعاف على الأقل في الخلفية المذكورة أعلاه عن التكاثر ( أي lll الملحوظ بالنسبة للخلايا المزروعة بدون متعدد (polypeptide asia) لتكون قادرة على حث induce proliferation ASH + قد يتم تقييم قدرة peptide على حث إنتاج interferon-y و /أو interleukin-12 في الخلايا بواسطة تلامس الخلايا مع peptide ثم قياس مستوي interferon-y أو interleukin-12 المنتج بالخلايا-
٠١ خلية من حوالي ٠١ التي كافية لتقييم حوالي peptide .على وجه العموم ؛ يتراوح مدي كمية ٠
اس
- ١ o—
نانوجرام / مل إلى حوالي ٠٠١ ميكروجرام / مل وتكون على نحو مفضل حوالي ٠١ ميكروجرام/
مل . فد يتم تثبيت «polypeptide لكنه لا يحتاج لذلك ؛ على داعم صلد » مثل خرزة أو كرية
دقيقة قابل للتحلل الحيوي ؛ مثل الموصوفة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 1188514
و8075105 على نحو نموذجي تجري حضانة متعدد الببتيد incubation of polypeptide مع
© الخلايا في درجة حرارة YY درجة مئوية لمدة ستة أيام ؛ تلي الحضانة مع incubation with full
polypeptide ؛ معايرة الخلايا بالنسبة ل interferon-y و/أو interleukin-12 ( أو واحدة أو اكثر
من الوحدات الفرعية منه one or more subunits thereof ؛ والذي قد يتم تقييمه بطرق معروفة
لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال ؛ Jie معايرة سوربنت مناعي مرتبط بالأنزيم enzyme-
linked immunosorbent assay (ELISA) أو في Alls وحدة فرعية P70 11-12 ؛ معايرة حيوية
Ve مثل معايرة قياس تكاثر خلايا 1 . على وجه العموم ¢ يعتبر polypeptide الذي يؤدي إلى إنتاج
"1-٠١ طافية مزروعة ( محتوية على sale لكل مل interferon-y بيكوجرام على الأقل من ٠
خلية 1 لكل مل) ذو قدرة على حث إنتاج interferon-y ؛ يعتبر polypeptide الذي يبحث على
إنتاج ٠١ بيكوجرام / مل على الأقل من الوحدة الفرعية P70 subunit 11-12 ؛ و/أو على الأقل
٠ بيكوجرام / مل من الوحدة الفرعية P40 subunit 11-12 ؛ لكل "٠١ ملتهمات جراثيم كبيرة
macrophages © أو BUYS (و لكل ؟ PBMC ٠١# ) على انه قادر على حث إنتاج ]1 12
عموما ؛ تعد مولدات المضاد للمولد المناعي هي تلك مولدات المضاد التي تحث على FEI و
/ 0 إنتاج cytokine ( بمعني « إنتاج interferon-y و/أو 2-و:6لن101616 ) في T WA ؛ خلايا
NK ؛ B Wa و/أو ملتهمات جراثيم كبيرة macrophages المشتقة من حوالي Yo 1 على الأقل
Yo من أفراد ذوي مناعة للمتفطرة السلية . من بين مولدات المضاد ذات المولد المناعي ؛ قد يتم تمييز
متعددة الببتيدات polypeptides ذات الخصائص العلاجية الفائقة اعتمادا على مقدار الإستجابات
ve — - في المعايرات المذكورة أعلاه واعتمادا على النسبة المئوية للأفراد الذين من أجلهم يتم ملاحظة الاستجابة . بالإضافة إلى ذلك ؛ سوف لا تحث مولدات المضاد المتميزة بخصائص علاجية فائقة Je superior therapeutic properties التكاثر و | أو إنتاج cytokine في أنابيب الاختبار في خلايا مشتقة من ما يزيد عن حوالي YO 7 من الأفراد الذين ليسوا ذوي مناعة للمتفطرة السلية ؛ © بذلك إزالة الاستجابات التي لا تؤدي على وجه التخصيص إلى خلايا مستجيبة للمتفطرة السلية . تتميز تلك مولدات المضاد التي تحث على استجابة بنسبة مئوية مرتفعة من مستحضرات خلية T ء خلية NK ؛ Ada 5 و / أو ملتهمات جرائيم كبيرة macrophages من أفراد ذوي مناعة للمتفطرة السلية ( بحدوث منخفض من الاستجابات في مستحضرات خلية من أشخاص آخرون ) بخصائص علاجية فائقة superior therapeutic properties . Ve كذلك قد يتم تمييز مولدات المضاد ذات الخصائص العلاجية الفائقة Antigens with superior lel therapeutic properties على قدرتها على التقليل من حدة العدوي بالمتفطرة السلية في حيوانات التجريبية experimental animals ؛ عندما تم إعطائها على هيئة لقاح vaccine . يتم وصف مستحضرات لقاح مناسبة للاستخدام على حيوانات تجريبية experimental animals بالتفصيل فيما يلي . قد يتم تحديد الفعالية اعتمادا على قدرة مولد المضاد بحيث يوفر على الأقل No حوالي Low انخفاض في إعداد البكتريا و/أو على الأقل حوالي 4٠ 7# نقص في نسبة الوفيات تالي للإصابة بالعدوى التجريبية . تتضمن حيوانات تجريبية experimental animals مناسبة الفئران mice وخنازير غينيا guinea pigs والحيوانات الرئيسية ( رتبة من الثدييات ) . —Y/0 فصل تسلسلات تشفير isolation of coding sequences . يتعلق الاختراع الحالي أيضا بجزيئات حمض نووي nucleic acid molecules التي تشفر متعدد ٠ - ببتيدات اندماج fusion polypeptides للمتفطرة السلية . في نموذج محدد بطريقة المثال في مقطع لحا
١١ -
1 أدناه ؛ يتم تشييد ثلاثة عشر تسلسلات تشفير اندماج المتفطرةٍ السلية . وفقا للاختراع الحالي ؛ يمكن استخدام أي تسلسل نيكلوتيد nucleotide sequence الذي يشفر تسلسل حمض أميني amino acid sequence 3550 اندماج fusion protein بغرض تكوين جزيئات مأشوبة generate
٠ coding sequence التي توجه التعديل الجيني لتسلسل التشفير recombinant molecules أو clone full-length coding sequences من أجل تشكيل نسائل لتسلسلات تشفير بالطول تام © homologous variants to generate the أشكال متغيرة متجانسة لتوليد متعدد نيكلوتيدات اندماج لتسلسلات النيكلوتيد ea موسوعة من أي DNA ) مسابير ( مجسات ¢ fusion polynucleotides أو مكملاتها التي تم الكشف عنها في السياق الحالي بغرض ترشيح nucleotide sequences مصنوعة من سلالات متعددة للمتفطرة السلية cDNA screen a genomic مجموعة مجينية لتمييز تسلسل التشفير لكل مكون مستقل . كذلك قد يجري فصل تسلسلات التشفير بواسطة ٠ باستخدام اثنان من تجمعات مادة polymerase chain reactions (PCR) تفاعلات سلسلة بوليمراز مصممة على قاعدة من تسلسلات oligonucleotide primer pools اوليجونيكلوتيد بطانية منحلة
تشفير coding sequences التي تم الكشف عنها في السياق الحالي .
كذلك يتعلق الاختراع بفصل أو تنقية متعدد نيكلوتيدات لتسلسلات نيكوتيد purified polynucleotides complementary Vo بأرقام تعريف تسلسل ١و "١و 550 لو قو ١١و SIV ٠١ و ١7 و ١14 و 7١ و YT و YO »؛ يتم توفير متعدد نيكلوتيد الذي يهجن polynucleotides that selectively hybridize إلى تسلسل من أرقام تعريف تسلسل ١ و أو #و لاو و ١١و "١و ١5 و1١ و YY و YY و Yo أو تسلسلها المكتمل تحت ظروف أقل صرامة ويشفر بروتين الذي يحتفظ بالمولدة المناعية لبروتينات الاندماج من أرقام تعريف التسلسل : أو st ١و هو١٠و؟١ 0٠ و 4 و ١١و ١8 و ٠7و "7و YE 71 . بطريقة المثال وليس الحصر ؛ تكون حالات
Zw - تمثيلية أقل صرامة كما يني (أنظر أيضاً Shilo , Weinberg » 198 » أجراءات الجمعية الأكاديمية الدولية . الولايات المتحدة الأمريكية العدد VA : الصفحات 1797-797489 ) : تحضر مرشحات محتوية على DNA لمدة 7 ساعات في درجة حرارة ٠ درجة مئوية في محلول متضمنا
Tris-HCl Tris-HCI و +0 مليمول تريس -حمض هيدروكلوريك XSSC/ و formamide 7 Yo © ( بتركيز هيدروجيني (V.0 pH و © مليمول من EDTA و ).+ 7 من PVP 3 ).+ من Ficoll و 71١ من BSA و 000 ميكروجرام /مل من DNA لنظفة سلمون denatured salmon محولة الصفحات الطبيعية . تجري عمليات التهجين Hybridizations في نفس المحلول بالتعديلات التالية : يتم استخدام 00007 ZL 2170 و 0.07 7 Ficoll و Zo JY 858 و ٠٠١ ميكروجرام/مل من DNA نظفة سلمون 7٠١ dextran sulfates denatured salmon ( وزن / حجم ) و مسبار ٠ موسوم Jabeled probe -م بقاس د ؟ ١. دورة لكل دقيقة . يجري تحضين المرشنحات Tilters are incubated في خليط التهجين hybridization mixture لمدة ٠١-١86 ساعة في درجة حرارة 40 درجة مئوية وتغسل بعد ذلك لمدة در ١ ساعة في درجة حرارة 00 درجة مئوية في محلول محتوي على X SSC 2 و YO مليمول من تريس-حمض هيدروكلوريك Tris-HCI ( بتركز هيدروجيني (Vet pH و © مليمول من 2014 و ).+ .7 SDS . ويتم استبدال محلول الغسل ٠ _ بمحلول حديث الصنع ثم يتم تحضنة لمدة ر١ إضافية في درجة حرارة Tr درجة مئوية . تنشف المرشحات حتى تجف ثم تعرض للتصوير بالإشعاع الذاتي autoradiography . إذا كان ضروريا ٠ تغسل المرشحات لمرةٍ ثلاثة في درجة حرارة 10 إلى TA درجة مئوية ويعاد تعريضها alll . تعد ظروف أخرى أقل صرامة التي قد تستخدم معروفة جيدا في هذا المجال ( على سبيل المثال ؛ كما هو مستخدم لعمليات التهجين employed for cross-species hybridizations من النوع ٠ المستعرض). حا
- ١8 -
في نموذج مفضل Hal ؛ يتم توفير متعدد نيكلوتيد polynucleotide الذي يهجن إلى تسلسل التشفير من أرقام تعريفات التسلسلات : ١و 7١و go و 4و ١١و “١و 50 SSI 7١ و 77 و Yo أو تسلسلها المكمل تحت ظروف عالية الصرامة ويشفر بروتين الذي يحتفظ بالمولدة المناعية لبروتينات الاندماج من أرقام تعريفات التسلسلات : ١و gE 71و 4و ١٠و ١7 © و ١14 و ١4 و 1# و ١7و 77 و YE و YT بطريقة المثال وليس التحديد ؛ تكون ظروف تمثيلية عالية الصرامة كما يلي يجري تهجين مسبق لمرشحات متضمنة DNA لمدة A ساعات لمدة ليلة في درجة حرارة 65 درجة مئوية في محلول منظم مؤلف من SSC * 6 و ٠٠ مليمول من تريس -<حمض هيدروكلوريك Tris-HCI (بتركيز هيدروجيني pH 7.5 ) و١ مليمول من EDTA و 7... 7 01700و Ficoll ZY و ".+ 3588و 5٠٠١ ميكروجراء/مل من DNA لنظفة ٠ سلمون denatured salmon محولة الصفات الطبيعية . تهجن مرشحات لمدة 8؛ ساعة في أدرجة حرارة 10 درجة مئوية في خليط مهجن مسبقا محتوي على ٠٠١ ميكروجرام/مل من 1118 لنطفة سلمون denatured salmon محولة الصفات الطبيعية و ه-+؟ ٠١ X دورة لكل دقيقة من مسبار موسوم “P-labeled probe . يجري Jue المرشحات في درجة حرارة VV درجة مئوية لمدة ١ ساعة في محلول متضمنا SSC 2% 5 تت لطر ١ت Ficoll Z و BSA ١ ٠ . ويتبع ذلك بالغسل في 0.١ * 850 في درجة حرارة ٠ * درجة مئوية لمدة fo دقيقة قبل التصوير بالإشعاع الذاتي autoradiography . تعد ظروف أخرى عالية الصرامة التي قد يتم
استخدامها معروفة جيدا في المجال . كذلك في نموذج مفضل أخرء يتم توفير متعدد نيكلوتيد polynucleotide الذي يهجن إلى تسلسل تشفير من أرقام تعريفات التسلسلات : ١و oF دولاو 53 ١١و "١و 510 7١و 4١و 7١ ٠ و YF و Yo أو تسلسلها المكمل تحت ظروف متوسطة الصرامة ويشفر بروتين الذي يحتفظ بالمولدة المناعية لبروتينات الاندماج من ارقام تعريفات التسلسلات : 7و و أو 4و ١٠و ١"
١8 تكون ظروف تمثيلية متوسطة الصرامة . YT و 0٠7و ؟؟ و 74 و ٠8 و ١7 و ٠4 و يلي . تجري معالجة مسبقة لمرشحات LS Exemplary conditions of moderate stringency لمدة 7 ساعات في درجة حرارة 00 درجة مئوية في محلول متضمنا DNA محتوية على 5 من Jf ميكرو جرام ٠٠١ و © / 5 و Denhart's solution و محلول درنهارت 6“ SSC محولة الصفات الطبيعية . تجري عملية التهجين في denatured salmon لنطفة سلمون DNA 5 -م32 labeled probe دورة لكل دقيقة من مسبار موسوم YX 7١-8 نفس المحلول ويتم استخدام لمدة hybridization mixture في خليط تهجين Filters are incubated تحتضن المرشحات .
