RU2821633C1 - Pharmaceutical composition stimulating immune response of living body - Google Patents
Pharmaceutical composition stimulating immune response of living body Download PDFInfo
- Publication number
- RU2821633C1 RU2821633C1 RU2021131774A RU2021131774A RU2821633C1 RU 2821633 C1 RU2821633 C1 RU 2821633C1 RU 2021131774 A RU2021131774 A RU 2021131774A RU 2021131774 A RU2021131774 A RU 2021131774A RU 2821633 C1 RU2821633 C1 RU 2821633C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- baricitinib
- pharmaceutical composition
- immune response
- erythropoietin
- ruxolitinib
- Prior art date
Links
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 33
- XUZMWHLSFXCVMG-UHFFFAOYSA-N baricitinib Chemical compound C1N(S(=O)(=O)CC)CC1(CC#N)N1N=CC(C=2C=3C=CNC=3N=CN=2)=C1 XUZMWHLSFXCVMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- 229950000971 baricitinib Drugs 0.000 claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 16
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 26
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 26
- 239000002144 L01XE18 - Ruxolitinib Substances 0.000 description 26
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 26
- HFNKQEVNSGCOJV-OAHLLOKOSA-N ruxolitinib Chemical compound C1([C@@H](CC#N)N2N=CC(=C2)C=2C=3C=CNC=3N=CN=2)CCCC1 HFNKQEVNSGCOJV-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 26
- 229960000215 ruxolitinib Drugs 0.000 description 26
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 23
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 20
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 20
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 229940122245 Janus kinase inhibitor Drugs 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 150000004944 pyrrolopyrimidines Chemical class 0.000 description 9
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 8
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 108010000837 Janus Kinase 1 Proteins 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 7
- 102100033438 Tyrosine-protein kinase JAK1 Human genes 0.000 description 7
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 7
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 6
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000005334 azaindolyl group Chemical group N1N=C(C2=CC=CC=C12)* 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 5
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 5
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 150000005255 pyrrolopyridines Chemical class 0.000 description 5
- 102000015617 Janus Kinases Human genes 0.000 description 4
- 108010024121 Janus Kinases Proteins 0.000 description 4
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- -1 nitrogenous heterocyclic compounds Chemical class 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 102100032028 Non-receptor tyrosine-protein kinase TYK2 Human genes 0.000 description 2
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108010010057 TYK2 Kinase Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008063 pharmaceutical solvent Substances 0.000 description 2
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- MVXVYAKCVDQRLW-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrrolo[2,3-b]pyridine Chemical class C1=CN=C2NC=CC2=C1 MVXVYAKCVDQRLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRSKXJVMVSSSHB-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrrolo[3,2-c]pyridine Chemical compound N1=CC=C2NC=CC2=C1 SRSKXJVMVSSSHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDKGOMZIPXGDDJ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydro-1h-indazole Chemical class C1=CC=C2CNNC2=C1 QDKGOMZIPXGDDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLAPHZHNODDMDD-UHFFFAOYSA-N 4-methylpyridine-3-carbonitrile Chemical compound CC1=CC=NC=C1C#N XLAPHZHNODDMDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010050685 Cytokine storm Diseases 0.000 description 1
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-NUEINMDLSA-N Isotretinoin Chemical group OC(=O)C=C(C)/C=C/C=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-NUEINMDLSA-N 0.000 description 1
- 102000042838 JAK family Human genes 0.000 description 1
- 108010019421 Janus Kinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010036176 Melitten Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102100025387 Tyrosine-protein kinase JAK3 Human genes 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 238000013378 biophysical characterization Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 210000000208 hepatic perisinusoidal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 125000004857 imidazopyridinyl group Chemical class N1C(=NC2=C1C=CC=N2)* 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 229960005280 isotretinoin Drugs 0.000 description 1
- 239000004070 kidney hormone Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- VDXZNPDIRNWWCW-JFTDCZMZSA-N melittin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 VDXZNPDIRNWWCW-JFTDCZMZSA-N 0.000 description 1
- 206010028537 myelofibrosis Diseases 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004395 organic heterocyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009979 protective mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 150000003235 pyrrolidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Description
Заявляемое изобретение относится к медицинской отрасли, а именно к фармацевтике, в том числе к фармацевтическим композициям на основе органических азотистых гетероциклических соединений. Заявляемое изобретение предназначается для лечения и профилактики заболеваний, связанных с нарушенным иммунитетом. Характеризуется регуляцией и/или стимуляцией иммунного ответа с повышением сопротивляемости к любым видам инфекций. Фармацевтическая композиция является активной в отношении позвоночных млекопитающих, в том числе человека.The claimed invention relates to the medical industry, namely to pharmaceuticals, including pharmaceutical compositions based on organic nitrogenous heterocyclic compounds. The claimed invention is intended for the treatment and prevention of diseases associated with impaired immunity. Characterized by regulation and/or stimulation of the immune response with increased resistance to any type of infection. The pharmaceutical composition is active against vertebrate mammals, including humans.
Из уровня техники известны производные пирролопиридина (WO2004099205 - Azaindole compounds as kinase inhibitors, опубл. 18.11.2004). Производные имидазопиридина (WO2004099204 - Imidazo and thiazolopyridines as jak3 kinase inhibitors, опубл. 18.11.2004). Производные пирролопиримидина (WO1999065908 - PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS, опубл. 23.12.1999; WO1999065909 - PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS, опубл. 23.12.1999; WO2001042246 - PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS, опубл. 14.06.2001; WO2002000661 - PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS AS IMMUNOSUPPRESSIVE AGENTS, опубл. 03.01.2002). Обычно рекомендованные разовые дозы препаратов на основе указанных соединений колеблются от 1 до 50 мг. Известные соединения используют для подавления иммунных реакций, в том числе гиперпродукции цитокинов. Нарушения внутриклеточных сигнальных путей, в частности, осуществляемых через систему протеинкиназ (янус-киназы 1,2,3, тирозинкиназа 2), имеющих вследствие дисбаланс продукции цитокинов, лежат в основе множества заболеваний и патологических состояний.Pyrrolopyridine derivatives are known from the prior art (WO2004099205 - Azaindole compounds as kinase inhibitors, published 11/18/2004). Imidazopyridine derivatives (WO2004099204 - Imidazo and thiazolopyridines as jak3 kinase inhibitors, published 11/18/2004). Pyrrolopyrimidine derivatives (WO1999065908 - PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS, published 12/23/1999; WO1999065909 - PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS, published 12/23/1999; 246 - PYRROLO[2,3-d ]PYRIMIDINE COMPOUNDS, publ. Typically, recommended single doses of drugs based on these compounds range from 1 to 50 mg. Known compounds are used to suppress immune reactions, including hyperproduction of cytokines. Disturbances in intracellular signaling pathways, in particular those carried out through the system of protein kinases (Janus kinases 1,2,3, tyrosine kinase 2), resulting in an imbalance in the production of cytokines, underlie many diseases and pathological conditions.
