Claims (22)
1. Водный раствор пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, который может вливаться человеку-пациенту в количестве, достигающем, приблизительно, 1,5 л, не вызывая снижение функции почек.1. An aqueous solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin, which can be infused into a human patient in an amount reaching approximately 1.5 L without causing a decrease in renal function.
2. Раствор гемоглобина по п.1, в котором раствор имеет период полувыведения у человека-пациента приблизительно 15 ч. 2. The hemoglobin solution according to claim 1, in which the solution has a half-life in a human patient of approximately 15 hours
3. Раствор гемоглобина по п.1, в котором раствор имеет период полувыведения у человека-пациента приблизительно 24 ч. 3. The hemoglobin solution according to claim 1, in which the solution has a half-life in a human patient of approximately 24 hours
4. Раствор по п.1, в котором раствор может вливаться в количестве, достигающем приблизительно 5 л. 4. The solution according to claim 1, in which the solution can be infused in an amount reaching approximately 5 l.
5. Раствор гемоглобина по п.1, в котором раствор может вливаться человеку-пациенту в количестве, достигающем приблизительно 3 л, не вызывая снижение функции почек, и раствор имеет период полувыведения у человека-пациента приблизительно 24 ч. 5. The hemoglobin solution according to claim 1, in which the solution can be infused into the human patient in an amount reaching approximately 3 l, without causing a decrease in renal function, and the solution has a half-life in the human patient of approximately 24 hours
6. Способ получения раствора пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, который может вливаться человеку-пациенту в количестве, достигающем приблизительно 3 л, включающий: (а) удаление лейкоцитов с помощью фильтрации смеси, содержащей эритроциты, через фильтр, имеющий минимальный средний размер пор, достаточный для предотвращения прохождения лейкоцитов; (b) лизирование эритроцитов; (с) добавление окиси углерода в продукт и его нагревание до температуры, приблизительно, 60-62oС в течение, приблизительно, 10 ч для получения подвергнутого тепловой обработке раствора гемоглобина; (d) фильтрация подвергнутого тепловой обработке раствора гемоглобина для удаления стромы и примесей стромы, осажденных нагреванием; (е) дегазация подвергнутого тепловой обработке раствора гемоглобина путем барботирования кислорода и затем азоте через подвергнутый тепловой обработке раствор при температуре, приблизительно, 10°С для получения пены для получения дегазированного, подвергнутого тепловой обработке раствора гемоглобина; (е) пиридоксилирование дегазированного раствора для получения раствора пиридоксилированного гемоглобина; (f) полимеризация раствора пиридоксилированного гемоглобина для получения раствора пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина; (g) оксигенация раствора; (g) очистка раствора для удаления тетрамерного гемоглобина и сбор очищенного пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, в котором раствор содержит менее, чем 0,8% на основании общей массы гемоглобина тетрамера; (h) дезоксигенация очищенного пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина; и (i) доведение pH и уровней электролитов в растворе очищенного пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина до физиологических уровней.6. A method of obtaining a solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin that can be infused into a human patient in an amount reaching approximately 3 L, comprising: (a) removing white blood cells by filtering a mixture containing red blood cells through a filter having a minimum average pore size sufficient to preventing the passage of white blood cells; (b) red blood cell lysis; (c) adding carbon monoxide to the product and heating it to a temperature of about 60-62 ° C. for about 10 hours to obtain a heat-treated hemoglobin solution; (d) filtering the heat-treated hemoglobin solution to remove stroma and stroma impurities precipitated by heating; (e) degassing a heat-treated hemoglobin solution by sparging oxygen and then nitrogen through a heat-treated solution at a temperature of about 10 ° C. to produce foam to obtain a degassed, heat-treated hemoglobin solution; (e) pyridoxylation of a degassed solution to obtain a pyridoxylated hemoglobin solution; (f) polymerizing a solution of pyridoxylated hemoglobin to obtain a solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin; (g) oxygenation of the solution; (g) purifying the solution to remove tetrameric hemoglobin and collecting purified pyridoxylated, polymerized hemoglobin, in which the solution contains less than 0.8% based on the total weight of the hemoglobin of the tetramer; (h) deoxygenation of purified pyridoxylated, polymerized hemoglobin; and (i) adjusting the pH and electrolyte levels in the solution of purified pyridoxylated, polymerized hemoglobin to physiological levels.
