RU98121521A - MODIFIED DNA POLYMERASE FROM CARBOXYDOTHERMUS HYDROGENOFORMANS AND ITS APPLICATION FOR PAIRED (COUPLED) REVERSE TRANSCRIPTION AND CHAIN POLYMERASE REACTION - Google Patents

MODIFIED DNA POLYMERASE FROM CARBOXYDOTHERMUS HYDROGENOFORMANS AND ITS APPLICATION FOR PAIRED (COUPLED) REVERSE TRANSCRIPTION AND CHAIN POLYMERASE REACTION

Info

Publication number
RU98121521A
RU98121521A RU98121521/13A RU98121521A RU98121521A RU 98121521 A RU98121521 A RU 98121521A RU 98121521/13 A RU98121521/13 A RU 98121521/13A RU 98121521 A RU98121521 A RU 98121521A RU 98121521 A RU98121521 A RU 98121521A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
dna polymerase
activity
polymerase
dna
vector
Prior art date
Application number
RU98121521/13A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2221866C2 (en
Inventor
Вальтрауд Анкенбауер
Урсула Маркау
Кристине Эбенбихлер
Гунтар Аххаммер
Original Assignee
Роше Диагностикс Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from EP97121151A external-priority patent/EP0921196A1/en
Application filed by Роше Диагностикс Гмбх filed Critical Роше Диагностикс Гмбх
Publication of RU98121521A publication Critical patent/RU98121521A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2221866C2 publication Critical patent/RU2221866C2/en

Links

Claims (1)