Так, например, одна из протеинкиназ, Янус-киназа 3 играет важную роль в передаче сигналов от интерлейкинов: IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21 ( J. J. O'shea et al, Cell, Vol. 109 (suppl.), S121, 2002; K. Ozaki et al, Science, Vol. 298, p. 1630, 2002), что ведет к нарушению созревания Т- и В-клеток. Следовательно, заболевания, включающие пролиферативную аномалию Т-клеток, такую как отторжение трансплантата, и аутоиммунные заболевания, могут быть подвергнуты лечению путем контроля иммунного ответа через этот механизм.For example, one of the protein kinases, Janus kinase 3, plays an important role in the transmission of signals from interleukins: IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 and IL-21 (J. J. O'shea et al, Cell, Vol. 109 (suppl.), S121, 2002; K. Ozaki et al, Vol. 298, p. 1630, 2002), which leads to impaired maturation of T and B cells. Therefore, diseases including T cell proliferative abnormalities such as transplant rejection and autoimmune diseases can be treated by controlling the immune response through this mechanism.
Такой же принцип касается и других протеинкиназ (Янус-киназы 1, 2, тирозинкиназа 2).The same principle applies to other protein kinases (Janus kinases 1, 2, tyrosine kinase 2).
Основное внимание современных исследователей в плане вышеуказанных патологических процессов, направлено на подавление функций данных киназ и, таким образом, получения искомого клинического эффекта.The main attention of modern researchers in terms of the above pathological processes is aimed at suppressing the functions of these kinases and, thus, obtaining the desired clinical effect.
Кроме того, с этой целью используются азаиндолы (RU 2403252 - АЗАИНДОЛЫ, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ JAK И ДРУГИХ ПРОТЕИНКИНАЗ, опубл. 10.11.2010). Азаиндолы (пирролопиридины, диазаинданы) - ряд органических гетероциклических соединений с общей химической формулой C7H6N2. Различают 4-, 5-, 6-, 7-Азаиндолы. In addition, azaindoles are used for this purpose (RU 2403252 - AZAINDOLES, USEFUL AS INHIBITORS OF JAK AND OTHER PROTEIN KINASES, published on November 10, 2010). Azaindoles (pyrrolopyridines, diazaindanes) are a series of organic heterocyclic compounds with the general chemical formula C7H6N2. There are 4-, 5-, 6-, 7-Azaindoles.
Известен эритропоэтин (гемопоэтин) - один из гормонов почек (также секретируется в перисинусоидальных клетках печени), который управляет эритропоэзом, то есть образование красных кровяных клеток (эритроцитов). По химическому строению является гликопротеином (Jelkmann W. Erythropoietin: structure, control of production, and function. Physiol Rev 1992; 72:449-489).Erythropoietin (hemopoietin) is known - one of the kidney hormones (also secreted in the perisinusoidal cells of the liver), which controls erythropoiesis, that is, the formation of red blood cells (erythrocytes). According to its chemical structure, it is a glycoprotein (Jelkmann W. Erythropoietin: structure, control of production, and function. Physiol Rev 1992; 72:449-489).
Известны свойства эритропоэтина, как противовоспалительного цитокина (Broxmeyer H.E. Erythropoietin surprises: an immune saga. Immunity. 2011; 34: 6-7).The properties of erythropoietin as an anti-inflammatory cytokine are known (Broxmeyer H.E. Erythropoietin surprises: an immune saga. Immunity. 2011; 34: 6-7).
Данные свойства обуславливают высокую эффективность совместного использования эритропоэтина и ингибиторов янус-киназ. Тем не менее, в уровне техники отсутствуют сведения о соответствующих композициях. These properties determine the high efficiency of the combined use of erythropoietin and Janus kinase inhibitors. However, there is no information in the prior art about the corresponding compositions.
Известен белок Меллиттин, продукт яда пчелы, обладающий противоопухолевыми свойствами через активацию рецепторов смерти и ингибицию нуклеарного фактора Каппа Би (NF-κB). Кроме того, известны мембраноактивные свойства меллиттина, повышающие проницаемость мембран в том числе, потенциально, и для лекарственных средств (Fatma Gizem Avci, Berna Sariyar Akbulut and Elif Ozkirimli, Membrane Active Peptides and Their Biophysical Characterization. Biomolecules 2018, 8, 77; https://doi.org/10.3390/biom8030077). Тем не менее, в уровне техники отсутствуют сведения о композициях, совместно с азотистыми гетероциклическими соединениями.The known protein Mellittin, a product of bee venom, has antitumor properties through activation of death receptors and inhibition of nuclear factor kappa Bi (NF-κB). In addition, the membrane-active properties of mellittin are known, increasing the permeability of membranes, including, potentially, for drugs (Fatma Gizem Avci, Berna Sariyar Akbulut and Elif Ozkirimli, Membrane Active Peptides and Their Biophysical Characterization. Biomolecules 2018, 8, 77; https: //doi.org/10.3390/biom8030077). However, in the prior art there is no information about compositions together with nitrogenous heterocyclic compounds.
Одним из наиболее близких источников к описываемой композиции, является RU 2676684 - ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРРОЛО[3,2-d]ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ ИНДУКТОРОВ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ИНТЕРФЕРОНА (опубл. 10.01.2019). Описываемое соединение обладает активностью индукторов интерферона альфа (IFN-α) и может найти применение для лечения или предупреждения, в том числе воспалительного состояния, инфекционного заболевания и так далее.One of the closest sources to the described composition is RU 2676684 - PYRROLO[3,2-d]PYRIMIDINE DERIVATIVES AS HUMAN INTERFERON INDUCTORS (published on January 10, 2019). The disclosed compound has interferon alpha (IFN-α) inducer activity and may find use in the treatment or prevention of inflammatory conditions, infectious diseases, and the like.