7. Способ по п.6, в котором дегазированный раствор пиридоксилируют путем контактирования дегазированного раствора с пиридоксал-5-фосфатом при молярном соотношении пиридоксал-5-фосфата и гемоглобина, приблизительно, 1:1 - 3:1. 7. The method according to claim 6, in which the degassed solution is pyridoxylated by contacting the degassed solution with pyridoxal-5-phosphate in a molar ratio of pyridoxal-5-phosphate and hemoglobin of approximately 1: 1 to 3: 1.
8. Способ по п.6, в котором дегазированный раствор пиридоксилируют путем контактирования дегазированного раствора с пиридоксал-5-фосфатом при молярном соотношении пиридоксал-5-фосфата и гемоглобина, приблизительно 2:1. 8. The method according to claim 6, in which the degassed solution is pyridoxylated by contacting the degassed solution with pyridoxal-5-phosphate in a molar ratio of pyridoxal-5-phosphate and hemoglobin, approximately 2: 1.
9. Способ по п.7, в котором пиридоксал-5-фосфат контактирует с гемоглобином и боргидридом в течение, приблизительно, одного часа. 9. The method according to claim 7, in which pyridoxal-5-phosphate is in contact with hemoglobin and borohydride for approximately one hour.
10. Способ по п.9, в котором гемоглобин в пиридоксилированном растворе полимеризуют путем контактирования пиридоксилированного раствора с глютаральдегидом при молярном соотношении глютаральдегида и гемоглобина, приблизительно, 24:1. 10. The method according to claim 9, in which hemoglobin in a pyridoxylated solution is polymerized by contacting the pyridoxylated solution with glutaraldehyde in a molar ratio of glutaraldehyde to hemoglobin of approximately 24: 1.
11. Способ по п.10, в котором пиридоксилированный раствор контактирует с глютаральдегидом в течение, приблизительна, 18 ч и затем реакцию прекращают. 11. The method of claim 10, wherein the pyridoxylated solution is contacted with glutaraldehyde for approximately 18 hours and then the reaction is stopped.
12. Способ переливания человеку-пациенту, нуждающемуся в переливании крови, включающий введение пациенту до 1,5 л раствора пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина. 12. A transfusion method for a human patient in need of a blood transfusion, comprising administering to the patient up to 1.5 L of a solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin.
13. Способ переливания человеку-пациенту, нуждающемуся в переливании крови, включающий введение пациенту до 3,0 л раствора пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина. 13. A method of transfusion to a human patient in need of a blood transfusion, comprising administering to the patient up to 3.0 L of a solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin.
14. Способ переливания человеку-пациенту, нуждающемуся в переливании крови, включающий введение пациенту до 5,0 л раствора пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина. 14. A transfusion method for a human patient in need of a blood transfusion, comprising administering to the patient up to 5.0 L of a solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin.
15. Способ по п.14, в котором гемоглобин представляет собой полимеризованный глютаральдегидом гемоглобин. 15. The method of claim 14, wherein the hemoglobin is hemoglobin polymerized by glutaraldehyde.
16. Раствор по п.1, в котором гемоглобин имеет распределение молекулярной массы, показанное на фиг.4. 16. The solution according to claim 1, in which the hemoglobin has a molecular weight distribution shown in figure 4.
17. Раствор по п.1, в котором гемоглобин представляет собой полимеризованный глютаральдегидом гемоглобин, имеющий распределение молекулярной массы, показанное на фиг.4. 17. The solution according to claim 1, wherein the hemoglobin is hemoglobin polymerized by glutaraldehyde having the molecular weight distribution shown in FIG.
18. Способ по п.15, в котором препарат гемоглобина содержит, приблизительно, 16% полимера гемоглобина с молекулярной массой приблизительно 128, приблизительно 26% полимера гемоглобина с молекулярной массой приблизительно 192 и приблизительно 58% полимера гемоглобина с молекулярной массой приблизительно 256. 18. The method according to clause 15, in which the hemoglobin preparation contains approximately 16% of a hemoglobin polymer with a molecular weight of approximately 128, approximately 26% of a hemoglobin polymer with a molecular weight of approximately 192 and approximately 58% of a hemoglobin polymer with a molecular weight of approximately 256.