1. Очищенная ДНК-полимераза, проявляющая активность обратной транскриптазы в присутствии ионов магния и/или ионов марганца, обладающая пониженной активность 5'-3'-экзонуклеазы или ее отсутствием и по существу не обладающая активностью рибонуклеазы Н и получаемая из Carboxydothermus hydrogenoformans.1. Purified DNA polymerase, exhibiting reverse transcriptase activity in the presence of magnesium ions and / or manganese ions, having reduced or absent 5'-3'-exonuclease activity and essentially no ribonuclease H activity and obtained from Carboxydothermus hydrogenoformans. 2. ДНК-полимераза по п.1, где указанная ДНК-полимераза проявляет активность обратной транскриптазы при практическом отсутствии ионов марганца. 2. DNA polymerase according to claim 1, where the specified DNA polymerase shows the activity of reverse transcriptase in the practical absence of manganese ions. 3. ДНК-полимераза по п.1 или 2, где указанная полимераза проявляет активность обратной транскриптазы, зависимую от марганца. 3. The DNA polymerase according to claim 1 or 2, wherein said polymerase exhibits manganese-dependent reverse transcriptase activity. 4. ДНК-полимераза по пп.1-3, где активность обратной транскриптазы, зависимая от магния, выше активности обратной транскриптазы указанной полимеразы, зависимой от марганца. 4. DNA polymerase according to claims 1 to 3, where the activity of reverse transcriptase, dependent on magnesium, is higher than the activity of reverse transcriptase of the indicated polymerase, dependent on manganese. 5. ДНК-полимераза по любому из пп.1-4, где указанная полимераза представляет собой мутант с пониженной активностью 5'-3'-экзонуклеазы или ее отсутствием, при этом последнюю получают из природной полимеразы, обладающей активностью 5'-3'-экзонуклеазы. 5. DNA polymerase according to any one of claims 1 to 4, wherein said polymerase is a mutant with reduced activity of 5'-3'-exonuclease or its absence, the latter being obtained from a natural polymerase having 5'-3'- activity exonuclease. 6. ДНК-полимераза по любому из пп.1-5, где указанная полимераза имеет кажущуюся молекулярную массу приблизительно между 64 и 71 килодальтон, определенную методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS). 6. DNA polymerase according to any one of claims 1 to 5, wherein said polymerase has an apparent molecular weight of between about 64 and 71 kilodaltons as determined by sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis. 7. Рекомбинантная ДНК-полимераза по любому из пп.1-6, где указанную полимеразу получают из Е.coli штамма, обозначаемого как Е. coli GАl. 7. Recombinant DNA polymerase according to any one of claims 1 to 6, wherein said polymerase is obtained from an E. coli strain designated as E. coli GAL. 8. Выделенная последовательность ДНК, кодирующая полимераву по любому из пп. 1-7. 8. The selected DNA sequence encoding a polymera according to any one of paragraphs. 1-7. 9. Последовательность рекомбинантной ДНК, способная кодировать ДНК-полимеразу по любому из пп.1-7. 9. A recombinant DNA sequence capable of encoding a DNA polymerase according to any one of claims 1 to 7. 10. Выделенная последовательность ДНК, представленная формулой, приведенной в SEQ ID Nо. 10. 10. The selected DNA sequence represented by the formula shown in SEQ ID No. ten. 11. Вектор, содержащий выделенную последовательность ДНК по любому из пп.8-10. 11. A vector containing the selected DNA sequence according to any one of paragraphs.8-10. 12. Вектор по п.11, где такой вектор представляет собой плазмиду pDS56, несущую мутант делеции гена ДНК-полимеразы Carboxydothermus hydrogenoformans, обозначенную как pΔ2-225AR4.
13. Вектор по п.11, обеспечивающий некоторые или все из следующих признаков:
(1) промоторы или сайты инициации транскрипции
(2) операторы, которые могут быть использованы для включения или выключения экспрессии генов
(3) рибосомные связывающие сайты для улучшенной трансляции
(4) транскрипцию или трансляцию сайтов терминации
14. Микробный хозяин, трансформированный вектором по пп.11-13.12. The vector according to claim 11, where the vector is a pDS56 plasmid carrying the deletion mutant of the Carboxydothermus hydrogenoformans DNA polymerase gene, designated as pΔ 2-225 AR 4 .
13. The vector according to claim 11, providing some or all of the following features:
(1) promoters or transcription initiation sites
(2) operators that can be used to turn gene expression on or off
(3) ribosomal binding sites for improved translation
(4) transcription or translation of termination sites
14. The microbial host transformed by the vector according to claims 11-13. 15. Микробный хозяин по п.14 в котором указанный трансформант представляет собой штамм Е.coli, обозначаемый как Е.coli GАl. 15. The microbial host of claim 14, wherein said transformant is an E. coli strain designated as E. coli Gal. 16. Способ получения ДНК-полимеразы по любому из пп.1-7, включающий стадии:
(а) культивирования природного штамма Carboxydothermus hydrogenoformans;
(b) суспендирования клеток природного штамма в буфере;
(с) разрушения клеток;
(d) очистки ДНК-полимеразы хроматографическими способами, включая использование одной или нескольких сефарозных колонок.16. The method of producing DNA polymerase according to any one of claims 1 to 7, comprising the steps of:
(a) cultivating a natural strain of Carboxydothermus hydrogenoformans;
(b) suspending cells of a natural strain in a buffer;
(c) cell destruction;
(d) purifying the DNA polymerase by chromatographic methods, including the use of one or more sepharose columns. 17. Способ получения ДНК-полимеразы по любому из пп.1-7, включающий выращивание рекомбинантного штамма Е.coli с использованием вектора по пп.11-13, очистку и выделение ДНК-полимеразы. 17. A method for producing a DNA polymerase according to any one of claims 1 to 7, comprising growing a recombinant E. coli strain using the vector of claims 11 to 13, purifying and isolating the DNA polymerase. 18. Способ амплификации РНК, характеризующийся тем, что термофильную ДНК-полимеразу по любому из пп.1-7 используют в сочетании с термостойкой ДНК-полимеразой. 18. The method of amplification of RNA, characterized in that the thermophilic DNA polymerase according to any one of claims 1 to 7 is used in combination with heat-resistant DNA polymerase. 19. Способ клонирования кДНК и секвенирования ДНК, характеризующийся тем, что используют термофильную ДНК-полимеразу по любому из пп.1-7. 19. The method of cloning cDNA and DNA sequencing, characterized in that they use thermophilic DNA polymerase according to any one of claims 1 to 7. 20. Способ мечения ДНК, характеризующийся использованием термофильной ДНК-полимеразы по любому из пп.1-7. 20. A method for labeling DNA, characterized by the use of thermophilic DNA polymerase according to any one of claims 1 to 7. 21. Способ обратной транскрипции РНК в кДНК, характеризующийся использованием термофильной ДНК-полимеразы по любому из пп.1-7. 21. The method of reverse transcription of RNA into cDNA, characterized by the use of thermophilic DNA polymerase according to any one of claims 1 to 7. 22. Набор для осуществления RТ-РСR, включающий обратную транскрипцию РНК с использованием термофильной ДНК-полимеразы по любому из пп.1-7 и амплификацию продукта кДНК термостойкой ДНК-полимеразой путем объединенной реакции (RТ и РСR), либо путем последовательных реакций (RT, а затем РСR). 22. A kit for RT-PCR, including reverse transcription of RNA using a thermophilic DNA polymerase according to any one of claims 1 to 7 and amplification of the cDNA product by heat-resistant DNA polymerase by a combined reaction (RT and PCR), or by sequential reactions (RT and then PCR).
RU98121521/13A 1997-12-02 1998-11-30 Purified dna polymerase, recombinant dna polymerase, methods for their preparing, isolated dna sequence and set for polymerase chain reaction RU2221866C2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP97121151.1 1997-12-02
EP97121151A EP0921196A1 (en) 1997-12-02 1997-12-02 Modified DNA-polymerase from carboxydothermus hydrogenoformans and its use for coupled reverse transcription and polymerase chain reaction