Известные фармацевтические композиции предназначены в основном для подавления и/или регулировки иммунного ответа, и использование вышеприведенных соединений сопровождается повышением опасности инфекционных осложнений и злокачественных опухолей, а также нарушением гемопоэза, в частности, продукции эритроцитов.Known pharmaceutical compositions are intended mainly to suppress and/or regulate the immune response, and the use of the above compounds is accompanied by an increased risk of infectious complications and malignant tumors, as well as impaired hematopoiesis, in particular, the production of red blood cells.
Целью заявляемого изобретения является достижение следующего технического результата: регуляция и/или стимуляция иммунного ответа в живом организме.The purpose of the claimed invention is to achieve the following technical result: regulation and/or stimulation of the immune response in a living organism.
Поставленная цель достигается следующим образом: фармацевтическая композиция, стимулирующая иммунный ответ живого организма, в основе содержащая сверхмалые дозы органических азотистых гетероциклических соединений азаиндолов, в качестве активного вещества содержащая соединения пирролидинов и/или пирроло-пиримидинов, и/или пирроло-пиридинов, и/или их производные, характеризующаяся тем, что терапевтическая доза составляет от 1 до 1000 пкг на килограмм веса живого организма.This goal is achieved as follows: a pharmaceutical composition that stimulates the immune response of a living organism, based on ultra-small doses of organic nitrogenous heterocyclic compounds of azaindoles, containing as an active substance compounds of pyrrolidines and/or pyrrolo-pyrimidines, and/or pyrrolo-pyridines, and/or their derivatives, characterized in that the therapeutic dose ranges from 1 to 1000 pkg per kilogram of body weight.
Фармацевтическая композиция, в частности, может содержаться в фармацевтическом растворителе. The pharmaceutical composition may in particular be contained in a pharmaceutical solvent.
Фармацевтическая композиция, в которой, в частности, в качестве пирроло-пиримидинов применяют пирроло[2-b]пиримидиновые соединения.A pharmaceutical composition in which, in particular, pyrrolo[2-b]pyrimidine compounds are used as pyrrolo-pyrimidines.
Фармацевтическая композиция, в которой, в частности, в качестве пирроло-пиримидинов применяют пирроло[3-b]пиримидиновые соединения.A pharmaceutical composition in which, in particular, pyrrolo[3-b]pyrimidine compounds are used as pyrrolo-pyrimidines.
Фармацевтическая композиция, в которой, в частности, в качестве пирроло-пиримидинов применяют пирроло[2-d]пиримидиновые соединения.A pharmaceutical composition in which, in particular, pyrrolo[2-d]pyrimidine compounds are used as pyrrolo-pyrimidines.
Фармацевтическая композиция, в которой, в частности, в качестве пирроло-пиримидинов применяют пирроло[3-d]пиримидиновые соединения.A pharmaceutical composition in which, in particular, pyrrolo[3-d]pyrimidine compounds are used as pyrrolo-pyrimidines.
Фармацевтическая композиция, в частности, может дополнительно содержать диазаинданы, и/или их производные в концентрации от 1 до 2% активного вещества.The pharmaceutical composition, in particular, may additionally contain diazaindans and/or their derivatives in a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в частности, может дополнительно содержать барицитиниб в концентрации от 1 до 2% активного вещества.The pharmaceutical composition, in particular, may additionally contain baricitinib at a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в частности, может дополнительно содержать руксолитиниб в концентрации от 1 до 2% активного вещества.The pharmaceutical composition, in particular, may additionally contain ruxolitinib at a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в частности, дополнительно содержащая барицитиниб в концентрации от 1 до 2% активного вещества и руксолитиниб в концентрации от 1 до 2% активного вещества.A pharmaceutical composition, in particular, additionally containing baricitinib at a concentration of 1 to 2% of the active substance and ruxolitinib at a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в частности, дополнительно содержащая барицитиниб в концентрации от 1 до 2% активного вещества и диазаинданы, и/или их производные в концентрации от 1 до 2% активного вещества.A pharmaceutical composition, in particular, additionally containing baricitinib at a concentration of 1 to 2% of the active substance and diazaindans, and/or their derivatives at a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в частности, дополнительно содержащая руксолитиниб в концентрации от 1 до 2% активного вещества и диазаинданы, и/или их производные в концентрации от 1 до 2% активного вещества.A pharmaceutical composition, in particular, additionally containing ruxolitinib at a concentration of 1 to 2% of the active substance and diazaindans, and/or their derivatives at a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в частности, дополнительно содержащая барицитиниб в концентрации от 1 до 2% активного вещества и руксолитиниб в концентрации от 1 до 2% активного вещества и диазаинданы, и/или их производные в концентрации от 1 до 2% активного вещества.A pharmaceutical composition, in particular, additionally containing baricitinib at a concentration of 1 to 2% of the active substance and ruxolitinib at a concentration of 1 to 2% of the active substance and diazaindans, and/or their derivatives at a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в частности, дополнительно содержащая эритропоэтин или его производные в концентрации от 1 до 2% активного вещества.A pharmaceutical composition, in particular, additionally containing erythropoietin or its derivatives in a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в частности, дополнительно содержащая меллиттин или его производные в концентрации от 1 до 2% активного вещества.A pharmaceutical composition, in particular, additionally containing melittin or its derivatives in a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Фармацевтическая композиция, в которой в качестве производных пирроло-пиримидинов применяют азаиндолы и их производные природного происхождения в концентрации от 1 до 2% активного вещества.A pharmaceutical composition in which azaindoles and their derivatives of natural origin are used as pyrrolo-pyrimidine derivatives in a concentration of 1 to 2% of the active substance.
Примеры осуществления заявляемой фармацевтической композицииExamples of implementation of the claimed pharmaceutical composition
Исследование ингибиторов янус-киназ, проведём на примере руксолитиниба (C17H18N6) и барицитиниба (C16H17N7O2S). Барицитиниб - лекарство для лечения ревматоидного артрита у взрослых, действует как ингибитор янус-киназы. Руксолитиниб - препарат для лечения миелофиброза средней или высокой степени риска, является селективным ингибитором янус-киназы. Исследование эффективности применения композиций производится в культуре клеток человека in vitro.We will study Janus kinase inhibitors using the example of ruxolitinib (C17H18N6) and baricitinib (C16H17N7O2S). Baricitinib, a medicine for the treatment of rheumatoid arthritis in adults, acts as a Janus kinase inhibitor. Ruxolitinib is a selective Janus kinase inhibitor for the treatment of moderate-to-high-risk myelofibrosis. The effectiveness of the compositions is studied in human cell culture in vitro.