To دقيقة في Ve ساعة في درجة حرارة 00 درجة مئوية وبعد ذلك تغسل مرتين لمدة 7-٠ تنشف المرشحات حتى تجف .808 7 ١ و ١ X SCC درجة مئوية في محلول محتوي على تعد ظروف أخرى متوسطة الصرامة التي . autoradiography وتعرض للتصوير بالإشعاع الذاتي ٠ درجة VY قد يتم استخدامها معروفة جيداً في هذا المجال . يجري غسل المرشحات في درجة حرارة . 8087 +.) 52 X SSC مئوية لمدة ساعة واحدة في محلول متضمنا polypeptides encoded by the coding uid متعددة ببتيدات مشفرة بواسطة تسلسلات —¢ [0 . sequences خاص بالاختراع الذي يشفر polynucleotide للاختراع ؛ قد يتم استخدام متعدد نيكلوتيد La, No أو أجزاء صغيرة منه أو مكافئات وظيفية منه بغرض توليد جزيئات fusion protein بروتين اندماج مأشوبة التي توجه القدرة على التعديل الجيني لبروتين nucleic acid molecules حمض نووية الاندماج أو أجزاء صغيرة منه أو مكافئات وظيفية منه خلايا عائل مناسبة . قد يتم تغير منتجات كهذه ؛ بواسطة المعالجة polynucleotides متعدد ببتيد الاندماج المشفرة بواسطة متعدد نيكلوتيدات ٠ molecular manipulation of the coding sequence الجزيئية لتسلسل التشفير Yo
Yar A
دام ل نتيجة للانحلال الملازم للرموز الجينات «Due to the inherent degeneracy of the genetic code قد يتم استخدام تسلسلات DNA أخرى التي تشفر على نحو جوهري نفس التسلسلات أو تسلسل حمض أميني amino acid sequence مكافئ من الناحية الوظيفية ؛ في المجال العملي للاختراع من أجل التعديل الجيني لمتعددة ببتيدات اندماج . تتضمن تسلسلات DNA كهذه تلك التسلسلات © التي تعد قادرة على التهجين إلى تسلسلات التشفير capable of hybridizing to the coding sequences أو مكملاتها المكتشفة their complements disclosed في السياق الحالي تحت ظروف على درجة منخفضة أو متوسطة أو عالية الصرامة الموصوفة في المقطع © /؟ ؛ ونفس المصدر السابق .
تتضمن تسلسلات نيكلوتيد متغيرة التي قد تستخدم وفقا للاختراع أوجه حذف أو إضافات أو ٠ استبدالات لأجزاء نيكلوتيد مختلفة متبقية مؤدية إلى تسلسل الذي يشفر نفس هذه التسلسلات أو منتج جين مكافئ من الناحية الوظيفية . قد يحتوى منتج الجين نفسه على أوجه حذف أو إضافات أو استبدالات لأجزاء حمض أميني متبقية ؛ والتي تؤدي إلى تغير خامد بالتالي إنتاج epitope
مولد المضاد المكافئ من الناحية الوظيفية . يمكن أن يتم عمل بدائل الحمض الأميني الواقية المذكورة على أساس التشابه في القطبية والشحنة VO والذوبانية وخاصية طرد الماء وخاصية ألفة الماء و ff الطبيعية الممرضة المزدوجة للمتخلفات الموجودة . تشتمل الأحماض الأمينية السلبية الشحنة ؛ على سبيل المقال ء على aspartic acid ٠ glutamic acid s وتشتمل الأحماض الأمينية إيجابية الشحنة positively charged amino acids على «arginine; histidine s lysine و تشتمل الأحماض الأمينية ذات المجموعات الرأسية القطبية الغير مشحونة التي يكون لها قيم ألفة للماء متشابهة ؛ على الأتي : glycine tyrosines ¢ threonine + serine s » glutamine 5 « asparagine; ٠٠ ¢ وتشمل الأحماض
الأمينية ذات المجموعات الراسية الغير قطبية amino acids with nonpolar head groups على . tryptophan « alanine, valine, isoleucine, leucine, phenylalanine, proline, methionine يمكن أن يتم تصميم تسلسلات النيوكليوتيد للاختراع لتبديل تسلسل تشفير بروتين الإدماج لعديد من لا الحصر ؛ على التبديلات التي تعمل على معالجة JU التي تشتمل ؛ على سبيل alll وتعديل المنتج الجيني . يمكن على سبيل المثال أن يتم إدخال عمليات تحول باستخدام أساليب © ana التبدل الخلقي الموجه حسب المكان © لإدخال أماكن حصر Jie معروفة جيداً في المجال ؛ والفوسفات 011050718100 ... الخ glycosylation patterns بالجليكوسيل dallas لتبديل نماذج يمكن في نموذج بديل للاختراع أن يتم تصنيع تسلسل تشفير بروتين الإدماج بصفة كلية أو بصفة
Caruthers ¢ جزئية ؛ باستخدام طرق كيميائية معروفة في المجال . أنظر ؛ على سبيل المثال ٠ نفل Crea and Horn تت ا-١7١١ ¢ V ندوة أبحاث الأحماض النررية VAAL وآخرون ؛ رسالة + 1980 « Matteucci and Caruthers ؛ 7177١ : ) ٠١ ( 9 أبحاث الأحماض النووية ؛ أبحاث 1181 « Chow and Kempe 214 : ١١ Tetrahedron Letter الهدرون oly ويمكن في طريقة بديله أن يتم إنتاج متعدد الببتيد . 1807-7409 : )١( 49 الأحماض النووية amino acid sequence نفسه باستخدام طرق كيميائية لتصنيع تسلسل حمض أميني polypeptide ٠ بصفة كلية أو جزئية . يمكن على سبيل المثال ؛ أن يتم تصنيع البيتيدات بأساليب طور صلب يتم ( ٠ كسرها من الراتنج ؛ وتنقيتها بواسطة عملية فصل كروماتوجرافي سائل تحضيرية عالية الأداء
Proteins Structures ؛ تركيبات البروتينات والأساسيات الجزيئية ٠187 ٠» Creighton « أنظر . ) 0-*. صفحات ١ وشركته ؛ نيويورك WH. Freeman « And Molecular Principles يمكن أن يتم تأكيد تركيب الببتيدات المتعددة التصنيعية بتحليل أو ترتيب حمض أميني ( على ٠
- YY - سبيل المثال ؛ أجراء التحلل ل Edman « أنظر VAY + Creighton ؛ تركيبات البروتينات والأساسيات الجزيثية © WH. Freeman وشركته ؛ نيويورك ٠ صفحات EYE يمكن بالإضافة إلى ذلك ؛ أن يتم تحول تسلسل تشفير بروتين الإدماج خارج أو داخل الجسم ؛ لتصنيع و/أو تدمير تسلسلات التحويل والبدء create and/or destroy translation, initiation, Sif sand/or termination sequences © من أماكن نيوكلياز حصر جديدة أو تدمير الأماكن الموجودة من قبل ¢ لتسهيل عملية التعديل خارج الجسم . يمكن أن يشتمل ؛ على سبيل المثال لا الحصر ؛ على التبدل الخلقي معروف في المجال ؛ و يشتمل ؛ على سبيل المثال لا الحصر ؛ على التبدل الخلقي الكيميائي ؛ والتبدل الخلقي الخارجي الموجه للمكان (.© Hutchinson, وآخرين ؛ ٠78 ؛ جريدة الكيمياء الأحيائية Yor : 3551 ) ؛ واستخدام روابط (Pharmacia) TAB® « وما Ve شابه ذلك ؛ ومن المهم اللاتؤدي المعالجة إلى تدمير عملية تكوين المناعة لببتيدات الإدماج المتعددة -fusion polypeptides يمكن بالإضافة إلى ذلك أن يتم إدخال أحماض أمينية غير تقليدية nonclassical amino acids أو نظائر حمض أميني كيميائي Jas chemical amino acid analogs أو إضافة إلى التسلسل . تشتمل الأحماض الأمينية الغير تقليدية ؛ على سبيل المثال لا الحصر ؛ على D-isomers ١٠ للأحماض الأمينية مشتركة common amino acids : a-amino isobutyric acid, 4-aminobutyric acid, Abu, 2-amino butyric acid, y-Abu, €-
Ahx, 6-amino hexanoic acid, Aib, 2-amino isobutyric acid, 3-amino propionic acid, ornithine, norleucine, norvaline, hydroxyproline, sarcosine, citrulline, cysteic acid, t- butylglycine, t-butylalanine, phenylglycine, cyclohexylalanine, B-alanine, fluoro-amino حأ
- #؟ acids, designer amino acids such as f-methyl amino acids, Ca-methyl amino acids, Na- methyl amino acids, ونظائر الحمض الأميني بصفة عامة . يمكن بالإضافة إلى ذلك أن يكون الحمض الأمين
.D (dextrorotary) or L (levorotary)
© يتم في أحد النماذج الخاصة للاختراع توصيل تسلسلات التشفير لكل مستضد في بروتين الإدماج عند طرف الامينو أو الكربوكسي amino- or carboxy-terminus الخاص بهم عن طريق رابطة ببتيد peptide linker بأي ترتيب . ويمكن في طريقة بديلة أن يتم استخدام تسلسل رابط الببتيد لفصل الببتيدات المتعددة المفردة التي تعمل على تكوين ببتيد إدماج متعدد بمسافة كافية للتأكد من أن كل من الببتيدات المتعددة قد تم طيه إلى تركيب ثنائي وثلاثي ؛ والذي يؤدي إلى زيادة كفاءته ٠ المستفده لمنع وعلاج الدرن . ويتم دمج تسلسل رابط الببتيد المذكور في بروتين الإدماج باستخدام أساليب قياسية معروفة جيداً في المجال. ويمكن أن يتم اختيار تسلسلات رابط الببتيد المناسبة وفقا للعوامل الاتية )١( قدرتهم على استيعاب عملية تأكيد مرنة ممتدة (Y) عدم مقدرتهم على استيعاب تركيب ثانوي يمكن أن يتفاعل مع عوامل تحديد مستضد وظيفية على الببتيدات المتعددة الأولى و الثانية ؛ )¥( نقص المتخلفات الطاردة للماء أو المشحونة التي يمكن أن تتفاعل مع عوامل تحديد Ve المستضد الوظيفية للببتيدات المتعددة . تحتوي تسلسلات رابط الببتيد المفضلة على متخلفات GlY و Asn و Ser . ويمكن أن يتم Lad استخدام أحماض أمينية قريبة متعادلة أخري مثل 15 و Alla في تسلسل الرابط . تشتمل تسلسلات الحمض الاميني التي يمكن استخدامها كروابط ؛ على التسلسلات التى تم الكشف عنها في ماراتيا وأخرين » جين rf 41-74 1148 ؛ وميرفي وأخرين ؛ العلوم الأكاديمية في Proc.
Natl ؛ الولايات المتحدة الأمريكية CAYTY=AYOA : AV ١185 ٠١ ؛ وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 4478777 وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 4781185 .
ويمكن أن يكون طول تسلسل الرابط من ١ إلى حوالي 5٠ من الأحماض الأمينية . ولا تكون تسلسلات الببتيد مطلوبة عندما تكون الببتيدات المتعددة الأولى والثانية بدون مناطق [1-حمض أميني طرفي غير أساسية ١ non-essential N-terminal amino acid والتي يمكن استخدامها لفصل المناطق الوظيفية ومنع التداخل التجسمي . يمكن على سبيل المثال ؛ أن يتم توصيل المستضدات © في بروتين إدماج بواسطة رابط متعدد مرن flexible polylinker مثل Gly-Cys-Gly أو Ser - Gly—Gly—Gly -والتكرار من ١-؟ مرات Dx) وآخرين « 15 Natp.Acad.Scipro « الولايات المتحدة الأمريكية ٠١٠١-٠١17 AY ) . يتم في أحد النماذج إنتاج مثل هذا البروتين بالتعديل الجيني المأشوب لحمض نووي مشفر للبروتين . ويمكن عمل منتج الإدماج المذكور بربط تسلسلات الحمض النووي المناسبة المشفرة ٠ ا لتسلسلات الحمض الأميني المطلوب ببعضها البعض بواسطة طرق معروفة في المجال ؛ في إطار التشفير الصحيح ‘ وإجراء تعديل جيني للمنتج بواسطة طرق معروفة في المجال . ويمكن في طريقة بديلة أن يتم عمل Jie هذا البروتين بواسطة أساليب بروتين صناعية ؛ على سبيل المثال ؛ باستخدم أداة تصنيع Af . يمكن أيضاً أن تتم إضافة تسلسلات تشفير لجزيئات أخري مثل cytokine أو مادة مساعدة adjuvant ٠5 ؛ إلى نيوكليوتيد الإدماج المتعدد fusion polynucleotide + / 0— إنتاج بروتينات الاتدماج production of fusion proteins حتى يتم إنتاج بروتين إدما z المتفطره السلية الخاص بالإختراع ؛ يتم إدخال تشفير تسلسل النيوكليوتيد للبروتين أو ما يعادله وظيفيا داخل ناقل تعديل جيني ؛ أي ¢ الناقل الذي يحتوي على العناصر الضرورية لنسخ وتحويل تسلسل التشفير المدخل . يمكن أن يتم استخدام خلايا العائل أو ٠ خطوط الخلية المصابة أو المحولة مع عوامل نقل تعديل جيني مأشوب في عديد من الإغراض .