19. Раствор по п.1, в котором препарата гемоглобина содержит приблизительно 16% полимера гемоглобина с молекулярной массой приблизительно 128, приблизительно 26% полимера гемоглобина с молекулярной массой приблизительно 192 и приблизительно 58% полимера гемоглобина с молекулярной массой приблизительно 256. 19. The solution according to claim 1, in which the hemoglobin preparation contains approximately 16% of a hemoglobin polymer with a molecular weight of approximately 128, approximately 26% of a hemoglobin polymer with a molecular weight of approximately 192 and approximately 58% of a hemoglobin polymer with a molecular weight of approximately 256.
20. Раствор пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, пригодного для вливания человеку-пациенту в количестве, приблизительно, до 3 л, полученный способом, включающим: (а) прохождение просроченной или не просроченной крови через подходящее аспирационное устройство при пониженном давлении для получения аспирированной крови; (b) удаление лейкоцитов из аспирированной крови путем фильтрации смеси, содержащей эритроциты, через серию фильтров, имеющих минимальный средний размер пор, достаточный для предотвращения прохождения лейкоцитов; (с) добавление окиси углерода в продукт со стадии (b), для получения раствора гемоглобина с рН менее, чем 7; (d) отмывание раствора со стадии (с) 1% раствором хлорида натрия, с получением промытого раствора; (е) разведение промытого раствора со стадии (d) водой для образования раствора лизированных клеток; (f) фильтрацию раствора лизированных клеток через фильтр для получения раствора гемоглобина, свободного от примесей стромы и материала стенок клеток; (g) нагревание и фильтрацию раствора гемоглобина со стадии (f) до температуры, приблизительно, 60-62oС в течение, приблизительно, 10 ч для получения подвергнутого тепловой обработке, свободного от стромы раствора гемоглобина; (h) концентрацию и диафильтрацию подвергнутого тепловой обработке, свободного от стромы раствора гемоглобина, для получения раствора карбоксигемоглобина; (i) дегазацию раствора карбоксигемоглобина путем барботирования кислорода и затем азота через подвергнутый тепловой обработке раствор при температуре, приблизительно, 10°С для получения дегазированного, подвергнутого тепловой обработке раствора гемоглооина; (j) пиридоксилирование дегазированного раствора с использованием пиридоксал-5"-фосфата при молярном соотношении пиридоксал-5"-фосфата и гемоглобина приблизительно от 1:1 до 3:1 для получения раствора пиридоксилированного гемоглобина; (k) полимеризацию раствора пиридоксилированного гемоглобина водным раствором глютаральдегида для получения раствора пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина с распределением массы, приблизительно, 65-75% полимера и 25-35% тетрамера; (l) оксигенацию и разведения полимеризованного раствора до тех пор, пока раствор не будет содержать приблизительно 4 мас.% гемоглобина; (m) очистку раствора со стадии (l) для удаления тетрамерного гемоглобина и сбор очищенного пиридоксилированного, полимеризовапного гемоглобина, при котором раствор содержит менее, чем 0,8% тетрамера от общей массы гемоглобина; (n) дезоксигенацию очищенного, пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина азотом; (о) доведение pH и уровней электролитов в растворе очищенного, пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, приблизительно, до 8,0-9,0; и (р) концентрацию и стерилизацию раствора с pH, доведенным на стадии (о).20. A solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin suitable for infusion to a human patient in an amount up to about 3 L, obtained by a method including: (a) passing expired or unexpired blood through a suitable aspiration device under reduced pressure to obtain aspirated blood; (b) removing white blood cells from aspirated blood by filtering a mixture containing red blood cells through a series of filters having a minimum average pore size sufficient to prevent the passage of white blood cells; (c) adding carbon monoxide to the product from step (b) to obtain a hemoglobin solution with a pH of less than 7; (d) washing the solution from step (c) with a 1% sodium chloride solution to obtain a washed solution; (e) diluting the washed solution from step (d) with water to form a solution of lysed cells; (f) filtering the solution of lysed cells through a filter to obtain a hemoglobin solution free of stromal impurities and cell wall material; (g) heating and filtering the hemoglobin solution from step (f) to a temperature of about 60-62 ° C. for about 10 hours to obtain a cooked, strom-free hemoglobin solution; (h) the concentration and diafiltration of the heat-treated, stroma-free hemoglobin solution, to obtain a carboxyhemoglobin solution; (i) degassing a solution of carboxyhemoglobin by sparging oxygen and then nitrogen through a heat-treated solution at a temperature of about 10 ° C. to obtain a degassed, heat-treated hemogloin solution; (j) pyridoxylation of the degassed solution using pyridoxal-5 "phosphate at a molar ratio of pyridoxal-5" phosphate and hemoglobin of about 1: 1 to 3: 1 to obtain a pyridoxylated hemoglobin solution; (k) polymerizing a solution of pyridoxylated hemoglobin with an aqueous solution of glutaraldehyde to obtain a solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin with a mass distribution of approximately 65-75% polymer and 25-35% tetramer; (l) oxygenating and diluting the polymerized solution until the solution contains approximately 4% by weight hemoglobin; (m) purifying the solution from step (l) to remove tetrameric hemoglobin and collecting purified pyridoxylated, polymerized hemoglobin, wherein the solution contains less than 0.8% tetramer of the total hemoglobin; (n) deoxygenation of purified, pyridoxylated, polymerized hemoglobin with nitrogen; (o) adjusting the pH and electrolyte levels in the solution of purified, pyridoxylated, polymerized hemoglobin to about 8.0-9.0; and (p) the concentration and sterilization of the solution with the pH adjusted in step (o).