Пример 1Example 1
Фракция мононуклеарных клеток из периферической крови (МПК) 3-х здоровых доноров получена путем выделения на градиенте плотности фиколла (Панэко, Россия) с ρ=1,077 по стандартной методике, с 2-кратной отмывкой от фиколла. После второй отмывки осадок клеток каждого донора был ресуспендирован в 1 мл среды RPMI-1640 (Панэко, Россия) с 10% эмбриональной бычьей сыворотки (Biosera, Франция) и антибиотиками - пенициллином 50 Ед и стрептомицином 50 мкг (далее - полная среда), производили подсчет количества и жизнеспособности клеток в камере Горяева, с окраской 1% трипановым синим. Выделенные клетки каждого донора развели полной средой до концентрации 2×106 в 1 мл и внесли по 200×105 в лунки А1:F6 96-луночного планшета (Nunc, Дания).The fraction of mononuclear cells from peripheral blood (PBMC) of 3 healthy donors was obtained by isolation on a Ficoll density gradient (Paneko, Russia) with ρ=1.077 according to the standard method, with 2-fold washing from Ficoll. After the second washing, the cell sediment from each donor was resuspended in 1 ml of RPMI-1640 medium (Paneko, Russia) with 10% fetal bovine serum (Biosera, France) and antibiotics - penicillin 50 U and streptomycin 50 μg (hereinafter - complete medium), produced counting the number and viability of cells in the Goryaev chamber, stained with 1% trypan blue. Isolated cells from each donor were diluted with complete medium to a concentration of 2×10 6 in 1 ml and 200×10 5 were added to wells A1:F6 of a 96-well plate (Nunc, Denmark).
В качестве индуктора экспрессии янус-киназ и продукции цитокинов использовали фитогемагглютинин (ФГА) в конечной концентрации 10 мкг/мл полной среды.Phytohemagglutinin (PHA) was used as an inducer of Janus kinase expression and cytokine production at a final concentration of 10 μg/ml complete medium.
В эксперименте использовали Барицитиниб (1 мкг/мл), Руксолитиниб (1 мкг/мл), Эритропоэтин (0.025 мкг/мл), Меллиттин (0,1 мкг/мл).Baricitinib (1 μg/ml), Ruxolitinib (1 μg/ml), Erythropoietin (0.025 μg/ml), Mellittin (0.1 μg/ml) were used in the experiment.
Использовали как отдельные вещества, так и их композиции. Both individual substances and their compositions were used.
В качестве фармацевтического растворителя, например, может применяться физиологический раствор или дистиллированная вода и другие им подобные.As a pharmaceutical solvent, for example, saline solution or distilled water and the like can be used.
В качестве производных азаиндолов природного происхождения может применяться, например, природный алюминий-содержащий 5-азаиндол, выработанный из морских беспозвоночных.As azaindole derivatives of natural origin, for example, natural aluminum-containing 5-azaindole, produced from marine invertebrates, can be used.
Препараты вносили в соответствующие лунки планшета по 10 мкл. Конечный объем среды во всех лунках - 250 мкл.The drugs were added into the corresponding wells of the plate in 10 μl volumes. The final volume of medium in all wells is 250 µl.
Планшет помещали в условия влажной атмосферы с 5% СО2 при 37°С на 48 часов. The plate was placed in a humid atmosphere with 5% CO 2 at 37°C for 48 hours.
После культивирования планшеты с клетками центрифугировали и в супернатанте определяли концентрацию фактора некроза опухолей альфа (TNFα), гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF), интерферона альфа (IFNα), интерлейкина 2 (IL-2), интерлейкина 4 (IL-4) и интерлейкина 6 (IL-6).After cultivation, the plates with cells were centrifuged and the concentration of tumor necrosis factor alpha (TNFα), granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), interferon alpha (IFNα), interleukin 2 (IL-2), interleukin 4 (IL-4) was determined in the supernatant ) and interleukin 6 (IL-6).
Анализ проведен методом цитометрических бус Bio-Plex Pro™ Human Cytokine Grp I Panel 8-plex (Bio-RAD) по протоколу производителя. Алгоритм анализа приведен на Фиг. 1-6.The analysis was performed using the Bio-Plex Pro™ Human Cytokine Grp I Panel 8-plex cytometric bead method (Bio-RAD) according to the manufacturer's protocol. The analysis algorithm is shown in Fig. 1-6.
На графических изображениях показано: магнитные бусы с иммобилизованными антителами к цитокинам (Фиг. 1) включают 8 групп с антителами к ИЛ-2, 4, 6, 8, 10, интерферону гамма, фактору некроза опухоли альфа, гранулоцитарно-макрофагальному фактору роста (Фиг. 2). Движение бус в контроле (Фиг. 3) и в присутствии цитокинов (Фиг. 4). Анализ индивидуальных цитокинов (Фиг. 5). Титровочная кривая для определения концентрации цитокинов (Фиг. 6).The graphic images show: magnetic beads with immobilized antibodies to cytokines (Fig. 1) include 8 groups with antibodies to IL-2, 4, 6, 8, 10, interferon gamma, tumor necrosis factor alpha, granulocyte-macrophage growth factor (Fig. .2). Bead movement in control (Figure 3) and in the presence of cytokines (Figure 4). Analysis of individual cytokines (Fig. 5). Titration curve for determining the concentration of cytokines (Fig. 6).
Результаты исследований представлены в таблицах 1-12. Количество цитокинов выражено в пг/мл.The research results are presented in tables 1-12. The amount of cytokines is expressed in pg/ml.
Данные по использованию композиций, содержащих, в том числе руксолитиниб, представлены в таблицах 1-6.Data on the use of compositions containing, including ruxolitinib, are presented in tables 1-6.
+эритропоэтин+меллиттинruxolitinib
+erythropoietin+mellittin
Примечание: * - статистически достоверно ( Р≤0,01) по сравнению с Р (контроль 2)Note: * - statistically significant (P≤0.01) compared to P (control 2)
Как видно из таблиц, руксолитиниб достоверно снижал продукцию всех исследованных цитокинов в культуре клеток.As can be seen from the tables, ruxolitinib significantly reduced the production of all cytokines studied in cell culture.
Однако, добавление эритропоэтина достоверно увеличивало эффект руксолитиниба. Изолированное добавление меллиттина было эффективно лишь в отношении TNFα.However, the addition of erythropoietin significantly increased the effect of ruxolitinib. Isolated addition of mellittin was effective only against TNFα.