_ Yo _
وتشتمل هذه الأغراض على سبيل المثال لا الحصر ؛ على إنتاج واسع القياس من بروتين الإدماج
يمكن أن يتم استخدام الطرق المعروفة جيدا لذوي الخبرة في المجال لبناء عوامل نقل تعديل جيني
تحتوي على تسلسل تشفير ادماج وإشارات تحكم نسخية / تحويلية + وتشتمل هذه الطرق على
© أساليب DNA مأشوب خارج الجسم ؛ وأساليب صناعية و تأشب داخل الجسم/تأشب خلقي (
أنظر على سبيل المثال ؛ الأساليب التي تم وصفها في Sambrook وآخرين + 1543 ؛ كتيب
المختبر النسخ الجزيئي Molecular Cloning A Laboratory Manual ؛ مختبر ميناء النبع البارد ؛
نيويورك ¢ Ausubel s وآخرين + (VAAR المراسم الجارية في الأحياء الجزيئية ؛ زملاء النشر
Greene والعلوم البينية ل Wiley « نيويورك « ويمكن أيضا أن تكون RNA القادرة على تشفير
ua طبعة ( polypeptide may also be chemically synthesized Lila متعدد ببتيد؛ مصنعة ٠ . (Oxford «IRL دار نشر + Oligonucleoide Synthesis تصنيع الاوليجونيوكليوتيد ¢ 4 ٠
expression systems نظم قدرة التعديل الجيني —V fo [0
من الممكن الاستعانة بتنوع من نظم ناقل قدرة التعديل الجيني للعائل لأحداث تعديل جيني لتسلسل
تشفير بروتين اندماج fusion protein . تتضمن هذه النظم ٠ على سبيل المثال وليس الحصر ¢
٠ كائنات دقيقة Jie البكتريا ( مثلاً اشريكية قولونية B.Subtilis « E coli ) محول بواسطة ملتهمة
البكتريا المأشوبة DNA recombinant bacteriophage أو plasmid DNA أو نواقل قدرة التعديل
الجيني DNA لن«هه_محتوية على تسلسل تشفير أو خميرة ( Saccharomycdes Yas «
(Pichia محولة بواسطة نواقل قدرة التعديل الجيني للخميرة الماشوبة محتوية على تسلسل تشفير ؛
نظم خلية حشرية مصابة بنواقل قدرةٍ التعديل الجيني لفيروس مأشوب baculovirus « Jia) (
To محتوية على تسلسل تشفير + نظم خلية نباتية مصابة بنواقل تعديل القدرة الجينية المأشوبة ( مثلاً
لاط
- ١ ) TMV « tobacco mosaic virus ؛ فيروس فسيفسائي التبغ Camv ,Canliflower mosaic virus transformed with recombinant أو محولة بواسطة نواقل تعديل القدرة الجينية لبلازميد المأشوب محتوية على تسلسل تشفير أو نظم خلية (Ti plasmid Mic ) plasmid expression vectors
CHO ء COS (مثلاً خلايا containing a coding sequence; or mammalian cell systems ثدبية تنتوع عناصر تعديل القدرة الجينية من حيث شدتها ومواصفاتها. . (313 293 « BHK «© اعتمادا على نظام العاثل /الناقل المستعمل host/vector system utilized ء من الممكن استخدام أي عدد من عناصر النسخ والتحول الملائمة ؛ المتضمنة مثيرات أساسية وقابلة للحث ؛ في ناقل القدرة على التعديل الجيني. مثلاً « عند الاستنساخ في النظم البكتيرية ؛ من الممكن استعمال مثيرات قابلة للحث مثل PL ملتهمة البكتريا plac, ptrp, ptac .3 ( مثير مختلط Ptrp-lac ؛ مثير Ve فيروس مضخم للخلايا (cytomegalovirus promoter وما شابه ؛ Laie يكون الاستنساخ في نظم خلايا حشرية insect cell systems ؛ من الممكن استعمال المثيرات Jie معزز متعدد الوجوه baculovirous ؛ عندما يكون الاستنساخ في نظم خلايا نبات ؛ من الممكن استعمال مثيرات مشتقة من مجين ( مجموعة العوامل الوراثية) من IDA النباتية ( مثلاً ؛ مثيرات صدمة الحر heat shock promoters « المثير الخاصة بالوحدة الفرعية الصغيرة RUBISCO small subunit أو ٠ المثير الخاص بكلوروفيل بروتين ترابط الفا/بيتا chlorophyll o/f binding protein ( أو من فيروسات نباتية plant viruses مثلاً مقير CaMV 355 RNA ( + مثير بروتين طبقة الغطاء coat protein promoter TMV ) ؛ عند الاستنساخ في LOAN pai الثديية ¢ من الممكن استعمال مثيرات مشتقة من مجين الخلايا الثديية ( ie مثير ثيوتين معدني metallothionein promoter ( أو فيروسات Mie ) mammalian viruses Audi مثير فيروس غدي متأخر adenovirus late promoter ٠ + مثير فيروس جدري vaccinia virus 7.5K promoter all ( » عند توليد خطوط اح
YY _ — الخلايا التي تحتوي على نسخ متعددة من تسلسل تشفير مولد الضد من الممكن استعمال نواقل بقاعدة من BPV , 87740 و EBV بواسم قابل للاختبار ملائم . يفضل نظم بلتبرية لإجراء التعديل الجيني لمولدات الضد antigens للمتفطرة السلية . بالنسبة للأعطاء في الجسم الحي ؛ من الممكن هندسة أنوا ع البكتريا Bacillus-Calmette-guerrin Jie © للتعديل الجيني . متعدد بببتيد الاندماج للاختراع على سطح خليته . من الملاثم اختيار عدد من نواقل التعديل الجيني البكترية اعتمادا على الاستعمال لتحقيق غرض المنتجات المعدلة جينيا + مثل » عندما يتم إنتاج كميات كبيرة من بروتين الاندماج لصياغة التركيبات الصيدلانية ؛ قد يكون من المرغوب فيه نواقل التي توجه التعديل الجيني بمستويات مرتفعة من منتجات بروتين الاندماج ويتم تنقيتها بسهولة . تتضمن هذه Jalal على سبيل JU وليس الحصر ؛ ناقل التعديل جيني ٠ للاشيريكية القولونية Ruther ( pUR 278 E. coli وآخرين ) « 487 ل EMBO ؛ مجلد 7 ؛ ١7١ ) فيه من الممكن ربط تسلسل التشفير في الناقل في إطار مع منطقة التشفير lacZ بحيث يتم إنتاج بروتين مهجن ؛ نواقل PIN وما شابه . من الممكن كذلك استعمال 00176 shay التعديل الجيني لمتعدد ببتيدات أجنبية على هيئة بروتينات اندماج fusion proteins مع glutathione S-transferase (GST) . عموما تعد YO بروتينات الاندماج هذه قابلة lsd ومن الممكن تنقيتها بسهولة من الخلايا المحللة بواسطة الامتزاز adsorption إلى كريات glutathione-agarose متبوعا بالتخفيف في وجود جلوتاثيون حر free glutathione . يتم تصميم النواقل PGEX لكي تتضمن thrombin أو مواضع انشطار protease عامل Xa بحيث من الممكن تحرير متعدد ببتيد أندماج منسوج موضوع | لاختراع من شق 51 ٠ © / 7/5-تنقية البروتين ٠ protein purification حا
YA — - بمجرد أن يتم التعديل الجيني لبروتين مأشوب ؛ حيث من الممكن التعرف عليه بواسطة المعايرات على أساس خواص ينزيقية ووظيفية physical or functional properties للمنتج ¢ متضمناً وسم فعال شعاعيا للمنتج متبوعا بالتحليل بواسطة استشراد هلامي gel electrophoresis ومعايرة مناعية إشعاعية radioimmunoassay ومعايرات بيولوجية bioassays إلى أخره. © بمجرد أن يتم التعرف على البروتين المشفر encoded protein ؛ من الممكن عزله وتنقيتة بواسطة الطرق المعيارية المتضمنة الفصل الكروماتوجرافي chromatography ( مثل الفصل الكروماتوجرافي ذو السائل عال الأداء high performance liquid chromatography و التبادل الأيوني ion exchange والألفة والفصل الكروماتوجرافي العمودي الحجمي sizing column chromatography » الفرز بالطرد المركزي centrifugation ؛ التذاوب التفاضيلي differential solubility | ٠ ء أو بواسطة أسلوب تقني معياري standard technique أخر لتنقية البروتينات ٠ سوف تعتمد الظروف الفعالة ؛ جزثئيا على عوامل مثل الشحن الصافي net charge ¢ الغير ألفة للماء hydrophobic ؛ الألفة للماء opal hydrophilicity ؛ وسوف تكون واضحة لهؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال . من الممكن تقييم الخواص الوظيفية باستعمال إي معايرة ملائمة مثل الترابط للجسم المضاد ¢ حث تكائثر Stimulation of proliferation خلية T cell proliferation « ٠ حث أنتاج Jie cytokine 112 و IL-4 و [Ly . بالنسبة للممارسة الاختراع الحالي ؛ من المفضل أن يكون كل بروتين اندماج A+ fusion protein 7 على الأقل منقي من بروتينات أخري . من المفضل على نحو أكثر أن تكون البروتينات بتنقية 980 7 على الأقل . بالنسبة للإعطاء في الجسم الحي ؛ يفضل أن تكون البروتينات بتنقية أكبر من 58 7 . ١ / © استعمالات تسلسل تشفير بروتين الاتدماج -uses of the fusion protein coding sequence
- Ya _
من الممكن استعمال تسلسل-تشفير بروتين الاندماج protein coding sequence 0 من أجل تشفير منتج بروتين للاستعمال على هيئة مولد مناعة لحث و/أو تعزيز الاستجابات المناعية للمتفطرة السلية . أضف إلى ذلك ؛ من الممكن كذلك ربط تسلسل التشفير بتسلسل تشفير جزيئي أخر مثل cytokine أو مادة مساعدة adjuvant . من الممكن استعمال متعدد نيكلوتيدات polynucleotides © هذه في الجسم الحي باعتبارها لقاح DNA vaccine (براءة الاختراع الأمريكية أرقام 850844717 و 017471497 و 07107055 ) . في نموذج الاختراع هذا ؛ يقوم متعدد التيكلوتيد بتعديل بروتينية المشفر جينيا في مستقبل لأحداث حث مباشر لاستجابة مناعية . من الممكن حقن متعدد نيكليوتيد polynucleotide may be injected . إلى خاضع للدراسة غير مطعم لبدء استجابة مناعية لمنتجة المشفر ؛ أو إعطائه إلى خاضع للدراسة مصاب أو مطعم لتعزيز ٠ الاستجابة المناعية الثانوية secondary immune responses في نموذج مفضل ¢ يتضمن تركيب علاجي therapeutic composition تسلسل تشفير بروتين اندماج fusion protein أو أجزاء منه الذي يعد جزء من ناقل التعديل الجيني . بصفة خاصة ؛ يحتوي متعدد النيكلوتيد هذا على مثير مرتبط من الناحية العملية بمنطقة التشفير ؛ ويكون المثير المذكور قابل للحث أو أساسي ؛ و اختياري ؛ نوعي للانسجة . في نموذج أخر ؛ (ging متعدد نيكليوتيد تسلسل تشفير مجانية بمناطق a ٠ تأشيب متجانس في موقع مرغوب في المجين ؛ وهكذا توفير تعديل جيني كرومازومي داخلي intrachromosomal expression لتسلسل التشفير ‘Koller and Smithies) coding sequence Proc.
Natl.
Acad 14 ¢ الولايات المتحدة الأمريكية 85م : AGYOo-AAYY 6 1184 + تيتشر
7 : صما لحل ( . قد يكون إعطاء الحمض النووي nucleic acid داخل خاضع للدراسة سواء بطريقة مباشرة ؛ في تلك Ye الحالة يتم تعريض الخاضع للدراسة للحمض النووي أو ناقل Jala للحمض النووي nucleic acid- «carrying vector أو بطريقة غير مباشرة ؛ في تلك الحالة ؛ يجري أولاً تحويل LAN بواسطة
0 ©.
الحمض النووي في أنبوب الاختبار vitro ؛ ثم غرسها في الخاضع للدراسة . أن هذين المدخلين المذكورين معروفين ؛ على التوالي ؛ باعتبارهما تحويل جيني داخل الجسم أو خارج الجسم الحي
.in vivo or ex vivo gene transfer في نموذج نوعي ؛ يعطي الحمض النووي مباشرة في الجسم الحي ؛ حيث يتم تعديله جينيا لإنتاج مشفر . من الممكن أن يتم ذلك بواسطة أي عدد هائل من fusion protein منتج بروتين اندماج © الطرق المعروفة في هذا المجال ؛ مثلاً ؛ بواسطة بنائه باعتباره جزء من ناقل تعديل جيني للحمض النووي ملائم وإعطائه بحيث يصبح داخل الخلية ؛ مثلاً « بواسطة أحداث عدوي باستعمال ناقل أنظر ( other viral vector ضعيف sl أو فيروس أخر ناقص attenuated retroviral ريتروفيرال DNA ل direct injection براءة الاختراع الأمريكية رقم 49807485 ) أو بواسطة حقن مباشر ؛ بندقية Sie ) microparticle bombardment مكشوف أو باستعمال قذف دقيق اللجسيمات ٠ أو coating with lipids أو التغليف بالشحوم « Dupont « Biolistic » gene gun جينات أو التغليف في Transfecting أو عوامل cell-surface receptors مستقبلات سطحية للخلايا أو microparticles أو جسيمات دقيقة encapsulation in liposomes الجسيمات الشحمية براءة الاختراع الأمريكية أرقام 8430979664 و 00577717 و ( microcapsules كبسولات دقيقة الذي يكون معروف linkage to a peptide و 8م١28 ) أو بإعطائه بالربط بببتيد 8143440 ٠ ؛ بإعطائه بالربط بخاضع ترابطي لالتقام خلوي موسط enter the nucleus أنه بداخل النواة administering it in linkage to a ligand subject to receptor-mediated endocytosis بالمستقبلة ) 5477-4474 : 767 جريدة الكيمياء البيولوجية ؛ « VAAY وء Wu and Wu Sie أنظر ( target cell types الذي من الممكن استعماله لاستهداف أنوا ع خلية تقوم بنسخ نوعي للمستقبلات ؛ من الممكن تشكيل مركب al إلى أخره . في نموذج » specifically expressing the receptors Y + ض فيها يتضمن المركب nucleic acid-ligand complex can be formed ترابطي لحمض نووي
EE
الترابطي ببتيد فيروسي مولد مغزلي لوقف الجسميات الغدية fusogenic viral peptide to disrupt 685 ؛ مما يسمح للحمض النووي لتجنب انحلال جسمي حال ٠. في مظهر أخر Sua) ¢ من الممكن استهداف الحمض النووي في الجسم الحي لأجل استيعاب وتعديل جيني نوعي للخلايا ٠6 بتاريخ » 180 JY مطبوعات 207 أو ٠ بواسطة استهداف مستقبلة نوعية ( أنظر ؛ مثلاً ٠ © ابريل 1447 77178/47 بتاريخ YT ديسمبر + 1547 ؛ أو 07136/97 7 بتاريخ 17 نوفمبر 17 ؛ أو ١148 [AT بتاريخ YY يوليو ؛ 1447 أو 47 0 7077١ بتاريخ ٠6 اكتوبر 147 . بديلاً عن ذلك ؛ من الممكن إدخال الحمض النووي خلويا أو ادماجة في DNA خلية عائل لأجل التعديل الجيني ؛ بواسطة تأشيب متجانس Koller and ) homologous recombination Proc. Natl. Aced. Sci 1104 +» Smithies ء الولايات المتحدة الأمريكية AT : 4175-4477 ١ .) 0-75 : 477 يشر 1441 نيرخآو Zijlstra + 0٠ في نموذج نوعي ؛ من الممكن استعمال ناقل فيروس مثل ناقل ريتوفيرال retroviral vector أنظر Miller وآخرينء؛ 1147 « Meth.Enzymol » 717 : 044-51 ) يتم تعديل نواقل ريتروفيرال Retroviral vectors لحدف تسلسلات ريتروفيرال retroviral sequences التي تعد غير ضرورية لتعبئة مجين فيروسي packaging of the viral genome وتكامله في DNA خلية عائل . يتم نسخ Ve تسلسل تشفير اندماج ٠ الذي يسهل إعطاء الحمض النووي إلى متلقي . من الممكن ايجاد المزيد من التفاصيل عن نواقل تيرزوفيرال Retroviral vectors في «©8ع30وآخرين ؛ ١944 العلاج البيولوجي ١-711 : ١ Biotherapy ؛ التي تصف استعمال ناقل ريتروفيرال retroviral vector لإعطاء جين 14081 لخلايا جذعية مكونة للدم لصناعة خلايا جذعية أكثر مقاومة للعلاج الكيميائي . هناك مراجع أخرى توضح استعمال نواقل ريتروفيرال retroviral vector في العلادجي Ye الجيني هي Clowes وآخرين 1444 ؛ جريدة الاستقصاءات السريرية 2 47 : 191-544 Kiem وآخرين 4 . AY Blood : الت لض ات Salmons and Gunzberg ¢
- م٠
و1-١: ؛ Human Gene Therapy البشري gene therapy العلاج الجيني 1 ٠7 . ١14-11١ : ء الآراء الحالية في عالم الجينات والتطورء ؟ ٠147 ¢ Grossman and Wilson أخري من الممكن viral vectors هي عبارة عن نواقل فيروسية adenoviruses الفيروسات الغدية عبارة عن adenoviruses ؛ تعد الفيروسات الغدية gene therapy استعمالها في العلاج الجيني على وجه الخصوص لإعطاء جينات إلى الظهاريات التنفسية attractive vehicles نواقل جذابة 5 الظهاريات adenoviruses من المعتاد أن تصيب الفيروسات الغدية . respiratory epithelia قد تسبب مرض طفيف . أن الأهداف الأخرى لنظم الإعطاء Cus respiratory epithelia التنفسية central nervous system والجهاز العصبي المركزي liver بأساس فيروس غدية هي الكبد لقد تم اقتراح فيروس مصاحب للغدة . muscle والعضل endothelial cells والخلايا البطانية use in in vivo للاستعمال في تحويل جيني في الجسم الحي Adeno-associated virus (AAV) ٠١ ٠. :تغتح Yet Pre.