21. Способ получения раствора пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, пригодного для вливания человеку-пациенту в количестве, достигающем приблизительно 3 литра, включающий: (а) прохождение просроченной или не просроченной крови через подходящее аспирационное устройство при пониженном давлении для получения аспирированной крови; (b) удаление лейкоцитов из аспирированной крови путем фильтрации смеси, содержащей эритроциты, через серию фильтров, имеющих минимальный средний размер пор, достаточный для предотвращения прохождения лейкоцитов; (с) добавление окиси углерода в продукт со стадии (b), для получения раствора гемоглобина с pH менее, чем 7; (d) промывание раствора со стадии (с) 1% раствором хлорида натрия, для получения промытого раствора; (е) разведение промытого раствора со стадии (d) водой для образования раствора лизированных клеток; (f) фильтрацию раствора лизированных клеток через фильтр для получения раствора гемоглобина, свободного от примесей стромы и материала стенок клеток; (g) нагревание и фильтрацию раствора гемоглобина со стадии (f) до температуры, приблизительно, 60-62°С в течение, приблизительно, 10 ч для получения подвергнутого тепловой обработке, свободного от стромы раствора гемоглобина; (h) концентрацию и диафильтрацию подвергнутого тепловой обработке, свободного от стромы раствора гемоглобина, для получения раствора карбоксигемоглобина; (i) дегазацию раствора карбоксигемоглобина путем барботирования кислорода и затем азота через подвергнутый тепловой обработке раствор при температуре, приблизительно, 10°С для создания пены с целью получения дегазированного, подвергнутого тепловой обработке раствора гемоглобина; (j) пиридоксилирование дегазированного раствора с использованием пиридоксал-5"-фосфата при молярном соотношении пиридоксал-5"-фосфата и гемоглобина, приблизительно, 1:1-3:1 для получения раствора пиридоксилированного гемоглобина; (k) полимеризацию раствора пиридоксилированного гемоглобина с использованием водного раствора глютаральдегида для получения раствора пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина с распределением массы, приблизительно, 65-75% полимера и 25-35% тетрамера; (l) оксигенацию и разведения полимеризованного раствора до тех пор, пока раствор не будет содержать, приблизительно, 4 мас.% гемоглобина; (m) очистку раствора со стадии (l) для удаления тетрамерного гемоглобина и сбор очищенного пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, при котором раствор содержит менее, чем 0,8% тетрамера на основании общей массы гемоглобина; (n) дезоксигенацию очищенного, пиридоксилированного, полимеризовзнного гемоглобина азотом; (о) доведение рН и уровней электролитов в растворе очищенного, пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, приблизительно, до 8,3-9,0; и (р) концентрацию и стерилизацию раствора с рН, доведенным на стадии (о). 21. A method of obtaining a solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin suitable for infusion to a human patient in an amount reaching approximately 3 liters, comprising: (a) passing expired or unexpired blood through a suitable suction device under reduced pressure to obtain aspirated blood; (b) removing white blood cells from aspirated blood by filtering a mixture containing red blood cells through a series of filters having a minimum average pore size sufficient to prevent the passage of white blood cells; (c) adding carbon monoxide to the product from step (b) to obtain a hemoglobin solution with a pH of less than 7; (d) washing the solution from step (c) with a 1% sodium chloride solution to obtain a washed solution; (e) diluting the washed solution from step (d) with water to form a solution of lysed cells; (f) filtering the solution