Особое внимание обращает на себя сочетанное применение композиции Руксолитиниб+Эритропоэтин+Меллиттин, когда эффект в отношении ингибиции синтеза цитокинов, особенно противовоспалительных, был наиболее достоверно выражен.Particular attention is drawn to the combined use of the composition Ruxolitinib + Erythropoietin + Mellittin, when the effect on the inhibition of the synthesis of cytokines, especially anti-inflammatory ones, was most reliably expressed.
Данные результаты подтверждают высокую эффективность предлагаемой фармацевтической композиции.These results confirm the high efficiency of the proposed pharmaceutical composition.
Данные по использованию композиций, содержащих, в том числе, барицитиниб, представлены в таблицах 7-12.Data on the use of compositions containing, inter alia, baricitinib are presented in tables 7-12.
+эритропоэтин+меллиттинbaricitinib
+erythropoietin+mellittin
Примечание: * - статистически достоверно ( Р≤ 0,01) по сравнению с Б (контроль 2)Note: * - statistically significant (P≤ 0.01) compared to B (control 2)
+эритропоэтин+меллиттинbaricitinib
+erythropoietin+mellittin
Примечание: * - статистически достоверно ( Р≤ 0,01) по сравнению с Б (контроль 2)Note: * - statistically significant (P≤ 0.01) compared to B (control 2)
+эритропоэтин+меллиттинbaricitinib
+erythropoietin+mellittin
Примечание: * - статистически достоверно ( Р≤ 0,01) по сравнению с Б (контроль 2)Note: * - statistically significant (P≤ 0.01) compared to B (control 2)
+эритропоэтин+меллиттинbaricitinib
+erythropoietin+mellittin
Примечание: * - статистически достоверно ( Р≤ 0,01) по сравнению с Б (контроль 2)Note: * - statistically significant (P≤ 0.01) compared to B (control 2)
+эритропоэтин+меллиттинbaricitinib
+erythropoietin+mellittin
Примечание: * - статистически достоверно ( Р≤ 0,01) по сравнению с Б (контроль 2).Note: * - statistically significant (P≤ 0.01) compared to B (control 2).
+эритропоэтин+меллиттинbaricitinib
+erythropoietin+mellittin
Примечание: * - статистически достоверно ( Р≤ 0,01) по сравнению с Б (контроль 2).Note: * - statistically significant (P≤ 0.01) compared to B (control 2).
Как видно из таблиц 7-12, изолированное применение Барицитиниба достоверно ингибировало синтез цитокинов. Добавление в культуру эритропоэтина усиливало эффект. В отношении Меллиттина эффект был менее выражен и достоверно проявлялся лишь в случае TNFα.As can be seen from Tables 7-12, isolated use of Baricitinib significantly inhibited the synthesis of cytokines. Addition of erythropoietin to the culture enhanced the effect. With regard to Mellittin, the effect was less pronounced and was significantly manifested only in the case of TNFα.
Наиболее достоверно выраженные результаты получены при использовании фармацевтической композиции Барицитиниб+Эритропоэтин+Меллиттин.The most reliably expressed results were obtained using the pharmaceutical composition Baricitinib + Erythropoietin + Mellittin.
То есть полученные данные полностью коррелируют с таковыми, полученными в отношении Руксолитиниба.That is, the data obtained completely correlate with those obtained for Ruxolitinib.
Данный факт свидетельствует о том, что эффект предлагаемой фармацевтической композиции не обособлен в отношении какого-либо одного вещества, но является универсальным по отношению всего класса ингибиторов янус-киназ, повышая их эффективность.This fact indicates that the effect of the proposed pharmaceutical composition is not isolated in relation to any one substance, but is universal in relation to the entire class of Janus kinase inhibitors, increasing their effectiveness.
Пример 2Example 2
Для более конкретного определения механизмов действия предлагаемой фармацевтической композиции провели оценку ее влияния на синтез янус-киназы 1.To more specifically determine the mechanisms of action of the proposed pharmaceutical composition, its effect on the synthesis of Janus kinase 1 was assessed.
Исследование проведено с использованием человеческих донорских мононуклеарных клеток. Выделение и культивирование клеток проводили по методике, приведенной в Примере 1. В эксперименте использовали Барицитиниб (1 мкг/мл), Руксолитиниб (1 мкг/мл), Эритропоэтин (0.025 мкг/мл), Меллиттин (0,1 мкг/мл). Использовали как отдельные вещества, так и их композиции. The study was conducted using human donor mononuclear cells. Isolation and cultivation of cells were carried out according to the method given in Example 1. Baricitinib (1 μg/ml), Ruxolitinib (1 μg/ml), Erythropoietin (0.025 μg/ml), Mellittin (0.1 μg/ml) were used in the experiment. Both individual substances and their compositions were used.
Препараты вносили в соответствующие лунки планшета по 10 мкл. Конечный объем среды во всех лунках - 250 мкл.The drugs were added into the corresponding wells of the plate in 10 μl volumes. The final volume of medium in all wells is 250 µl.
Часть образцов являлась общим контролем, а также контролем построения калибровочной кривой. Для определения концентрации Янус-киназы 1 использовали набор ELISA Kit for Janus Kinase 1 (JAK1). Производитель: Cloud-Clone Corp. (Китай).Some of the samples served as a general control, as well as a control for constructing a calibration curve. The ELISA Kit for Janus Kinase 1 (JAK1) was used to determine the concentration of Janus kinase 1. Manufacturer: Cloud-Clone Corp. (China).
Определение концентрации JAK1-киназы в мононуклеарах периферической крови (МНК).Determination of JAK1-kinase concentration in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs).
По окончании культивирования для определения экспрессии JAK1-киназы в МПК произвели лизис клеток в соответствие по протоколу производителя набора.At the end of cultivation, to determine the expression of JAK1 kinase in PBMCs, cell lysis was performed according to the protocol of the kit manufacturer.
Для исследования использовали супернатанты из лунок в объеме 100 мкл. Исследование концентрации JAK1 в супернатантах проводили методом ИФА на наборе CloneCloud (США-Китай) в строгом соответствии с инструкцией к набору. Детекцию результатов и расчеты проводили на планшетном ридере Multiskan FC при длине волны λ=450 нм, под управлением ПО SkanIt 3.1.Supernatants from wells in a volume of 100 μl were used for the study. The concentration of JAK1 in the supernatants was studied by ELISA using the CloneCloud kit (USA-China) in strict accordance with the instructions for the kit. Detection of results and calculations were carried out on a Multiskan FC tablet reader at a wavelength of λ=450 nm, controlled by SkanIt 3.1 software.