Soc.
Exp.
Biol.
Med 117 « بآخرين Walsh ) gene transfer ينطوي مدخل أخر على تحويل تركيب ما إلى خلايا في مزرعة النسيج بواسطة هذه الطرق على calcium موسط بفسفات كالسيوم fransfection أو lipofection أو electroporation هيئة على نحو معتاد تتضمن طريقة . viral infection أو عدوي فيروسية » phosphate mediated ٠ التحويل تحويل واسم قابل للتحويل إلى خلايا . بعد ذلك يتم وضع الخلايا تحت الاختيار لعزل هذه الخلايا تلك التي تلتقط وتعدل جينيا الجين المحول . بعد ذلك يتم إعطاء الخلايا تلك التي خاضع
للاختبار . في هذا النموذج ؛ يتم إدخال الحمض النووي nucleic acid إلى خلية قبل الاعطاء في الجسم الحي ٠٠ للخلية المأشوبة الناتجة in vivo of the resulting recombinant cell . من الممكن shal مثل هذا
"++ الادخال بواسطة الطريقة المعروفة في هذا (Jad متضمنة ؛ على سبيل المثال لا الحصر ¢ electroportion sl transfection أو الحقن الدقيق microinjection أو العدوي بناقل فيروسي أو ملتهمة بكتيرية infection with a viral or bacteriophage vector محتوية على تسلسلات الحمض النووي nucleic acid sequences » اندماج الخلية cell fusion ¢ تحويل جيني موسط بالكروموزم chromosome-mediated gene transfer © ¢ تحويل جيني موسط بخلية 4383 microcell-mediated gene transfer ؛ Lil ج 80101882 « إلى أخره . توجد أساليب تقنية هائلة معروفة في هذا المجال لإدخال جينات أجنبية في الخلايا foreign genes into cells ) أنظر Loeffler and Behr « ie « Cohen « TYA=044 : ل٠١ meth.Enzymol « Y44Y رآخرين ¢ Meth.
Enzymol » ٠357 :Y4 ¢« pharmac.
Ther « Y3A® ¢ Cline ¢1££—TYA :Y\V « 37-414٠ ) و من الممكن استعمالها مع الاختراع الحالي . من الممكن كذلك استعمال متعدد نيكليوتيدات polynucleotides للاختراع في تشخيط مرض السل diagnosis of tuberculosis من أجل الكشف عن تسلسلات متعدد نيكليوتيد نوعية للمتفطرة السلية في أحد المرضي . من الممكن اتمام هذا الكشف ؛ مثلاً ؛ بواسطة عزل متعدد نيكليوتيدات polynucleotides من عينة بيولوجية biological sample يتم الحصول Lede من مريض يشتبه ١ في أنه مصاب بالبكتريا infected with the bacteria . عند عزل متعدد النيكليوتيدات polynucleotides من عينة بيولوجية biological sample ¢ سوف يتم السماح لينكليوتيد موسوم للاختراع ويعتبر مكمل لواحد أو اكثر من متعدد النيكليوتيدات polynucleotides بأن يتهجن إلى متعدد نيكليوتيدات polynucleotides في عينة بيولوجية باستعمال الأساليب التقنية لتهجين الحمض النووي المعروفة لهؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال . مثلاً ؛ من الممكن أجراء التهجين
المذكور في محلول أو مع شريك تهجين hybridization partner على مادة مساعدة adjuvant صلدة 5 الاستعمال العلاجية والوقائية لبروتين الاتدماج therapeutic and prophylactic uses of the fusion protein . © قد يتم صياغة بروتينات اندماج fusion proteins منتقاة أو منقاة جزئيا أو أجزاء منها باعتبارها لقاح vaccine أو تركيب علاجي therapeutic composition . قد يتضمن تركيب علاجي كهذا عوامل مساعدة لتعزيز استجابات المناعة composition may include adjuvants to enhance immune response بالإضافة لذلك ؛ قد يتم أيضاً تعليق هذه البروتينات في مستحلب زيت oil emulsion ليحدث إطلاق إبطأ للبروتينات في الكائن الحي عند الحقن cause a slower release of the proteins in vivo upon injection Ve قد يتم تحديد أفضل النسب لكل مكون في الصياغة بأساليب تقنية معروفة جيدا لهؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال . قد يستخدم أي مجموعة منوعة من العوامل المساعدة في لقاحات vaccines الاختراع الحالي بغرض تعزيز استجابة المناعة . تحتوي معظم العوامل المساعدة على مادة مصممة لحماية مولد المضاد من التقويض السريع ¢ aluminum hydroxide Jie أو زيت معدني mineral oil و حافز Ve غير نوعي لاستجابة المناعة ؛ مثل شحم © ؛ الشهقة بورتادلا pertussis 7 أو المتفطرة السلية . تعد عوامل مساعدة متوفرة تجاريا وتتضمن ؛ على سبيل المثال ؛ المادة المساعدة Freund's Incomplete والمادة المساعدة Freund's Complete ( معامل ديفكو Difco Laboratories ( والمادة المساعدة ميرك 10 65 Merck ( Merck Adjuvant وشركاءه ¢ شركة محدودة ¢ Rahway ؛ ولاية نيوجيرس ) . تتضمن مواد مساعدة أخري الشب Other suitable ٠ تتح adjuvants include + كريات دقيقة تتحلل بالبكتريا biodegradable microspheres «
- Yo —
Ling ( monophosphoryl lipid A, quil A, SBASlc 2 وآخرين ¢ ١547 ؛ اللقاح
. AL(OH)3 و SBAS7 و ( ١517-1657 الصفحات : Vo vaccine الاختراع الحالي ؛ فمن المفضل أن تحث المادة المساعدة استجابة المناعة vaccines في لقاحات متضمنة أوجه 111 . تتضمن نظم مساعدة مناسبة ؛ على سبيل المثال ؛ اتحاد كيميائي من شحم 3-de-O-acylated monophosphoryl lipid A ؛ على نحو مفضل ؟ monophosphoryl lipid A © أن نظام معزز يشتمل على اتحاد كيميائي . aluminum salt معا مع ملح ألومنيوم (3D-MLP) ء على نحو خاص الاتحاد saponin derivative ومشتق صابونين monophosphoryl lipid A من والصابونين 0821 كما تم الكشف عنه في براءة الاختراع الدولية 3D-MLP الكيميائي من حيث يتم كبت 0521 بالكوليسترول كما تم الكشف Jif أو تركيب متفاعل جينيا بدرجة . ٠07/914 عنه في براءة الاختراع الدولية -73774/47 . أوضحت التجارب السابقة تأثير مؤازر واضح ٠ في حث كلا من استجابات المناعة الخلوية من النوع 0521 3D mip للاتحادات الكيميائية 3D- مساعدة فعالية متضمنة 0821 و Ae Lua على نحو خاص يتم وصف THI الخلطي والنوع قابل للذوبان في الماء في براءة الاختراع oil emulsion في مستحلب زيت tocopherol و MLP
الدولية 485/ ١77٠١ وهي صياغة مفضلة .
Vo قد يتم إعطاء صياغات محتوية على مولد المضاد الخاص بالاختراع الحالي للشخص الخاضع للاختبار المعروف بذاته أو في شكل تركيب صيدلي أو عاتجي pharmaceutical or therapeutic composition . قد تصنع تركيبات صيدلية محتوية على البروتينات بواسطة عمليات تقليدية من خلط conventional mixing وإذابة dissolving أى تحبيب granulating أو بعمل جبات دواء ملبسة dragee-making أو بالسحق levigating 0 بالاستحلاب emulsifying أو بتشكيل كبسولات أو ٠ التشكيل بالحصر أو بالتجفيف في حالة التجمد . قد يتم صياغة تركيبات صيدلية بطريقة تقليدية اا
“١1 أو excipients أو سواغات diluents أو مخفضات carriers باستخدام واحدة أو اكثر من حوامل في polypeptides معالجة متعددة الببتيدات Jeu مواد مساعدة مقبولة فيسولوجيا التي المستحضرات التي يمكن استخدامها صيدلانيا . تكون صياغة دقيقة معتمدة على طريقة الإعطاء . المختارة هلامات «solutions بالنسبة للإعطاء الموضعي ؛ قد يتم صياغة البروتينات على هيئة محاليل © إلى أخره ¢ باعتبارها » suspensions مستعلقات ¢ creams كريمات » ointments مراهم ¢ gels معروفة جيداً في هذا المجال . تتضمن صياغات جسمانية تلك الصياغات المصممة للإعطاء أو في intravenous أو في الوريد subcutaneous بالحقن ؛ على سبيل المثال بالحقن تحث الجلد « intraperitoneal أو داخل البريتون intrathecal أو داخل الغمد intramuscular العضل أو عبر الغشاء transdermal بالإضافة إلى تلك الصياغات المصممة للإعطاء عبر الأدمة ٠ بالنسبة . pulmonary administration أو الإعطاء الرئوي oral Alls أو transmucosal المخاطي ؛ على نحو مفضل في محاليل aqueous solutions للحقن ؛ قد البروتينات في محاليل مائية أو محلول رينجير Hanks's solution محلول هانكس Jie منظمة متوافقة فيسولوجيا solutions قد يحتوي .0137510108168[ saline buffer أو محلول ملحي منظم فسيولوجيا Ringer's solution استقرار » suspending مثل عوامل تعليق formulatory agents المحلول على عوامل صياغة ٠ نحو بديل ؛ قد تكون le. dispersing agents عوامل تشتت Sf و stabilizing كيميائي البروتينات في شكل مسحوق من أجل التركيب مع ناقل مناسب ؛ على سبيل المثال ماء معقم خالي ؛ قبل الاستخدام . بالنسبة للإعطاء عبر الغشاء المخاطيء تستخدم عوامل إحتراق pyrogen من . لكي تنفذ إلى الحاجز في الصياغة . عموما تعد عوامل الاختراق هذه معروفة في هذا المجال
١ —
بالنسبة للإعطاء عن طريق الفم ¢ يمكن أن يصاع تركيب بسهولة بواسطة تجميع البروتينات مع حوامل مقبولة صيدلانيا معروفة جيدا في المجال . أن حوامل كهذه تساعد البروتينات على أن تصاغ على هيئة أقراص tablets ¢ حبات pills ¢ حبات دواء dragees dle ؛ كبسولات capsules « سوائل liquids « هلامات gels ¢ أنواع شراب syrups ¢ أنواع ملاط slurries ¢ © مستعلقات suspensions وما شابه ؛ بالنسبة للابتلاع الفمي من قبل الشخص الخاضع للعلاج . بالنسبة للصياغات الفمية الصلدة مثل ؛ على سبيل المثال ؛ المساحيق powders والكبسولات capsules والأقراص ١ tablets تتضمن سواغات excipients ملائمة مواد fillers sulin مثل السكريات sugars » مثل mannitol 5 sucrose 5 lactose و sorbitol ؛ مستحضرات cellulose Jie نشا الذرة ؛ نشا القمح ؛ نشا الأرز ؛ نشا البطاطس « methyl « gum tragacanth « gelatin sodium carboxymethylcellulose ¢ cellulose « hydroxypropylmethyl « cellulose ٠ و/أو polyvinylpyrrolidone (PVP) « عوامل تحبيب granulating agents وعوامل ربط binding agents . إذا كان مرغوباً ؛ قد يضاف عوامل تفتت ؛ مثل polyvinylpyrrolidone مترابط بالتقاطع 0 alginic acid sl agar 0 ملح منه مثل sodium alginate إذا كان مرغوبا ؛ قد يتم تغطية أشكال قياس الجرعات الصلدة بالسكر solid dosage forms may be sugar أو قد يجري
تغليف معوي باستخدام أساليب تقنية معيارية ٠ 11610-06021610 using standard techniques بالنسبة للمستحضرات السائلة الفمية liquid preparations 1د:ه مثل ؛ على سبيل المثال ؛ المستعلقات suspensions و اكسيرات elixirs ومحاليل solutions ¢ تتضمن حوامل carriers أو سواغات excipients أو مخففات ملائمة الماء glycols « diluents include water ؛ زيوت ؛ كحولات opal alcohols . على نحو إضافي ؛ قد تضاف مكسبات نكهة ومواد حافظة preservatives - ٠٠ و عوامل تلوين Lay coloring agents شابه بالنسبة للإعطاء الخدي ؛ قد تأخذ
البروتينات شكل pall ؛ قريصات «lozenges إلى أخره . مصاغة بطريقة تقليدية .
لاض
ام بالنسبة للإعطاء بواسطة الاستنشاق ؛ يتم تتداول البروتينات الخاصة بالاستخدام وفقا للاختراع الحالي على نحو ملائم في شكل رشاش ايروسول aerosol spray من عبوات مضغوطة pressurized packs أو في شكل مذرة nebulizer ؛ مع استخدام مادة دافعة مناسبة suitable propellant » على Ju wu المثال « trichlorofluoromethane « dichlorodifluoromethane «¢ dichlorotetrafluoroethane © ؛ AU اكسيد الكربون carbon dioxide أو غاز أخر مناسب . في حالة ايروسول مضغوط pressurized aerosol قد يتم تحديد وحدة قياس الجرعات بواسطة توفير صمام لتناول كمية مقاسة . قد يتم صياغة كبسولات ولفيفات cartridges من ؛ على سبيل JO gelatin خاصة بالاستخدام في أداة استنشاق inhaler أو مزفار insufflator محتوية على خليط مسحوق من البروتينات وقاعدة مسحوق مناسبة lactose Jie أو النشا .