of lysed cells through a filter to obtain a hemoglobin solution free of stromal impurities and cell wall material; (g) heating and filtering the hemoglobin solution from step (f) to a temperature of about 60-62 ° C. for about 10 hours to obtain a cooked, strom-free hemoglobin solution; (h) the concentration and diafiltration of the heat-treated, stroma-free hemoglobin solution, to obtain a carboxyhemoglobin solution; (i) degassing a solution of carboxyhemoglobin by sparging oxygen and then nitrogen through a heat-treated solution at a temperature of about 10 ° C. to create a foam to obtain a degassed, heat-treated hemoglobin solution; (j) pyridoxylation of the degassed solution using pyridoxal-5 "phosphate at a molar ratio of pyridoxal-5" phosphate and hemoglobin of approximately 1: 1-3: 1 to obtain a pyridoxylated hemoglobin solution; (k) polymerizing a solution of pyridoxylated hemoglobin using an aqueous solution of glutaraldehyde to obtain a solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin with a mass distribution of approximately 65-75% polymer and 25-35% tetramer; (l) oxygenating and diluting the polymerized solution until the solution contains approximately 4% by weight hemoglobin; (m) purifying the solution from step (l) to remove tetrameric hemoglobin and collecting purified pyridoxylated, polymerized hemoglobin, wherein the solution contains less than 0.8% tetramer based on the total weight of hemoglobin; (n) deoxygenation of purified, pyridoxylated, polymerized hemoglobin with nitrogen; (o) adjusting the pH and electrolyte levels in the solution of purified, pyridoxylated, polymerized hemoglobin to approximately 8.3-9.0; and (p) the concentration and sterilization of the solution with the pH adjusted in step (o).
22. Водный раствор пиридоксилированного, полимеризованного гемоглобина, содержащий: (а) общий гемоглобин в количестве 9,5 - 12,0 г/дкл; (b) общий метгемоглобин в количестве менее 8% от общего гемоглобина; (с) общий карбоксигемоглобин в количестве менее 5% от общего гемоглобина; (d) диссоциацию кислорода-гемоглобина при 23 - 32 торр; (е) осмоляльность 280 - 360 ммоль/кг; (f) концентрацию натрия 135 - 155 ммоль/л; (g) концентрацию калия 3,5 - 4,5 ммоль/л; (h) концентарцию хлорида 85 - 110 ммоль/кг; (i) общее свободное железо менее, чем 2,0 ч/млн; (j) распределение максимальной молекулярной массы 128 кД 10 - 24%; (k) распределение максимальной молекулярной массы 192 кД 18 - 30%; (l) распределение максимальной молекулярной массы 256 кД 45 - 70%; (m) общее количество тетрамера менее, чем 0,8%; (n) эндотоксин в концентрации менее, чем 0,03 EU/мл; (о) фосфолипиды в концентрации менее, чем 50 нг/Нb; и (р) гликолипиды в концентрации менее, чем 2 нг/Нb. 22. An aqueous solution of pyridoxylated, polymerized hemoglobin, containing: (a) total hemoglobin in an amount of 9.5-12.0 g / dl; (b) total methemoglobin in an amount of less than 8% of total hemoglobin; (c) total carboxyhemoglobin in an amount of less than 5% of total hemoglobin; (d) the dissociation of oxygen-hemoglobin at 23 - 32 torr; (f) osmolality 280-360 mmol / kg; (f) a sodium concentration of 135-155 mmol / L; (g) a potassium concentration of 3.5-4.5 mmol / L; (h) a chloride concentration of 85 to 110 mmol / kg; (i) total free iron less than 2.0 ppm; (j) a maximum molecular weight distribution of 128 kDa of 10-24%; (k) a distribution of a maximum molecular weight of 192 kD 18-30%; (l) the distribution of the maximum molecular weight of 256 kD 45 - 70%; (m) a total amount of tetramer of less than 0.8%; (n) endotoxin in a concentration of less than 0.03 EU / ml; (o) phospholipids at a concentration of less than 50 ng / Hb; and (p) glycolipids at a concentration of less than 2 ng / Hb.