Полученные данные представлены в таблице 13.The obtained data are presented in table 13.
Уровень JAK1-киназы представлен в нг/мл.JAK1-kinase levels are presented in ng/ml.
Как видно из таблицы, и Барицитиниб, и Руксолитиниб выраженно ингибировали синтез JAK1-киназы в МНК. Фармацевтические композиции 1 и 2 были достоверно более активны и более выраженно снижали синтез JAK1-киназы в МНК (Р≤0,01).As can be seen from the table, both Baricitinib and Ruxolitinib significantly inhibited the synthesis of JAK1-kinase in MNCs. Pharmaceutical compositions 1 and 2 were significantly more active and more pronouncedly reduced the synthesis of JAK1-kinase in MNCs (P≤0.01).
Таким образом, предлагаемая фармацевтическая композиция, включающая ингибиторы Янус-киназ, эритропоэтин и меллиттин была достоверно эффективнее изолированных веществ - ингибиторов Янус-киназ. Таким образом, иммуномодулирующий эффект предлагаемой фармацевтической композиции связан с усилением ингибиции Янус-киназ.Thus, the proposed pharmaceutical composition, including Janus kinase inhibitors, erythropoietin and mellittin, was significantly more effective than isolated substances - Janus kinase inhibitors. Thus, the immunomodulatory effect of the proposed pharmaceutical composition is associated with increased inhibition of Janus kinases.
Пример 3Example 3
Исследование дозовозависимого эффекта ингибиторов Янус-киназ.Study of the dose-dependent effect of Janus kinase inhibitors.
Как уже упоминалось выше, применение ингибиторов Янус-киназ ограничено узким диапазоном концентраций, в основном от 1 до 50 мг. В этой связи проведено исследование действия препаратов в более широком диапазоне доз. Исследования проведены в культуре клеток здоровых доноров, Клетки выделяли и культивировали согласно регламенту, описанному в Примере 1.As mentioned above, the use of Janus kinase inhibitors is limited to a narrow concentration range, mainly from 1 to 50 mg. In this regard, a study of the effect of drugs in a wider range of doses was conducted. The studies were carried out in cell culture from healthy donors. Cells were isolated and cultured according to the regulations described in Example 1.
В часть исследуемых образцов добавляли Руксолитиниб и Барицитиниб в концентрациях 1 мкг/мл и 10 пг/мл.Ruxolitinib and Baricitinib were added to some of the studied samples at concentrations of 1 μg/ml and 10 pg/ml.
После культивирования планшеты с клетками центрифугировали и в супернатанте определяли концентрацию Интерлейкина 6 на оборудовании фирмы SIEMENS с использованием набора реагентов для определения интерлейкина 6 (IL-6) IMMULITE 2000 той же фирмы.After cultivation, the plates with cells were centrifuged and the concentration of Interleukin 6 in the supernatant was determined on equipment from SIEMENS using a set of reagents for the determination of interleukin 6 (IL-6) IMMULITE 2000 from the same company.
Результаты представлены в таблице 14.The results are presented in Table 14.
Уровень интерлейкина 6 (пг/мл)Table 14
Interleukin 6 level (pg/ml)
1 мкг/млbaricitinib
1 µg/ml
Примечание: статистически достоверно (Р≤0,01) по сравнению с использованием аналогичного препарата в дозе 1 мкг/мл.Note: statistically significant (P≤0.01) compared with the use of a similar drug at a dose of 1 μg/ml.
Как видно из таблицы, полученные данные указывают на стимулирующий, но не подавляющий эффект сверхмалых доз препаратов.As can be seen from the table, the data obtained indicate a stimulating, but not suppressive effect of ultra-low doses of drugs.
Когда используется концентрация 1 мкг/мл, что сравнимо с обычно назначаемой для этих препаратов разовой дозой (например, для Барицитиниба она составляет 5 мг на человека), происходит закономерное подавление синтеза про воспалительный цитокин - интерлейкина 6.When a concentration of 1 mcg/ml is used, which is comparable to the single dose usually prescribed for these drugs (for example, for Baricitinib it is 5 mg per person), there is a natural suppression of the synthesis of the pro-inflammatory cytokine interleukin 6.
Как показано, сверхнизкие дозы данной группы веществ, на примере барицитиниба и Руксолитиниба действуют прямо противоположно, то есть не подавляют синтез цитокинов, а стимулируют его, что дает неизвестный ранее для этой группы веществ эффект стимуляции выработки цитокинов.As shown, ultra-low doses of this group of substances, using the example of baricitinib and Ruxolitinib, act directly opposite, that is, they do not suppress the synthesis of cytokines, but stimulate it, which gives a previously unknown effect for this group of substances in stimulating the production of cytokines.
Известно, что в больших дозах указанные вещества, являющиеся ингибиторами JAK1-киназы, блокируют производство организмом цитокинов, снижая иммунный ответ, борясь при этом с аллергическими проявлениями и, в частности, с «цитокиновым штормом». Напротив, при сверхмалых дозах заявляемой композиции, наблюдается инверсия свойств этих веществ, определяющая стимуляцию выработки цитокинов, обеспечивающих повышение иммунного ответа организма.It is known that in large doses, these substances, which are JAK1 kinase inhibitors, block the body's production of cytokines, reducing the immune response, while fighting allergic manifestations and, in particular, the “cytokine storm”. On the contrary, at ultra-low doses of the claimed composition, an inversion of the properties of these substances is observed, which determines the stimulation of the production of cytokines, which ensure an increase in the body’s immune response.
Дозы вещества свыше 1000 пкг на килограмм веса живого организма, на основе азаиндолов в частности соединения, содержащие пирролидин и/или пирроло-пиримидины, и/или пирроло-пиридины, и/или их производные, вызывают гуморальный иммунный ответ организма, в частности с помощью фагоцитов, токсино-разрушающих ферментов печени и других защитных механизмов организма. Высокая концентрация действующих веществ вызывает ответную реакцию иммунной системы, в частности, подавляя синтез цитокинов. Естественные иммунные защитные механизмы организма начинают разрушать попадающие в организм соединения.Doses of a substance over 1000 pg per kilogram of the weight of a living organism, based on azaindoles, in particular compounds containing pyrrolidine and/or pyrrolo-pyrimidines, and/or pyrrolo-pyridines, and/or their derivatives, cause a humoral immune response of the body, in particular with the help of phagocytes, toxin-degrading liver enzymes and other body defense mechanisms. A high concentration of active substances causes a response from the immune system, in particular, suppressing the synthesis of cytokines. The body's natural immune defense mechanisms begin to destroy compounds that enter the body.