Jie vaginal أو مهبلية rectal كذلك قد تصاغ البروتينات في تركيبات للاستخدام عبر المستقيم ٠ ء على سبيل المثال ؛ محتوية على retention enemas أو حقنات حصر suppositories التحاميل أو cocoa butter مثل زبدة الكاكاو conventional suppository bases قواعد تحاميل تفليدية . أخرى glycerides جليسريدات بالإضافة إلى الصياغات الموصوفة مسبقا ؛ قد تصاغ أيضا البروتينات باعتبارها مستحضر مخزن ٠ . قد يتم إعطاء صياغات طويلة المفعول كهذه بالغرس ( على سبيل المثال تجت الجلد subcutaneously أو في العضل intramuscular ( أو بالحقن داخل العضل muscle . هكذا ؛ على سبيل المثال ؛ قد تصاغ البروتينات باستخدام مواد بوليمرية polymeric أو غير ألفة للماء hydrophobic ( مثل على هيئة مستحلب في زيت مقبول emulsion in an acceptable oil ( 0 راتينجات تبادل أيوني jon exchange resins أو على هيئة مشتقات ALE للذوبان على نحو . ضئيل ؛ على سبيل المثال ؛ باعتبارها ملح قابل للذوبان على نحو ضئيل Yo
_ ةق“ - على نحو بديل ؛ قد تستخدم نظم تداول صيدلية أخري . تعد جسيمات شحمية و مستحلبات أمثلة معروفة جيداً لنواقل التداول التي قد تستخدم مذيبات عضوية معينة مثل dimethylsulfoxide « على الرغم من تكلفة السمية الكبيرة . كذلك قد يتم تشكيل كبسولات من بروتينات الاندماج في شكل كريات microspheres Aids ( أرقام براءات الاختراع في الولايات المتحدة COE VTA 08837675 81173446 ( 087/83 ) بالإضافة لذلك ؛ قد يتم تداول البروتينات باستخدام نظام إطلاق مدعم ؛ مثل مواد قالب شبه منفذ من بوليمرات صلدة solid polymers محتوية على العامل العلاجي therapeutic أو عامل التلقيح vaccinating agent . لقد تم تركيب مواد إطلاق مدعمة عديدة وهي تعد معروفة جيدا لهؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال . قد تطلق كبسولات بإطلاق مدعمة ؛ اعتمادا على طبيعتها الكيميائية ؛ بروتينات لمدة أسابيع قليلة تصل إلى ما يزيد Ve عن ٠٠١ يوم . بناءا على الطبيعة الكيميائية والاستقرار البيولوجي للمفاعل ؛ قد يتم استخدام استراتيجيات إضافية لاستقرار البروتين . يعد تحديد كمية فعالة من بروتين الاندماج لحث الاستجابة ذات مناعة في الشخص الخاضع للعلاج Yoho في نطاق إمكانيات هؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال ؛ خاصا فيما يتعلق بالاكتشاف الموصوف بالتفصيل المتوفر في السياق الحالي . ٠ يمكن تقدير جرعة فعالية على نحو مبدئي في معايرات في أنابيب الاختبار . على سبيل المثال يمكن صياغة جرعة في نماذج حيوانية لإنجاز حث استجابة ذات مناعة بأساليب تقنية معروفة جيدا في هذا المجال . في استطاعة شخص ذوي مهارة عادية في هذا المجال أن يجعل الإعطاء للإنسان أقرب ما يكون إلى الفاعلية اعتمادا على البيانات الناتجة عن التجارب الحيوائية . قد يتم ضبط كمية قياس ٠ الجرعات والفاصل الزمني على نحو مستقل . على سبيل المثال ؛ عندما تستخدم باعتبارها لقاح ملكا
$0 -— vaccine ¢ قد تعطي متعددة الببتيدات polypeptides و / أو متعددة النيكلوتيدات polynucleotides للاختراع الحالي في حوالي ١ إلى “ جرعات sad زمنية من 1-١ ؟ أسبوع . على نحو مفضل يتم Uae) ثلاثة جرعات ؛ بفواصل زمنية من حوالي *-؛ أشهر ؛ وقد تعطي لقاحات vaccines منشطة على نحو دوري بعد ذلك . قد يعد بروتوكولات بديلة مناسبة للمرضي © المنفردين . تكون جرعة مناسبة عبارة عن كمية من متعدد الببتيد polypeptides أو DNA التي ؛ عندما تعطي كما تم وصفه أعلاه ؛ تعد قادرة على إحداث استجابة منعية في مريض تم تحضنة كافية لحماية المريض من الإصابة بعدوي المتفطرة السلية لمدة 7-١ سنة على الأقل . بوجه عام ٠ تقدر كمية متعدد الببتيد polypeptides الموجود في جرعة واحدة ( أو المنتجة في موضع بواسطة أل DNA في جرعة واحدة ) بمدي يتراوح من حوالي ١ بيكوجرام إلى حوالي ٠٠١ ٠ مليجرام لكل كيلوجرام من العائل ؛ على نحو نموذجي من حوالي ٠١ بيكوجرام إلى حوالي ١ مليجرام وعلى نحو مفضل من حوالي ٠٠١ بيكوجرام إلى حوالي ١ ميكروجرام . سوف يتنوع مدي الجرعة المناسبة بحسب حجم المريض ؛ لكنة نموذجيا سوف يكون بمدي من حوالي 0.١ مل إلى حوالي deo —AJo الاستخدامات التشخيصية لبروتين الاندماج ٠ diagnostic uses of the fusion protein ١ تعد متعددة ببتيدات الاندماج للاختراع الحالي مفيدة في تشخيص عدوي السل في أنابيب الاختبار وفي الجسم الحي . يمكن معايرة قدرة متعدد الببتيد للاختراع الحالي من أجل حث تكاثر cell ida Stimulation of proliferation أو إنتاج cytokine بواسطة طرق تم الكشف عنها في مقطع Y Jo ء نفس المصدر السابق . 7ح
في مظهر أخر يوفر الاختراع الحالي طرق الاستخدام واحدة أو اكثر من متعدد ببتيدات الاندماج لتشخيص مرض السل indicative of tuberculosis باستخدام اختبار الجلد في الجسم الحي skin test in vivo كما هو مستخدم في السياق الحالي ؛ يعد اختبار الجلد عبارة عن معايرة تجري مباشرة على بروتين الذي فيه يتم قياس تفاعل مفرط الحساسية من نوع متأخر ( Jie) (DTH © الانتفاخ swelling أو الاحمرار reddening أو التهاب الجلد (dermatitis تابعا للحقن عبر الأدمة بواحدة أو اكثر من polypeptides كما وصفت أعلاه . قد يجري هذا الحقن باستخدام أي جهاز مناسب كافي لتلامس متعدد الببتيد مع الخلايا الجلدية للمريض Jia ٠ ؛ على سبيل المثال ؛ محقنة tuberculin أو محقنة سعة ١ مل . على نحو مفضل ء يقاس التفاعل بعد مرور EA ساعة على
الأقل من الحقن وعلى نحو اكثر تفضيلاً حوالي 6A إلى VY ساعة بعد الحقن .
٠ يعد التفاعل DTH عبارة عن استجابة منيعة موسطة بالخلية ؛ التي تكون كبيرة في المريضي الذين تم تعريضهم مسبقا لاختبار مولد المضاد ( على سبيل المثال . جزء المولد المناعي من متعدد الببتيد polypeptide المستخدم ٠ أو متغير منه ) . قد يتم قياس الاستجابة بشكل مرئي ؛ باستخدام مسطرة . على وجه العموم ؛ تكون استجابة التي يزيد قطرها عن حوالي #ر؛ سم ؛ على نحو مفضل يزيد قطرها عن حوالي ١سم ؛ استجابة إيجابية ؛ دالة على الإصابة بعدوي السل؛ والتي قد
٠ active disease تظهر أو لا تظهر باعتبارها مرض نشط Ve الخاصة بالاختراع fusion polypeptides على نحو مفضل يتم صياغة متعددة ببتيدات الاندماج ؛ باعتبارها تركيبات صيدلية محتوية على متعدد skin test الحالي ؛ للاستخدام في اختبار الجلد نموذجيا تحتوي تركيبات . physiologically acceptable carrier ببتيد وحامل مقبول فيسولوجيا ١ كهذه على واحدة أو اكثر من متعددة الببتيدات المذكورة أعلاء بمدى كمية يتراوح من حوالي
٠ ميكروجرام إلى حوالي ٠ ميكروجرام ؛ على نحو مفضل من حوالي ٠١ ميكروجرام إلى حوالي لقا
- ey -
ميكروجرام بحجم 01 مل . على نحو مفضل ؛ يكون الحامل المستخدم في مثل هذه
التركيبات الصيدلية عبارة محلول ملحي مع مواد حافظة ملائمة ؛ Tween if 5 phenol Jie
. 0
في مظهر jal يوفر الاختراع الحالي طرق لاستخدام متعددة الببتيدات polypeptides من أجل © تشخيص مرض السل ٠ indicative of tuberculosis
في هذا المظهر ؛ يتم توفير طرق للكشف عن عدوي المتفطرة السلية في عينة بيولوجية biological
٠. باستخدام متعددة ببتيدات الاندماج بمفردها أو في شكل اتحاد كيميائي «sample
كما هو مستخدم في السياق الحالي ٠ تكون " عينة بيولوجية biological sample " عبارة عن أي
die محتوية على جسم مضاد antibody التي تم الحصول عليها من مريض . على نحو مفضل ٠ ء تكون العينة pall بكامل ؛ نواتج القشرع sputum ؛ مصل serum ¢ بلازما plasma ¢ اللعاب
saliva ¢ السائل المخي الشوكي cerebrospinal fluid أو البول urine . على نحو أكثر تفضيلاً
تكون العينة عبارة عن عينة دم أو مصل serum أو بلازما 1888م تم الحصول عليها من مريض
أو مصدر دم . يستخدم متعدد الببتيد polypeptide في معايرة ؛ كما هو موصوف أدناه ؛ لتحديد
وجود أو غياب الأجسام المضادة لمتعدد الببتيد ( الببتيدات ) polypeptide(s) في عينة فيما يتعلق ٠ بقيمة قطع محدد مسبقا . يدل وجود أجسام مضادة كهذه على تحسس لمولدات المضاد المتفطرة
التي تعد دالة على مرض السل ٠ indicative of tuberculosis
في النماذج التي تستخدم اكثر من واحد من متعدد ببتيد الاندماج ٠ أن polypeptides المستخدمة
على نحو مفضل تكون مكملة ( أي أن متعدد ببتيد مكون واحد سوف يقصد به الكشف عن العدوى
في عينات حيث لا يتم الكشف عن العدوى بمتعدد ببتيد مكون another component al (polypeptide ٠ .
دض
عموما من أجل and عينات المصل serum التي تم الحصول عليها من سلسلة مرضى معروفين بإصابتهم قد يتم تمييز متعددة الببتيدات polypeptides المكملة باستخدام كل متعدد ببتيد على نحو مستقل بعدوي المتفطرة السلية . بعد تحديد أي من عينات الاختبار موجبة ( كما وصف أدناه ). © باستخدام كل واحدا من متعدد ببتيد ؛ قد تصاغ اتحادات كيميائية من اثنان أو اكثر من متعدد lagi الاندماج التي تعد قادرة على الكشف عن العدوي في معظم ؛ أو كل ؛ العينات المختبرة. تكون متعددة الببتيدات polypeptides كهذه مكملة . يكون ¥o=Yo 7 تقريبا من الأمصال من الأفراد المصابون بعدوي السل سالبة بالنسبة للأجسام المضادة لأي بروتين مفرد. لذلك قد يتم استخدام متعدد ببتيدات مكملة في شكل اتحاد كيميائي بغرض تحسين حساسية الاختبار ٠ التشخيصى ٠ improve sensitivity of a diagnostic test هناك مجموعة متنوعة من نسق المعايرة المعروفة لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال لاستخدام واحد أو اكشر من متعددة الببتيدات polypeptides من اجل الكشف عن الأجسام المضادة في dae أنظر ¢ على سبيل المثال ¢ ٠١ Harlow and Lane لأجسام المضادة :نر ١14 ¢ Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory التي تم دمجها في السياق Ye الحالي بالإشارة إليها . في نموذج مفضل ؛ تتضمن معايرة استخدام متعدد ببتيد مثبتث على داعم صلد للربط إلى ولإزالة الجسم المضاد من العينة . بعد ذلك قد يتم الكشف عن الجسم المضاد المربوط باستخدام مفاعل كشف الذي يحتوي على مجموعة مراسل . تتضمن مفاعلات كشف مناسب أجسام مضادة التي تربط إلى جسم مضاد antibody /متعدد ببتيد متعد التركيب ومتعدد ببتيد حر موسوم بمجموعة مراسل polypeptide complex and free polypeptide labeled witha ص reporter group ) على سبيل المثال في معايرة شبه منافسة ( .
