Claims (10)
1. Очищенная ДНК-полимераза, проявляющая активность обратной транскриптазы в присутствии ионов магния и/или ионов марганца, обладающая пониженной активностью 5’-3’-экзонуклеазы или ее отсутствием и по существу не обладающая активностью рибонуклеазы Н и получаемая из Carboxydothermus hydrogenoformans, и где указанная полимераза имеет кажущуюся молекулярную массу между 64 и 71 кД, определенную методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS), и содержащая аминокислотную последовательность SEQ ID No: 11.1. Purified DNA polymerase, exhibiting reverse transcriptase activity in the presence of magnesium ions and / or manganese ions, having reduced or absent 5'-3'-exonuclease activity and essentially no ribonuclease H activity and obtained from Carboxydothermus hydrogenoformans, and where said polymerase has an apparent molecular weight of between 64 and 71 kDa, determined by polyacrylamide gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate (SDS), and containing the amino acid sequence of SEQ ID No: 11.
2. ДНК-полимераза по п.1, отличающаяся тем, что указанная ДНК-полимераза проявляет активность обратной транскриптазы при практическом отсутствии ионов марганца.2. DNA polymerase according to claim 1, characterized in that said DNA polymerase exhibits reverse transcriptase activity in the practical absence of manganese ions.
3. ДНК-полимераза по п.1 или 2, отличающаяся тем, что указанная полимераза проявляет активность обратной транскриптазы, зависимую от марганца.3. DNA polymerase according to claim 1 or 2, characterized in that said polymerase exhibits manganese-dependent reverse transcriptase activity.
4. ДНК-полимераза по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что активность обратной транскриптазы, зависимая от магния, выше активности обратной транскриптазы указанной полимеразы, зависимой от марганца.4. DNA polymerase according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the activity of reverse transcriptase, dependent on magnesium, is higher than the activity of reverse transcriptase of the indicated polymerase, dependent on manganese.
5. ДНК-полимераза по любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что указанная полимераза обладает пониженной активностью 5’-3’-экзонуклеазы или ее отсутствием, при этом последнюю получают из природной полимеразы, обладающей активностью 5’-3’-экзонуклеазы.5. DNA polymerase according to any one of claims 1 to 4, characterized in that said polymerase has reduced activity of 5'-3'-exonuclease or its absence, the latter being obtained from a natural polymerase having activity 5'-3'- exonuclease.
6. Рекомбинантная ДНК-полимераза, проявляющая активность обратной транскриптазы в присутствии ионов магния и/или ионов марганца, обладающая пониженной активностью 5’-3’-экзонуклеазы или ее отсутствием и по существу не обладающая активностью рибонуклеазы Н и где указанная полимераза имеет кажущуюся молекулярную массу между 64 и 71 кД, определенную методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS), и содержащая аминокислотную последовательность SEQ ID No: 11, где указанную полимеразу получают из штамма Е. coli, обозначенного как Е. coli GA 1.6. Recombinant DNA polymerase exhibiting reverse transcriptase activity in the presence of magnesium ions and / or manganese ions, having reduced or absent activity of 5'-3'-exonuclease, and essentially not having ribonuclease H activity, and wherein said polymerase has an apparent molecular weight between 64 and 71 kDa, determined by polyacrylamide gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate (SDS), and containing the amino acid sequence of SEQ ID No: 11, where this polymerase is obtained from E. coli strain, is indicated much like E. coli GA 1.
7. Выделенная последовательность ДНК, кодирующая ДНК-полимеразу по любому из пп.1-6, включающая нуклеотидную последовательность SEQ ID No: 10.7. The selected DNA sequence encoding a DNA polymerase according to any one of claims 1 to 6, including the nucleotide sequence of SEQ ID No: 10.
8. Способ получения ДНК-полимеразы по любому из пп.1-5, включающий стадии (а) культивирования природного штамма Carboxydothermus hydrogenoformans; (b) суспендирования клеток природного штамма в буфере; (с) разрушения клеток; (d) очистки ДНК-полимеразы хроматографическими способами, включая использование одной или нескольких сефарозных колонок.8. A method for producing a DNA polymerase according to any one of claims 1 to 5, comprising the steps of (a) culturing a natural strain of Carboxydothermus hydrogenoformans; (b) suspending cells of a natural strain in a buffer; (c) cell destruction; (d) purifying the DNA polymerase by chromatographic methods, including the use of one or more sepharose columns.
9. Способ получения ДНК-полимеразы по п.6, включающий культивирование рекомбинантного штамма Е. coli, трансформированного вектором, содержащим нуклеотидную последовательность SEQ ID No: 10, очистку и выделение ДНК-полимеразы.9. The method of producing DNA polymerase according to claim 6, comprising culturing a recombinant E. coli strain transformed with a vector containing the nucleotide sequence of SEQ ID No: 10, purification and isolation of DNA polymerase.
10. Набор для осуществления полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией PHK (RT-PCR), где набор содержит термофильную ДНК-полимеразу по любому из пп.1-6 и другие традиционные дополнительные компоненты для осуществления RT-PCR.10. Kit for the implementation of polymerase chain reaction with reverse transcription PHK (RT-PCR), where the kit contains a thermophilic DNA polymerase according to any one of claims 1 to 6 and other traditional additional components for the implementation of RT-PCR.