Напротив, при сверхнизких концентрациях активных действующих веществ, в частности содержащие пирролидин и/или пирроло-пиримидины, и/или пирроло-пиридины, и/или их производные, иммунные защитные механизмы организма не распознают действующие вещества, как потенциально опасные и не запускают защитные процессы. Сверхмалые (от 1 до 1000 пкг на килограмм веса живого организма) дозы не успевают в полной мере пройти процессы анализа инородных веществ и выработки разрушающих его соответствующих ферментов. Использованы дозы веществ на несколько порядков ниже рекомендуемых. В частности, в патенте WO 2014/028756 описаны дозы в миллиграммах, тогда как в заявленной композиции используются пикограммы, то есть дозы заявленной композиции меньше на 6-9 порядков. Микродозы активного вещества успешно проходят кровяные каналы и постепенно оказываются, в том числе, в лимфатических узлах, где и осуществляется их взаимодействие с В-клетками (В-лимфоцитами), стимулируя их деление и массированную выработку цитокинов (преимущественно IL-2 и IL-4) обеспечивая стимуляцию иммунного ответа организма.On the contrary, at ultra-low concentrations of active substances, in particular those containing pyrrolidine and/or pyrrolo-pyrimidines, and/or pyrrolo-pyridines, and/or their derivatives, the body’s immune defense mechanisms do not recognize the active substances as potentially dangerous and do not trigger protective processes . Ultra-small doses (from 1 to 1000 pkg per kilogram of the weight of a living organism) do not have time to fully go through the processes of analyzing foreign substances and producing the corresponding enzymes that destroy them. The doses of substances used were several orders of magnitude lower than recommended. In particular, the patent WO 2014/028756 describes doses in milligrams, while the claimed composition uses picograms, that is, the doses of the claimed composition are 6-9 orders of magnitude less. Microdoses of the active substance successfully pass through the blood channels and gradually end up, including in the lymph nodes, where they interact with B cells (B lymphocytes), stimulating their division and massive production of cytokines (mainly IL-2 and IL-4 ) providing stimulation of the body's immune response.
Стимуляция иммунного ответа может иметь более ярко выраженный характер при использовании в композиции одновременно нескольких из описанных веществ, например, барицитиниб и руксолитиниб; или барицитиниб и диазаинданы, и/или их производные; или руксолитиниб и диазаинданы, и/или их производные; или барицитиниб и руксолитиниб и диазаинданы, и/или их производные. Использование какого-либо конкретного из указанных веществ, или их совместное использование, может иметь более ярко выраженную эффективность при определённых конкретных заболеваниях.Stimulation of the immune response may be more pronounced when several of the described substances are used simultaneously in the composition, for example, baricitinib and ruxolitinib; or baricitinib and diazaindans, and/or derivatives thereof; or ruxolitinib and diazaindans, and/or derivatives thereof; or baricitinib and ruxolitinib and diazaindans, and/or derivatives thereof. The use of any specific of these substances, or their combined use, may have more pronounced effectiveness for certain specific diseases.
Одновременно, в литературе описано усиление эффекта или инверсии действия сверхмалыми дозами биологически активных веществ (Эпштейн О.И. Сверхмалые дозы. История одного исследования. Издательство РАМН. 2008 г. - 336 с.; Бурлакова Е.Б., Конрадов А.А., Мальцева Е.Л. Действие сверхмалых доз биологически активных веществ и низкоинтенсивных физических факторов. Ж.: Химическая физика. 2003 Том: 22 № 2 С. 21-40; патент RU 2707753 - НИЗКОДОЗОВАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ИЗОТРЕТИНОИНА ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ, опубл. 29.11.2019). На основе этого принципа созданы и используются ряд эффективных лекарственных препаратов.At the same time, the literature describes the enhancement of the effect or inversion of the action by ultra-low doses of biologically active substances (Epshtein O.I. Ultra-low doses. The history of one study. Publishing house of the Russian Academy of Medical Sciences. 2008 - 336 pp.; Burlakova E.B., Konradov A.A. , Maltseva E.L. Effect of ultra-low doses of biologically active substances and low-intensity physical factors. Zh.: Chemical Physics. 2003 Vol.: 22 No. 2 P. 21-40; LOW-DOSE PHARMACEUTICAL COMPOSITION OF ISOTRETINOIN FOR ORAL ADMINISTRATION, publ. 1 .2019). Based on this principle, a number of effective medications have been created and used.
Полученные данные подтверждают высокую эффективность предлагаемой композиции в обеспечении регуляции и/или стимуляции иммунного ответа организма.The data obtained confirm the high efficiency of the proposed composition in providing regulation and/or stimulation of the body's immune response.
Анализ литературных данных свидетельствует, что применение такой композиции нигде явным образом не следует из уровня техники.An analysis of the literature data shows that the use of such a composition is nowhere explicitly stated in the prior art.
Таким образом, получены и описаны новые комплексы соединений, которые могут быть использованы в качестве активного ингредиента средства, для стимуляции иммунного ответа, что в свою очередь приводит к повышению иммунитета, в результате чего обеспечивается профилактика и лечение заболеваний, например, простудных, воспалительных и целый ряд других. Также заявляемую композицию можно применять при лечении пациентов с ослабленным иммунитетом. Ослабленный иммунитет одновременно возможно пролечивать, за счёт использования заявленной фармацевтической композиции.Thus, new complexes of compounds have been obtained and described that can be used as an active ingredient of the drug to stimulate the immune response, which in turn leads to increased immunity, resulting in the prevention and treatment of diseases, for example, colds, inflammatory and other diseases. a number of others. Also, the inventive composition can be used in the treatment of patients with weakened immune systems. It is possible to simultaneously treat weakened immunity through the use of the claimed pharmaceutical composition.
Таким образом, предложенная фармацевтическая композиция со сверхмалой дозировкой активных веществ, созданная на основе органических азотистых гетероциклических соединений, обеспечивает достижение заявленного результата, а именно повышение иммунного ответа живого организма.Thus, the proposed pharmaceutical composition with an ultra-low dosage of active substances, created on the basis of organic nitrogenous heterocyclic compounds, ensures the achievement of the declared result, namely an increase in the immune response of a living organism.