tt _ بديلا عن ذلك ؛ من الممكن استعمال معايرة تنافسية ؛ فيها يتم وسم جسم مضاد antibody الذي يرتبط بمتعدد ببتيد بمجموعة مستقبل والسماح له بالربط بمولد ضد موقوف بعد حضانة مولد الضد مع العينة . أن الامتداد الذي ليه تقوم أجزاء العينة بتثبيط ربط الجسم المضاد الموسوم بمتعدد الببتيد binding of the labeled antibody to the polypeptide هو مؤشر على فعالية العينة مع © متعدد الببتيد المثبت immobilized polypeptide
من الممكن أن تكون الدعامة الصلدة solid support عبارة عن مادة صلدة solid material معروفة لذوي المهارة المعتادة في هذا المجال التي إليها يتم ربط مولد الضد . مثلاً ؛ قد تكون الدعامة الصلدة solid support عبارة عن eles اختبار في لوح معايرة دقيق أو nitrocellulose أو غشاء ملائم أخر . بديلاً عن ذلك ؛ قد تكون الدعامة عبارة عن كرية أو قرص ؛ مثل زجاج أو ٠ زجاج ليفي fiberglass أو لبن الشجر latex أو عصارته أو sale لدنة plastic مثل متعدد ستيرين polystyrene أو متعدد فينيل كلوريد polyvinylchloride . من الممكن أن تكون الدعامة كذلك جسيم مغنطيسي magnetic particle أو جهاز إحساس بصري ليفي Jie «fiber optic sensor
تلك الوسائل التي تم الكشف عنها ؛ مثلاً في براءة الاختراع الأمريكية رقم 9784541 . من الممكن ربط polypeptides بدعامة صلدة solid support باستعمال تنوع من الأساليب التتقية ٠ المعروفة لذوى المهارة في هذا المجال . في سياق الاختراع الحالي ؛ يشير المصطلح " مرتبطة " إلى كلا من تجمع غير اسهامي ¢ مثل الامتزاز adsorption ¢ و ترابط اسهامي covalent attachment ( الذي قد يكون عبارة عن ترابط مباشر بين مولد الضد و المجموعات الوظيفية antigen and functional groups على الدعامة أو قد يكون ترابط بأي حال من عامل ربط عرضي cross-linking agent ( يفضل الربط بالامتزاز adsorption على وعاء في لوح معايرة دقيقة أو ٠ على غشاء . في هذه الحالات ؛ من الممكن تحقيق امتزاز بتلامس متعدد الببتيد ؛ في محلول لاض
منظم ملائم ؛ مع الدعامة الصلدة laid solid support ملاثم من الزمن . يتنوع زمن التلامس مع درجة الحرارة ؛ إلا أنه من الناحية النموذجية ؛ تتراوح درجة الحرارة بين حوالي ساعة واحدة ويوم واحد . clases بعد تلامس وعاء لوح معايرة دقيقة دقيق لدن contacting a well of a plastic polystyrene Ais ) microtiter plate أو (polyvinylchloride مع مقدار من متعدد الببتيد polypeptide © متراوح من حوالي ٠١ نانوجرام إلى حوالي ١ ميكروجرام ؛ ويفضل حوالي ٠٠١
نانوجرام ؛ كافية لربط كمية ملائمة من مولد الضد antigen . عموما من الممكن تحقيق ترابط اسهامي anata covalent attachment الببتيد بدعامة صلدة بواسطة أولاً تفاعل الدعامة مع مفاعل ثنائي وظيفي الذي سوف يتفاعل بدوره مع كلا من الدعامة ومجموعة وظيفية ¢ Jie مجموعة hydroxyl أو amino ؛ على متعدد الببتيد . مثلاً ٠ من الممكن ٠ ربط متعدد الببتيد بالدعامات ذات تغليف بوليمري a Dlappropriate polymer coating باستعمال hydrogen على الدعامة مع عتتحتة aldehyde أو بواسطة تكثيف مجموعة benzoquinone : فعال على متعدد الببتيد ( أنظر مثلاً
Pierce Immunotechnology catalog and handbook,1991,at A12-A13 في نماذج معينة؛ تكون المعايرة عبارة عن معايرة immunosorbent مرتبط با لأنزيم ) ELISA ) . من الممكن أجراء هذه ٠ المعايرة أولاً بواسطة تلامس مولد ضد متعدد ببتيد إندماج الذي من الممكن تثبيته على دعامة صلدة ؛ على نحو شائع على جدار لوح معايرة دقيق ؛ مع العينة ؛ بحيث يسمح للأجسام المضادة لمتعدد الببتيد داخل العينة للارتباط بمتعدد ببيتد مثبت . بعد ذلك يتم إزالة العينة الغير مرتبطة من متعدد الببتيد المثبت ويتم إضافة مفاعل كشف قادر على الارثباط بمركب معقد التركيب من جسم مضاد antibody مثبت ومتعدد الببتيد . بعد ذلك يتم تحديد مقدار مفاعل الكشف الذي يبقي مرتبط حك
ال - بالدعامة الصلدة solid support باستعمال طريقة مناسبة لمفاعل الكشف النوعي specific .detection reagent على نحو نوعي بدرجة اكبر ؛ بمجردٍ أن يتم تثبيت متعدد الببتيد على الدعامة وفقا لما هو موصوف بعالية ؛ على نحو نموذجي يتم حصر مواضع ترابط البروتين المتبقي على الدعم . من © الممكن الاستعانة بأي عامل حصر ملائم معروف لذوي المهارة المعتادة في هذا المجال ؛ Jie زلال مصل بقري ٠١ Tween s bovine serum albumin ) علامة تجارية) ) Sigma Chemical Co., (St.
Louis, MO . بعد ذلك يتم حضانة متعدد الببتيد incubation of polypeptide المثبت مع العينة ؛ ويسمح للجسم المضاد للربط بمولد مضاد . من الممكن تخفيف ملائم ؛ مثل محلول ملحي منظم بالفسفات phosphate-buffered saline (PBS) قبل الحضانة . عموما ؛ يكون زمن التلامس ٠ الملائم عبارة عن الفترة الزمنية التي تكون كافية للكشف عن وجود جسم مضاد antibody داخل عينة مصابة بالمتفطرة السلية . من المفضل ان يكون زمن التلامس كاف لتحقيق مستوي ترابط يكون 755 على الأقل مما تحقق عند التوازن بين الجسم المضاد المرتبط والغير مرتبط . بأن ذوي المهارة أولئك سوف يتعرفون أن الزمن الضروري لتحقيق التوازن من الممكن تحديده بسهولة بواسطة معايرة مستوى الترابط الذي يحدث عبر فترة من الزمن . في درجة حرارة الغرفة ؛ من الضروري أن ٠ يكون زمن الحضانة حوالي ٠ ؟ دقيقة. بعد ذلك من الممكن نزع العينة الغير مرتبط بغسل الدعامة الصلبة بمحلول منظم ملائم ؛ مثل محتوي على ).+ 7 Yo Tween ) علامة تجارية ) من الممكن بعد ذلك إضافة مفاعل كشف إلى الدعامة الصلدة solid support . أن مفاعل الكشف الملاثم عن أي مركب يرتبط بمركب جسم مضاد antibody مثبت ومتعدد ad ومن الممكن الكشف عنه بواسطة أي واحد من Yo عدد متنوع من الوسائل المعروفة لاولئك في هذا المجال . من المفضل أن يحتوي عامل الكشف
Vv _ -— على عامل ترابط ( Nia بروتين A أو بروتين G أو lectin أو مولد ضد حر (free antigen مقترنة بمجموعة reporter . تتضمن مجموعات reporter المفضلة انزيمات ( مثل horseradish peroxidase ( « وركائز substrates وعوامل مشتركة cofactors ومثبطات inhibitors وإصباغ dyes ونيكليوات أشضعاعية radionuclides ومجموعات اشعاع ضوئي luminescent ومجموعات © تفلورية fluorescent و biotin وجسيمات غروانية colloidal particles ؛ مثل ذهب وسيلينيوم غرواني colloidal gold and selenium . من الممكن تحقيق تقارن لعامل الترابط بمجموعة reporter باستعمال الطرق المعيارية المعروفة لذوي المهارة المعتادة في هذا المجال . من الممكن كذلك شراء عوامل ترابط عامة متقارنة بتنوع من مجموعات reporters من العديد من مصادر تجارية ) (Zymed Laboratories, San Francisco, CA, and Pierce, Rockford.
IL Nie . ٠ بعد ذلك يتم حضانة مفاعل الكشف مع مركب جسم مضاد antibody مثبت و متعدد ببتيد لفترة زمنية كافية للكشف عن الجسم المضاد المرتبط . عموما من الممكن تحديد مقدار زمني كاف من تعليمات الجهة المصنعة أو بواسطة معايرة مستوي الترابط الذي يحدث على مدى فترة من الزمن . يتم بعد ذلك نزع مفاعل الكشف الغير مرثبط ويجري الكشف عن مفاعل الكشف المرتبط باستعمال مجموعة reporter . تعتمد الطريقة المستعملة للكشف عن مجموعة reporter على طبيعة مجموعة reporter ٠ © بالنسبة للمجموعات الفعالة إشعاعيا ؛ من الملاثم بصفة عامة طرق تعداد الومضان أو طرق التصوير الإشعاع الذاتي . من الممكن استخدام طرق مطيافية مجهرية للكشف عن إصباغ ومجموعات إشعاع ضوثي أو مجموعات تفلورية fluorescent قد يتم الكشف عن Biotin باستخدام avidin المقترن بمجموعة مراسلة مختلفة ( على نحو شائع مجموعة ذات فعالية إشعاعية أو مجموعة fluorescent أو أنزيم ) قد يتم توجه عام الكشف عن ٠ مجموعات مراسلة ١ لأنزيم بإضافة ركيزة substrate ) عموما لمدة محددة من الزمن generally for له
- tA — (a specific period of time متبوعا بالتحليل الطيفي أو بتحليل أخر لمنتجات التفاعل . spectroscopic or other analysis of the reaction products من أجل تحديد وجود أو غياب الأجسام المضادة للمتفطرة السلية في العينة ؛ عموما تجري solid support مقارنة الإشارة المكتشفة من المجموعة المراسلة التي تبقي مرتبطة بالدعامة الصلدة بالإشارة إلى تمائل قيمة قطع محددة مسبقا . في أحد النماذج المفضلة ؛ تكون قيمة القطع عبارة © : عن إشارة بمعدل متوسط التي تم الحصول عليها عندما تم تحضين مولد المضاد المثبت مع عينات
AD من مريض غير مصاب بالعدوى . على وجه العموم ؛ تعتبر عينة مولدة لإشارة ذات انحرافات عيارية أعلى قيمة القطع المحددة مسبقا ؛ إيجابية بالنسبة لمرض السل . في نموذج
Sackett وفقا لطريقة. . Receiver Operator Curve مفضل بديل ؛ يتم تحديد قيمة القطع باستخدام ‘ علم أساسي للدواء السريري : Clinical Epidemiology على الأدوية السريري » ٠ + وآخرين ٠ على نحو موجز ؛ في هذا النموذج ؛ قد يتم . ٠١١ و ٠٠١١ وشركاه الصفحات Little Brown (sensitivity تحديد قيمة القطع من بقعة لأزواج من معدلات إيجابية حقيقة ( أي ؛ الحساسية واحدة من قيمة JS التي تماثل ) 77٠٠٠ نوعية ( false positive rates Adil) ومعدلات إيجابية القطع المحتملة لنتيجة الاختبار التشخيصى . تكون قيمة القطع على البقعة الأقرب للزاوية اليسرى _العلوية ( أي القيمة التي تتضمن المساحة الأكبر ) هي قيمة القطع الأكثر دقة ؛ وقد تعتبر عينة ٠ مولدة لإشارة تكون أعلى من قيمة القطع المحددة بهذه الطريقة إيجابية . على نحو بديل ؛ قد تتغير إلى false positive rate قيمة القطع إلى اليسار بمحاذاة البقعة ¢ لتقليل المعدل الإيجابي الزائف إلى الحد الأدنى . عموما ؛ false negative rate الحد الأدنى ؛ أو لتقليل المعدل السالب الزائف تعتبر عينة مولدة لإشارة التي تكون أعلى من قيمة القطع المحددة بهذه الطريقة إيجابية لمرض . tuberculosis Judl ٠١
في نموذج ذو صلة ؛ تجري المعايرة في نسق تدفق سريع خلالي أو اختبار شرائح ؛ حيث أنه يتم تثبيت مولد الضد على غشاء ؛ مثل nitrocellulose . في اختبار التدفق الخلالي flow- through 1 » ترتبط الأجسام المضاد داخل العينة بمتعدد الببتيد المثبت| immobilized polypeptide حيث تمر العينة خلال الغشاء . بعد ذلك يرتّبط مفاعل كشف بتركيب الجسم المضاد © و متعدد الببتيد حيث يتدفق المحلول المحتوي على مفاعل الكشف خلال الغشاء . قد يجري بعد ذلك الكشف عن مفاعل الكشف المترابط كما وصف أعلاه. في نسق اختبار الشرائح ؛ يتم غمر طرف واحد من الغشاء الذي إليها يتم ربط متعدد الببتيد في محلول محتوي على العينة . ترحل العينة بمحاذاة الغشاء خلال منطقة متضمنة مفاعل الكشف وإلى مساحة متعدد الببتيد المثبت . يدل تركيز مفاعل الكشف في متعدد الببتيد على وجود الأجسام المضادة للمتفطرة السلية في العينة Ve . على نحو نموذجي ؛ أن تركيز مفاعل الكشف في ذلك الموضع بشكل نموذج ؛ Jie خط ؛ الذي يمكن قراءته بصريا. يدل عدم وجود نموذج كهذا على نتيجة سالبة . عموما ؛ يتم اختبار كمية متعدد الببتيد المثبت على الغشاء لكي يكون نموذج يمكن تمييزه بصريا عندما تحتوي العينة الحيوية على مستوى من الأجسام المضادة الذي سوف يكون كافيا لتوليد إشارة موجبة في ELISA ؛ كما تم توضيحه أعلاه . على نحو مفضل ¢ تقدر كمية متعدد الببتيد المثبت على الغشاء من حوالي * ٠ نانوجرام إلى حوالي ١ ميكروجرام ؛ وعلى نحو اكثر تفضيلاً من حوالي ٠٠ نانوجرام . نموذجيا من الممكن أجراء هذه الاختبارات بكمية صغيرة جداً ( Wie نقطة واحدة) من مصل serum أو دم المريض . يعد وصف الاختراع ثم تقديم الأمثلة كسبيل للشرح ولا تعد هذه الأمثلة محددة لمجاله . + مثال : بروتينات اندماج fusion proteins مولدات الضد antigens للمتفطرة السلية تحتفظ بتوليد ٠ المناعة للأجزاء المستقلة 7ح