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU98121521A true RU98121521A (en) 2000-09-20
RU2221866C2 RU2221866C2 (en) 2004-01-20

Family

ID=29433259

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU98121521/13A RU2221866C2 (en) 1997-12-02 1998-11-30 Purified dna polymerase, recombinant dna polymerase, methods for their preparing, isolated dna sequence and set for polymerase chain reaction

Country Status (4)

Country Link
AT (1) ATE310822T1 (en)
CA (1) CA2252968C (en)
DE (1) DE69832459T2 (en)
RU (1) RU2221866C2 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111662893A (en) * 2020-07-01 2020-09-15 济南国科医工科技发展有限公司 Preparation method of molecular diagnostic enzyme preparation

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Waters et al. The tetracycline resistance determinants of RP1 and Tn l721: nucleotide sequence analysis
RU99109121A (en) THERMOSTABLE DNA POLYMERASE FROM CARBOXYDOTHERMUS HYDROGENOFORMANS
ES2201216T3 (en) ALCOHOL-DEHYDROGENASES AND ITS USE FOR PREPARATION BY ENZYMATIC ROUTE OF QUIRAL HYDROXYL COMPOUNDS.
Lehrach et al. Construction and characterization of pro. alpha. 1 collagen complementary deoxyribonucleic acid clones
Robson et al. Second gene (nif H*) coding for a nitrogenase iron protein in Azotobacter chroococcum is adjacent to a gene coding for a ferredoxin‐like protein
KR830005351A (en) Method for producing bacterial polypeptide using tryptophan promoting gene-operator gene
Xu et al. Cloning, sequencing, and analysis of a gene cluster from Chelatobacter heintzii ATCC 29600 encoding nitrilotriacetate monooxygenase and NADH: flavin mononucleotide oxidoreductase
Peschke et al. Efficient utilization of Escherichia coli transcriptional signals in Bacillus subtilis
GB2363795A (en) Process for nucleic acid purification using silicon carbide
Moise et al. T4 gene 32 protein model for control of activity at replication fork
JPH0669375B2 (en) Specific cleavage linker
WO1999020766A3 (en) NOVEL MODIFIED NUCLEIC ACID SEQUENCES AND METHODS FOR INCREASING mRNA LEVELS AND PROTEIN EXPRESSION IN CELL SYSTEMS
Stamburski et al. First step toward a virus-derived vector for gene cloning and expression in spiroplasmas, organisms which read UGA as a tryptophan codon: synthesis of chloramphenicol acetyltransferase in Spiroplasma citri
JPH08500978A (en) Improved enzyme for 2-keto-L-gulonic acid production
Bloom et al. In vitro effect of the Escherichia coli heat shock regulatory protein on expression of heat shock genes
EP3733849A1 (en) Improved promoter and use thereof
Kapler et al. Nuclease mapping and DNA sequence analysis of transcripts from the dihydrofolate reductase-thymidylate synthase (R) region of Leishmania major
Rosenthal et al. Purification and characterization of the heteromeric transcriptional activator MvaT of the Pseudomonas mevalonii mvaAB operon
RU99109022A (en) THERMOSTABLE DNA POLYMERASE FROM ANAEROCELLUM THERMOPHILUM
RU98121521A (en) MODIFIED DNA POLYMERASE FROM CARBOXYDOTHERMUS HYDROGENOFORMANS AND ITS APPLICATION FOR PAIRED (COUPLED) REVERSE TRANSCRIPTION AND CHAIN POLYMERASE REACTION
KR960023056A (en) Penicillin V Amidohydrolase Gene from Fuzarium Oxyporum
JPH0829099B2 (en) Recombinant DNA, expression vector and plasmid, production method thereof and inducible and repressible foreign gene expression method
EP0179786B1 (en) High copy number expression vectors
CA2267217A1 (en) Thermostable dna polymerase from anaerocellum thermophilum
KR910001046A (en) Expression vector for expression in microorganism for preparing unfused protein