Таким образом, настоящее изобретение может быть использовано в фармацевтике, медицине, ветеринарии, биотехнологии, иммунологии, при создании фармацевтических композиций с комплексным использованием азотистых гетероциклов, алкалоидов, полипептидов для модуляции внутриклеточных сигнальных процессов и продукции биологически активных молекул, в частности, цитокинов. Фармацевтические композиции на основе описанных соединений и представляющий собой комплексный модулятор продукции активных цитокинов возможно широко применять при лечении и/или профилактики различных иммунопатологических заболеваний, включая инфекционные, воспалительные заболевания и тому подобные.Thus, the present invention can be used in pharmaceuticals, medicine, veterinary medicine, biotechnology, immunology, in the creation of pharmaceutical compositions with the complex use of nitrogen heterocycles, alkaloids, polypeptides to modulate intracellular signaling processes and the production of biologically active molecules, in particular cytokines. Pharmaceutical compositions based on the described compounds and representing a complex modulator of the production of active cytokines can be widely used in the treatment and/or prevention of various immunopathological diseases, including infectious, inflammatory diseases and the like.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2821633C1 true RU2821633C1 (en) | 2024-06-25 |
Family
ID=
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2197986C2 (en) * | 2001-03-23 | 2003-02-10 | Волчек Игорь Анатольевич | Immunomodelling preparation for injection-free application |
| WO2009022961A1 (en) * | 2007-05-15 | 2009-02-19 | Astrazeneca Ab | Pyrrolopyridine derivatives and their use as bace inhibitors |
| RU2403252C2 (en) * | 2004-03-30 | 2010-11-10 | Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед | Azaindoles, useful as inhibitors of jak and other proteinkinases |
| WO2014028756A1 (en) * | 2012-08-17 | 2014-02-20 | Concert Pharmaceuticals, Inc. | Deuterated baricitinib |
| EA201790356A1 (en) * | 2014-09-26 | 2017-09-29 | Пфайзер Инк. | Methyl and trifluoromethyl substituted PYRROPYRIDINE MODULATORS RORC2 AND METHODS OF THEIR APPLICATION |
| RU2676684C2 (en) * | 2014-02-20 | 2019-01-10 | ГлаксоСмитКлайн Интеллекчуал Проперти (No.2) Лимитед | Pyrrolo[3,2-d]pyrimidine derivatives as inducers of human interferon |
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2197986C2 (en) * | 2001-03-23 | 2003-02-10 | Волчек Игорь Анатольевич | Immunomodelling preparation for injection-free application |
| RU2403252C2 (en) * | 2004-03-30 | 2010-11-10 | Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед | Azaindoles, useful as inhibitors of jak and other proteinkinases |
| WO2009022961A1 (en) * | 2007-05-15 | 2009-02-19 | Astrazeneca Ab | Pyrrolopyridine derivatives and their use as bace inhibitors |
| WO2014028756A1 (en) * | 2012-08-17 | 2014-02-20 | Concert Pharmaceuticals, Inc. | Deuterated baricitinib |
| RU2676684C2 (en) * | 2014-02-20 | 2019-01-10 | ГлаксоСмитКлайн Интеллекчуал Проперти (No.2) Лимитед | Pyrrolo[3,2-d]pyrimidine derivatives as inducers of human interferon |
| EA201790356A1 (en) * | 2014-09-26 | 2017-09-29 | Пфайзер Инк. | Methyl and trifluoromethyl substituted PYRROPYRIDINE MODULATORS RORC2 AND METHODS OF THEIR APPLICATION |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PALMA MANDUZIO. Ruxolitinib in myelofibrosis: to be or not to be an immune disruptor //Therapeutics and Clinical Risk Management 2017:13 169-177. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Low-dose radiation (LDR) induces hematopoietic hormesis: LDR-induced mobilization of hematopoietic progenitor cells into peripheral blood circulation | |
| Kita et al. | Effect of steroids on immunoglobulin-induced eosinophil degranulation | |
| Guryanova et al. | Strategies for using muramyl peptides-modulators of innate immunity of bacterial origin-in medicine | |
| Zavadova et al. | Stimulation of reactive oxygen species production and cytotoxicity in human neutrophils in vitro and after oral administration of a polyenzyme preparation | |
| CN115521914B (en) | In-vitro amplification system and method for human primary natural killer cells | |
| Kim et al. | Curcumin elevates TFH cells and germinal center B cell response for antibody production in mice | |
| Tang et al. | Tripterygium ingredients for pathogenicity cells in rheumatoid arthritis | |
| Knedla et al. | Developments in the synovial biology field 2006 | |
| SA94150042B1 (en) | Inhibition of nitric oxide production by retinoic acid | |
| Chadha et al. | Focus on the multimodal role of autophagy in rheumatoid arthritis | |
| RU2821633C1 (en) | Pharmaceutical composition stimulating immune response of living body | |
| Xiong et al. | Investigation of effects of farrerol on suppression of murine T lymphocyte activation in vitro and in vivo | |
| US20150306112A1 (en) | Zhankuic acid A, a JAK2/3 tyrosine kinase inhibitor, and a potential therapeutic agent for hepatitis | |
| CN113491685B (en) | Composition for inhibiting macrophage activation and application thereof in preparation of anti-inflammatory product | |
| Nara et al. | Increased production of tumor necrosis factor and prostaglandin E 2 by monocytes in cancer patients and its unique modulation by their plasma | |
| Huang et al. | Splenic T lymphocytes induce the formation of immunosuppressive neutrophils through IFN-γ in sepsis | |
| Wang et al. | Bortezomib inhibits bone marrow-derived dendritic cells | |
| JPH02157231A (en) | Cytostatic agent | |
| Yu et al. | Dihydroartemisinin-ursodeoxycholic acid conjugate is a potential treatment agent for inflammatory bowel disease | |
| Treseler et al. | Biological activity of interleukin-2 bound to Candida albicans | |
| JP3817273B2 (en) | Pharmaceutical composition for immunosuppressive treatment, anticancer treatment and antiviral treatment | |
| Egba et al. | Oral administration of methanol extract of Gongronema latifolium (utazi) Up-Regulates cytokine expression and influences the immune system in wistar albino rats | |
| TWI732787B (en) | Preparation method of multi-peptide composition stimulated by temperature regulation | |
| 王鹏 et al. | The Regulatory Effects of mTOR Complexes in the Differentiation and Function of CD4+ T Cell Subsets | |
| Chen et al. | OPEN ACCESS EDITED BY Li Wu, Tsinghua University, China |