امه ا 7 المواد والطرق المستخدمة materials and methods ١٠ / 7 تشكيل بروتينات الاندماج construction of fusion proteins يجري تعديل تسلسلات التشفير لمولدات الضد antigens المتفطرةٍ السلية بواسطة PCR لأجل © تسهيل اندماجها وفيما بعد تعديل بروتين الاندماج جينيا يجري تكبير DNA باستعمال محلول منظم 7 بحجم ٠١ ميكرولتر ٠١ x و ؟ ميكرولتر . ٠١ مليمول ANTPs و ١ ميكرولتر من كل المواد التمهيدية ل PCR بتركيز ٠١ ميكرومول و 90 AY ميكرولتر من ماء و١٠ ميكرولتر Pfu بوليمراز (Stratagene, La Jolla, CA) DNA و ١ ميكرولتر من DNA بتركيز سواء ١ نانوجرام / ميكرولتر ( لمولد الضد 3 70188 ) أو ٠٠ نانوجرام / ميكرولتر (مولدات الضد -١ antigens ٠ 1038 بوزن YA كيلو دالتون ) . بالنسبة لمولد الضد ThRa3 ؛ يجري النسخ في 14 درجة iste لمدة Y دقيقة .متبوعا 5٠ دورة في 1 درجة مئوية لمدة ١5 ثانية و VY درجة مثوية لمدة ١ دقيقة وأخيراً ؛ بدرجة حرارة VY مئوية لمدة ؛ دقائق . بالنسبة لمولد الضد TA كيلو دالتون ؛ يجري النسخ في 976 درجة مئوية لمدة Y دقيقة ؛ متبوعا ب 5٠ دورة بدرجة حرارة 97 مئوية لمدة Fe ثانية و TA درجة مئوية لمدة ١١ ثانية و YY درجة مئوية لمدة ؟ دقيقة واخيراً بواسطة YY درجة Ashe VO لمدة ؛ دقائق . بالنسبة لمولد الضد 1038-1 ¢ يجري النسخ في 94 درجة مئوية لمدة 7 دقيقة ويتبع ذلك ٠١ دورات في 16 درجة مئوية لمدة ١١ ثانية و TA درجة مئوية لمدة A ١١ ولا درجة مئوية لمدة در ١ دقيقة + Te دورة في AN درجة مئوية ١١ Bad ثانية ؛ 14 درجة Ashe لمدة ٠ ثائية و VY درجة مئوية لمدة در١ واخيرا VY درجة مثوية لمدة ؛ دقائق . بعد الهضم Following digestion نيكلاز باطني restriction endonuclease حصر لإنتاج أطراف ٠ متماسكة غير حادة ؛ يتم ربط نيكلوتيد متعدد نوعي لكل متعدد ببتيد اندماج fusion polypeptide اس
ey — في بلازميد التعديل الجيني ligated into an expression plasmid احتوي كل بلازميد ناتج على تسلسلات تشفير لمولدات ضد مستقلة لكل متعدد ببتيد اندماج . لقد كانت نواقل التعديل الجيني PET-12b و 017*111 . يتم ربط تسلسلات التشفير الثلاثة لمولدات الضد Ra.12 antigens وع1511 و 18835 لأجل تشفير © بروتين اندماج fusion protein واحد ( رقم تعريف التسلسل : ١ و ؟ ) ( الشكلين ١ أ و ({=Y يتم كذلك ربط تسلسلات التشفير الثلاثة لمولدات الضد antigens 2:014 و MTI DPV لأجل تشفير بروتين اندماج ثان ( أرقام تعريف التسلسل : 7 و4 ) ( شكل * ) يتم ربط تسلسلات التشفير الثلاثة لمولدات المضادة 15183 38KD 5s و 1038-1 لتشفير بروتين اندماج fusion protein واحد (رقم تعريف التسلسل : # و ١ ) ( الأشكال ؟ أ-؟ د ) . يتم ربط اثتان من ٠ تسلسلات التشفير ThHg و TH38-1 لتشفير بروتين اندماج fusion protein ) أرقام تعريف التسلسل : 7 و (A (الأشكال ؛ أ-؛د ) . يجري ربط تسلسلات التشفير الأربعة لمولدات الضد antigens 3م18 و 380 و 38-1 Tb و DPEP _لتشفير بروتين اندماج fusion protein (أرقام تعريف التسلسل : ١١ و ١4 ) ( الشكلين أ و 7 ب ) . يجري ربط تسلسلات التشفير الأربعة الخاصة بمولدات ضد DPV و 1411 و MSL و MTCC2 لتشفير بروتين fusion gz Lei) protein ٠ واحد ( أرقام تعريف التسلسل : ١١ و (VA (الشكلين 4 أ و 49 ب) . يتم ربط تسلسلات التشفير الثلاثة الخاصة بمولدات الضد antigens 15119 و PDV و 1411 لتشفير بروتين اندماج fusion protein واحد ( أرقام تعريف التسلسل : 4 و ٠١ ) (الأشكال ه أ-ه ي). يجري ربط تسلسلات التشفير الخمسة الخاصة بمولدات الضد antigens 14 5:0 و DPV 5 1111و MSL و ud) Mice بروتين اندماج ( ارقام تعريف التسلسل : ١١و lal) ) ١١ أ و ١ب ) ٠ يتم ٠٠ ربط تسلسلات التشفير الأربعة الخاصة بمولدات الضد Erd14 antigens و 5s DPV 1111و MSL لتشفير بروتين اندماج واحد ( أرقام تعريف التسلسل : 145 و ٠١ ( الشكلين ٠١ أ و
١7 و Erd 14 antigens يجري ربط تسلسلات التشفير الثلاثة الخاصة بمولدات الضد ٠. ب yo أ ١١ (الشكلين (YY و 7١ : و 1411 لتشفير بروتين اندماج واحد ( أرقام تعريف التسلسل DPV و TbHg antigens ب ) . يتم ربط تسلسلات التشفير الاثنين الخاصتين بمولدات الضد ١١ و STAY لتشفير بروتين اندماج واحد ( ارقام تعريف التسلسل : 77 و 4 ؟ ) ( الأشكال 5 و 8812 antigens يجري ربط تسلسلات التشفير الاثنين الخاصتين بمولدات الضد ٠. ( اب © أ ١“ الشكلين ( (YT 75 : لأجل تشفير بروتين اندماج واحد ) ارقام تعريف التسلسل DPPD . ( و اب في الاشريكية recombinant proteins were expressed يجري التعديل الجيني للبروتينات المأشوبة amino-terminal لدي بروتين طرفي أميني histidine باستعمال سنة بقايا من 2. coli القولونية polymerase ونظام تعديل جيني بوليمراز ) 211-176 ( PET ناقل بلازميد Jlexiuls portion | ٠ ويتم استعمال سلالة اشريكية (WI « Novagen, Madison) T7RNA expression system high level للتعديل الجيني عال المستوي (Novagen) BL21 ( DE3 ( PlysE E. coli قولوينة . expression من المادة recombinant (His-Tag) fusion proteins يجري تنقية بروتينات الاتندماج المأشوبة مل من مزارع بتشغيله ٠٠ الطافية القابلة للذوبان أو هيكل تضمين غير قابل للذوبان حجمة ٠ : الألف باستعمال chromatography بواسطة الفصل الكروماتوجرافي IPTG محرضة ب
The one step QIAexpress Ni-NTA Agarose Matrix ( افآ Chatsworth,CA) من 3121 محتوية ald مل من مزرعة مشبعة خلال ٠١ باختصار ؛ يضاف .8M urea في وجود لمحتوي على 5 ميكروجرام / مل من 12X YT مل من وسط ٠ في PET على تركيب . درجة مئوية مع الهز TY والنمو في chloramphenicol ميكروجرام /مل من YE و ampicillin ٠٠
ov - _ يتم حث المزارع البكتيرية bacterial cultures باستعمال ¥ مليمول من IPTG في مستوي كثافة بصرية 060 مقدارها 7« والنمو لمدة ؟ ساعات إضافية ٠١“ =0D) إلى ٠١9 ) . تجمع الخلايا من de® ٠ من مزارع التشغيلة بالفرز بالطرد المركزي centrifugation وإعادة التعليق 40 في ٠١ مل من محلول منظم رايط binding buffer ( ).+ جزئ جرامي من sodium phosphate © وبتركيز هيدروجيني A pH و ٠١ مليمول من 108-1101 ؛ بتركيز هيدروجيني (A pH محتوي على ¥ مليمول من PMSF و ٠١ ميكروجرام / مل Leupeptin إضافة إلى قرص كامل من مثبط (Boehringer Mannheim) protease لكل Yo مل . يتم تحليل الاشريكية القولونية E.coli بواسطة ذوبان التجمد متبوعا بالمعالجة بالموجات الصوتية brief JSG) sonication مختصر ثم الدوران بمعدل ١١ كيلو دورةٍ لكل دقيقة لمدة ٠١ دقيقة لجعل أجسام ٠ التضمين على هيئة كرية pellet . تغسل أجسام التضمين ثلاث مرات في ١7 CHAPS في ٠١ مليمول من .109-1101 ( بتركيز هيدروجيني (A pH . أن هذه الخطوة تقلل بشكل كبير تلوث LPS يتم بصورة نهائية ذوبان هيكل التضمين في Yo مل من محلول تربط منظم محتوي على A جزئ جرامي من اليوريا أو يضاف A جزئ جرامي من اليوريا مباشرة إلى المادة الطافية القابلة للذوبان . كانت بروتينات الاندماج المأشوبة ببقايا His—Tag عبارة عن تشغيلة مرتبط براتينج ٠ اجاروز NINTA ( © مل من «ونوع: لكل 550 مل من مستويات الحث (inductions بواسطة الهز في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحد وتمرير المركب عبر عمود . يتم تمرير التدفق مرتين عبر نفس العمود ويغسل العمود ثلاث مرات بالاستعانة ب ٠١ مل كل مرةٍ من محلول غسل منظم ١ ( wash buffer جزئ ely من sodium phosphate و ٠١ مليمول من 1101- «Tris بتركيز هيدروجيني pH 07 ) محتوي كذلك على A جزيئي جرامي من urea . تشطف بروتينات مرتبطة ٠ باستخدام To مل من immidazole بتركيز 15١ جزئ جرامي في محلول Jue منظم و # مل من الأجزاء المتجمعة . تجمع الأجزاء الذي يحتوي كل منها على بروتين اندماج fusion protein
مأشوب ثم تجري ديلزة مقابل ٠١ مليمول من Tris Hel ( بتركيز هيدرجيني (A pH يرتبط مرة واحد بالمادة المرصامة NI-NTA bound مرة واحدة والشطف eluted والديلزة dialyzed في ٠مليمول من .115-1101 ( بتركيز هيدروجيني 7.8 ) . يتنوع نتاج البروتين المأشوب من *؟- ٠ مليجرام لكل لتر من المزرعة البكتيرية المحثة بنقاوة اكبر من 48 7-تجري معايرة البروتينات © المأشوبة من حيث التلوث بالاندوتوكسين باستعمال معايرة (BioWhittaker) Limulus وأظهرت البروتينات أنها تحتوي أقل من EU.Img 10 . =Y / ١ [1 معايرة تكائر خلية t-cell proliferation assay
يتم اختبار متعدد ببتيدات الاندماج المنقاة من حيث المقدرة على حث تكائر Stimulation of T Ada) proliferation في مستحضرات خلية أحادية نووية محيطية peripheral blood mononuclear cell (PBMC) ٠ . يتم زراعة PBMCs من المانحون المعروفون بأنهم موجوبون لأختبار الجلد PPD والتي اظهرت الخلايا 7 انها تتكاثر في استجابة ل PPD والبروتينات القابلة للذوبان الخام من المتفطرة السلية في 1640 RPMI مزودة بمصل بشري متجمع ٠١ 7و Su ميكروجرام /مل من gentamicin . يضاف متعدد ببتيدات منقاة في حجم مماثل بتركيزات ١<* إلى ٠ ميكروجرام /مل . بعد ستة أيام من الزراعة في ألواح ب 97 وعاء مستديرة القاعدة بحجم ٠٠١ ٠ ميكرولتر ويزال 00 ميكرولتر من الوسط من كل وعاء لأجل تحديد مستويات 1770-7 ؛ وفقا لما هو موصوف في السياق أدناه في مقطع Y/Y . يلي ذلك تعريض الألواح بالاستعانة ب ١ ميكروكوري/لكل وعاء من tritiated thymidine لمدة VA ساعة إضافية ؛ والتجميع وتحديد وامتصاص tritium باستعمال dae تذيذبي غازي gas scintillation counter . يؤخذ في الاعتبار أن الأجزاء الضئيلة الناتجة عن التكاثر في كلاهما تتضاعف ثلاث أضعاف اكبر من التكاثر
. الملحوظ في الخلايا المزروعة في الوسط بمفرده موجبة ٠ حا
١ 7 / ¥ معايرة interferon-y في ظروف معقمة يتم إزالة الطحال من كل واحد من الفئران mice ويعد معلق من الخلابا الأحادية في 8141 متبوعا بتحليل خلايا الدم الحمراء . يتم وضع ٠٠١ ميكرولتر من الخلايا ١ ؟ Vex خلية ) لكل وعاء في لوح دقيق المعايرة به AT وعاء مسطحة القاعدة . يتم حث المزارع © بالاستعانة ببروتينات مأشوبة لمدة YE ساعةومعايرة المادة الطافية من Cus وجود interferon-y . يتم تحليل مستويات interferon-y للمادة الطافية بواسطة SANDWich Elisa « باستعمال أزواج من الجسم المضاد والإجراءات المتاحة من فار مينجين . يتم إنتاج متحنيات معيارية باستعمال cytokine ات فئران مأشوبة . يتم تغليف ألوا ح ESA ( ما يسمي بعملية Corning ) باستعمال ٠ ميكرولتر/للوعا ء ( ١ ميكروجرام / مل ؛ في محلول تغليف من bicarbonate )+ جزيئي Ve جرامي ؛ بتركيز هيدروجيني pH 3.7( من طاهدد ماسك لل cytokine ( مضاد ل interferon-y الفثران mice المستخلص من الجرذان PharMingen) » 4% رقم (18181D ¢ والحضانة لمدة ¢ ساعات في dap حرارة الغرفة . تهز محتويات اللوح والحصر بعد ذلك باستعمال 0=PBS .+ 7 ٠٠١ ( BSA 7١ 5 Tween ميكرولتر/ للوعاء ) لمدة ليلة في ؛ درجة مئوية والغسل لستة مرات في Tween 7 ..١-035 . تضاف المعايير ) interferon-y الفثران (mice وعينات sale طافية 1° مخففة في 000-088 / BSA 7 0.٠ « Tween لمدة ساعتان في درجةحرارة الغرفة . تغسل الألواح كما هو بعالية ويلي ذلك التحضين لمدة ساعتان في درجة حرارة الغرفة مع ٠٠١ ميكرولتر/ sles من Ab ثان biotin rat y mouse IFN-Y (فئة رقم PharMingen / 18112 D ( بمعدل تحفيف در + ميكروجرام/مل في Tween 7 +» 0~PBS و ).+ BSA Z بعد الغسل ؛ يتم حضانة الألواح مع ٠٠١ ميكرولتر/وعاء من streptavidin-HRP (Zymed) بمعدل تخفيف ١ : قل
. درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة ABSA 7 +.) دع« و 7 ٠. 0-085 في 4
TMB substrate : ميكرو/ للوعاء من الركيزة ٠٠١ تغسل الألوا ح مرة واحدة اخيرة . واستعمال & Vea oe : :
Olea (3,315.5 - tetramethylbenzidine, Kirkegaard and Perry, Gaithersburg, MD) ميكرولتر/ وعاء . يجري ٠٠ ويتوقف التفاعل بعد ظهور اللون ؛ بالاستعانة بمركب ,11.50 ؛ نانومتر كطول موجي مرجعي ove 5؛ نانومتر باستعمال ٠ عند مستوي (OD) تحديد الامتصاص © . بقيم باستعمال المنحني المعياري cytokine وتركيز 7-النتائج / 1 حاث للاستجابات المناعية tri-fusion proteins -بروتينات اندماج ثلاثي 7 المتفطرة السلية في ناقل antigens يتم إدخال تسلسلات التشفير الثلاثة الخاصة بمولدات الضد antigens يجري إنتاج مولدات الضد . fusion protein التعديل الجيني لإنتاج بروتين اندماج Ve مأشوب واحد fusion protein علي هيئة بروتين اندماج Ra35 و 10119 sRal2 led] المشار و 1411 على هيئة بروتين إنتاج ثان DPV ب ) يتم إنتاج كل من 27214 و ١ أ و ١ الشكلين ( (شكل ؟ ) . بطريقة الفة يتم تنقية بروتيني الاندماج للاستعمال في معايرات انبوب الاختبار . والجسم الحي ١ يجري اختبار بروتيني الاندما z من حيث قدرتها على حث استجابات خلية 1 من ستة من الخاضعين للاختبار PPD عندما يتم قياس تكاثر الخلية 7 ؛ كلا بروتتي الاندماج أظهرا نمط مفاعليه مماثلة وكما هو الحال بالنسبة لأجزائها المستقلة ( الأشكال ؛ ١أ-4١ و ) . يجري الحصول على نتيجة مماثلة عندما يتم قياس إنتاج IFNy ( الأشكال ٠١أ-5١و ) . مثلاء استجاب الخاضع للاختبار 0160 لمولدات الضد antigens 15118 و MTT على نحو مستقل . : قا
IV antigens كذلك استجاب الخاضع للاختبار 0160 لبروتينيات الاندماج التي تضمنت مولدات الضد . ) ب١٠# الثلاثة (الأشكال ؛ ١ب و على النقيض من ذلك لم يلاحظ استجابة خلية 7 من 10160 إلى مولدات ضد أخري على نحو أو DPV و Erdl4 لم يتفاعل مع مولدات ضد D201 « للاختبار أخر jal منفردا . خاضع على نحو منفرد ¢ لم يكن كذلك سريع الاستجابة لبروتين الاندماج محتوي على مولدات الضد MTT © هذه . يجب ملاحظة انه عندما لم تكن استجابة الخلية 1 إلى الإجزاء المستقلة من antigens بروتيني الاندماج قوية بدرجة خاصة ؛ فأن بروتينات الاندماج تحت الاستجابات التي تكون المستقلة في معظم antigens متساوية إلى أو أعلى من تلك المستحثة بواسطة مولدات الضد . الحالات على هيئة مولد Ral2-TbH9-Ra35 A fusion protein يتم كذلك اختبار بروتين اندماج Ve مناعة في الجسم الحي . في هذه التجارب ؛ يتم حقن بروتين الاندماج إلى داخل وسادة القدم للفئران لإغراض التحصين . كل مجموعة من ثلاثة فئران استقبلت البروتين في صياغة مادة : ١١9 ؛ فاكسين ٠١547 ¢ وآخرين Ling ) SBAS2 » SBASIC : مختلفة adjuvant مساعدة بعد التحصين تحت الجلد مرتين بفاصل زمني . AL(OH); )و 58487و 1917-57 ثلاثية أسابيع ؛ يتم التضيحة بالحيوانات بعد أسبوع واحد . ويتم جمع العقد اللمفاوية الخاصة بتلك Ve و 1 cell proliferation مستجيبة في معايرات تكاثر خلية WA الحيوانات للاستعمال باعتبارها . cytokine إنتاج بصرف النظر عن المادة المساعدة التي يتم استعمالها في التحصين ؛ يتم حث استجابات تكاثر عندما يتم استعماله كمولد ضد مستقل ( شكل « ThbHg القوية ضد T cell proliferation خلية يتم حث استجابات أضعف ضد 8835 و 8812 ( المشكلين 7١ب و ١١ج ) . عندما . ) 1١١ 0 ٠١
امه - يتم استعمال بروتين الاندماج —TbH9-Ra35 12812 باعتباره مولد مناعة ؛ يتم ملاحظة استجابة مماثلة لتلك المضادة للأجزاء المستقلة . عندما يتم قياس إنتاج cytokine ؛ انتجت المواد المساعدة SBASIC و SBAS2 استجابات interferon-y مماثل ( شكل ١7 ) و 11.4 ( شكل (VA على الرغم من ذلك ؛ نتج عن اتحاد © كيميائي بين 5857 aluminum hydroxide y استجابات interferon-y الاقوي والمستوي الأقل لإنتاج 11.4 لكل مولدات الضد ADEN antigens . في ما يتعلق باستجابة الجسم المضاد البشري في الجسم all ؛ يظهر شكل ١١ أ -9١و أن بروتين الاندماج قد سبب BB) كلا من الاستجابات النوعية لمولد الضد 1801 و ,180:0 عندما يتم استعمال مع UT من المواد المساعدة الثلاثة . أضف إلى ذلك ؛ يتم تحصين فئران 5781/6 باتحاد كيميائي من اثنان من تركيبات التعديل ٠ الجيني كل منها يحتوي على تسلسلات التشفير Ral2-TbH9-Ra35(Mth32A) أو (39ط4) Erd14-DPV-MTI على هيئة لقاحات DNA vaccines . أظهرت الحيوانات المحصنة وقاية ملحوظة ضد مرض السل عند اختبار المناعة الايروسولي التالي لبكتريا حية . اعتمادا على هذه النتائج؛ يتم صناعة تركيب الاندماج من تسلسلات التشفير 1105328 و ه1439 و منتجة المشفر المختبر في نموذج وقاية طويل الأجل من خنزير هندي . في هذه ٠ الدراسات ؛ يتم تحصين الخنازير الهندي ببروتين اندماج fusion protein مأشوب أحادي أو خليط من بروتينات خليط Mtb32A و Mtb39A في صياغات محتوية على مادة مساعدة adjuvant . يظهر الشكل Volvo أن الخنازير الهندية المحصنة ببروتين اندماج SBASIC أو 53852 كانت أفضل وقاية ضد الإصابة بمرض السل عند أجراء اختبار مناعة تالٍ ؛ بالمقارنة بالحيوانات المحصنة باثنان من مولدات الضد antigens في خليط في نفس صياغة المادة المساعدة .وفرت ٠ -_بروتينات الاندماج في صياغة 53882 اكبر وقاية على الإطلاق في الحيوانات . اا
—- 9ه
هكذا من الممكن استعمال بروتينات الاندماج من مولدات ضد المتفطرة السلية mycobacterium
tuberculosis antigens المتنوعة باعتبارها مولدات مناعة اكثر فعالية في صياغات اللقاح
. خلائط مكونات مستقلة je vaccine
1[ ؟/ —Y بروتين اندماج ثنائي متضمنة استجابات مناعية bi-fusion protein induced immune
. responses °
يتم انتاج بروتين اندماج SU fusion protein محتوى على مولدات ضد 1011-9 و 1038-1
بدون تسلسل مفصلي بواسطة طرق مأشوبة . يجري التحقيق من قدرةٍ بروتين الاندماج 16381-
9 لحث تكائر Stimulation of proliferation خلية 1 cell وانتاج interferon-y . يجري
الاستعانة ب PBMC من ثلاث متبرعين : أحد المتبرعين تم إظهار من قبل بأنه يستجيب لمولد ٠ الضد 70119 ولكن ليس إلى alse الضد 7038-1 ( متبرع ١١١ ) ؛ أظهر أخر استجابة لمولد
الضد 7038-١ ولكن لم يظهر استجابة لمولد الضد 05119 ( متبرع (VAL أظهر متبوع أخر
استجابة لكلا مولدي الضد (متبرع ٠١١ ( . تشرح نتيجة هذه الدراسات الفاعلية الوظيفية لكلا
مولدي الضد في بروتين الاندماج ( الأشكال ١7أو١اب و "١7١أو '”باو (RYT ١ | 1 Vo 7-بروتين اندما z رباعي متفاعل بأمصال مريض السل .
يتم إنتاج بروتين اندماج fusion protein محتوي على مولد الضد TbRa3 و 38161 و Tb38-1 و
DPEP بواسطة الطرق المأشوبة recombinant methods . يتم اختبار فاعلية بروتين الاندماج
الرباعي tetra-fusion protein هذا باعتباره 1017-2 بامصال من بروتينات مصابة بالمتفطرة السلية
ا اه
بواسطة ELISA . تشرح نتائج الدراسات هذه (جدول ١ ) أن كل مولدات الضد antigens الأربعة سوف يقدر شخص ما ذو مهارة في هذا المجال انه من الممكن تغيير مولدات الضد antigens المستقلة في كل بروتين اندماج ومن المتوقع ان الفعالية المقارنة توفر ذلك لكل واحد من عوامل © تحديد المستضد الذي يظل متاح من الناحية الوظيفية . أضف إلى ذلك ؛ من الممكن استعمال الصور المبتورة من البروتينات المحتوية على عوامل تحديد المستضد الفعالة في هيكل بروتينات لاتدماج construction of fusion proteins . أن الاختراع الحالي غير محدود بمجال النماذج التمثلية والتي يكون الغرض منها توضيح مظاهر فردية للاختراع + تعد أي تسلسلات نسائل أو nucleotide أو حمض أميني amino acid التي ٠ تكون متماثلة وظيفيا داخل مجال الاختراع . في الواقع سوف تصبح التعديلات المتنوعة للاختراع علاوة على تلك الموصوفة هنا في السياق واضحة لذوي المهارة في هذا المجال من الوصف السابق والرسومات المرفقة . أن الغرض من هذه التعديلات تقع في مجال عناصر الحماية المرفقة . من المفهوم أن كل الأحجام الأزواج القاعدية المفترضة للنيكليوتيدات nucleotides تقريبية ويتم استعمالها لعمليات الوصف ٠. 5 يتم إدماج كل المطبوعات المذكور هنا في السياق بالإشارة إليها بالكامل . جدول ١ فعالية بروتين الاندماج 1137-2 مصابة بمرض السل الأمصال المعتادة الحالة | 188 [WI] 758 | الحالة | هوية OD45 | 4 | 0 YA | TbRa | Tb38-1 | DPEP المصل 3 كيلو 0 دالتون Kd BRIA] TB | cov [+ evn [+ [wo
1١ = — ل | + | عا + ]| + | تنا نايا 8 اا اما جا د +0 BoaLiy | 18 new | oie ٠ع الح vest eae [ee [ee ا ا ا + [xan [+ | Yeve | |x [x ل ل لاا ا قا جا ةا SC اا Te + ا يي + جا خا ewe | ww تر p00] TB ادك الح one] TB ven [eave |e Te Te a | = | جد + | sow TB [Yaa + vets [ - | جا جا جا TB [eee | vee [we 71004 ا اجا جد + العا + اا soot |B جا حا pond | © [vas [evans [wr المح ال ل ل IP ET IAT NE PW TB [rere awe [ww | | = |[ حل حا جا - اا اكد + اجا “aso | TB + ا ادا TB [even] + [ves [Tw | 0800 اح TB An Tess |e oe للك ay [ee | ال Cu] TB لح ام اه ا د أده ioe | mm [Sve a] الما احا + ا [een = انا TB |04 امك الح ال ل ل ال ا لمكن ال الح ل ل ال ا ل ا ا أ اا خا + | ا ا IT ST NE الي اله للب الاح ملس =e الج الحا اا الا تكن ال الا ا i004 الخاة الا النة الال ان لتك TB | 5 اد اسح ل ل ل ال ل ححا =[ | AGS [ak ven | - [ave = حا د | AGN eek ave - [vs AGO ak ave | - [vey [= [= | =o ev [oo | - ا AG ek [ote اا ات الا ا - ا اب A698 | wh ذا لا الا اللا الح ل ا ا ا ححا [oo ا ا = ask any [606ه __ [Obed | wm Tove |
Claims (1)
- _ ht Y — عناصر الحماية-١ ١ بولي ببتيد مولد للمناعة immunogenic polypeptide « يشتمل على متوالية حمض أميني lads amino acid sequence للوحدات البنائية من 4 إلى VY من المتوالية ذات الهوية رقم AF ١ ؟- بولي نيكلوتيد polynucleotide يشتمل على متوالية نيكلوتيد nucleotide sequence التي ¥ 458 بولي ببتيد encodes a polypeptide طبقاً لعنصر الحماية .١ ١ ؟- بولي نيكلوتيد polynucleotide يتكون من متوالية نيكلوتيد nucleotide sequence التي لها " المتوالية ذات الهوية رقم ١١ أو المتوالية التي تشفر نفس النيكلوتيد nucleotide أو منتج جين YF مكافئ من الناحية الوظيفية functionally equivalent gene product . ١ 4 - تركيبة صيدلانية تشتمل على بولي ببتيد polypeptide طبقاً لعنصر الحماية .١ ١ *#- تركيبة صيدلانية تشتمل على بولي نيكلوتيد polynucleotide طبقاً لأي عنصر من عناصر 7 الحماية ؟ او .٠ <١ ١ ناقل تعبير expression vector يشتمل على بولي نيكلوتيد polynucleotide طبقا raid Y الحماية #. Jib —V ١ تعبير expression vector طبقاً لعنصر الحماية 7 والذي يكون عبارة عن JU Y فيروسي viral vector .Y4YA— A Y —-A ١ تركيبة لقاح vaccine composition تشتمل على بولي ببتيد طبقاً لعنصر الحماية ١ وعامل ١ مساعد.١ 4- تركيبة لقاح vaccine composition تشتمل على بولي نيكلوتيد polynucleotide طبقاً لأي -٠١ ١ خلية عائل معزولة isolated host cell تعبر عن بولي ببتيد polypeptide ناتج عودة الارتباط الجيني طبقاً لعنصر الحماية .١-١١ ١ طريقة لإنتاج بولي ببتيد polypeptide طبقاً لعنصر الحماية ١ تشتمل على تعبير ناتج ¥ عودة الارتباط الجيني لبولي نيكلوتيد polynucleotide طبقاً لاي عنصر من عناصر الحماية ؟ أو ©
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SA08290426A SA08290426B1 (ar) | 2005-11-12 | 2005-11-12 | بروتينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السلية واستعمالاتها |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SA08290426A SA08290426B1 (ar) | 2005-11-12 | 2005-11-12 | بروتينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السلية واستعمالاتها |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA08290426B1 true SA08290426B1 (ar) | 2012-05-16 |
Family
ID=58232640
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA08290426A SA08290426B1 (ar) | 2005-11-12 | 2005-11-12 | بروتينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السلية واستعمالاتها |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SA (1) | SA08290426B1 (ar) |
-
2005
- 2005-11-12 SA SA08290426A patent/SA08290426B1/ar unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2326598C (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis antigens and their uses | |
| US7335369B2 (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis antigens and their uses | |
| JP4516616B2 (ja) | Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原の融合タンパク質およびその使用 | |
| ES2262595T3 (es) | Compuestos y metodos para la inmunoterapia y diagnostico de la tuberculosis. | |
| US8143386B2 (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis antigens and their uses | |
| JP4764445B2 (ja) | 結核の免疫治療および診断のための化合物およびそれらの使用方法 | |
| ES2378051T3 (es) | Compuestos y métodos para el diagnóstico de la tubercolosis. | |
| US6465633B1 (en) | Compositions and methods of their use in the treatment, prevention and diagnosis of tuberculosis | |
| SA08290426B1 (ar) | بروتينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السلية واستعمالاتها | |
| SA08290425B1 (ar) | بروتينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السلية واستعمالاتها | |
| ZA200005505B (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis and their uses. | |
| ES2368572T3 (es) | Compuestos y métodos para inmunoterapia y diagnosis de tuberculosis. | |
| MXPA00009803A (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis |