RU2821521C2 - Способы образования полиплексов - Google Patents
Способы образования полиплексов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2821521C2 RU2821521C2 RU2021122218A RU2021122218A RU2821521C2 RU 2821521 C2 RU2821521 C2 RU 2821521C2 RU 2021122218 A RU2021122218 A RU 2021122218A RU 2021122218 A RU2021122218 A RU 2021122218A RU 2821521 C2 RU2821521 C2 RU 2821521C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- kda
- polymer
- nucleic acid
- polyplex
- acid component
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 138
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 150
- -1 poly(aminoether) Polymers 0.000 claims abstract description 135
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 104
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 89
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 89
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 89
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 47
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 31
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 claims description 21
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 claims description 21
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 16
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 14
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 206010014989 Epidermolysis bullosa Diseases 0.000 claims description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 8
- 102100024335 Collagen alpha-1(VII) chain Human genes 0.000 claims description 7
- 101000909498 Homo sapiens Collagen alpha-1(VII) chain Proteins 0.000 claims description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 7
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 claims description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 6
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- 102100036664 Adenosine deaminase Human genes 0.000 claims description 4
- NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N Sorbitan monooleate Chemical group CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N 0.000 claims description 4
- IJCWFDPJFXGQBN-RYNSOKOISA-N [(2R)-2-[(2R,3R,4S)-4-hydroxy-3-octadecanoyloxyoxolan-2-yl]-2-octadecanoyloxyethyl] octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IJCWFDPJFXGQBN-RYNSOKOISA-N 0.000 claims description 4
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 claims description 4
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 claims description 4
- 235000011078 sorbitan tristearate Nutrition 0.000 claims description 4
- QDOIZVITZUBGOQ-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2,3,3,4,4,4-nonafluoro-n,n-bis(1,1,2,2,3,3,4,4,4-nonafluorobutyl)butan-1-amine;1,1,2,2,3,3,4,4,4-nonafluoro-n-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-nonafluorobutyl)-n-(trifluoromethyl)butan-1-amine Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)N(C(F)(F)F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F.FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)N(C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QDOIZVITZUBGOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102100022712 Alpha-1-antitrypsin Human genes 0.000 claims description 3
- 101800000026 Dentin sialoprotein Proteins 0.000 claims description 3
- 102100038199 Desmoplakin Human genes 0.000 claims description 3
- 102100040683 Fermitin family homolog 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 101000823116 Homo sapiens Alpha-1-antitrypsin Proteins 0.000 claims description 3
- 101000892670 Homo sapiens Fermitin family homolog 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000827746 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000917159 Homo sapiens Filaggrin Proteins 0.000 claims description 3
- 101000614436 Homo sapiens Keratin, type I cytoskeletal 14 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100040445 Keratin, type I cytoskeletal 14 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100024629 Laminin subunit beta-3 Human genes 0.000 claims description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- 108010005020 Serine Peptidase Inhibitor Kazal-Type 5 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025420 Serine protease inhibitor Kazal-type 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 claims description 3
- NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N fluoromethane Chemical compound FC NBVXSUQYWXRMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 3
- 102000008371 intracellularly ATP-gated chloride channel activity proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010028309 kalinin Proteins 0.000 claims description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 3
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 claims 7
- 108010079245 Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Proteins 0.000 claims 1
- 101000929495 Homo sapiens Adenosine deaminase Proteins 0.000 claims 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 31
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 24
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 22
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 19
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 18
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 17
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 17
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 17
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfoxide Natural products CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 13
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 12
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 11
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 10
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 10
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 10
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 10
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 9
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 9
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 9
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 8
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 8
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 8
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 7
- 125000005913 (C3-C6) cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 6
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical group C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 125000000018 nitroso group Chemical group N(=O)* 0.000 description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 6
- SNOOUWRIMMFWNE-UHFFFAOYSA-M sodium;6-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl)amino]hexanoate Chemical compound [Na+].COC1=CC(C(=O)NCCCCCC([O-])=O)=CC(OC)=C1OC SNOOUWRIMMFWNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 125000000565 sulfonamide group Chemical group 0.000 description 6
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 6
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 4
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 4
- 201000009628 adenosine deaminase deficiency Diseases 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 4
- 208000036556 autosomal recessive T cell-negative B cell-negative NK cell-negative due to adenosine deaminase deficiency severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 4
- 208000007150 epidermolysis bullosa simplex Diseases 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 3
- 208000003019 Neurofibromatosis 1 Diseases 0.000 description 3
- 208000024834 Neurofibromatosis type 1 Diseases 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004305 biphenyl Chemical group 0.000 description 3
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000004474 heteroalkylene group Chemical group 0.000 description 3
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 3
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004568 thiomorpholinyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 125000006552 (C3-C8) cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- VXNZUUAINFGPBY-UHFFFAOYSA-N 1-Butene Chemical group CCC=C VXNZUUAINFGPBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FCEHBMOGCRZNNI-UHFFFAOYSA-N 1-benzothiophene Chemical compound C1=CC=C2SC=CC2=C1 FCEHBMOGCRZNNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004918 2-methyl-2-pentyl group Chemical group CC(C)(CCC)* 0.000 description 2
- 125000004493 2-methylbut-1-yl group Chemical group CC(C*)CC 0.000 description 2
- 125000004919 3-methyl-2-pentyl group Chemical group CC(C(C)*)CC 0.000 description 2
- UIKUBYKUYUSRSM-UHFFFAOYSA-N 3-morpholinopropylamine Chemical compound NCCCN1CCOCC1 UIKUBYKUYUSRSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BLFRQYKZFKYQLO-UHFFFAOYSA-N 4-aminobutan-1-ol Chemical compound NCCCCO BLFRQYKZFKYQLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004920 4-methyl-2-pentyl group Chemical group CC(CC(C)*)C 0.000 description 2
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000010975 Dystrophic epidermolysis bullosa Diseases 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030673 Homozygous familial hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- DAKWPKUUDNSNPN-UHFFFAOYSA-N Trimethylolpropane triacrylate Chemical compound C=CC(=O)OCC(CC)(COC(=O)C=C)COC(=O)C=C DAKWPKUUDNSNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010045261 Type IIa hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- IYYZUPMFVPLQIF-UHFFFAOYSA-N dibenzothiophene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3SC2=C1 IYYZUPMFVPLQIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 2
- 208000004298 epidermolysis bullosa dystrophica Diseases 0.000 description 2
- 125000005678 ethenylene group Chemical group [H]C([*:1])=C([H])[*:2] 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004613 furo[2,3-c]pyridinyl group Chemical group O1C(=CC=2C1=CN=CC2)* 0.000 description 2
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 2
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 125000002183 isoquinolinyl group Chemical group C1(=NC=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 2
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 125000006410 propenylene group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004737 (C1-C6) haloalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000171 (C1-C6) haloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- XGYCWCIGCYGQFU-UHFFFAOYSA-N 1,2-thiazolidine 1,1-dioxide Chemical compound O=S1(=O)CCCN1 XGYCWCIGCYGQFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SILNNFMWIMZVEQ-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydrobenzimidazol-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(O)=NC2=C1 SILNNFMWIMZVEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYELEBBISJGNHJ-UHFFFAOYSA-N 1,3-oxazinan-2-one Chemical compound O=C1NCCCO1 OYELEBBISJGNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDVBKXJMLILLLB-UHFFFAOYSA-N 1,4'-bipiperidine Chemical group C1CCCCN1C1CCNCC1 QDVBKXJMLILLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005960 1,4-diazepanyl group Chemical group 0.000 description 1
- HFZLSTDPRQSZCQ-UHFFFAOYSA-N 1-pyrrolidin-3-ylpyrrolidine Chemical group C1CCCN1C1CNCC1 HFZLSTDPRQSZCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 1H-indene Natural products C1=CC=C2CC=CC2=C1 YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWBOSXFRPFZLOP-UHFFFAOYSA-N 2,1,3-benzoxadiazole Chemical compound C1=CC=CC2=NON=C21 AWBOSXFRPFZLOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBBVURRQGJPTHH-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyacetic acid;2-hydroxypropanoic acid Chemical compound OCC(O)=O.CC(O)C(O)=O XBBVURRQGJPTHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000175 2-thienyl group Chemical group S1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- IDUSJBBWEKNWAK-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydro-2h-1,2-benzothiazine Chemical compound C1=CC=C2SNCCC2=C1 IDUSJBBWEKNWAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYLMCBOAXJVARF-UHFFFAOYSA-N 3-azabicyclo[2.2.1]heptane Chemical compound C1C2CCC1NC2 GYLMCBOAXJVARF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEJRWHAVMIAJKC-UHFFFAOYSA-N 4-Butyrolactone Chemical compound O=C1CCCO1 YEJRWHAVMIAJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 229930185605 Bisphenol Natural products 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010013801 Duchenne Muscular Dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000002197 Ehlers-Danlos syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- KMTRUDSVKNLOMY-UHFFFAOYSA-N Ethylene carbonate Chemical compound O=C1OCCO1 KMTRUDSVKNLOMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034607 Kindler epidermolysis bullosa Diseases 0.000 description 1
- 201000004290 Kindler syndrome Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011219 Netherton syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091060545 Nonsense suppressor Proteins 0.000 description 1
- 201000011252 Phenylketonuria Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 108091030084 RNA-OUT Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrothiophene-1,1-dioxide, Natural products O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000014769 Usher Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 1
- GUWTXVUFNXVQMT-UHFFFAOYSA-N [N]1C=2N(CCC1)C=CC2 Chemical compound [N]1C=2N(CCC1)C=CC2 GUWTXVUFNXVQMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001436 acantholytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 208000006682 alpha 1-Antitrypsin Deficiency Diseases 0.000 description 1
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002178 anthracenyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 125000002029 aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- AXMNGEUJXLXFRY-UHFFFAOYSA-N azaspirodecane Chemical compound C1CCCC21CCNCC2 AXMNGEUJXLXFRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002393 azetidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002199 base oil Substances 0.000 description 1
- 229920005601 base polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000004603 benzisoxazolyl group Chemical group O1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 1
- BNBQRQQYDMDJAH-UHFFFAOYSA-N benzodioxan Chemical compound C1=CC=C2OCCOC2=C1 BNBQRQQYDMDJAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004619 benzopyranyl group Chemical group O1C(C=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000001164 benzothiazolyl group Chemical group S1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004196 benzothienyl group Chemical group S1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004541 benzoxazolyl group Chemical group O1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- BVCRERJDOOBZOH-UHFFFAOYSA-N bicyclo[2.2.1]heptanyl Chemical group C1C[C+]2CC[C-]1C2 BVCRERJDOOBZOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IISBACLAFKSPIT-UHFFFAOYSA-N bisphenol A Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1C(C)(C)C1=CC=C(O)C=C1 IISBACLAFKSPIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004369 butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 1
- 125000000480 butynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000011437 continuous method Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 125000000000 cycloalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002100 cyclohexa-1,3-dienyl group Chemical group [H]C1([*])C([H])=C([H])C([H])=C([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002150 cyclohexa-1,4-dienyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])(*)C([H])=C([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002433 cyclopentenyl group Chemical group C1(=CCCC1)* 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 125000004652 decahydroisoquinolinyl group Chemical group C1(NCCC2CCCCC12)* 0.000 description 1
- 125000005508 decahydronaphthalenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004856 decahydroquinolinyl group Chemical group N1(CCCC2CCCCC12)* 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 125000004386 diacrylate group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001028 difluoromethyl group Chemical group [H]C(F)(F)* 0.000 description 1
- 125000000723 dihydrobenzofuranyl group Chemical group O1C(CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000005436 dihydrobenzothiophenyl group Chemical group S1C(CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000004615 furo[2,3-b]pyridinyl group Chemical group O1C(=CC=2C1=NC=CC2)* 0.000 description 1
- YRTCKZIKGWZNCU-UHFFFAOYSA-N furo[3,2-b]pyridine Chemical compound C1=CC=C2OC=CC2=N1 YRTCKZIKGWZNCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 238000012637 gene transfection Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004404 heteroalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006038 hexenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005980 hexynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 229920000587 hyperbranched polymer Polymers 0.000 description 1
- 206010021198 ichthyosis Diseases 0.000 description 1
- 201000002597 ichthyosis vulgaris Diseases 0.000 description 1
- YAMHXTCMCPHKLN-UHFFFAOYSA-N imidazolidin-2-one Chemical compound O=C1NCCN1 YAMHXTCMCPHKLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 201000008319 inclusion body myositis Diseases 0.000 description 1
- 125000003392 indanyl group Chemical group C1(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000003453 indazolyl group Chemical group N1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000003454 indenyl group Chemical group C1(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000003387 indolinyl group Chemical group N1(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 238000002743 insertional mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000904 isoindolyl group Chemical group C=1(NC=C2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 125000002757 morpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000003136 n-heptyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 231100001081 no carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 125000001715 oxadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000160 oxazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005968 oxazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003566 oxetanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000466 oxiranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 125000006340 pentafluoro ethyl group Chemical group FC(F)(F)C(F)(F)* 0.000 description 1
- 125000002255 pentenyl group Chemical group C(=CCCC)* 0.000 description 1
- 125000005981 pentynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001828 phenalenyl group Chemical group C1(C=CC2=CC=CC3=CC=CC1=C23)* 0.000 description 1
- 125000001792 phenanthrenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C=CC12)* 0.000 description 1
- 125000005954 phenoxathiinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- IWELDVXSEVIIGI-UHFFFAOYSA-N piperazin-2-one Chemical compound O=C1CNCCN1 IWELDVXSEVIIGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000019525 primary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002568 propynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004309 pyranyl group Chemical group O1C(C=CC=C1)* 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003072 pyrazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N pyridin-2-ol Chemical compound OC1=CC=CC=N1 UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000002943 quinolinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000005493 quinolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 229950004959 sorbitan oleate Drugs 0.000 description 1
- 239000001589 sorbitan tristearate Substances 0.000 description 1
- 229960004129 sorbitan tristearate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003718 tetrahydrofuranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000147 tetrahydroquinolinyl group Chemical group N1(CCCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001113 thiadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- BUGOPWGPQGYYGR-UHFFFAOYSA-N thiane 1,1-dioxide Chemical compound O=S1(=O)CCCCC1 BUGOPWGPQGYYGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFRGCMIFZVPLSJ-UHFFFAOYSA-N thiazepane 1,1-dioxide Chemical compound O=S1(=O)CCCCCN1 NFRGCMIFZVPLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001984 thiazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002769 thiazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- VJYJJHQEVLEOFL-UHFFFAOYSA-N thieno[3,2-b]thiophene Chemical compound S1C=CC2=C1C=CS2 VJYJJHQEVLEOFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 description 1
- 125000004306 triazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003866 trichloromethyl group Chemical group ClC(Cl)(Cl)* 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Настоящее изобретение относится к способу образования полиплексов на основе нуклеиновых кислот, которые находят применение в генной терапии в качестве безопасных и нетоксичных трансфекционных агентов. Способ включает в себя несколько стадий. На первой создают два потока жидкости, один из которых содержит полимер, представляющий собой сильно разветвленный поли(аминоэфир) (HPAE); а второй - компонент нуклеиновой кислоты. Затем приводят в контакт полимер в первом потоке жидкости с компонентом нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости. В результате получают полиплекс, имеющий размер и заряд, подходящие для терапевтического введения. На последнем этапе выделяют и стабилизируют полученный полиплекс. Предложенный в изобретении способ является воспроизводимым и масштабируемым, а также позволяет получать однородные и стабильные полиплексы. 42 з.п.ф-лы, 1 ил., 1 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Данная заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/786050, поданной 28 декабря 2018 г., содержание которой полностью включено в данный документ посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] Генная терапия представляет собой быстро развивающуюся область наномедицины для исправления нарушений здоровья и коррекции генетических нарушений. [1] В настоящее время в большинстве протоколов доставки генов в качестве носителей генов используются вирусные векторы. Однако проблемы, связанные с вирусными векторами, включая риски инициации иммуногенных ответов и инсерционного мутагенеза трансгена, ограничения, связанные с крупномасштабным производством и низкой «грузовместимостью» генетических материалов, наряду с непредсказуемостью мобильности векторов, остаются нерешенными. [2,3]
[0003] Невирусные векторы обладают рядом преимуществ перед вирусными системами, таких как их потенциал в отношении минимальной иммуногенности, неканцерогенности, рентабельности производства, высокой нагрузки нуклеиновыми кислотами и локализованной экспрессии генов. С 2010 года количество клинических испытаний генной терапии с использованием невирусных генных векторов значительно увеличилось. Плазмидные ДНК и малые интерферирующие РНК (миРНК) были включены в состав по меньшей мере 40 вариантов генной терапии на основе наночастиц для коррекции генов, терапевтической экспрессии белков и вакцинации антигенами, при этом 12 основных липосомных систем были исследованы в 27 клинических испытаниях и 7 систем на основе полимеров - в 13 клинических испытаниях.[3] Среди клинических испытаний по изучению генной терапии на основе полимеров некоторые перспективы показал уже имеющийся на рынке катионный полимер полиэтиленимин (PEI - англ. polyethylenimine). Однако PEI является неразлагающимся, и его применение значительно ограничено опасениями по поводу безопасности. [4] По этой причине были предприняты огромные усилия для повышения эффективности трансфекции генов и безопасности полимерных генных векторов, чтобы генная терапия на основе полимеров могла быть приближена к клиническим применениям. На эффективность трансфекции полиплексов и их биологическую активность влияют несколько факторов, таких как размер полимера, молекулярная масса, степень ветвления полимера, плотность заряда, а также состав рецептурной среды и отношение полимера к компоненту нуклеиновой кислоты.[5]
[0004] Для коммерческого использования необходимы воспроизводимые и масштабируемые методы сборки однородных и стабильных полиплексных комплексов с жестким контролем физических параметров. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает улучшенные способы получения полиплексов, включая способы, которые можно масштабировать для производства в промышленных масштабах.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0005] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает способ создания одного или более полиплексов, включающий:
(а) обеспечение:
i. полимера в первом потоке жидкости;
ii. компонента нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости;
(b) приведение в контакт полимера в первом потоке жидкости с компонентом нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости с образованием полиплекса, имеющего размер и заряд, которые подходят для терапевтического введения; а также
(c) выделение полиплекса для получения стабилизированного полиплекса.
[0006] В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает оценку и сбор одного или более полиплексов. В некоторых вариантах осуществления способ по настоящему изобретения представляет собой непрерывный процесс, в котором каждый образованный полиплекс изолирован от других полиплексов, образованных данным способом. В некоторых вариантах осуществления каждый полиплекс отделяется от других полиплексов во время фазы стабилизации после контакта с первым и вторым потоками жидкости.
[0007] В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает фильтрацию, промывку, замораживание и/или лиофилизацию стабилизированных полиплексов.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0008] Фигура 1 описывает иллюстративный способ изготовления полиплексов по настоящему изобретению.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0009] Как использовано выше и во всем данном описании следующие термины, если не указано иное, следует понимать как имеющие следующие значения. Если термин отсутствует, используется общепринятый термин, известный специалистам в данной области техники.
[0010] Использованные в данном документе термины «включающий » и «содержащий» используются в их открытом, неограничивающем смысле.
[0011] Артикли «а» и «an» используются в данном раскрытии для обозначения одного или более чем одного (то есть, по меньшей мере, одного) грамматического объекта описания. Например, «элемент» означает один элемент или более одного элемента.
[0012] Термин «и/или» используется в данном раскрытии для обозначения как «и», так и «или», если не указано иное.
[0013] Термин «около», непосредственно предшествующий числовому значению, означает диапазон (например, плюс или минус 10% от этого значения). Например, «около 50» может означать от 45 до 55, «около 25000» может означать от 22500 до 27500 и т.д., если контекст описания не подразумевает иное или не согласуется с такой интерпретацией. Например, в перечне числовых значений, таких как «около 49, около 50, около 55,…», «около 50» означает диапазон, распространяющийся до менее чем половины интервала(ов) между предыдущим и последующим значениями, например, от более чем 49,5 до менее чем 52,5. Кроме того, фразы «меньше чем около» значения или «больше чем около» значения следует понимать в свете определения термина «около», приведенного в данном документе. Точно так же термин «около», предшествующий ряду числовых значений или диапазону значений (например, «около 10, 20, 30» или «около 10-30»), относится, соответственно, ко всем значениям в серии или конечным точкам диапазона. Концентрации, которые заданы в процентах, относятся к массовым отношениям, если не указано иное.
[0014] В контексте данного описания термин «нарушение» означает и используется взаимозаменяемо с терминами заболевание, патологическое состояние или болезнь, если не указано иное.
[0015] Использование терминов «фармацевтически приемлемый» или «фармакологически приемлемый» предназначено для обозначения материала, который не является биологически, или иным образом нежелательным - такой материал можно вводить индивидууму, не вызывая каких-либо по существу нежелательных биологических эффектов, или без вредного взаимодействия с любым из компонентов композиции, в которой он содержится.
[0016] Все документы, на которые имеются ссылки в данном документе, включены путем ссылки в полном объеме для любых целей.
[0017] В контексте данного документа «алкил» означает прямую цепь или насыщенную разветвленную цепь, имеющую от 1 до 40 атомов углерода. Типичные насыщенные алкильные группы включают в себя, но не ограничиваются ими, метил, этил, н-пропил, изопропил, 2-метил-1-пропил, 2-метил-2-пропил, 2-метил-1-бутил, 3-метил-1-бутил, 2-метил-3-бутил, 2,2-диметил-1-пропил, 2-метил-1-пентил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил, 2-метил-2-пентил, 3-метил-2-пентил, 4-метил-2-пентил, 2,2-диметил-1-бутил, 3,3-диметил-1-бутил, 2-этил-1-бутил, бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил и т. п., а также более длинные алкильные группы, такие как гептил, октил и т. п. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной. Алкильные группы, содержащие три или более атомов углерода, могут быть прямыми или разветвленными. В контексте данного документа «низший алкил» обозначает алкильную группу, имеющую от 1 до 10 атомов углерода.
[0018] В контексте данного документа «алкенил» включает в себя неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую 2-40 атомов углерода. «Алкенильная» группа содержит по меньшей мере одну двойную связь. Двойная связь алкенильной группы может быть неконъюгированной или конъюгированной с другой ненасыщенной группой. Примеры алкенильных групп включают в себя, но не ограничиваются ими, этиленил, винил, аллил, бутенил, пентенил, гексенил, бутадиенил, пентадиенил, гексадиенил, 2-этилгексенил, 2-пропил-2-бутенил, 4-(2-метил-3-бутен)-пентенил и тому подобное. Алкенильная группа может быть замещенной или незамещенной. Алкенил, как указано в настоящем документе, также может быть разветвленным или прямым.
[0019] В контексте данного документа «алкинил» включает в себя неразветвленную или разветвленную ненасыщенную углеводородную цепь, содержащую 2-40 атомов углерода. «Алкинильная» группа содержит по меньшей мере одну тройную связь. Тройная связь алкинильной группы может быть неконъюгированной или конъюгированной с другой ненасыщенной группой. Примеры алкинильных групп включают в себя, но не ограничиваются ими, этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил, метилпропинил, 4-метил-1-бутинил, 4-пропил-2-пентинил, 4-бутил-2-гексинил и т. п. Алкинильная группа может быть замещенной или незамещенной.
[0020] Следует также отметить, что любой атом углерода, а также гетероатом с ненасыщенными валентностями описанный в данном документе, как предполагается, имеет достаточное количество атомов водорода, чтобы насытить валентности.
[0021] Термин «гало» или «галоген» относится к фтору, хлору, брому или йоду.
[0022] В контексте данного документа термин «галогеналкил» относится к алкильной группе, как определено в данном документе, которая замещена одним или более галогенами. Примеры галогеналкильных групп включают, но не ограничиваются ими, трифторметил, дифторметил, пентафторэтил, трихлорметил и т.д.
[0023] Если специально не указано иное, термин «арил» относится к циклическим, ароматическим углеводородным группам, которые имеют от 1 до 3 ароматических колец, включая моноциклические или бициклические группы, такие как фенил, бифенил или нафтил. В случае наличия двух ароматических колец (бициклические соединения и т. д.), ароматические кольца арильной группы могут быть соединены в одной точке (например, бифенил) или конденсированы (например, нафтил). Арильная группа может быть необязательно замещена одним или более заместителями, например, 1-5 заместителями, в любой точке присоединения. Заместители могут сами быть необязательно замещенными. Кроме того, в случае, наличия двух конденсированных колец арильные группы по определению данного документа могут иметь ненасыщенное или частично насыщенное кольцо, конденсированное с полностью насыщенным кольцом. Примеры кольцевых систем этих арильных групп включают, но не ограничиваются ими, фенил, бифенил, нафтил, антраценил, феналенил, фенантренил, инданил, инденил, тетрагидронафталенил, тетрагидробензоаннуленил и т. п.
[0024] Если специально не указано иное, «гетероарил» обозначает одновалентный моноциклический или полициклический ароматический радикал из 5-18 кольцевых атомов или полициклический ароматический радикал, содержащий один или более кольцевых гетероатомов, выбранных из N, O или S, а оставшиеся атомы представляют собой С. Гетероарил по определению данного документа также обозначает бициклическую гетероароматическую группу, в которой гетероатом выбран из N, O или S. Ароматический радикал является независимо необязательно замещенным одним или более заместителями, описанными в данном документе. Заместители могут сами быть необязательно замещенными. Примеры включают в себя, но не ограничиваются ими, бензотиофен, фурил, тиенил, пирролил, пиридил, пиразолил, пиримидинил, имидазолил, изоксазолил, оксазолил, оксадиазолил, пиразинил, индолил, тиофен-2-ил, хинолил, бензопиранил, изотиазолил, тиазолил, тиадиазолил, тиено[3,2-b]тиофен, триазолил, триазинил, имидазо[1,2-b]пиразолил, фуро[2,3-c]пиридинил, имидазо[1,2-a]пиридинил, индазолил, пирроло[2,3-c]пиридинил, пирроло[3,2-c]пиридинил, пиразоло[3,4-c]пиридинил, бензоимидазолил, тиено[3,2-c]пиридинил, тиено[2,3-c]пиридинил, тиено[2,3-b]пиридинил, бензотиазолил, индолил, индолинил, индолинонил, дигидробензотиофенил, дигидробензофуранил, бензофуран, хроманил, тиохроманил, тетрагидрохинолинил, дигидробензотиазин, дигидробензоксанил, хинолинил, изохинолинил, 1,6-нафтиридинил, бензо[де]изохинолинил, пиридо[4,3-b][1,6]нафтиридинил, тиено[2,3-b]пиразинил, хиназолинил, тетразоло[1,5-a]пиридинил, [1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридинил, изоиндолил, пирроло[2,3-b]пиридинил, пирроло[3,4-b]пиридинил, пирроло[3,2-b]пиридинил, имидазо[5,4-b]пиридинил, пирроло[1,2-a]пиримидинил, тетрагидропирроло[1,2-a]пиримидинил, 3,4-дигидро-2H-1λ2-пирроло[2,1-b]пиримидин, дибензо[b, d]тиофен, пиридин-2-он, фуро[3,2-c]пиридинил, фуро[2,3-c]пиридинил, 1H-пиридо[3,4-b][1,4]тиазинил, бензоксазолил, бензизоксазолил, фуро[2,3-b]пиридинил, бензотиофенил, 1,5-нафтиридинил, фуро[3,2-b]пиридин, [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиридинил, бензо[1,2,3]триазолил, имидазо[1,2-a]пиримидинил, [1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазинил, бензо[c][1,2,5]тиадиазолил, бензо[c][1,2,5]оксадиазол, 1,3-дигидро-2H-бензо[d]имидазол-2-он, 3,4-дигидро-2H-пиразоло[1,5-b][1,2]оксазинил, 4,5,6,7-тетрагидропиразоло[1,5-a]пиридинил, тиазоло[5,4-d]тиазолил, имидазо[2,1-b][1,3,4]тиадиазолил, тиено[2,3-b]пирролил, 3H-индолил и их производные. Кроме того, в случае наличия двух конденсированных колец гетероарильные группы по определению данного документа могут иметь ненасыщенное или частично насыщенное кольцо, конденсированное с полностью насыщенным кольцом.
[0025] В контексте данного документа термин «циклоалкил» относится к насыщенному или частично насыщенному, моноциклическому, конденсированному или спирополициклическому карбоциклу, имеющему от 3 до 18 атомов углерода на кольцо. Циклоалкильное кольцо или карбоцикл могут быть необязательно замещены одним или более заместителями, например, 1-5 заместителями, в любой точке присоединения. Заместители могут сами быть необязательно замещенными. Примеры циклоалкильных групп включают, без ограничений, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептанил, циклооктанил, норборанил, норборенил, бицикло[2.2.2]октанил, бицикло[2.2.2]октенил, декагидронафталенил, октагидро-1H-инденил, циклопентенил, циклогексенил, циклогекса-1,4-диенил, циклогекса-1,3-диенил, 1,2,3,4-тетрагидронафталенил, октагидропенталенил, 3a,4,5,6,7,7a-гексагидро-1H-инденил, 1,2,3,3a-тетрагидропенталенил, бицикло[3.1.0]гексанил, бицикло[2.1.0]пентанил, спиро[3.3]гептанил, бицикло[2.2.1]гептанил, бицикло[2.2.1]гепт-2-енил, бицикло[2.2.2]октанил, 6-метилбицикло[3.1.1]гептанил, 2,6,6-триметилбицикло[3.1.1]гептанил и их производные.
[0026] В контексте данного документа термин «циклоалкенил» относится к частично насыщенному, моноциклическому, конденсированному или спирополициклическому карбоциклу, имеющему от 3 до 18 атомов углерода на кольцо и содержащему по меньшей мере одну двойную связь. Циклоалкенильное кольцо может быть необязательно замещено одним или более заместителями, например, 1-5 заместителями, в любой точке присоединения. Заместители могут сами быть необязательно замещенными.
[0027] В контексте данного документа термин «гетероциклоалкил» или «гетероциклил» относится к насыщенной или частично ненасыщенной и неароматической моноциклической, конденсированной или спиральной, полициклической, кольцевой структуре из 4-18 атомов, содержащей углерод и гетероатомы, взятые из кислорода, азота или серы, и где между кольцевыми атомом углерода или гетероатомами отсутствуют делокализованные π-электроны (ароматичность). Структура гетероциклоалкильного или гетероциклильного кольца может быть замещенной одним или более заместителей. Заместители могут сами быть необязательно замещенными. Примеры гетероциклоалкильного или гетероциклильного колец включают, но не ограничиваются ими, оксетанил, азетидинил, тетрагидрофуранил, пирролидинил, оксазолинил, оксазолидинил, тиазолинил, тиазолидинил, пиранил, тиопиранил, тетрагидропиранил, диоксалинил, пиперидинил, морфолинил, тиоморфолинил, тиоморфолинила S-оксид, тиоморфолинила S-диоксид, пиперазинил, азепинил, оксепинил, диазепинил, тропанил, гомотропанил, дигидротиофен-2(3H)-онил, тетрагидротиофена 1,1-диоксид, 2,5-дигидро-1H-пирролил, имидазолидин-2-он, пирролидин-2-он, дигидрофуран-2(3H)-он, 1,3-диоксолан-2-он, изотиазолидина 1,1-диоксид, 4,5-дигидро-1H-имидазолил, 4,5-дигидрооксазолил, оксиранил, пиразолидинил, 4H-1,4-тиазинил, тиоморфолинил, 1,2,3,4-тетрагидропиридинил, 1,2,3,4-тетрагидропиразинил, 1,3-оксазинан-2-он, тетрагидро-2H-тиопирана 1,1-диоксид, 7-оксабицикло[2.2.1]гептанил, 1,2-тиазепана 1,1- диоксид, октагидро-2H-хинолизинил, 1,3-диазабицикло[2.2.2]октанил, 2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксин, 3-азабицикло[3.2.1]октанил, 8-азаспиро[4.5]декан, 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октанил, 2-азабицикло[2.2.1]гептан, 2,8-диазаспиро[5.5] ундеканил, 2-азаспиро[5.5]ундеканил, 3-азаспиро[5.5]ундеканил, декагидроизохинолинил, 1-окса-8-азаспиро[4.5]деканил, 8-азабицикло[3.2.1]октанил, 1,4'-бипиперидинил, азепанил, 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октанил, 3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]оксазинил, 5,6,7,8- тетрагидроимидазо[1,2-a]пиридинил, 1,4-диазепанил, феноксатиинил, бензо[d][1,3]диоксолил, 2,3-дигидробензофуранил, 2,3-дигидробензо[b][1,4]диоксинил, 4-(пиперидин-4-ил)морфолинил, 3-азаспиро[5.5] ундеканил, декагидрохинолинил, пиперазин-2-он, 1-(пирролидин-2-илметил) пирролидинил, 1,3'-бипирролидинил и 6,7,8,9-тетрагидро-1H, 5H-пиразоло[1,2-a][1,2] диазепинил.
[0028] Используемые в данном документе числовые диапазоны предназначены для включения последовательных целых чисел, если не указано иное. Например, диапазон, выраженный как «от 0 до 5», будет включать в себя 0, 1, 2, 3, 4 и 5.
[0029] В контексте данного документа термин «замещенный» означает, что указанные группа или фрагмент несут один или более подходящих заместителей, при этом заместители могут быть соединены с указанными группой или фрагментом в одном или более положений. Например, «арил, замещенный циклоалкилом» может указывать на то, что циклоалкил соединен с одним атомом арила связью или посредством конденсации с арилом, и они имеют два или более общих атомов.
[0030] В контексте данного документа термин «незамещенный» означает, что указанная группа не несет заместителей.
[0031] Подразумевается, что термин «необязательно замещенный» означает, что данный химический фрагмент (например, алкильная группа) может (но не в обязательном порядке) быть связанным с другими заместителями (например, гетероатомами). Например, необязательно замещенная алкильная группа может представлять собой полностью насыщенную алкильную цепь (т. е. чистый углеводород). В альтернативном варианте такая же необязательно замещенная алкильная группа может иметь заместители, отличные от водорода. Например, она может, в любой точке на протяжении цепи, быть связана с атомом галогена, гидроксильной группой или любым другим заместителем, описанным в данном документе. Таким образом, термин «необязательно замещенный» означает, что данный химический фрагмент потенциально может содержать другие функциональные группы, но необязательно имеет какие-либо дополнительные функциональные группы. Если не указано иное, подходящие заместители, используемые при необязательном замещении описанных групп, включают в себя, без ограничения, оксо, -галоген, C1-C6 алкил, C1-C6 алкокси, C1-C6 галоалкил, C1-C6 галоалкокси, -OC1-C6 алкенил, -OC1-C6 алкинил, -C1-C6 алкенил, -C1-C6 алкинил, -OH, CN (циано), -CH2CN, -OP(O)(OH)2, -C(O)OH, -OC(O)C1-C6 алкил, -C(O)C1-C6 алкил, -C(O)-C0-C6 алкиленил-циклоалкил, -C(O)-C0-C6 алкиленил-гетероциклоалкил, -C(O)-C0-C6 алкиленил-арил, -C(O)-C0-C6 алкиленил-гетероарил,-OC(O)OC1-C6 алкил, NH2, NH(C1-C6 алкил), N(C1-C6 алкил)2, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-C6 алкил), -C(O)N(C1-C6 алкил)2, -C(O)NH циклоалкил, -C(O)N(C1-C6 алкил)циклоалкил, -C(O)NHгетероциклоалкил, -C(O)N(C1-C6 алкил)гетероциклоалкил, -C(O)NHарил, -C(O)N(C1-C6 алкил)арил, -C(O)NHгетероарил, -C(O)N(C1-C6 алкил)гетероарил, -S(O)2-C1-C6 алкил, -S(O)2-C1-C6 галоалкил, -S(O)2- циклоалкил, -S(O)2-гетероциклоалкил, -S(O)2-арил, -S(O)2-гетероарил-C0-C6 алкиленил-S(O)2NH2, -S(O)2NHC1-C6 алкил, -S(O)2N(C1-C6 алкил)2, -S(O)2NHциклоалкил, -S(O)2NHгетероциклоалкил, -S(O)2NHарил, -S(O)2NHгетероарил, -NHS(O)2C1-C6 алкил, -N(C1-C6 алкил)S(O)2(C1-C6 алкил), -NHS(O)2арил, -N(C1-C6 алкил)S(O)2 арил, -NHS(O)2 гетероарил, -N(C1-C6 алкил)S(O)2 гетероарил, -NHS(O)2 циклоалкил, -N(C1-C6 алкил)S(O)2 циклоалкил, -NHS(O)2 гетероциклоалкил, -N(C1-C6 алкил)S(O)2 гетероциклоалкил, -N(C1-C6 алкил)S(O)2 арил,-C0-C6 алкиленил-арил, -C0-C6 алкиленил-гетероарил, -C0-C6 алкиленил-циклоалкил, -C0-C6 алкиленил-гетероциклоалкил, -O-арил, -NH-арил и N(C1-C6 алкил)арил. Заместители могут сами быть необязательно замещенными. Когда показан многофункциональный фрагмент, точку присоединения к ядру указывают линией, например, (циклоалкилокси)алкил- относится к алкилу, который является точкой присоединения к ядру, в то время как циклоалкил присоединен к алкилу через оксигруппу. «Необязательно замещенный» также относится к термину «замещенный» или «незамещенный» со значениями, описанными выше.
[0032] При использовании в данном документе термин «линкер» или «связывающий фрагмент» относится к группе, которая соединяет две группы и имеет основную цепь, состоящую из от 0 до 100 атомов. Линкер или связь может представлять собой ковалентную связь (то есть остов из 0 атомов), которая соединяет две группы или цепь длиной от 1 до 100 атомов, например, длиной около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 , 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98 или 100 атомов углерода, где линкер может быть линейным, разветвленным, циклическим или одиночным атомом. В некоторых случаях один или более атомов углерода основной цепи линкера могут быть необязательно замещены гетероатомом серы, азота или кислорода. Связи между атомами основной цепи могут быть насыщенными или ненасыщенными. Линкер может включать в себя одну или более групп заместителя, например, алкильную, арильную или алкенильную группу. Линкер может включать в себя, без ограничений, олиго(этиленгликоль), эфиры, тиоэфиры, третичные амины, алкилы, которые могут быть прямыми или разветвленными, например, метил, этил, н-пропил, 1-метилэтил (изопропил), н-бутил, н-пентил, 1,1-диметилэтил(трет-бутил) и тому подобное. Основная цепь линкера может включать циклическую группу, например, арил, гетероцикл или циклоалкильную группу, где 2 или более атомов, например, 2, 3 или 4 атома циклической группы, включены в остов. Линкер может быть расщепляемым или нерасщепляемым.
[0033] Если не указано иное, термин «молекулярная масса» относится к средневесовой молекулярной массе (MW).
[0034] Термин «гетероалкилен» относится к двухвалентному алкилену, в котором один или более атомов углерода заменены серой, кислородом или NRd , где Rd представляет собой водород или алкил. Гетероалкилен может быть линейным, разветвленным, циклическим или их комбинациями.
[0035] Термин «гетероалкенилен» относится к двухвалентным гидрокарбильным группам с прямой или разветвленной цепью, имеющим по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь и один или большее количество гетероатомов (например, N, S или O) в своей основной цепи.
[0036] Термин «гетероалкинилен» относится к двухвалентным гидрокарбильным группам с прямой или разветвленной цепью, имеющим по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь и один или более гетероатомов (например, N, S или O) в своей основной цепи.
[0037] Используемый в данном документе термин «полиплекс» относится к комплексу между нуклеиновой кислотой и полимером. Нуклеиновая кислота связана, инкапсулирована или связана с полимером нековалентными силами, например электростатическими взаимодействиями.
[0038] Термин «плазмида» относится к внехромосомному элементу, часто несущему ген, который не является частью центрального метаболизма клетки и обычно имеет форму кольцевых двухцепочечных молекул ДНК. Такие элементы могут быть автономно реплицирующимися последовательностями, интегрирующими геном последовательностями, фаговыми или нуклеотидными последовательностями, линейной, кольцевой или суперспиральной, одноцепочечной или двухцепочечной ДНК или РНК, полученной из любого источника, в которых ряд нуклеотидных последовательностей соединены или рекомбинированы в уникальную конструкцию, которая способна вводить в клетку промоторный фрагмент и последовательность ДНК для продукта выбранного гена вместе с соответствующей 3′-нетранслируемой последовательностью. В контексте данного документа термин «плазмида» относится к конструкции, состоящей из генетического материала (то есть нуклеиновых кислот). Как правило, плазмида содержит точку начала репликации, которая является функциональной в бактериальных клетках-хозяевах, например,Escherichia coli, и селектируемые маркеры для выявления бактериальных клеток-хозяев, содержащих такую плазмиду.
[0039] Термин «наноплазмида» относится к кольцевой последовательности ДНК, имеющей сокращенную бактериальную последовательность, которая обеспечивает плазмиду меньшего размера с желаемой генной вставкой. Например, наноплазмиды, полученные с помощью не содержащей антибиотиков селективной системы RNA-OUT, и способы их получения описаны в патенте США № 9 109 012, который в полном объеме включен в настоящий документ посредством ссылки и запатентован Nature Technology.
[0040] Термин «нуклеиновая кислота» относится к биологическому полимеру нуклеотидных оснований и может включать, не ограничиваясь ими, дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК), рибонуклеиновую кислоту (РНК), микро РНК (микроРНК) и пептидную нуклеиновую кислоту (ПНК).
[0041] Термин «миникольцо» относится к небольшой кольцевой ДНК минимального размера, полученной из родительской плазмиды путем внутримолекулярной рекомбинации для удаления последовательностей бактериальной репликации.
[0042] Термин «система редактирования генов» относится к системе, способной изменять нуклеиновую кислоту-мишень одним из многих способов репарации ДНК.
[0043] Термин «оценка» используется в данном раскрытии для обозначения оценки одной или нескольких характеристик полиплекса для определения того, соответствует ли полиплекс спецификации, включая, но не ограничиваясь ими, размер, конфигурацию, дзета-потенциал, форму (например, неагломерированную форму) или показатель преломления.
Способы
[0044] В настоящем раскрытии представлены способы производства полиплексов, которые включают смешивание полимера и компонента нуклеиновой кислоты (в частности, ДНК) для получения стабилизированного изолированного полиплекса.
[0045] Обычные способы получения полиплексов предусматривают смешивание раствора подходящего полимера с раствором подходящей ДНК (или РНК). Полученная смесь образует комплексы между ДНК (или РНК) и полимером, как правило, за счет электростатического взаимодействия. Полученные полиплексы представлены в диапазоне размеров и включают агломерированные полиплексы, которые не подходят для абсорбции в клетки-мишени. Описанные в данном документе способы обеспечивают контролируемое образование таких полиплексов путем приведения в контакт выбранных объемов и концентраций ДНК и растворов полимеров в контролируемых условиях, таким образом, что полученные полиплексы имеют относительно узкое и четко определенное распределение характеристик полиплекса (например, размер, заряд , так далее.). Кроме того, поскольку полиплексы формируются последовательно, можно использовать автоматизированные методы контроля качества для удаления полиплексов, характеристики которых выходят за пределы определенных производственных спецификаций, и/или выбора и выделения полиплексов, отвечающих определенным производственным спецификациям. Таким образом, полученные полиплексы имеют более однородные характеристики и улучшенную терапевтическую эффективность.
[0046] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает способ создания одного или нескольких полиплексов, включающий:
(а) обеспечение:
i. полимера в первом потоке жидкости;
ii. компонента нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости;
(b) приведение в контакт полимера в первом потоке жидкости с компонентом нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости с образованием полиплекса, имеющего размер и заряд, которые подходят для терапевтического введения (в частности, трансдермального введения), а также
(c) выделение полиплекса для получения стабилизированного полиплекса.
[0047] В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости и второй поток жидкости являются растворами.
[0048] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает непрерывный способ создания полиплексов.
[0049] В некоторых вариантах осуществления способов по настоящему изобретению полимер в первом потоке жидкости приводят в контакт с компонентом нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости в количестве, которое обеспечивает конкретное соотношение компонента нуклеиновой кислоты к полимеру, как описано в данном документе.
[0050] В некоторых вариантах осуществления способ включает пропускание первого потока жидкости и второго потока жидкости через устройство для регулирования потока со скоростью, которая обеспечивает полиплекс, имеющий размер и заряд, которые подходят для трансдермального введения или инъекции.
[0051] В некоторых вариантах осуществления способ включает пропускание первого потока жидкости и второго потока жидкости через устройство регулирования потока со скоростью микролитра.
[0052] В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости, содержащий полимер, и второй поток жидкости, содержащий нуклеиновую кислоту, независимо друг от друга протекают через устройство для регулирования потока со скоростью от около 1 мкл/мин до около 1000 мкл/мин, включая около 1,0 мкл/мин, около 2,0 мкл/мин, около 3,0 мкл/мин, около 4,0 мкл/мин, около 5,0 мкл/мин, около 6,0 мкл/мин, около 7,0 мкл/мин, около 8,0 мкл/мин, около 9,0 мкл/мин, около 10 мкл/мин, около 15 мкл/мин, около 20 мкл/мин, около 25 мкл/мин, около 30 мкл/мин, около 35 мкл/мин, около 40 мкл/мин, около 45 мкл/мин, около 50 мкл/мин, около 55 мкл/мин, около 60 мкл/мин, около 65 мкл/мин, около 70 мкл/мин, около 75 мкл/мин, около 80 мкл/мин, около 85 мкл/мин, около 90 мкл/мин, около 95 мкл/мин, около 100 мкл/мин, около 150 мкл/мин, около 200 мкл/мин, около 250 мкл/мин, около 300 мкл/мин, около 350 мкл/мин, около 400 мкл/мин, около 450 мкл/мин, около 500 мкл/мин, около 550 мкл/мин, около 600 мкл/мин, около 650 мкл/мин, около 700 мкл/мин, около 750 мкл/мин, около 800 мкл/мин, около 850 мкл/мин, около 900 мкл/мин, около 950 мкл/мин и около 1000 мкл/мин, включая все диапазоны между ними.
[0053] В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости, содержащий полимер, и второй поток жидкости, содержащий нуклеиновую кислоту, независимо друг от друга протекают через устройство для регулирования потока со скоростью около 1 мкл/мин, около 2,0 мкл/мин, около 3,0 мкл/мин, около 4,0 мкл/мин, около 5,0 мкл/мин, около 6,0 мкл/мин, около 7,0 мкл/мин, около 8,0 мкл/мин, около 9,0 мкл/мин, около 10 мкл/мин, около 15 мкл/мин, около 20 мкл/мин, около 25 мкл/мин, около 30 мкл/мин, около 35 мкл/мин, около 40 мкл/мин, около 45 мкл/мин, около 50 мкл/мин, около 55 мкл/мин, около 60 мкл/мин, около 65 мкл/мин, около 70 мкл/мин, около 75 мкл/мин, около 80 мкл/мин, около 85 мкл/мин, около 90 мкл/мин, около 95 мкл/мин, около 100 мкл/мин, около 150 мкл/мин, около 200 мкл/мин, около 250 мкл/мин, около 300 мкл/мин, около 350 мкл/мин, около 400 мкл/мин, около 450 мкл/мин, около 500 мкл/мин, около 550 мкл/мин, около 600 мкл/мин, около 650 мкл/мин, около 700 мкл/мин, около 750 мкл/мин, около 800 мкл/мин, около 850 мкл/мин, около 900 мкл/мин, около 950 мкл/мин или около 1000 мкл/мин.
[0054] В некоторых вариантах реализации способ проводят при давлении от около 500 мбар до около 2 бар, включая около 500 мбар, около 550 мбар, около 600 мбар, около 650 мбар, около 700 мбар, около 750 мбар, около 800 мбар, около 850 мбар, около 900 мбар, около 950 мбар, около 1 бара, около 1,1 бара, около 1,2 бара, около 1,3 бара, около 1,4, около 1,5 бара, около 1,6 бара, около 1,7 бара, около 1,8 бара, около 1,9 бар, и около 2 бар, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах реализации способ проводят при давлении около 500 мбар, около 550 мбар, около 600 мбар, около 650 мбар, около 700 мбар, около 750 мбар, около 800 мбар, около 850 мбар, около 900 мбар, около 950 мбар. мбар, около 1 бара, около 1,1 бара, около 1,2 бара, около 1,3 бара, около 1,4, около 1,5 бара, около 1,6 бара, около 1,7 бара, около 1,8 бара, около 1,9 бара или около 2 бар. В некоторых вариантах реализации способ проводят при давлении от около 1 до около 2 бар. Все описанные здесь давления являются абсолютными.
[0055] В некоторых вариантах осуществления первый и второй потоки жидкости, транспортирующие полимер и компонент нуклеиновой кислоты, заключены в каналы, имеющие ширину от около 1 мм до около 12 мм, включая около 1 мм, около 2 мм, около 3 мм, около 4 мм, около 5 мм, около 6 мм, около 7 мм, около 8 мм, около 9 мм, около 10 мм, около 11 мм и около 12 мм, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах осуществления ширина каналов составляет около 1 мм, около 2 мм, около 3 мм, около 4 мм, около 5 мм, около 6 мм, около 7 мм, около 8 мм, около 9 мм, около 10 мм, около 11 мм или около 12 мм.
[0056] В некоторых вариантах осуществления первый и второй потоки жидкости, транспортирующие полимер и компонент нуклеиновой кислоты, заключены в каналы, имеющие высоту от около 1 мм до около 12 мм, включая около 1 мм, около 2 мм, около 3 мм, около 4 мм, около 5 мм, около 6 мм, около 7 мм, около 8 мм, около 9 мм, около 10 мм, около 11 мм и около 12 мм, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах осуществления высота каналов составляет около 1 мм, около 2 мм, около 3 мм, около 4 мм, около 5 мм, около 6 мм, около 7 мм, около 8 мм, около 9 мм, около 10 мм, около 11 мм или около 12 мм. Поперечное сечение канала может быть приблизительно прямоугольным, овальным или круглым.
[0057] В некоторых вариантах осуществления устройство для регулирования потока выбирается из группы, состоящей из поршневого насоса прямого вытеснения, шприцевого насоса, нагнетательного насоса и гравитационного насоса.
[0058] В некоторых вариантах осуществления на стадии приведения в контакт используется насадка, микрожидкостное смесительное устройство, сенсорная трубка, жидкостный мостик, вертикальный смеситель, вращающаяся двойная трубка или распылитель.
[0059] Следующие ниже варианты осуществления предоставляют неограничивающие примеры способов приведения в контакт первого жидкого потока, содержащего полимер, и второго жидкого потока, содержащего нуклеиновую кислоту.
[0060] Насадки В некоторых вариантах реализации в способах настоящего раскрытия используются насадки. В некоторых вариантах реализации одна насадка впрыскивает контролируемое количество компонента нуклеиновой кислоты в канал масло/жидкость, а в назначенное время и положение, которые определяются датчиками (например, камерами) с помощью системы управления, вторая насадка впрыскивает полимерсодержащий первый жидкий поток во второй жидкий поток, содержащий нуклеиновую кислоту, с образованием полиплекса. Такая точность подачи многократных впрысков при точно контролируемых параметрах времени, скорости, объема, плотности и положения обеспечивает контролируемое образование полиплексов с относительно постоянными и контролируемыми свойствами. В некоторых вариантах осуществления две насадки (одна для содержащего нуклеиновую кислоту второго потока жидкости и одна для содержащего полимер первого потока жидкости) имеют противоположную конфигурацию для впрыскивания двух противоположных потоков жидкости с высокой скоростью в камеру смешивания (т.е. смешивание пересекающихся потоков).
[0061] Микрожидкости. В некоторых вариантах осуществления по настоящему изобретению используются микрожидкости. В некоторых вариантах осуществления два микрожидкостных потока (например, первый поток жидкости, содержащий полимер, и второй поток жидкости, содержащий нуклеиновую кислоту) объединяются с образованием полиплексов. В некоторых вариантах осуществления импульсы жидкости, содержащей контролируемые количества компонента нуклеиновой кислоты и полимера (например, HPAE), проходят вдоль каждого микрожидкостного потока для выгрузки нужного количества исходного материала (например, компонента нуклеиновой кислоты или HPAE) из каждого микрожидкостного потока в зону смешения. Смешивание происходит мгновенно и точно.
[0062] Сенсорные трубки. В некоторых вариантах осуществления по настоящему изобретению используются сенсорные трубки. В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости, содержащий полимер, и второй поток жидкости, содержащий нуклеиновую кислоту, объединяются, чтобы слиться и смешаться в сенсорной трубке после того, как они были выпущены из соответствующих насадок или микрожидкостных потоков. В некоторых вариантах осуществления трубки обращены друг к другу, разделенные небольшим воздушным зазором. В некоторых вариантах осуществления несколько сенсорных трубок по отдельности или вместе выпускают или первый поток жидкости, содержащий полимер, или второй поток жидкости, содержащий нуклеиновую кислоту, в потоки носители.
[0063] Жидкостное соединение: в некоторых вариантах осуществления по настоящему изобретению используется жидкостное соединение. В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости, содержащий полимер, и второй поток жидкости, содержащий нуклеиновую кислоту, доставляются через обычно параллельные трубки на вертикально ориентированную платформу, где они встречаются и образуют комплекс. Полученный полиплекс может затем соскользнуть с вертикальной платформы в жидкостную линию, как описано в данном документе, которая доставляет сформированные полиплексы, например, в резервуар для сбора.
[0064] Вертикальный смеситель: в некоторых вариантах осуществления по настоящему изобретению используется вертикальное перемешивание. В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости, содержащий полимер, и второй поток жидкости, содержащий нуклеиновую кислоту, подают по отдельности в две концентрически ориентированные трубки, одна трубка находится внутри другой. После разгрузки содержимое внутренней трубки (например, компонент нуклеиновой кислоты или полимер) смешивается с содержимым концентрически ориентированной внешней трубки (например, компонентом нуклеиновой кислоты или полимером) с образованием полиплекса. После образования полиплекса плотность изменяется, и сформированные полиплексы перемещаются наружу и текут в жидкостную линию, как описано в данном документе, которая доставляет сформированные полиплексы, например, в резервуар для сбора.
[0065] Вертикальный вращающийся смеситель: в некоторых вариантах осуществления по настоящему изобретению используется вертикальный вращающийся смеситель В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости, содержащий полимер, и второй поток жидкости, содержащий нуклеиновую кислоту, подают по трубке в трубке, и центробежные силы заставляют оба материала перемещаться из центра при разных скоростях, таким образом перемешиваясь. Как только полиплекс образуется, плотность изменяется, в результате чего сформированные полиплексы перемещаются наружу и перетекают в жидкостную линию, как описано в данном документе, которая доставляет сформированные полиплексы, например, в резервуар для сбора.
[0066] В некоторых вариантах осуществления на стадии приведения в контакт используется насадка. В некоторых вариантах осуществления насадки направлены таким образом, чтобы обеспечить контакт пульсирующего потока между первым потоком жидкости и вторым потоком жидкости под углом 90° к направлению движения каждого отдельного материала. Угол насадок относительно жидкостной транспортной линии может изменяться от 0° до 90°.
[0067] В некоторых вариантах осуществления стадия приведения в контакт происходит в воздушном зазоре или в масле-носителе внутри жидкостной линии, как описано в данном документе. В некоторых вариантах осуществления образование полиплекса начинается мгновенно без внешнего перемешивания (например, механического перемешивания). В некоторых вариантах осуществления для образования полиплекса после стадии приведения в контакт требуется внешнее перемешивание. В некоторых вариантах осуществления внешнее перемешивание включает обдув смеси воздушными потоками после стадии приведения в контакт. В некоторых вариантах осуществления воздушный поток способствует перемещению вновь образованных полиплексов во время фазы стабилизации.
[0068] В некоторых вариантах осуществления объемы первого жидкого потока, содержащего полимер, и второго жидкого потока, содержащего нуклеиновую кислоту, на стадии приведения в контакт находятся в микролитровом диапазоне (например, от около 1 мкл до около 1000 мкл). В некоторых вариантах осуществления объемы первого жидкого потока, содержащего полимер, и второго жидкого потока, содержащего нуклеиновую кислоту, на стадии приведения в контакт составляют менее, чем около 5 мкл.
[0069] В некоторых вариантах осуществления объем первого потока жидкости и второго потока жидкости каждый независимо составляет от около 1 мкл до около 1000 мкл, включая около 1 мкл, около 5 мкл, около 10 мкл, около 15 мкл, около 20 мкл, около 25 мкл, около 30 мкл, около 35 мкл, около 40 мкл, около 45 мкл, около 50 мкл, около 55 мкл, около 60 мкл, около 65 мкл, около 70 мкл, около 75 мкл, около 80 мкл, около 85 мкл , около 90 мкл, около 95 мкл, около 100 мкл, около 105 мкл, около 110 мкл, около 115 мкл, около 120 мкл, около 125 мкл, около 130 мкл, около 135 мкл, около 140 мкл, около 145 мкл, около 150 мкл, около 155 мкл, около 160 мкл, около 165 мкл, около 170 мкл, около 175 мкл, около 180 мкл, около 185 мкл, около 190 мкл, около 195 мкл, около 200 мкл, около 205 мкл, около 210 мкл , около 215 мкл, около 220 мкл, около 225 мкл, около 230 мкл, около 235 мкл, около 240 мкл, около 245 мкл, около 250 мкл, около 255 мкл, около 260 мкл, около 265 мкл, около 270 мкл, около 275 мкл, около 280 мкл, около 285 мкл, около 290 мкл, около 295 мкл, около 300 мкл, около 305 мкл, около 310 мкл, около 315 мкл, около 320 мкл, около 325 мкл, около 330 мкл, около 335 мкл, около 340 мкл, около 345 мкл, около 350 мкл, около 355 мкл, около 360 мкл, около 365 мкл, около 370 мкл, около 375 мкл, около 380 мкл, около 385 мкл, около 390 мкл, около 395 мкл, около 400 мкл, около 405 мкл, около 410 мкл, около 415 мкл, около 420 мкл, около 425 мкл, около 430 мкл, около 435 мкл, около 440 мкл, около 445 мкл, около 450 мкл, около 455 мкл, около 460 мкл, около 465 мкл, около 470 мкл, около 475 мкл, около 480 мкл, около 485 мкл, около 490 мкл, около 495 мкл, около 500 мкл, около 505 мкл, около 510 мкл, около 515 мкл, около 520 мкл, около 525 мкл, около 530 мкл, около 535 мкл, около 540 мкл, около 545 мкл, около 550 мкл, около 555 мкл, около 560 мкл, около 565 мкл, около 570 мкл, около 575 мкл, около 580 мкл, около 585 мкл, около 590 мкл, около 595 мкл, около 600 мкл, около 605 мкл, около 610 мкл, около 615 мкл, около 620 мкл, около 625 мкл, около 630 мкл, около 635 мкл, около 640 мкл, около 645 мкл, около 650 мкл, около 655 мкл, около 660 мкл, около 665 мкл, около 670 мкл, около 675 мкл, около 680 мкл, около 685 мкл, около 690 мкл, около 695 мкл, около 700 мкл, около 705 мкл, около 710 мкл, около 715 мкл, около 720 мкл, около 725 мкл, около 730 мкл, около 735 мкл, около 740 мкл, около 745 мкл, около 750 мкл, около 755 мкл, около 760 мкл, около 765 мкл, около 770 мкл, около 775 мкл, около 780 мкл, около 785 мкл, около 790 мкл, около 795 мкл, около 800 мкл, около 810 мкл, около 815 мкл, около 820 мкл, около 825 мкл, около 830 мкл, около 835 мкл, около 840 мкл, около 845 мкл, около 850 мкл, около 855 мкл, около 860 мкл, около 865 мкл, около 870 мкл, около 875 мкл, около 880 мкл, около 885 мкл, около 890 мкл, около 895 мкл, около 900 мкл, около 905 мкл, около 910 мкл, около 915 мкл, около 920 мкл, около 925 мкл, около 930 мкл, около 935 мкл, около 940 мкл, около 945 мкл, около 950 мкл, около 955 мкл, около 960 мкл, около 965 мкл, около 970 мкл, около 975 мкл, около 980 мкл, около 985 мкл, около 990 мкл, около 995 мкл и около 1000 мкл, включая все диапазоны между ними.
[0070] В некоторых вариантах осуществления объем первого потока жидкости и второго потока жидкости каждый независимо составляет около 1 мкл, около 5 мкл, около 10 мкл, около15 мкл, около 20 мкл, около 25 мкл, около 30 мкл, около 35 мкл, около 40 мкл, около 45 мкл, около 50 мкл, около 55 мкл, около 60 мкл, около 65 мкл, около 70 мкл, около 75 мкл, около 80 мкл, около 85 мкл, около 90 мкл, около 95 мкл, около 100 мкл, около 105 мкл, около 110 мкл, около 115 мкл, около 120 мкл, около 125 мкл, около 130 мкл, около 135 мкл, около 140 мкл, около 145 мкл, около 150 мкл, около 155 мкл, около 160 мкл , около 165 мкл, около 170 мкл, около 175 мкл, около 180 мкл, около 185 мкл, около 190 мкл, около 195 мкл, около 200 мкл, около 205 мкл, около 210 мкл, около 215 мкл, около 220 мкл, около 225 мкл, около 230 мкл, около 235 мкл, около 240 мкл, около 245 мкл, около 250 мкл, около 255 мкл, около 260 мкл, около 265 мкл, около 270 мкл, около 275 мкл, около 280 мкл, около 285 мкл, около 290 мкл, около 295 мкл, около 300, около 305 мкл, около 310 мкл, около 315 мкл, около 320 мкл, около 325 мкл, около 330 мкл, около 335 мкл, около 340 мкл, около 345 мкл, около 350 мкл, около 355 мкл, около 360 мкл, около 365 мкл, около 370 мкл, около 375 мкл, около 380 мкл, около 385 мкл , около 390 мкл, около 395 мкл, около 400 мкл, около 405 мкл, около 410 мкл, около 415 мкл, около 420 мкл, около 425 мкл, около 430 мкл, около 435 мкл, около 440 мкл, около 445 мкл, около 450 мкл, около 455 мкл, около 460 мкл, около 465 мкл, около 470 мкл, около 475 мкл, около 480 мкл, около 485 мкл, около 490 мкл, около 495 мкл, около 500 мкл, около 505 мкл, около 510 мкл , около 515 мкл, около 520 мкл, около 525 мкл, около 530 мкл, около 535 мкл, около 540 мкл, около 545 мкл, около 550 мкл, около 555 мкл, около 560 мкл, около 565 мкл, около 570 мкл, около 575 мкл, около 580 мкл, около 585 мкл, около 590 мкл, около 595 мкл, около 600 мкл, около 605 мкл, около 610 мкл, около 615 мкл, около 620 мкл, около 625 мкл, около 630 мкл, около 635 мкл , около 640 мкл, около 645 мкл, около 650 мкл, около 655 мкл, около 660 мкл, около 665 мкл, около 670 мкл, около 675 мкл, около 680 мкл , около 685 мкл, около 690 мкл, около 695 мкл, около 700 мкл, около 705 мкл, около 710 мкл, около 715 мкл, около 720 мкл, около 725 мкл, около 730 мкл, около 735 мкл, около 740 мкл, около 745 мкл, около 750 мкл, около 755 мкл, около 760 мкл, около 765 мкл, около 770 мкл, около 775 мкл, около 780 мкл, около 785 мкл, около 790 мкл, около 795 мкл, около 800 мкл, около 810 мкл , около 815 мкл, около 820 мкл, около 825 мкл, около 830 мкл, около 835 мкл, около 840 мкл, около 845 мкл, около 850 мкл, около 855 мкл, около 860 мкл, около 865 мкл, около 870 мкл, около 875 мкл, около 880 мкл, около 885 мкл, около 890 мкл, около 895 мкл, около 900 мкл, около 905 мкл, около 910 мкл, около 915 мкл, около 920 мкл, около 925 мкл, около 930 мкл, около 935 мкл , около 940 мкл, около 945 мкл, около 950 мкл, около 955 мкл, около 960 мкл, около 965 мкл, около 970 мкл, около 975 мкл, около 980 мкл, около 985 мкл, около 990 мкл, около 995 мкл или около 1000 мкл.
[0071] В некоторых вариантах осуществления объем первого потока жидкости и второго потока жидкости каждый независимо составляет от около 1 мкл до около 300 мкл. В некоторых вариантах осуществления объем первого потока жидкости и второго потока жидкости каждый независимо составляет около 10 мкл.
[0072] В некоторых вариантах осуществления объем первого потока жидкости и второго потока жидкости (например, каждый выброс первого и второго потоков жидкости, например, из насадки) каждый независимо составляет около 0,1 мкл, около 0,5 мкл, около 1 мкл, около 2 мкл, около 3 мкл, около 4 мкл, около 5 мкл, около 6 мкл, около 7 мкл, около 8 мкл, около 9 мкл, около 10 мкл, около 11 мкл, около 12 мкл, около 13 мкл, около 14 мкл, около 15 мкл, около 16 мкл, около 17 мкл, около 18 мкл, около 19 мкл, около 20 мкл, около 21 мкл, около 22 мкл, около 23 мкл, около 24 мкл, около 25 мкл, около 26 мкл, около 27 мкл, около 28 мкл, около 29 мкл, около 30 мкл, около 31 мкл, около 32 мкл, около 33 мкл, около 34 мкл, около 35 мкл, около 36 мкл, около 37 мкл, около 38 мкл, около 39 мкл, около 40 мкл, около 41 мкл, около 42 мкл, около 43 мкл, около 44 мкл, около 45 мкл, около 46 мкл, около 47 мкл, около 48 мкл, около 49 мкл, около 50 мкл, около 51 мкл, около 52 мкл, около 53 мкл, около 54 мкл, около 55 мкл, около 56 мкл, около 57 мкл, около 58 мкл, около 59 мкл, около 60 мкл, около 61 мкл, около 62 мкл, около 63 мкл, около 64 мкл, около 65 мкл, около 67 мкл, около 68 мкл, около 69 мкл, около 70 мкл, около 71 мкл, около 72 мкл, около 73 мкл, около 74 мкл , около 75 мкл, около 76 мкл, около 77 мкл, около 78 мкл, около 79 мкл, около 80 мкл, около 81 мкл, около 82 мкл, около 83 мкл, около 84 мкл, около 85 мкл, около 86 мкл, около 87 мкл, около 88 мкл, около 89 мкл, около 90 мкл, около 91 мкл, около 92 мкл, около 93 мкл, около 94 мкл, около 95 мкл, около 96 мкл, около 97 мкл, около 98 мкл, около 99 мкл , около 100 мкл, около 101 мкл, около 102 мкл, около 103 мкл, около 104 мкл, около 105 мкл, около 106 мкл, около 107 мкл, около 108 мкл, около 109 мкл, около 110 мкл, около 111 мкл, около 112 мкл, около 113 мкл, около 114 мкл, около 115 мкл, около 116 мкл, около 117 мкл, около 118 мкл, около 119 мкл, около 120 мкл, около 121 мкл, около 122 мкл, около 123 мкл, около 124 мкл , около 125 мкл, около 126 мкл, около 127 мкл, около 128 мкл, около 129 мкл, около 130 мкл, около 131 мкл, около 132 мкл, около 133 мкл, около 134 мкл, около 135 мкл, около 13 6 мкл, около 137 мкл, около 138 мкл, около 139 мкл, около 140 мкл, около 141 мкл, около 142 мкл, около 143 мкл, около 144 мкл, около 145 мкл, около 146 мкл, около 147 мкл, около 148 мкл , около 149 мкл, около 150 мкл, около 151 мкл, около 152 мкл, около 153 мкл, около 154 мкл, около 155 мкл, около 156 мкл, около 157 мкл, около 158 мкл, около 159 мкл, около 160 мкл, около 161 мкл, около 162 мкл, около 163 мкл, около 164 мкл, около 165 мкл, около 166 мкл, около 167 мкл, около 168 мкл, около 169 мкл, около 170 мкл, около 171 мкл, около 172 мкл, около 173 мкл , около 174 мкл, около 175 мкл, около 176 мкл, около 177 мкл, около 178 мкл, около 179 мкл, около 180 мкл, около 181 мкл, около 182 мкл, около 183 мкл, около 184 мкл, около 185 мкл, около 186 мкл, около 187 мкл, около 188 мкл, около 189 мкл, около 190 мкл, около 191 мкл, около 192 мкл, около 193 мкл, около 194 мкл, около 195 мкл, около 196 мкл, около 197 мкл, около 198 мкл , около 199 мкл, около 200, около 201 мкл, около 202 мкл, около 203 мкл, около 204 мкл, около 205 мкл, около 206 мкл, около 207 мкл, около t 208 мкл, около 209 мкл, около 210 мкл, около 211 мкл, около 212 мкл, около 213 мкл, около 214 мкл, около 215 мкл, около 216 мкл, около 217 мкл, около 218 мкл, около 219 мкл, около 220 мкл, около 221 мкл, около 222 мкл, около 223 мкл, около 224 мкл, около 225 мкл, около 226 мкл, около 227 мкл, около 228 мкл, около 229 мкл, около 230 мкл, около 231 мкл, около 232 мкл, около 233 мкл, около 234 мкл, около 235 мкл, около 236 мкл, около 237 мкл, около 238 мкл, около 239 мкл, около 240 мкл, около 241 мкл, около 242 мкл, около 243 мкл, около 244 мкл, около 245 мкл, около 246 мкл, около 247 мкл, около 248 мкл, около 249 мкл, около 250 мкл, около 251 мкл, около 252 мкл, около 253 мкл, около 254 мкл, около 255 мкл, около 256 мкл, около 257 мкл, около 258 мкл, около 259 мкл, около 260 мкл, около 261 мкл, около 262 мкл, около 263 мкл, около 264 мкл, около 265 мкл, около 266 мкл, около 267 мкл, около 268 мкл, около 269 мкл, около 270 мкл, около 271 мкл, около 272 мкл, около 273 мкл, около 274 мкл, около 275 мкл, около 276 мкл, около 277 мкл, около 278 мкл, около 279 мкл, около 280 мкл, около 281 мкл, около 282 мкл, около 283 мкл, около 284 мкл, около 285 мкл, около 286 мкл, около 287 мкл, около 288 мкл, около 289 мкл, около 290 мкл, около 291 мкл, около 292 мкл, около 293 мкл, около 294 мкл, около 295 мкл, около 296 мкл, около 297 мкл, около 298 мкл, около 299 мкл, 300 мкл, около 305 мкл, около 310 мкл, около 315 мкл, около 320 мкл , около 325 мкл, около 330 мкл, около 335 мкл, около 340 мкл, около 345 мкл, около 350 мкл, около 355 мкл, около 360 мкл, около 365 мкл, около 370 мкл, около 375 мкл, около 380 мкл, около 385 мкл, около 390 мкл, около 395 мкл, около 400 мкл, около 405 мкл, около 410 мкл, около 415 мкл, около 420 мкл, около 425 мкл, около 430 мкл, около 435 мкл, около 440 мкл, около 445 мкл , около 450 мкл, около 455 мкл, около 460 мкл, около 465 мкл, около 470 мкл, около 475 мкл, около 480 мкл, около 485 мкл, около 490 мкл, около 495 мкл, около 500 мкл, около 505 мкл, около 510 мкл, около 515 мкл, около 520 мкл, около 525 мкл, около 530 мкл, около 535 мкл, около 540 мкл, около 545 мкл, около 550 мкл, около 555 мкл, около 560 мкл, около 565 мкл, около 570 мкл, около 575 мкл, около 580 мкл, около 585 мкл, около 590 мкл, около 595 мкл, около 600 мкл, около 605 мкл, около 610 мкл, около 615 мкл, около 620 мкл, около 625 мкл, около 630 мкл, около 635 мкл, около 640 мкл, около 645 мкл, около 650 мкл, около 655 мкл, около 660 мкл, около 665 мкл, около 670 мкл, около 675 мкл, около 680 мкл, около 685 мкл, около 690 мкл, около 695 мкл, около 700 мкл, около 705 мкл, около 710 мкл, около 715 мкл, около 720 мкл, около 725 мкл, около 730 мкл, около 735 мкл, около 740 мкл, около 745 мкл, около 750 мкл, около 755 мкл, около 760 мкл, около 765 мкл, около 770 мкл, около 775 мкл, около 780 мкл, около 785 мкл, около 790 мкл, около 795 мкл, около 800 мкл, около 805 мкл, около 810 мкл, около 815 мкл, около 820 мкл, около 825 мкл, около 830 мкл, около 835 мкл, около 840 мкл, около 845 мкл, около 850 мкл, около 855 мкл, около 860 мкл, около 865 мкл, около 870 мкл, около 875 мкл, около 880 мкл, около 885 мкл, около 890 мкл, около 895 мкл, около 900 мкл, около 905 мкл, около 910 мкл, около 915 мкл, около 920 мкл , около 925 мкл, около 930 мкл, около 935 мкл, около 940 мкл, около 945 мкл, около 950 мкл, около 955 мкл, около 960 мкл, около 965 мкл, около 970 мкл, около 975 мкл, около 980 мкл, около 985 мкл, около 990 мкл, около 995 мкл или около 1000 мкл.
[0073] В некоторых вариантах реализации первый поток жидкости и второй поток жидкости приводят в контакт (или смешивают) около при комнатной температуре (например, около 20-22 ºC). В некоторых вариантах реализации первый поток жидкости и второй поток жидкости приводят в контакт (или смешивают) при температуре около 0 °C, около 1 °C, около 2 °C, около 3 °C, около 4 °C, около 5 °C, около 6 °C, около 7 °C, около 8 °C, около 9 °C, около 10 °C, около 11 °C, около 12 °C, около 13 °C, около 14 °C, около 15 °C, около 16 °C, около 17 °C, около 18 °C, около 19 °C, около 20 °C, около 21 °C, около 22 °C, около 23 °C, около 24 °C, около 25 °C, около 26 °C, около 27 °C, около 28 °C, около 29 °C, около 30 °C, около 31 °C, около 32 °C, около 33 °C, около 34 °C, около 35 °C, около 36 °C, около 37 °C, около 38 °C, около 39 °C, около 40 °C, около 41 °C, около 42 °C, около 43 °C, около 44 °C, около 45 °C, около 46 °C, около 47 °C, около 48 °C, около 49 °C, около 50 °C, около 51 °C, около 52 °C, около 53 °C, около 54 °C, около 55 °C, около 56 °C, около 57 °C, около 58 °C, около 59°C или около 60 °C. В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости и второй поток жидкости приводят в контакт (или смешивают) при 25 °C +/- 5 °C. В некоторых вариантах осуществления первый поток жидкости и второй поток жидкости приводят в контакт (или смешивают) при 20 °C +/- 10 °C.
[0074] В некоторых вариантах осуществления выделение включает доставку полиплекса (например, в том виде, в котором он образуется после смешивания полимера и компонента нуклеиновой кислоты) в жидкостную линию для его пребывания там в течение времени, достаточного для стабилизации полиплекса.
[0075] В некоторых вариантах осуществления время пребывания составляет от около 1 секунды (сек) до около 20 минут (мин), включая около 1 сек, около 2 сек, около 3 сек, около 4 сек, около 5 сек, около 6 сек, около 7 сек, около 8 сек, около 9 сек, около 10 сек, около 15 сек, около 20 сек, около 30 сек, около 40 сек, около 50 сек, около 1 мин, около 1,5 мин, около 2 мин, около 2,5 мин, около 3 мин, около 3,5 мин, около 4 мин, около 4,5 мин, около 5 ми, около 5,5 мин, около 6 мин, около 6,5 мин, около 7 мин, около 7,5 мин, около 8 мин, около 8,5 мин, около 9 мин , около 9,5 мин, около 10 мин, около 10,5 мин, около 11 мин, около 11,5 мин, около 12 мин, около 12,5 мин, около 13 мин, около 13,5 мин, около 14 мин, около 14,5 мин, около 15,0 мин, около 15,5 мин, около 16 мин, около 16,5 мин, около 17 мин, около 17,5 мин, около 18 мин, около 18,5 мин, около 19 мин, около 19,5 мин и около 20 мин, включая все диапазоны между ними.
[0076] В некоторых вариантах осуществления время пребывания составляет около 1 сек, около 2 сек, около 3 сек, около 4 сек, около 5 сек, около 6 сек, около 7 сек, около 8 сек, около 9 сек, около 10 сек, около 15 сек, около 20 сек, около 30 сек, около 40 сек, около 50 сек, около 1 мин, около 1,5 мин, около 2 мин, около 2,5 мин, около 3 мин, около 3,5 мин, около 4 мин, около 4,5 мин, около 5 ми, около 5,5 мин, около 6 мин, около 6,5 мин, около 7 мин, около 7,5 мин, около 8 мин, около 8,5 мин, около 9 мин , около 9,5 мин, около 10 мин, около 10,5 мин, около 11 мин, около 11,5 мин, около 12 мин, около 12,5 мин, около 13 мин, около 13,5 мин, около 14 мин, около 14,5 мин, около 15,0 мин, около 15,5 мин, около 16 мин, около 16,5 мин, около 17 мин, около 17,5 мин, около 18 мин, около 18,5 мин, около 19 мин, около 19,5 мин и около 20 мин, включая все диапазоны между ними.
[0077] В некоторых вариантах осуществления время пребывания составляет не менее 1 секунды и не более 10 минут. В некоторых вариантах осуществления время пребывания составляет около 10 минут.
[0078] Для разных полиплексных продуктов (т.е. для разных комбинаций полимеров и компонентов нуклеиновых кислот) может потребоваться разное время осаждения или формирования. Время оседания и формирования можно изменять, увеличивая или сокращая время пребывания в жидкостной линии.
[0079] В некоторых вариантах осуществления способы, раскрытые в данном документе, предотвращают комкование, агломерацию, свертывание, группирование или слипание вновь образованных полиплексов. Например, при приведении в контакт первого и второго потоков жидкости в пульсирующем режиме, полученные полиплексы можно пространственно отделить друг от друга во время образования и/или до выделения.
[0080] В некоторых вариантах реализации канал для жидкости заряжен слегка отрицательно. В некоторых вариантах осуществления канал для жидкости содержит водную фазу, окруженную жидкостью-носителем. В некоторых вариантах осуществления плотность жидкости-носителя представляет собой значение в диапазоне от около 1300 кг/м3 до около 2000 кг/м3 , а плотность водной фазы представляет собой значение в диапазоне от около 900 кг/м3 до около 1200 кг/м3. В некоторых вариантах осуществления плотность жидкости-носителя составляет около 1300 кг/м3, около 1400 кг/м3, около 1500 кг/м3, около 1600 кг/м3, около 1700 кг/м3, около 1800 кг/м3, около 1900 кг/м3, или около 2000 кг/м3, включая все диапазоны между любыми значениями, приведенными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления плотность жидкости-носителя составляет около 900 кг/м3, около 1000 кг/м3, около 1100 кг/м3, или около 1200 кг/м3 , включая все диапазоны между любыми значениями, приведенными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления водная фаза содержит натрий-ацетатный буфер.
[0081] В некоторых вариантах осуществления жидкость-носитель представляет собой масло (как описано в данном документе). В некоторых вариантах осуществления масляный канал имеет ширину 5- 100 мм. Не желая ограничиваться теорией, слегка отрицательный заряд канала масло/жидкость электростатически притягивает положительно заряженные полиплексы, упорядоченно транспортируя полиплексы через канал для жидкости и повышая стабильность системы.
[0082] В некоторых вариантах осуществления масло выбирают из группы, включающей: (a) Fluorinert FC-40 (фторуглеродное масло), (b) силиконовое масло, (c) минеральное масло, (d) перфторированное аминное масло, (e) фенилметилполисилоксан или (f) масло на основе фенилметилполисилоксана и добавку. В некоторых вариантах осуществления добавка имеет значение гидрофильно-липофильного баланса в диапазоне от 2 до 8. В некоторых вариантах осуществления добавка представляет собой полисорбат.
[0083] В некоторых вариантах реализации добавка полисорбата представляет собой SPAN 80 (сорбитан олеат), SPAN 65 (сорбитан тристеарат) или Tween 20 (полиэтиленгликоль сорбитан монолаурат).
[0084] В некоторых вариантах осуществления концентрация добавки в водной фазе составляет от около 0,001% до около 10% (масс./масс.%).
[0085] в некоторых вариантах осуществления добавки добавляют до конечной концентрации от 10мг/мл до 50мг/мл в водной фазе. В одном аспекте полиплексы пространственно разделены или сегрегированы в канале для жидкости. В некоторых вариантах осуществления пространство между сегрегированными полиплексами регулируется скоростью жидкости в канале. То есть, поскольку отдельные полиплексы образуются при контакте части раствора ДНК и части раствора полимера с дискретной скоростью перед введением в канал для жидкости, чем больше скорость жидкости в канале для жидкости, тем меньше пространственное разделение между полиплексами.
[0086] В некоторых вариантах осуществления скорость жидкости, движущейся в канале, составляет от около 0,1 м/с до около 1 м/с, включая около 0,1 м/с, около 0,11 м/с, около 0,12 м/с, около 0,13 м/с, около 0,14 м/с, около 0,15 м/с, около 0,16 м/с, около 0,17 м/с, около 0,18 м/с, около 0,19 м/с, около 0,2 м/с, около 0,21 м/с, около 0,22 м/с, около 0,23 м/с, около 0,24 м/с, около 0,25 м/с, около 0,26 м/с, около 0,27 м/с, около 0,28 м/с, около 0,29 м/с, около 0,30 м/с, около 0,31 м/с, около 0,32 м/с, около 0,33 м/с, около 0,34 м/с, около 0,35 м/с, около 0,36 м/с, около 0,37 м/с, около 0,38 м/с, около 0,39 м/с, около 0,4 м/с, около 0,41 м/с, около 0,42 м/с, около 0,43 м/с, около 0,44 м/с, около 0,45 м/с, около 0,46 м/с , около 0,47 м/с, около 0,48 м/с, около 0,49 м/с, около 0,5 м/с, около 0,51 м/с, около 0,52 м/с, около 0,53 м/с, около 0,54 м/с, около 0,55 м/с, около 0,56 м/с, около 0,57 м/с, около 0,57 м/с, около 0,59 м/с, около 0,6 м/с, около 0,61 м/с, около 0,62 м/с, около 0,63 м/с, около 0,64 м/с, около 0,65 м/с, около 0,66 м/с, около 0,67 м/с, около 0,68 м/с, около 0,69 м/с, около 0,7 м/с, около 0,71 м/с, около 0,72 м/с, около 0,73 м/с, около 0,74 м/с, около 0,75 м/с, около 0,76 м/с, около 0,77 м/с, около 0,78 м/с, около 0,79 м/с, около 0,8 м/с, около 0,81 м/с около 0,82 м/с, около 0,83 м/с, около 0,84 м/с, около 0,85 м/с, около 0,86 м/с, около 0,87 м/с, около 0,88 м/с, около 0,9 м/с, около 0,91 м/с, около 0,92 м/с, около 0,93 м/с, около 0,94 м/с, около 0,95 м/с, около 0,96 м/с, около 0,97 м/с, около 0,98 м/с и около 1,0 м/с, включая все диапазоны между ними.
[0087] В некоторых вариантах осуществления скорость жидкости, движущейся в канале, составляет около 0,10 м/с, около 0,11 м/с, около 0,12 м/с, около 0,13 м/с, около 0,14 м/с, около 0,15 м/с, около 0,16 м/с, около 0,17 м/с, около 0,18 м/с, около 0,19 м/с, около 0,2 м/с, около 0,21 м/с, около 0,22 м/с, около 0,23 м/с, около 0,24 м/с, около 0,25 м/с, около 0,26 м/с, около 0,27 м/с, около 0,28 м/с, около 0,29 м/с, около 0,30 м/с, около 0,31 м/с, около 0,32 м/с, около 0,33 м/с, около 0,34 м/с, около 0,35 м/с, около 0,36 м/с, около 0,37 м/с, около 0,38 м/с, около 0,39 м/с, около 0,4 м/с, около 0,41 м/с, около 0,42 м/с, около 0,43 м/с, около 0,44 м/с, около 0,45 м/с, около 0,46 м/с , около 0,47 м/с, около 0,48 м/с, около 0,49 м/с, около 0,5 м/с, около 0,51 м/с, около 0,52 м/с, около 0,53 м/с, около 0,54 м/с, около 0,55 м/с, около 0,56 м/с, около 0,57 м/с, около 0,58 м/с, около 0,59 м/с, около 0,6 м/с, около 0,61 м/с, около 0,62 м/с, около 0,63 м/с, около 0,64 м/с, около 0,6 5 м/с, около 0,66 м/с, около 0,67 м/с, около 0,68 м/с, около 0,69 м/с, около 0,7 м/с, около 0,71 м/с, около 0,72 м/с, около 0,73 м/с, около 0,74 м/с, около 0,75 м/с, около 0,76 м/с, около 0,77 м/с, около 0,78 м/с, около 0,79 м/с, около 0,8 м/с, около 0,81 м/с около 0,82 м/с, около 0,83 м/с, около 0,84 м/с, около 0,85 м/с, около 0,86 м/с, около 0,87 м/с, около 0,88 м/с, около 0,89 м/с, около 0,9 м/с, около 0,91 м/с, около 0,92 м/с, около 0,93 м/с, около 0,94 м/с, около 0,95 м/с, около 0,96 м/с, около 0,97 м/с, около 0,98 м/с, около 0,99 м/с и около 1,0 м/с, включая все диапазоны между ними.
[0088] В некоторых вариантах осуществления поток жидкости, в котором образуются полиплексы, движется в условиях ламинарного потока. В некоторых вариантах осуществления поток жидкости движется в условиях частичного ламинарного потока.
[0089] В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает оценку и сбор одного или более полиплексов.
[0090] В некоторых вариантах осуществления оценка полиплексов происходит (например, с помощью теста контроля качества на линии), когда полиплексы перемещаются в канале для жидкости, чтобы определить, соответствуют ли полиплексы спецификации. Например, в некоторых вариантах осуществления интересующая область в канале для жидкости и полиплексов в нем контролируется высокоскоростными камерами, которые измеряют оптические характеристики (например, показатель преломления) полиплексов. Полиплексы, не соответствующие спецификации, отделяются и направляются в отходы. В некоторых вариантах осуществления полиплексы, которые не соответствуют спецификации, разделяют путем приложения пневматического давления к интересующей области. Полиплексы, соответствующие спецификации, отбирают.
[0091] В некоторых вариантах осуществления оценка включает измерение показателя преломления полиплексов в канале для жидкости; и, необязательно, удаление полиплексов с показателем преломления, который не соответствует спецификации. Показатель преломления полиплекса коррелирует с желательными характеристиками правильно сформированного полиплекса (например, желаемым размером частиц полиплекса).
[0092] В некоторых вариантах осуществления, когда частицы полиплекса полностью сформированы, частицы полиплекса и канал масло/жидкость входят в область, где отрицательный заряд удаляется из масла/жидкости, позволяя легко отделять частицы от масла/жидкости и собирать.
[0093] В некоторых вариантах осуществления сбор стабилизированных полиплексов включает:
а) сбор полиплексов в резервуар; или
б) сбор аликвоты определенного количества жидких полиплексов и замораживание аликвоты для терапевтического использования; или
c) сбор полиплексов в емкости для замораживания или сублимационной сушки при подготовке полиплексов для конечного терапевтического продукта.
[0094] В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает фильтрацию, промывку, замораживание и/или лиофилизацию стабилизированных полиплексов.
[0095] В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает первую фильтрацию и промывание полиплексов.
[0096] В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает замораживание и/или лиофилизацию полиплексов.
[0097] В некоторых вариантах осуществления лиофилизированные полиплексы можно упаковывать и надежно хранить.
[0098] В некоторых вариантах осуществления полимер заряжен положительно, а компонент нуклеиновой кислоты заряжен отрицательно.
[0099] В некоторых вариантах осуществления полимер сначала растворяют в органическом растворителе при концентрации не более 300 мкг/мкл, а затем суспендируют в растворе ацетата натрия . В некоторых вариантах осуществления раствор ацетата натрия составляет 25 мМ и имеет pH 5,2.
[00100] В некоторых вариантах осуществления концентрация полимера в органическом растворителе составляет от около 1 мкг/мкл до около 300 мкг/мкл, включая около 1 мкг/мкл, около 5 мкг/мкл, около 10 мкг/мкл, около 15 мкг/мкл. мкл, около 20 мкг/мкл, около 25 мкг/мкл, около 30 мкг/мкл, около 35 мкг/мкл, около 40 мкг/мкл, около 45 мкг/мкл, около 50 мкг/мкл, около 55 мкг/мкл, около 60 мкг/мкл, около 65 мкг/мкл, около 70 мкг/мкл, около 75 мкг/мкл, около 80 мкг/мкл, около 85 мкг/мкл, около 90 мкг/мкл, около 95 мкг/мкл, около 100 мкг/мкл, около 105 мкг/мкл, около 110 мкг/мкл, около 115 мкг/мкл, около 120 мкг/мкл, около 125 мкг/мкл, около 130 мкг/мкл, около 135 мкг/мкл, около 140 мкг/мкл, около 145 мкг/мкл, около 150 мкг/мкл, около 155 мкг/мкл, около 160 мкг/мкл, около 165 мкг/мкл, около 170 мкг/мкл, около 175 мкг/мкл, около 180 мкг/мкл, около 185 мкг/мкл, около 190 мкг/мкл, около 195 мкг/мкл, около 200 мкг/мкл, около 205 мкг/мкл, около 210 мкг/мкл, около 215 мкг/мкл, около 220 мкг/мкл, около 225 мкг/мкл, около 230 мкг/мкл, около 235 мкг/мкл, около 240 мкг/мкл, около 245 мкг/мкл, около 250 мкг/мкл, около 255 мкг/мкл, около 260 мкг/мкл, около 265 мкг/мкл, около 270 мкг/мкл, около 275 мкг/мкл, около 280 мкг/мкл, около 285 мкг/мкл, около 290 мкг/мкл, около 295 мкг/мкл и около 300 мкг/мкл, включая все диапазоны между ними.
[00101] В некоторых вариантах осуществления концентрация полимера в органическом растворителе составляет около 1 мкг/мкл, около 2 мкг/мкл, около 3 мкг/мкл, около 4 мкг/мкл, около 5 мкг/мкл, около 6 мкг/мкл, около 7 мкг/мкл, около 8 мкг/мкл, около 9 мкг/мкл, около 10 мкг/мкл, около 11 мкг/мкл, около 12 мкг/мкл, около 13 мкг/мкл, около 14 мкг/мкл, около 15 мкг/мкл, около 16 мкг/мкл, около 17 мкг/мкл, около 18 мкг/мкл, около 19 мкг/мкл, около 20 мкг/мкл, около 21 мкг/мкл, около 22 мкг/мкл, около 23 мкг/мкл, около 24 мкг/мкл, около 25 мкг/мкл, около 26 мкг/мкл, около 27 мкг/мкл, около 28 мкг/мкл, около 29 мкг/мкл, около 30 мкг/мкл, около 31 мкг/мкл, около 32 мкг/мкл, около 33 мкг/мкл, около 34 мкг/мкл, около 35 мкг/мкл, около 36 мкг/мкл, около 37 мкг/мкл, около 38 мкг/мкл, около 39 мкг/мкл, около 40 мкг/мкл, около 41 мкг/мкл, около 42 мкг/мкл, около 43 мкг/мкл, около 44 мкг/мкл, около 45 мкг/мкл, около 46 мкг/мкл, около 47 мкг/мкл, около 48 мкг/мкл, около 49 мкг/мкл, около 50 мкг/мкл, около 51 мкг/мкл, около 52 мкг/мкл, около 53 мкг/мкл, около 54 мкг/мкл, около 55 мкг/мкл, около 56 мкг/мкл, около 57 мкг/мкл, около 58 мкг/мкл, около 59 мкг/мкл, около 60 мкг/мкл, около 61 мкг/мкл, около 62 мкг/мкл, около 63 мкг/мкл, около 64 мкг/мкл, около 65 мкг/мкл, около 67 мкг/мкл, около 68 мкг/мкл, около 69 мкг/мкл, около 70 мкг/мкл, около 71 мкг/мкл, около 72 мкг/мкл, около 73 мкг/мкл, около 74 мкг/мкл, около 75 мкг/мкл, около 76 мкг/мкл, около 77 мкг/мкл, около 78 мкг/мкл, около 79 мкг/мкл, около 80 мкг/мкл, около 81 мкг/мкл, около 82 мкг/мкл, около 83 мкг/мкл, около 84 мкг/мкл, около 85 мкг/мкл, около 86 мкг/мкл, около 87 мкг/мкл, около 88 мкг/мкл, около 89 мкг/мкл, около 90 мкг/мкл, около 91 мкг/мкл, около 92 мкг/мкл, около 93 мкг/мкл, около 94 мкг/мкл, около 95 мкг/мкл, около 96 мкг/мкл, около 97 мкг/мкл, около 98 мкг/мкл, около 99 мкг/мкл, около 100 мкг/мкл, около 101 мкг/мкл, около 102 мкг/мкл, около 103 мкг/мкл, около 104 мкг/мкл, около 105 мкг/мкл, около 106 мкг/мкл, около 107 мкг/мкл, около 108 мкг/мкл, около 109 мкг/мкл, около 110 мкг/мкл, около 111 мкг/мкл, около 112 мкг/мкл, около 113 мкг/мкл, около 114 мкг/мкл, около 115 мкг/мкл, около 116 мкг/мкл, около 117 мкг/мкл, около 118 мкг/мкл, около 119 мкг/мкл, около 120 мкг/мкл, около 121 мкг/мкл, около 122 мкг/мкл, около 123 мкг/мкл, около 124 мкг/мкл, около 125 мкг/мкл, около 126 мкг/мкл, около 127 мкг/мкл, около 128 мкг/мкл, около 129 мкг/мкл, около 130 мкг/мкл, около 131 мкг/мкл, около 132 мкг/мкл, около 133 мкг/мкл, около 134 мкг/мкл, около 135 мкг/мкл, около 136 мкг/мкл, около 137 мкг/мкл , около 138 мкг/мкл, около 139 мкг/мкл, около 140 мкг/мкл, около 141 мкг/мкл, около 142 мкг/мкл, около 143 мкг/мкл, около 144 мкг/мкл, около 145 мкг/мкл, около 146 мкг/мкл, около 147 мкг/мкл, около 148 мкг/мкл, около 149 мкг/мкл, около 150 мкг/мкл, около 151 мкг/мкл, около 152 мкг/мкл, около 153 мкг/мкл, около 154 мкг/мкл, около 155 мкг/мкл, около 156 мкг/мкл, около 157 мкг/мкл, около 158 мкг/мкл, около 159 мкг/мкл, около 160 мкг/мкл, около 161 мкг/мкл, около 162 мкг/мкл , около 163 мкг/мкл, около 164 мкг/мкл, около 165 мкг/мкл, около 166 мкг/мкл, около 167 мкг/мкл, около 168 мкг/мкл, около 169 мкг/мкл, около 170 мкг/мкл, около 171 мкг/мкл, около 172 мкг/мкл, около 173 мкг/мкл, около 174 мкг/мкл, около 175 мкг/мкл, около 176 мкг/мкл, около 177 мкг/мкл, около 178 мкг/мкл, около 179 мкг/мкл, около 180 мкг/мкл, около 181 мкг/мкл, около 182 мкг/мкл, около 183 мкг/мкл, около 184 мкг/мкл, около 185 мкг/мкл, около 186 мкг/мкл, около 187 мкг/мкл, около 188 мкг/мкл, около 189 мкг/мкл, около 190 мкг/мкл, около 191 мкг/мкл, около 192 мкг/мкл, около 193 мкг/мкл, около 194 мкг/мкл, около 195 мкг/мкл, около 196 мкг/мкл, около 197 мкг/мкл, около 198 мкг/мкл, около 199 мкг/мкл, около 200 мкг/мкл, около 201 мкг/мкл, около 202 мкг/мкл, около 203 мкг/мкл, около 204 мкг/мкл, около 205 мкг/мкл, около 206 мкг/мкл, около 207 мкг/мкл, около 208 мкг/мкл, около 209 мкг/мкл, около 210 мкг/мкл, около 211 мкг/мкл, около 212 мкг/мкл, около 213 мкг/мкл, около 214 мкг/мкл, около 215 мкг/мкл, около 216 мкг/мкл, около 217 мкг/мкл, около 218 мкг/мкл, около 219 мкг/мкл, около 220 мкг/мкл, около 221 мкг/мкл, около 222 мкг/мкл, около 223 мкг/мкл, около 224 мкг/мкл, около 225 мкг/мкл, около 226 мкг/мкл, около 227 мкг/мкл, около 228 мкг/мкл, около 229 мкг/мкл, около 230 мкг/мкл, около 231 мкг/мкл, около 232 мкг/мкл, около 233 мкг/мкл, около 234 мкг/мкл, около 235 мкг/мкл, около 236 мкг/мкл, около 237 мкг/мкл, около 238 мкг/мкл, около 239 мкг/мкл, около 240 мкг/мкл, около 241 мкг/мкл, около 242 мкг/мкл, около 243 мкг/мкл, около 244 мкг/мкл, около 245 мкг/мкл, около 246 мкг/мкл, около 247 мкг/мкл, около 248 мкг/мкл, около 249 мкг/мкл, около 250 мкг/мкл, около 251 мкг/мкл, около 252 мкг/мкл, около 253 мкг/мкл, около 254 мкг/мкл, около 255 мкг/мкл, около 256 мкг/мкл, около 257 мкг/мкл, около 258 мкг/мкл, около 259 мкг/мкл, около 260 мкг/мкл, около 261 мкг/мкл, около 262 мкг/мкл, около 263 мкг/мкл, около 264 мкг/мкл, около 265 мкг/мкл, около 266 мкг/мкл, около 267 мкг/мкл, около 268 мкг/мкл, около 269 мкг/мкл, около 270 мкг/мкл, около 271 мкг/мкл, около 272 мкг/мкл, около 273 мкг/мкл, около 274 мкг/мкл, около 275 мкг/мкл, около 276 мкг/мкл, около 277 мкг/мкл, около 278 мкг/мкл, около 279 мкг/мкл, около 280 мкг/мкл, около 281 мкг/мкл, около 282 мкг/мкл, около 283 мкг/мкл, около 284 мкг/мкл, около 285 мкг/мкл, около 286 мкг/мкл, около 287 мкг/мкл, около 288 мкг/мкл, около 289 мкг/мкл, около 290 мкг/мкл, около 291 мкг/мкл, около 292 мкг/мкл, около 293 мкг/мкл, около 294 мкг/мкл, около 295 мкг/мкл, около 296 мкг/мкл, около 297 мкг/мкл, около 298 мкг/мкл, около 299 мкг/мкл или около 300 мкг/мкл.
[00102] В некоторых вариантах осуществления органический растворитель, используемый для первоначального растворения полимера, представляет собой органический растворитель, смешивающийся с водой. В некоторых вариантах осуществления органический растворитель представляет собой диметилсульфоксид (ДМСО), диметилформамид (ДМФ), ацетонитрил, тетрагидрофуран, метанол, этанол или изопропанол. В некоторых вариантах осуществления органический растворитель представляет собой ДМСО, N, N-диметилформамид (ДМФ), N-метилпирролидон (NMP) и тому подобное, кетоны, например, метилэтилкетон, метилизобутилкетон и подобные; или простые эфиры, например, тетрагидрофуран (THF). В некоторых вариантах осуществления органический растворитель представляет собой ДМСО.
[00103] В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты (например, ДНК) сначала растворяют в растворителе в концентрации не более 4 мг/мл, а затем суспендируют в растворе ацетата натрия. В некоторых вариантах осуществления раствор ацетата натрия составляет 25 мМ и имеет pH 5,2.
[00104] В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты (в частности, ДНК) растворяют с получением раствора, имеющего концентрацию не более, чем около 4 мг/мл, включая не более, чем около 3,5 мг/мл, не более, чем около 3,0 мг/мл, не более, чем около 2,5 мг/мл, не более, чем около 2,0 мг/мл, не более, чем около 1,5 мг/мл, не более, чем около 1,0 мг/мл, не более, чем около 0,5 мг/мл, не более, чем около 0,1 мг/мл, не более, чем около 0,05 мг/мл и не более, чем около 0,01 мг/мл; включая все промежуточные концентрации.
[00105] В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты (в частности, ДНК) растворяют с получением раствора, имеющего концентрацию от около 0,01 мг/мл до 4 мг/мл, включая около 0,01 мг/мл, около 0,02 мг/мл, около 0,06 мг. / мл, около 0,07 мг/мл, около 0,08 мг/мл, около 0,09 мг/мл, около 0,1 мг/мл, около 0,11 мг/мл, около 0,12 мг/мл, около 0,13 мг/мл, около 0,14 мг/мл, около 0,15 мг/мл, около 0,16 мг/мл, около 0,17 мг/мл, около 0,18 мг/мл, около 0,19 мг/мл, около 0,20 мг/мл, около 0,25 мг/мл, около 0,30 мг/мл, около 0,35 мг/мл, около 0,40 мг/мл, около 0,45 мг/мл, около 0,50 мг/мл, около 0,55 мг/мл, около 0,60 мг/мл, около 0,65 мг/мл, около 0,70 мг/мл, около 0,75 мг/мл, около 0,80 мг/мл, около 0,85 мг/мл, около 0,90 мг/мл, около 0,95 мг/мл, около 1,0 мг/мл, около 1,05 мг/мл, около 1,10 мг/мл, около 1,15 мг/мл , около 1,20 мг/мл, около 1,25 мг/мл, около 1,30 мг/мл, около 1,35 мг/мл, около 1,40 мг/мл, около 1,45 мг/мл, около 1,50 мг/мл, около 1,55 мг/мл, около 1,60 мг/мл, около 1,65 мг/мл, около 1,70 м г/мл, около 1,75 мг/мл, около 1,80 мг/мл, около 1,85 мг/мл, около 1,90 мг/мл, около 1,95 мг/мл, около 2,0 мг/мл, около 2,10 мг/мл, около 2,15 мг/мл. мл, около 2,20 мг/мл, около 2,25 мг/мл, около 2,30 мг/мл, около 2,35 мг/мл, около 2,40 мг/мл, около 2,45 мг/мл, около 2,50 мг/мл, около 2,55 мг/мл, около 2,60 мг/мл, около 2,65 мг/мл, около 2,70 мг/мл, около 2,75 мг/мл, около 2,80 мг/мл, около 2,85 мг/мл, около 2,90 мг/мл, около 2,95 мг/мл, около 3,0 мг/мл, около 3,10 мг/мл, около 3,15 мг/мл, около 3,20 мг/мл, около 3,25 мг/мл, около 3,30 мг/мл, около 3,35 мг/мл, около 3,40 мг/мл, около 3,45 мг/мл. мл, около 3,50 мг/мл, около 3,55 мг/мл, около 3,60 мг/мл, около 3,65 мг/мл, около 3,70 мг/мл, около 3,75 мг/мл, около 3,80 мг/мл, около 3,85 мг/мл, около 3,90 мг/мл, около 3,95 мг/мл и около 4,0 мг/мл, включая все значения между ними. В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты (в частности, ДНК) суспендируют в жидкости, содержащей сахар. Например, трегалозу, сахарозу, глюкозу и маннит. В некоторых вариантах осуществления сахар представляет собой сахарозу.
[00106] В некоторых вариантах осуществления в способе по настоящему изобретению используется любой полимер, способный образовывать полиплекс, включая полиэтиленимины, линейные поли(аминоэфиры) (LPAE) [например, описанные в Mol Ther. 2005, 11 (3), 426-434; и Methods Mol Biol. 2009; 480, 53-63, содержание каждого из которых полностью включено в настоящее описание посредством ссылки], хитозан, полимеры сополимера молочной и гликолевой кислот, полимеры полимолочной кислоты и сильно разветвленные сложные поли(аминоэфиры), такие как разветвленные сложные поли(b-аминоэфиры) [например, описанные в Biomacromolecules 2016, 17, 3640-3647; Biomacromolecules 2015, 16, 2609−2617; ACS Appl. Mater. Interfaces 2016, 8, 50, 34218-34226; J. Control Release, 2016, 244 (Pt B), 336-346; Drug Discov. Today. 2013 Nov; 18 (21-22), 1090-1098; Sci. Adv. 2016; 2 : e1600102; WO 2014/053654; US 2015/0266986; and WO 2016/020474, содержание каждого из которых полностью включено в настоящее описание посредством ссылки]. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой сильно разветвленный сложный поли(аминоэфир) (HPAE), например, как описано ниже.
[00107] В одном аспекте описанный в данном документе способ предусматривает полиплекс, содержащий компонент нуклеиновой кислоты, и полимер, содержащий:
(a) ;
(b) ; и
(c) или
,
каждый J представляет собой -O-
Z’’ представляет собой связывающий фрагмент;
Z представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов углерода, линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов, содержащую гетероатом, карбоцикл, содержащий от 3 до 30 атомов углерода, или гетероцикл, содержащий от 3 до 30 атомов; или Z представляет собой, где x равно 1-1000;
причем Z является незамещенным или замещенным по меньшей мере одним из: галогеном, гидроксилом, аминогруппой, сульфонильной группой, сульфонамидной группой, тиолом, C1-C6 алкилом, C1-C6 алкокси, C1-C6эфиром, C1-C6 тиоэфиром, C1-C6 сульфоном, C1-C6 сульфоксидом, C1-C6первичным амидом, C1-C6 вторичным амидом, галоген-C1-C6 алкилом, карбоксильной группой, цианогруппой, нитрогруппой, нитрозогруппой, -OC(O)NR′R′, -N(R′)C(O)NR′R′, -N(R′)C(O)O-C1-C6 алкилом, C3-C6циклоалкилом, C3-C6 гетероциклилом, C2-C5 гетероарилом или C6-C10 арилом; при этом каждый R′ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и C1-C6 алкила;
A представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов углерода, линейную или разветвленную углеродную цепь из от 2 до 30 атомов, содержащую гетероатом, карбоцикл, содержащий от 3 до 30 атомов углерода, или гетероцикл, содержащий от 3 до 30 атомов;
причем A необязательно замещен одним или более галогеном, гидроксилом, аминогруппой, сульфонильной группой, сульфонамидной группой, тиолом, C1-C6 алкилом C1-C6 алкокси, C1-C6эфиром, C1-C6 тиоэфиром, C1-C6 сульфоном, C1-C6 сульфоксидом, C1-C6 первичным амидом, C1-C6 вторичным амидом, галоген-C1-C6 алкилом, карбоксильной группой, цианогруппой, нитрогруппой, нитрозогруппой, -OC(O)NR′R′, -N(R′)C(O)NR′R′, -N(R′)C(O)O-C1-C6 алкилом, C3-C6циклоалкилом, C3-C6 гетероциклилом, C2-C5 гетероарилом или C6-C10 арилом; где каждый R′ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и C1-C6 алкила;
G представляет собой -C-;
каждый Q представляет собой H;
каждый E1 представляет собой гетероалкилен;
R1 и R2 каждый независимо представляет собой C1-C40алкил, C1-C40 гетероалкил, C2-C40алкенил, C2-C40 гетероалкенилен, C4-C8циклоалкенил, C2-C40алкинил, C2-C40 гетероалкинилен, C3-C8циклоалкил, гетероциклил, арил или гетероарил; причем гетероциклил и гетероарил содержат 1-5 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, S, P и O; причем C1-C40алкил, C2-C40алкенил, C4-C8циклоалкенил, C2-C40алкинил, C3-C8циклоалкил, гетероциклил, арил и гетероарил необязательно замещены D, галогеном, C1-C6алкилом, -OH, -O-C1-C6алкилом,-NH2, -NH(C1-C6алкилом), или -N(C1-C6алкилом)2; где R1 и R2 является незамещенными или замещенными по меньшей мере одним из: галогеном, гидроксилом, аминогруппой, сульфонильной группой, сульфонамидной группой, тиолом, C1-C6 алкилом, C1-C6 алкокси, C1-C6 эфиром, C1-C6 тиоэфиром, C1-C6 сульфоном, C1-C6 сульфоксидом, C1-C6 первичным амидом, C1-C6 вторичным амидом, галоген-C1-C6 алкилом, карбоксильной группой, цианогруппой, нитрогруппой, нитрозогруппой, -OC(O)NR′R′, -N(R′)C(O)NR′R′, -N(R′)C(O)O-C1-C6 алкилом, C3-C6циклоалкилом, C3-C6 гетероциклилом, C2-C5 гетероарилом и C6-C10) арилом; причем каждый R′ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C1-C6 алкила; и
каждый n равен по меньшей мере 1
[00108] В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь, из от 1 до 30 атомов углерода, или линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов, содержащую гетероатом, причем, Z является незамещенным или замещенным по меньшей мере одним из: галогеном, гидроксилом, аминогруппой, сульфонильной группой, сульфонамидной группой, тиолом, C1-C6 алкилом, C1-C6 алкокси, C1-C6эфиром, C1-C6 тиоэфиром, C1-C6 сульфоном, C1-C6 сульфоксидом, C1-C6первичным амидом, C1-C6 вторичным амидом, галоген-C1-C6 алкилом, карбоксильной группой, цианогруппой, нитрогруппой, нитрозогруппой, -OC(O)NR′R′, -N(R′)C(O)NR′R′, -N(R′)C(O)O-C1-C6 алкилом, C3-C6циклоалкилом, C3-C6 гетероциклилом, C2-C5 гетероарилом или C6-C10 арилом; где каждый R′ независимо выбран из группы, состоящей из водорода и C1-C6 алкила; или Z представляет собой, где x равен 1-1000.
[00109] В некоторых вариантах осуществления Z’’ представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов углерода, линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов, содержащую гетероатом, карбоцикл, содержащий от 3 до 30 атомов углерода или гетероцикл, содержащий от 3 до 30 атомов, при этом Z является незамещенным или замещенным по меньшей мере одним из: галогеном, гидроксилом, аминогруппой, сульфонильной группой, сульфонамидной группой, тиолом, C1-C6 алкилом, C1-C6 алкокси, C1-C6эфиром, C1-C6 тиоэфиром, C1-C6 сульфоном, C1-C6 сульфоксидом, C1-C6первичным амидом, C1-C6 вторичным амидом, галоген-C1-C6 алкилом, карбоксильной группой, цианогруппой, нитрогруппой, нитрозогруппой, -OC(O)NR′R′, -N(R′)C(O)NR′R′, -N(R′)C(O)O-C1-C6 алкилом, C3-C6циклоалкилом, C3-C6 гетероциклилом, C2-C5 гетероарилом или C6-C10 арилом; где каждый R′ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и C1-C6 алкила
[00110] В некоторых вариантах осуществления Z’’ представляет собой линейную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов углерода. Например, Z’’ может представлять собой алкиленовую группу, включающую в себя, не ограничиваясь ими, C1-C24 алкилен, C1-C20 алкилен, C1-C16 алкилен, C1-C12 алкилен, C1-C8 алкилен, C1-C6 алкилен, C1-C4 алкилен, C1-C3 алкилен, C1-C2 алкилен, C1 алкилен. Типичные алкиленовые группы включают в себя, но не ограничиваются ими, метилен, этилен, пропилен, н-бутилен, этенилен, пропенилен, н-бутенилен, пропинилен, н-бутинилен и т. п.
[00111] В некоторых вариантах осуществления Z’’ представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь, имеющую от 1 до 30 атомов углерода, или линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов, содержащую гетероатом.
[00112] В некоторых вариантах осуществления Z’’ представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов углерода, линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов, содержащую гетероатом, карбоцикл, содержащий от 3 до 30 атомов углерода или гетероцикл, содержащий от 3 до 30 атомов, при этом Z является незамещенным или замещенным по меньшей мере одним из: галогеном, гидроксилом, аминогруппой, сульфонильной группой, сульфонамидной группой, тиолом, C1-C6 алкилом, C1-C6 алкокси, C1-C6эфиром, C1-C6 тиоэфиром, C1-C6 сульфоном, C1-C6 сульфоксидом, C1-C6первичным амидом, C1-C6 вторичным амидом, галоген-C1-C6 алкилом, карбоксильной группой, цианогруппой, нитрогруппой, нитрозогруппой, -OC(O)NR′R′, -N(R′)C(O)NR′R′, -N(R′)C(O)O-C1-C6 алкилом, C3-C6циклоалкилом, C3-C6 гетероциклилом, C2-C5 гетероарилом и C6-C10 арилом; где каждый R′ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода и C1-C6 алкила.
[00113] В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов углерода, или линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов, содержащую гетероатом. В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой линейную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов углерода. Например, Z может представлять собой алкиленовую группу, включающую в себя, не ограничиваясь ими, C1-C24 алкилен, C1-C20 алкилен, C1-C16 алкилен, C1-C12 алкилен, C1-C8 алкилен, C1-C6 алкилен, C1-C4 алкилен, C1-C3 алкилен, C1-C2 алкилен, C1 алкилен. Типичные алкиленовые группы включают в себя, но не ограничиваются ими, метилен, этилен, пропилен, н-бутилен, этенилен, пропенилен, н-бутенилен, пропинилен, н-бутинилен и т. п. В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 30 атомов, содержащую гетероатом Например, Z может представлять собой линейную или разветвленную углеродную цепь с одним или более атомов углерода, замещенных гетероатомом, включая, но не ограничиваясь ими, O, N, S или P. В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь из от 1 до 10 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой, где x равен 1-1000. В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой .
[00114] В некоторых вариантах осуществления R1 и R2 независимо представляют собой C1-C20 алкил. Например, R1 и R2 могут представлять собой C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11, C12, C13, C14, C15, C16, C17, C18, C19, или C20 алкильные группы, такие как метил, этил, н-пропил, изопропил, 2-метил-1-пропил, 2-метил-2-пропил, 2-метил-1-бутил, 3-метил-1-бутил, 2-метил-3-бутил, 2,2-диметил-1-пропил, 2-метил-1-пентил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил, 2-метил-2-пентил, 3-метил-2-пентил, 4-метил-2-пентил, 2,2-диметил-1-бутил, 3,3-диметил-1-бутил, 2-этил-1-бутил, бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, н-ундецил, н-додецил, н-тридецил, н-тетрадецил, н-пентадецил, н-гексадецил, н-гептадецил, н-октадецил, н-нонадецил или н-икозил. В некоторых вариантах осуществления R1 и R2 являются независимо незамещенными. В некоторых вариантах осуществления R1 и R2 являются независимо замещенными. В некоторых вариантах осуществления R1 и R2 независимо выбирают из группы, состоящей , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , и .
[00115] В некоторых вариантах осуществления R1 представляет собой и R2 представляет собой .
[00116] В некоторых вариантах осуществления R1 представляет собой и R2 представляет собой .
[00117] В некоторых вариантах осуществления полимер содержит:
(a) ;
(b) ; и
(c) .
[00118] В некоторых вариантах осуществления полимер содержит:
(a) ;
(b) ; и
(c) .
[00119] В некоторых вариантах осуществления полимер содержит:
(a) и
(c) .
[00120] В некоторых вариантах осуществления полимер содержит:
(a) , и
(c) , где
J представляет собой O и Z представляет собой , где x равен 1-1000.
[00121] В некоторых вариантах осуществления полимер содержит:
(b) .
[00122] В некоторых вариантах осуществления полимер содержит:
(a) ;
(b) ; и
(c) , где
R1 представляет собой и
R2 выбирают из .
[00123] В некоторых вариантах реализации полиплекс включает компонент нуклеиновой кислоты и полимер, содержащий:
(a) ;
(b) ; и
(c) , где
J представляет собой O и Z представляет собой , где x равен 1-1000.
R1 представляет собой и
R2 представляет собой .
[00124] В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют параметр альфа, определенный из уравнения Марка - Хаувинка, меньше, чем около 0,5. Например, полимеры по настоящему изобретению имеют параметр альфа, определенный из уравнения Марка - Хаувинка, в диапазоне от около 0,01 до около 0,49. Например, полимеры по настоящему изобретению имеют параметр альфа, определенный из уравнения Марка - Хаувинка, в диапазоне от около 0,01, около 0,02, около 0,03, около 0,04, около 0,05, около 0,06, около 0,07, около 0,08, около 0,09, около 0,10, около 0,11, около 0,12, около 0,13, около 0,14, около 0,15, около 0,16, около 0,17, около 0,18, около 0,19, около 0,20, около 0,21, около 0,22, около 0,23, около 0,24, около 0,25, около 0,26, около 0,27, около 0,28, около 0,29, около 0,30, около 0,31, около 0,32, около 0,33, около 0,34, около 0,35, около 0,36, около 0,37, около 0,38, около 0,39, около 0,40, около 0,41, около 0,42, около 0,43, около 0,44, около 0,45, около 0,46, около 0,47, около 0,48, до около 0,49, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют параметр альфа, определенный из уравнения Марка - Хаувинка, от около 0,2 до около 0,5.
[00125] В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют параметр альфа, определенный из уравнения Марка - Хаувинка, около 0,01, около 0,02, около 0,03, около 0,04, около 0,05, около 0,06, около 0,07, около 0,08, около 0,09, около 0,10, около 0,11, около 0,12, около 0,13, около 0,14, около 0,15, около 0,16, около 0,17, около 0,18, около 0,19, около 0,20, около 0,21, около 0,22, около 0,23, около 0,24, около 0,25, около 0,26, около 0,27, около 0,28, около 0,29, около 0,30, около 0,31, около 0,32, около 0,33, около 0,34, около 0,35, около 0,36, около 0,37, около 0,38, около 0,39, около 0,40, около 0,41, около 0,42, около 0,43, около 0,44, около 0,45, около 0,46, около 0,47, около 0,48 или около 0,49.
[00126] В некоторых вариантах осуществления полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, меньше, чем около 0,5. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, от около 0,2 до около 0,5.
[00127] Термин «индекс полидисперсности» (PDI - англ., polydispersity index) относится к измерению распределения молекулярной массы в образце данного полимера. Индекс полидисперсности рассчитывают делением средневесовой молекулярной массы (Mw) на среднечисловую молекулярную массу (Mn). В контексте данного документа термин «средневесовая молекулярная масса» обычно относится к показателю молекулярной массы, который зависит от распределения молекул полимера в соответствии с их размерами. В контексте данного документа термин «среднечисловая молекулярная масса» обычно относится к показателю молекулярной массы, который рассчитывается путем деления общей массы всех молекул полимера в образце на общее количество молекул полимера в образце. Эти термины хорошо известны специалистам в данной области техники.
[00128] В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют индекс полидисперсности (PDI) от около 1,01 до около 8,0. Например, значение PDI может находится в диапазоне от около 1,01, около 1,02, около 1,03, около 1,04, около 1,05, около 1,06, около 1,07. около 1,08, около 1,09, около 1,1, около 1,2, около 1,3, около 1,4, около 1,5, около 1,6, около 1,7, около 1,8 , около 1,9, около 2,0, около 2,1, около 2,2, около 2,3, около 2,4, около 2,5, около 2,6, около 2,7, около 2,8, около 2,9, около 3,0, около 3,1, около 3,2, около 3,3, около 3,4, около 3,5, около 3,6, около 3,7, около 3,8, около 3,9, около 4,0, около 4,1, около 4,2, около 4,3, около 4,4, около 4,5, около 4,6, около 4,7, около 4,8, около 4,9, около 5,0, около 5,1, около 5,2, около 5,3, около 5,4, около 5,5, около 5,6, около 5,7, около 5,8, около 5,9, около 6,0, около 6,1, около 6,2, около 6,3, около 6,4, около 6,5, около 6,6, около 6,7, около 6,8 , около 6,9, около 7,0, около 7,1, около 7,2, около 7,3, около 7,4, около 7,5, около 7,6, около 7,7, около 7,8, около 7,9 до около 8,0, включая все диапазоны между ними.
[00129] В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют значение PDI около 1,01, около 1,02, около 1,03, около 1,04, около 1,05, около 1,06, около 1,07, около 1,08, около 1,09, около 1,1, около 1,2, около 1,3, около 1,4, около 1,5, около 1,6, около 1,7, около 1,8 , около 1,9, около 2,0, около 2,1, около 2,2, около 2,3, около 2,4, около 2,5, около 2,6, около 2,7, около 2,8, около 2,9, около 3,0, около 3,1, около 3,2, около 3,3, около 3,4, около 3,5, около 3,6, около 3,7, около 3,8, около 3,9, около 4,0, около 4,1, около 4,2, около 4,3, около 4,4, около 4,5, около 4,6, около 4,7, около 4,8, около 4,9, около 5,0, около 5,1, около 5,2, около 5,3, около 5,4, около 5,5, около 5,6, около 5,7, около 5,8, около 5,9, около 6,0, около 6,1, около 6,2, около 6,3, около 6,4, около 6,5, около 6,6, около 6,7, около 6,8 , около 6,9, около 7,0, около 7,1, около 7,2, около 7,3, около 7,4, около 7,5, около 7,6, около 7,7, около 7,8, около 7,9 или около 8,0. В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют PDI около 2,5.
[00130] В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют индекс полидисперсности (PDI) от около 1,01 до около 8,0. В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют PDI около 2,5.
[00131] В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют M W , по меньшей мере, 3 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют M W от около 3 кДа до около 200 кДа. Соответственно, полимеры по настоящему изобретению имеют M W в диапазоне от около 3 кДа, около 4 кДа, около 5 кДа, около 6 кДа, около 7 кДа, около 8 кДа, около 9 кДа, около 10 кДа, около 11 кДа, около 12 кДа, около 13 кДа, около 14 кДа, около 15 кДа, около 16 кДа, около 17 кДа, около 18 кДа, около 19 кДа, около 20 кДа , около 21 кДа, около 22 кДа, около 23 кДа, около 24 кДа, около 25 кДа, около 26 кДа, около 27 кДа, около 28 кДа, около 29 кДа, около 30 кДа, около 31 кДа, около 32 кДа, около 33 кДа, около 34 кДа, около 35 кДа, около 36 кДа, около 37 кДа, около 38 кДа, около 39 кДа, около 40 кДа, около 41 кДа, около 42 кДа, около 43 кДа, около 44 кДа, около 45 кДа, около 46 кДа, около 47 кДа, около 48 кДа, около 49 кДа, около 50 кДа, около 51 кДа, около 52 кДа, около 53 кДа, около 54 кДа, около 55 кДа, около 56 кДа, около 57 кДа, около 58 кДа, около 59 кДа, около 60 кДа, около 61 кДа, около 62 кДа, около 63 кДа, около 64 кДа, около 65 кДа, около 66 кДа, около 67 кДа, около 68 кДа, около 69 кДа, около 70 кДа, около 71 кДа, около 72 кДа, около 73 кДа, около 74 кДа, около 75 кДа, около 76 кДа, около 77 кДа, около 78 кДа, около 79 кДа, около 80 кДа, около 81 кДа, около 82 кДа, около 83 кДа, около 84 кДа, около 85 кДа, около 86 кДа, около 87 кДа, около 88 кДа, около 89 кДа, около 90 кДа, около 91 кДа, около 92 кДа, около 93 кДа, около 94 кДа, около 95 кДа, около 96 кДа, около 97 кДа, около 98 кДа, около 99 кДа, около 100 кДа, около 101 кДа, около 102 кДа, около 103 кДа, около 104 кДа, около 105 кДа, около 106 кДа, около 107 кДа, около 108 кДа, около 109 кДа, около 110 кДа, около 111 кДа, около 112 кДа, около 113 кДа, около 114 кДа, около 115 кДа, около 116 кДа, около 117 кДа, около 118 кДа, около 119 кДа, около 120 кДа, около 121 кДа, около 122 кДа, около 123 кДа, около 124 кДа, около 125 кДа, около 126 кДа, около 127 кДа, около 128 кДа, около 129 кДа, около 130 кДа, около 131 кДа, около 132 кДа, около 133 кДа, около 134 кДа, около 135 кДа, около 136 кДа, около 137 кДа, около 138 кДа, около 139 кДа, около 140 кДа, около 141 кДа, около 142 кДа, около 143 кДа, около 144 кДа, около 145 кДа, около 146 кДа, около 147 кДа, около 148 кДа, около 149 кДа, около 150 кДа, около 151 кДа, около 152 кДа, около 153 кДа, около 154 кДа, около 155 кДа, около 156 кДа, около 157 кДа, около 158 кДа, около 159 кДа, около 160 кДа, около 161 кДа, около 162 кДа, около 163 кДа, около 164 кДа, около 165 кДа, около 166 кДа, около 167 кДа около 168 кДа, около 169 кДа, около 170кДа, около 171 кДа, около 172 кДа, около 173 кДа, около 174 кДа, около 175 кДа, около 176 кДа, около 177 кДа, около 178 кДа, около 179 кДа, около 180 кДа, около 181 кДа, около 182 кДа, около 183 кДа, около 184 кДа, около 185 кДа, около 186 кДа, около 187 кДа, около 188 кДа, около 189 кДа, около кДа 190 кДа, около 191 кДа, около 192 кДа, около 193 кДа, около 194 кДа, около 195 кДа, около 196 кДа, около 197 кДа, около 198 кДа, около 199 кДа, около 200 кДа, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет M W между около 5 кДа и 50 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет M W между около 10 кДа и 50 кДа.
[00132] В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют M W около 3 кДа, около 4 кДа, около 5 кДа, около 6 кДа, около 7 кДа, около 8 кДа, около 9 кДа, около 10 кДа, около 11 кДа, около 12 кДа, около 13 кДа, около 14 кДа, около 15 кДа, около 16 кДа, около 17 кДа, около 18 кДа, около 19 кДа, около 20 кДа , около 21 кДа, около 22 кДа, около 23 кДа, около 24 кДа, около 25 кДа, около 26 кДа, около 27 кДа, около 28 кДа, около 29 кДа, около 30 кДа, около 31 кДа, около 32 кДа, около 33 кДа, около 34 кДа, около 35 кДа, около 36 кДа, около 37 кДа, около 38 кДа, около 39 кДа, около 40 кДа, около 41 кДа, около 42 кДа, около 43 кДа, около 44 кДа, около 45 кДа, около 46 кДа, около 47 кДа, около 48 кДа, около 49 кДа, около 50 кДа, около 51 кДа, около 52 кДа, около 53 кДа, около 54 кДа, около 55 кДа, около 56 кДа, около 57 кДа, около 58 кДа, около 59 кДа, около 60 кДа, около 61 кДа, около 62 кДа, около 63 кДа, около 64 кДа, около 65 кДа, около 66 кДа, около 67 кДа, около 68 кДа, около 69 кДа, около 70 кДа, около 71 кДа, около 72 кДа, около 73 кДа, около 74 кДа, около 75 кДа, около 76 кДа, около 77 кДа, около 78 кДа, около 79 кДа, около 80 кДа, около 81 кДа, около 82 кДа, около 83 кДа, около 84 кДа, около 85 кДа, около 86 кДа, около 87 кДа, около 88 кДа, около 89 кДа, около 90 кДа, около 91 кДа, около 92 кДа, около 93 кДа, около 94 кДа, около 95 кДа, около 96 кДа, около 97 кДа, около 98 кДа, около 99 кДа, около 100 кДа, около 101 кДа, около 102 кДа, около 103 кДа, около 104 кДа, около 105 кДа, около 106 кДа, около 107 кДа, около 108 кДа, около 109 кДа, около 110 кДа, около 111 кДа, около 112 кДа, около 113 кДа, около 114 кДа, около 115 кДа, около 116 кДа, около 117 кДа, около 118 кДа, около 119 кДа, около 120 кДа, около 121 кДа, около 122 кДа, около 123 кДа, около 124 кДа, около 125 кДа, около 126 кДа, около 127 кДа, около 128 кДа, около 129 кДа, около 130 кДа, около 131 кДа, около 132 кДа, около 133 кДа, около 134 кДа, около 135 кДа, около 136 кДа, около 137 кДа, около 138 кДа, около 139 кДа, около 140 кДа, около 141 кДа, около 142 кДа, около 143 кДа, около 144 кДа, около 145 кДа, около 146 кДа, около 147 кДа, около 148 кДа, около 149 кДа, около 150 кДа, около 151 кДа, около 152 кДа, около 153 кДа, около 154 кДа, около 155 кДа, около 156 кДа, около 157 кДа, около 158 кДа, около 159 кДа, около 160 кДа, около 161 кДа, около 162 кДа, около 163 кДа, около 164 кДа, около 165 кДа, около 166 кДа, около 167 кДа около 168 кДа, около 169 кДа, около 170 кДа, около 171 кДа, около 172 кДа, около 173 кДа, около 174 кДа, около 175 кДа, около 176 кДа, около 177 кДа, около 178 кДа, около 179 кДа, около 180 кДа, около 181 кДа, около 182 кДа, около 183 кДа, около 184 кДа, около 185 кДа, около 186 кДа, около 187 кДа, около 188 кДа, около 189 кДа, около 190 кДа, около 191 кДа, около 192 кДа, около 193 кДа, около 194 кДа, около 195 кДа, около 196 кДа, около 197 кДа, около 198 кДа, около 199 кДа, около 200 кДа, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет M W между около 5 кДа и 50 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет M W между около 10 кДа и 50 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет M W около 10 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет M W около 20 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет M W около 30 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет M W около 40 кДа.
[00133] В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют M W по меньшей мере, 3 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимеры, по настоящему изобретению, имеют M W между около 5 кДа и 50 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимеры по настоящему изобретению имеют M W около 10 кДа.
[00134] В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении от около 0,1:1 до около 200:1 (масс./масс.). Например, полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении в диапазоне от около 0,1:1, около 0,2:1, около 0,3:1, около 0,4:1, около 0,5:1, около 0,6:1, около 0,7:1, около 0,8:1, около 0,9:1, около 1:1, около 2:1, около 3:1, около 4:1, около 5:1, около 6:1, около 7:1, около 8:1, около 9:1, около 10:1 около 11:1, около 12:1, около 13:1, около 14:1, около 15:1, около 16:1, около 17:1, около 18:1, около 19:1, около 20:1, около 21:1, около 22:1, около 23:1, около 24:1, около 25:1, около 26:1, около 27:1, около 28:1, около 29:1, около 30:1, около 31:1, около 32:1, около 33:1, около 34:1, около 35:1, около 36:1, около 37:1, около 38:1, около 39:1, около 40:1, около 41:1, около 42:1, около 43:1, около 44:1, около 45:1, около 46:1, около 47:1, около 48:1, около 49:1, около 50:1, около 51:1, около 52:1, около 53:1, около 54:1, около 55:1, около 56:1, около 57:1, около 58:1, около 59:1, около 60:1, около 61:1, около 62:1, около 63:1, около 64:1, около 65:1, около 66:1, около 67:1, около 68:1, около 69:1, около 70:1, около 71:1, около 72:1, около 73:1, около 74:1, около 75:1, около 76:1, около 77:1, около 78:1, около 79:1, около 80:1, около 81:1, около 82:1, около 83:1, около 84:1, около 85:1, около 86:1, около 87:1, около 88:1, около 89:1, около 90:1, около 91:1, около 92:1, около 93:1, около 94:1, около 95:1, около 96:1, около 97:1, около 98:1, около 99:1, около 100:1, около 101:1, около 102:1, около 103:1, около 104:1, около 105:1, около 106:1, около 107:1, около 108:1, около 109:1, около 110:1, около 111:1, около 112:1, около 113:1, около 114:1, около 115:1, около 116:1, около 117:1, около 118:1, около 119:1, около 120:1, около 121:1, около 122:1, около 123:1, около 124:1, около 125:1, около 126:1, около 127:1, около 128:1, около 129:1, около 130:1, около 131:1, около 132:1, около 133:1, около 134:1, около 135:1, около 136:1, около 137:1, около 138:1, около 139:1, около 140:1, около 141:1, около 142:1, около 143:1, около 144:1, около 145:1, около 146:1, около 147:1, около 148:1, около 149:1, около 150:1, около 151:1, около 152:1, около 153:1, около 154:1, около 155:1, около 156:1, около 157:1, около 158:1, около 159:1, около 160:1, около 161:1, около 162:1, около 163:1, около 164:1, около 165:1, около 166:1, около 167:1, около 168:1, около 169:1, около 170:1, около 171:1, около 172:1, около 173:1, около 174:1, около 175:1, около 176:1, около 177:1, около 178:1, около 179:1, около 180:1, около 181:1, около 182:1, около 183:1, около 184:1, около 185:1, около 186:1, около 187:1, около 188:1, около 189:1, около 190:1, около 191:1, около 192:1, около 193:1, около 194:1, около 195:1, около 196:1, около 197:1, около 198:1, около 199:1 до около 200:1, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении от около 20:1 до около 80:1 (масс./масс.).
[00135] В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении около 0,1:1, около 0,2:1, около 0,3:1, около 0,4:1, около 0,5:1, около 0,6:1, около 0,7:1, около 0,8:1, около 0,9:1, около 1:1, около 2:1, около 3:1, около 4:1, около 5:1, около 6:1, около 7:1, около 8:1, около 9:1, около 10:1 около 11:1, около 12:1, около 13:1, около 14:1, около 15:1, около 16:1, около 17:1, около 18:1, около 19:1, около 20:1, около 21:1, около 22:1, около 23:1, около 24:1, около 25:1, около 26:1, около 27:1, около 28:1, около 29:1, около 30:1, около 31:1, около 32:1, около 33:1, около 34:1, около 35:1, около 36:1, около 37:1, около 38:1, около 39:1, около 40:1, около 41:1, около 42:1, около 43:1, около 44:1, около 45:1, около 46:1, около 47:1, около 48:1, около 49:1, около 50:1, около 51:1, около 52:1, около 53:1, около 54:1, около 55:1, около 56:1, около 57:1, около 58:1, около 59:1, около 60:1, около 61:1, около 62:1, около 63:1, около 64:1, около 65:1, около 66:1, около 67:1, около 68:1, около 69:1, около 70:1, около 71:1, около 72:1, около 73:1, около 74:1, около 75:1, около 76:1, около 77:1, около 78:1, около 79:1, около 80:1, около 81:1, около 82:1, около 83:1, около 84:1, около 85:1, около 86:1, около 87:1, около 88:1, около 89:1, около 90:1, около 91:1, около 92:1, около 93:1, около 94:1, около 95:1, около 96:1, около 97:1, около 98:1, около 99:1, около 100:1, около 101:1, около 102:1, около 103:1, около 104:1, около 105:1, около 106:1, около 107:1, около 108:1, около 109:1, около 110:1, около 111:1, около 112:1, около 113:1, около 114:1, около 115:1, около 116:1, около 117:1, около 118:1, около 119:1, около 120:1, около 121:1, около 122:1, около 123:1, около 124:1, около 125:1, около 126:1, около 127:1, около 128:1, около 129:1, около 130:1, около 131:1, около 132:1, около 133:1, около 134:1, около 135:1, около 136:1, около 137:1, около 138:1, около 139:1, около 140:1, около 141:1, около 142:1, около 143:1, около 144:1, около 145:1, около 146:1, около 147:1, около 148:1, около 149:1, около 150:1, около 151:1, около 152:1, около 153:1, около 154:1, около 155:1, около 156:1, около 157:1, около 158:1, около 159:1, около 160:1, около 161:1, около 162:1, около 163:1, около 164:1, около 165:1, около 166:1, около 167:1, около 168:1, около 169:1, около 170:1, около 171:1, около 172:1, около 173:1, около 174:1, около 175:1, около 176:1, около 177:1, около 178:1, около 179:1, около 180:1, около 181:1, около 182:1, около 183:1, около 184:1, около 185:1, около 186:1, около 187:1, около 188:1, около 189:1, около 190:1, около 191:1, около 192:1, около 193:1, около 194:1, около 195:1, около 196:1, около 197:1, около 198:1, около 199:1 или около 200:1. В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении около 30:1 (масс./масс.).
[00136] В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет M W от около 3 кДа до около 200 кДа. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет M W от около 5 кДа до около 50 кДа. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет M W между около 10 кДа и 50 кДа. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет M W от около 5 кДа до около 15 кДа. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет M W около 10 кДа. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет M W около 20 кДа. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет M W около 30 кДа. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет M W около 40 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, меньше, чем около 0,5. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, в диапазоне от около 0,3 до около 0,5. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет индекс полидисперсности (PDI - англ., polydispersity index) от около 1,0 до около 8,0. В некоторых дополнительных вариантах осуществления полимер имеет PDI около 2,5.
[00137] В одном аспекте полимер представляет собой HPAE.
[00138] В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении от около 0,1:1 до около 200:1 (масс./масс.). Например, полимер и компонент нуклеиновой кислоты представлены в полиплексе в соотношении в диапазоне от около 0,1:1, около 0,2:1, около 0,3:1, около 0,4:1, около 0,5:1, около 0,6:1, около 0,7:1, около 0,8:1, около 0,9:1, около 1:1, около 2:1, около 3:1, около 4:1, около 5:1, около 6:1, около 7:1, около 8:1, около 9:1, около 10:1 около 11:1, около 12:1, около 13:1, около 14:1, около 15:1, около 16:1, около 17:1, около 18:1, около 19:1, около 20:1, около 21:1, около 22:1, около 23:1, около 24:1, около 25:1, около 26:1, около 27:1, около 28:1, около 29:1, около 30:1, около 31:1, около 32:1, около 33:1, около 34:1, около 35:1, около 36:1, около 37:1, около 38:1, около 39:1, около 40:1, около 41:1, около 42:1, около 43:1, около 44:1, около 45:1, около 46:1, около 47:1, около 48:1, около 49:1, около 50:1, около 51:1, около 52:1, около 53:1, около 54:1, около 55:1, около 56:1, около 57:1, около 58:1, около 59:1, около 60:1, около 61:1, около 62:1, около 63:1, около 64:1, около 65:1, около 66:1, около 67:1, около 68:1, около 69:1, около 70:1, около 71:1, около 72:1, около 73:1, около 74:1, около 75:1, около 76:1, около 77:1, около 78:1, около 79:1, около 80:1, около 81:1, около 82:1, около 83:1, около 84:1, около 85:1, около 86:1, около 87:1, около 88:1, около 89:1, около 90:1, около 91:1, около 92:1, около 93:1, около 94:1, около 95:1, около 96:1, около 97:1, около 98:1, около 99:1, около 100:1, около 101:1, около 102:1, около 103:1, около 104:1, около 105:1, около 106:1, около 107:1, около 108:1, около 109:1, около 110:1, около 111:1, около 112:1, около 113:1, около 114:1, около 115:1, около 116:1, около 117:1, около 118:1, около 119:1, около 120:1, около 121:1, около 122:1, около 123:1, около 124:1, около 125:1, около 126:1, около 127:1, около 128:1, около 129:1, около 130:1, около 131:1, около 132:1, около 133:1, около 134:1, около 135:1, около 136:1, около 137:1, около 138:1, около 139:1, около 140:1, около 141:1, около 142:1, около 143:1, около 144:1, около 145:1, около 146:1, около 147:1, около 148:1, около 149:1, около 150:1, около 151:1, около 152:1, около 153:1, около 154:1, около 155:1, около 156:1, около 157:1, около 158:1, около 159:1, около 160:1, около 161:1, около 162:1, около 163:1, около 164:1, около 165:1, около 166:1, около 167:1, около 168:1, около 169:1, около 170:1, около 171:1, около 172:1, около 173:1, около 174:1, около 175:1, около 176:1, около 177:1, около 178:1, около 179:1, около 180:1, около 181:1, около 182:1, около 183:1, около 184:1, около 185:1, около 186:1, около 187:1, около 188:1, около 189:1, около 190:1, около 191:1, около 192:1, около 193:1, около 194:1, около 195:1, около 196:1, около 197:1, около 198:1, около 199:1 до около 200:1, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении от около 20:1 до около 80:1 (масс./масс.).
[00139] В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты представлены в полиплексе в соотношении около 0,1:1, около 0,2:1, около 0,3:1, около 0,4:1, около 0,5:1, около 0,6:1, около 0,7:1, около 0,8:1, около 0,9:1, около 1:1, около 2:1, около 3:1, около 4:1, около 5:1, около 6:1, около 7:1, около 8:1, около 9:1, около 10:1 около 11:1, около 12:1, около 13:1, около 14:1, около 15:1, около 16:1, около 17:1, около 18:1, около 19:1, около 20:1, около 21:1, около 22:1, около 23:1, около 24:1, около 25:1, около 26:1, около 27:1, около 28:1, около 29:1, около 30:1, около 31:1, около 32:1, около 33:1, около 34:1, около 35:1, около 36:1, около 37:1, около 38:1, около 39:1, около 40:1, около 41:1, около 42:1, около 43:1, около 44:1, около 45:1, около 46:1, около 47:1, около 48:1, около 49:1, около 50:1, около 51:1, около 52:1, около 53:1, около 54:1, около 55:1, около 56:1, около 57:1, около 58:1, около 59:1, около 60:1, около 61:1, около 62:1, около 63:1, около 64:1, около 65:1, около 66:1, около 67:1, около 68:1, около 69:1, около 70:1, около 71:1, около 72:1, около 73:1, около 74:1, около 75:1, около 76:1, около 77:1, около 78:1, около 79:1, около 80:1, около 81:1, около 82:1, около 83:1, около 84:1, около 85:1, около 86:1, около 87:1, около 88:1, около 89:1, около 90:1, около 91:1, около 92:1, около 93:1, около 94:1, около 95:1, около 96:1, около 97:1, около 98:1, около 99:1, около 100:1, около 101:1, около 102:1, около 103:1, около 104:1, около 105:1, около 106:1, около 107:1, около 108:1, около 109:1, около 110:1, около 111:1, около 112:1, около 113:1, около 114:1, около 115:1, около 116:1, около 117:1, около 118:1, около 119:1, около 120:1, около 121:1, около 122:1, около 123:1, около 124:1, около 125:1, около 126:1, около 127:1, около 128:1, около 129:1, около 130:1, около 131:1, около 132:1, около 133:1, около 134:1, около 135:1, около 136:1, около 137:1, около 138:1, около 139:1, около 140:1, около 141:1, около 142:1, около 143:1, около 144:1, около 145:1, около 146:1, около 147:1, около 148:1, около 149:1, около 150:1, около 151:1, около 152:1, около 153:1, около 154:1, около 155:1, около 156:1, около 157:1, около 158:1, около 159:1, около 160:1, около 161:1, около 162:1, около 163:1, около 164:1, около 165:1, около 166:1, около 167:1, около 168:1, около 169:1, около 170:1, около 171:1, около 172:1, около 173:1, около 174:1, около 175:1, около 176:1, около 177:1, около 178:1, около 179:1, около 180:1, около 181:1, около 182:1, около 183:1, около 184:1, около 185:1, около 186:1, около 187:1, около 188:1, около 189:1, около 190:1, около 191:1, около 192:1, около 193:1, около 194:1, около 195:1, около 196:1, около 197:1, около 198:1, около 199:1 или около 200:1. В некоторых вариантах осуществления полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении около 30:1 (масс./масс.).
[00140] В некоторых вариантах осуществления размер частиц стабилизированного полиплекса составляет менее, чем 2 мкм. В некоторых вариантах осуществления размер частиц стабилизированного полиплекса составляет менее, чем около 300 нм. В некоторых вариантах осуществления размер частиц стабилизированного полиплекса составляет около 50 нм, около 51 нм, около 52 нм, около 53 нм, около 54 нм, около 55 нм, около 56 нм, около 57 нм, около 58 нм, около 59 нм, около 60 нм, около 61 нм, около 62 нм, около 63 нм, около 64 нм, около 65 нм, около 66 нм, около 67 нм, около 68 нм, около 69 нм, около 70 нм, около 71 нм, около 72 нм, около 73 нм, около 74 нм, около 75 нм, около 76 нм, около 77 нм, около 78 нм, около 79 нм, около 80 нм, около 81 нм, около 82 нм, около 83 нм, около 84 нм, около 85 нм, около 86 нм, около 87 нм , около 88 нм, около 89 нм, около 90 нм, около 91 нм, около 92 нм, около 93 нм, около 94 нм, около 95 нм, около 96 нм, около 97 нм, около 98 нм, около 99 нм, около 100 нм, около 101 нм, около 102 нм, около 103 нм, около 104 нм, около 105 нм, около 106 нм, около 107 нм, около 108 нм, около 109 нм, около 110 нм, около 111 нм, около 112 нм , около 113 нм, около 114 нм, около 115 нм, около 116 нм, около 117 нм, около 118 нм, около 119 нм, около 120 нм, около 121 нм, около 122 нм, около 123 нм, около 124 нм, около125 нм, около 126 нм, около 127 нм, около 128 нм, около 129 нм, около 130 нм, около 131 нм, около 132 нм, около 133 нм, около 134 нм, около 135 нм, около 136 нм, около 137 нм , около 138 нм, около 139 нм, около 140 нм, около 141 нм, около 142 нм, около 143 нм, около 144 нм, около 145 нм, около 146 нм, около 147 нм, около 148 нм, около 149 нм, около 150 нм, около 151 нм, около 152 нм, около 153 нм, около 154 нм, около 155 нм, около 156 нм, около 157 нм, около 158 нм, около 159 нм, около 160 нм, около 161 нм, около 162 нм , около 163 нм, около 164 нм, около 165 нм, около 166 нм, около 167 нм, около 168 нм, около 169 нм, около 170 нм, около 171 нм, около 172 нм, около 173 нм, около 174 нм, около 175 нм, около 176 нм, около 177 нм, около 178 нм, около 179 нм, около 180 нм, около 181 нм, около 182 нм, около 183 нм, около 184 нм, около 185 нм, около 186 нм, около 187 нм, около 188 нм, около 189 нм, около 190 нм, около 191 нм, около 192 нм, около 193 нм, около 194 нм, около 195 нм, около 196 нм около 197 нм, около 198 нм, около 199 нм, около 200 нм, около 201 нм, около 202 нм, около 203 нм, около 204 нм, около 205 нм, около 206 нм, около 207 нм, около 208 нм, около 209 нм, около 210 нм, около 211 нм, около 212 нм, около 213 нм, около 214 нм, около 215 нм, около 216 нм, около 217 нм, около 218 нм, около 219 нм, около 220 нм, около 221 нм, около 222 нм, около 223 нм, около 224 нм, около 225 нм, около 226 нм, около 227 нм, около 228 нм, около 229 нм, около 230 нм, около 231 нм, около 232 нм, около 233 нм, около 234 нм, около 235 нм, около 236 нм, около 237 нм, около 238 нм, около 239 нм, около 240 нм, около 241 нм, около 242 нм, около 243 нм, около 244 нм, около 245 нм, около 246 нм, около 247 нм, около 248 нм, около 249 нм, около 250 нм, около 251 нм, около 252 нм, около 253 нм, около 254 нм, около 255 нм, около 256 нм, около 257 нм, около 258 нм, около 259 нм, около 260 нм, около 261 нм, около 262 нм, около 263 нм, около 264 нм, около 265 нм, около 266 нм, около 267 нм, около 268 нм, около 269 нм, около 270 нм, около 271 нм, около 272 нм, около 273 нм, около 274 нм, около 275 нм, около 276 нм, около 277 нм, около 278 нм, около 279 нм, около 280 нм, около 281 нм, около 282 нм, около 283 нм, около 284 нм, около 285 нм, около 286 нм, около 287 нм, около 288 нм, около 289 нм, около 290 нм, около 291 нм, около 292 нм, около 293 нм, около 294 нм, около 295 нм, около 296 нм, около 297 нм, около 298 нм, около 299 нм или около 300 нм. В некоторых вариантах осуществления стабилизированные полиплексы по настоящему изобретению имеют размер частиц от около 60 нм до около 250 нм. В некоторых вариантах осуществления стабилизированные полиплексы по настоящему изобретению имеют размер частиц от около 175 нм до около 250 нм.
[00141] В некоторых вариантах осуществления стабилизированный полиплекс является слабо положительно заряженным. В некоторых вариантах осуществления слабо положительно заряженным является дзета-потенциал от около 10 и 40 мВ.
[00142] В некоторых вариантах реализации стабилизированные полиплексы по настоящему изобретению имеют дзета-потенциал от около 0 мВ до около 100 мВ, включая около 0 мВ, около 1 мВ, около 2 мВ, около 3 мВ, около 4 мВ, около 5 мВ, около 6 мВ, около 7 мВ, около 8 мВ, около 9 мВ, около 10 мВ, около 11 мВ, около 12 мВ, около 13 мВ, около 14 мВ, около 15 мВ, около 16 мВ, около 17 мВ, около 18 мВ , около 19 мВ, около 20 мВ, около 21 мВ, около 22 мВ, около 23 мВ, около 24 мВ, около 25 мВ, около 26 мВ, около 27 мВ, около 28 мВ, около 29 мВ, около 30 мВ, около 31 мВ, около 32 мВ, около 33 мВ, около 34 мВ, около 35 мВ, около 36 мВ, около 37 мВ, около 38 мВ, около 39 мВ, около 40 мВ, около 41 мВ, около 42 мВ, около 43 мВ , около 44 мВ, около 45 мВ, около 46 мВ, около 47 мВ, около 48 мВ, около 49 мВ, около 50 мВ, около 51 мВ, около 52 мВ, около 53 мВ, около 54 мВ, около 55 мВ, около 56 мВ, около 57 мВ, около 58 мВ, около 59 мВ, около 60 мВ, около 61 мВ, около 62 мВ, около 63 мВ, около 64 мВ, около 65 мВ, около 66 мВ, около 67 мВ, около 68 мВ, около 69 мВ, около 70 мВ, около 71 мВ, около 72 мВ, около 73 мВ, около 74 мВ, около 75 мВ, около 76 мВ, около 77 мВ, около 78 мВ, около 78 мВ, около 79 мВ, около 80 мВ, около 81 мВ, около 82 мВ, около 83 мВ, около 84 мВ, около 85 мВ, около 86 мВ, около 87 мВ, около 88 мВ, около 89 мВ, около 90 мВ, около 91 мВ, около 92 мВ, около 93 мВ, около 94 мВ, около 95 мВ, около 96 мВ, около 97 мВ, около 98 мВ, около 99 мВ и около 100 мВ, включая все диапазоны между ними. В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал стабилизированного полиплекса составляет от около 30 мВ до около 34 мВ.
[00143] В некоторых вариантах осуществления стабилизированные полиплексы по настоящему изобретению имеют дзета-потенциал около 0 мВ, около 1 мВ, около 2 мВ, около 3 мВ, около 4 мВ, около 5 мВ, около 6 мВ, около 7 мВ, около 8 мВ, около 9 мВ, около 10 мВ, около 11 мВ, около 12 мВ, около 13 мВ, около 14 мВ, около 15 мВ, около 16 мВ, около 17 мВ, около 18 мВ, около 19 мВ, около 20 мВ, около 21 мВ, около 22 мВ, около 23 мВ, около 24 мВ, около 25 мВ, около 26 мВ, около 27 мВ, около 28 мВ, около 29 мВ, около 30 мВ, около 31 мВ, около 32 мВ, около 33 мВ, около 34 мВ, около 35 мВ, около 36 мВ, около 37 мВ , около 38 мВ, около 39 мВ, около 40 мВ, около 41 мВ, около 42 мВ, около 43 мВ, около 44 мВ, около 45 мВ, около 46 мВ, около 47 мВ, около 48 мВ, около 49 мВ, около 50 мВ, около 51 мВ, около 52 мВ, около 53 мВ, около 54 мВ, около 55 мВ, около 56 мВ, около 57 мВ, около 58 мВ, около 59 мВ, около 60 мВ, около 61 мВ, около 62 мВ, около 63 мВ, около 64 мВ, около 65 мВ, около 66 мВ, около 67 мВ, около 68 мВ, около 69 мВ, около 70 мВ, около 71 мВ, около 72 мВ, около 73 мВ, около 74 мВ, около 75 мВ, около 76 мВ, около 77 мВ, или около 78 мВ, около 78 мВ, около 79 мВ, около 80 мВ, около 81 мВ, около 82 мВ, около 83 мВ, около 84 мВ, около 85 мВ, около 86 мВ, около 87 мВ, около 88 мВ, около 89 мВ, около 90 мВ, около 91 мВ, около 92 мВ, около 93 мВ, около 94 мВ, около 95 мВ, около 96 мВ, около 97 мВ, около 98 мВ, около 99 или около 100 мВ.
[00144] В некоторых вариантах осуществления стабилизированный полиплекс имеет сферическую форму.
[00145] В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты полиплекса представляет собой плазмиду, наноплазмиду, нуклеиновую кислоту, миникольцо или систему редактирования гена. В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты полиплекса представляет собой плазмиду. В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты полиплекса представляет собой наноплазмиду. В некоторых вариантах осуществления наноплазмида содержит эукариотический трансген и бактериальный остов размером менее 0,5 т.п.н. В некоторых вариантах осуществления плазмида или наноплазмида представляют собой не имеющую маркера устойчивости к антибиотику плазмиду или не имеющую маркера устойчивости к антибиотику наноплазмиду. В некоторых вариантах осуществления плазмида или наноплазмида содержат маркер селекции сахарозы или маркер нонсенс-супрессора.
[00146] В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты полиплекса представляет собой систему редактирования генов. В некоторых вариантах осуществления система редактирования генов представляет собой (i) систему (Cas), (CRISPR)-ассоциированную с кластерными палиндромными повторами, разделенными регулярными промежутками; (ii) систему эффекторной нуклеазы, подобной активаторам транскрипции (TALEN - англ., transcription activator-like effector nuclease); или (iii) систему нуклеазы с цинковыми пальцами (ZFN - англ., zinc finger nuclease).
[00147] В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты представляет собой РНКи-индуцирующую молекулу. РНКи-индуцирующая молекула может быть выбрана из группы, состоящей из малой интерферирующей РНК (миРНК), длинной двухцепочечной РНК (дцРНК), короткой шпилечной РНК (кшРНК) и микроРНК.
[00148] В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты содержит тканеспецифичный промотор.
[00149] В некоторых вариантах осуществления компонент нуклеиновой кислоты содержит ген, ассоциированный с генетическим нарушением или заболеванием. Такое генетическое нарушение или заболевание могут быть вызваны мутацией одного или большего количества генов, которая приводит к пониженной, отсутствующей или дисфункциональной экспрессии белка. В некоторых вариантах осуществления ген выбирают из группы, состоящей из COL7A1, LAMB3, ADA, SERPINA1, CFTR, HTT, NF1, PHA, HBS, FERMT1, KRT14, DSP, SPINK5 и FLG.
[00150] В некоторых вариантах осуществления ген представляет собой COL7A1, а генетическое нарушение или заболевание представляет собой форму буллезного эпидермолиза. Буллезный эпидермолиз включает в себя дистрофический буллезный эпидермолиз (аутосомно-рецессивный), дистрофический буллезный эпидермолиз (локализованная форма), пруригинозный буллезный эпидермолиз, буллезный эпидермолиз (претибиальный), простой буллезный эпидермолиз (тип Доулинга-Меара), простой буллезный эпидермолиз (тип Кебнера), простой буллезный эпидермолиз (рецессивный 1), простой буллезный эпидермолиз (тип Вебера-Кокейна), буллезный эпидермолиз (летальный акантолитический). В некоторых вариантах осуществления генетическое нарушение или генетическое заболевание представляет собой дефицит аденозиндезаминазы (ADA), дефицит альфа-1-антитрипсина, муковисцидоз, болезнь Хантингтона, нейрофиброматоз типа 1, фенилкетонурию, серповидно-клеточную анемию, спорадический миозит с тельцами включения, мышечную дистрофию Дюшенна, синдром Киндлера, пограничный буллезный эпидермолиз, пигментную ретикулярную дерматопатию, синдром Негели-Франческетти-Ядассона, синдром Нетертона, обыкновенный ихтиоз, атопический дерматит, синдром Ушера, синдром Элерса-Данлоса, гомозиготную семейную гиперхолестеринемию (HoFH) или болезнь Крона.
[00151] В некоторых вариантах осуществления последовательность гена оптимизирована для максимальной экспрессии белка после доставки полиплекса в клетку.
Фармацевтические композиции
[00152] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество одного или более полиплексов, описанных в данном документе, в комбинации с криопротектором. В некоторых вариантах осуществления криопротектор выбран из группы, состоящей из глюкозы, сахарозы, трегалозы, лактозы, маннита, сорбита, аэросила (коллоидного диоксида кремния), мальтозы, поливинилпирролидона, фруктозы, декстрана, глицерина, поливинилового спирта, глицина, гидроксипропил-β-циклодекстрина и желатина. В некоторых вариантах осуществления криопротектор выбирают из группы, состоящей из трегалозы, сахарозы, глюкозы и маннита. В некоторых вариантах осуществления криопротектор представляет собой сахарозу.
[00153] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция представляет собой лиофил. В некоторых вариантах осуществления лиофил содержит эффективное количество одного или более полиплексов, описанных в данном документе, в комбинации с фармацевтически приемлемым наполнителем. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый наполнитель содержит криопротектор. В некоторых вариантах осуществления криопротектор выбирают из группы, состоящей из трегалозы, сахарозы, глюкозы и маннита. В некоторых вариантах осуществления криопротектор представляет собой сахарозу.
[00154] В некоторых вариантах осуществления способ включает объединение одного или большего количества полиплексов, описанных в данном документе, в подходящем растворителе. В некоторых вариантах осуществления подходящий растворитель выбирают из группы, состоящей из воды, диметилсульфоксида и их смесей. В некоторых вариантах осуществления подходящий растворитель содержит воду.
[00155] В некоторых вариантах осуществления способ включает:
(a) объединение одного или более полиплексов, описанных в данном документе, с подходящим растворителем;
(b) добавление одного или более фармацевтически приемлемых наполнителей к смеси стадии (а) и
(c) лиофилизацию смеси стадии (b) для получения лиофила.
[00156] В некоторых вариантах осуществления один или более фармацевтически приемлемых наполнителей стадии (b) содержит криопротектор. В некоторых вариантах осуществления концентрация криопротектора составляет от около 1% до около 20%, включая около 2%, около 3%, около 4%, около 5%, около 6%, около 7%, около 8%, около 9%, около 10%, около 11%, около 12%, около 13%, около 14% , около 15%, около 16%, около 17%, около 18% и около 19%, включая все диапазоны между ними, от массы смеси стадии (b). В некоторых вариантах осуществления концентрация криопротектора составляет около 1%, около 2%, около 3%, около 4%, около 5%, около 6%, около 7%, около 8%, около 9%, около 10%, около 11%, около 12%, около 13%, около 14%, около 15%, около 16%, около 17%, около 18%, около 19%, или около 20% от массы смеси стадии (b). В некоторых вариантах осуществления концентрация криопротектора составляет около 1% от массы смеси стадии (b). В некоторых вариантах осуществления концентрация криопротектора составляет около 3% от массы смеси стадии (b). В некоторых вариантах осуществления концентрация криопротектора составляет около 5% от массы смеси стадии (b).
Примеры
[00157] Следующие примеры приведены для иллюстрации настоящего изобретения и не должны толковаться как ограничивающие его. В этих примерах все части и проценты являются массовыми, если не указано иное. Сокращения в примерах приведены ниже.
Пример 1.
[00158] Синтез иллюстративного сверхразветвленного полимера PAE (HPAE): 0,28 г триметилолпропантриакрилата (TMPTA), 0,29 г диакрилата этоксилата бисфенола (BE) и 0,18 г 4-амино-1-бутанола (S4) растворяют в 7,5 мл ДМСО и проводят реакцию при 90 °С. Как только молекулярная масса находится в диапазоне 5000-7000 Да, добавляют 0,288 г 3-морфолинопропиламина (MPA), растворенного в 2,88 мл ДМСО для ограничения роста молекулярной массы основного полимера с концевыми акрилатными группами при комнатной температуре в течение 24 часов. Полимерный продукт трижды осаждают диэтиловым эфиром, сушат под вакуумом в течение 24 ч и затем хранят при -20°C для последующих исследований.
[00159] Приготовление полиплекса: полимер HPAE сначала растворяют в ДМСО до концентрации около 100 мкг/мкл. Соответственно массовому соотношению полимера HPAE/ДНК 30:1 (масс./масс.), необходимое количество исходного раствора полимера HPAE и раствора наноплазмиды COL7A1 с концентрацией 4 мг/мл разбавляют натрий-ацетатным буфером (0,025 M, pH=5,2) до необходимого объема. Затем 10 мкл раствора HPAE и 10 мкл раствора ДНК распределяют через отдельные насадки в смесительную камеру, где два раствора приводят в контакт и смешивают. Вновь образовавшаяся капля полиплекса течет в слабо отрицательно заряженный канал для жидкости, содержащий буфер силиконовое масло/ацетат натрия. Полиплексы перемещаются по каналу для жидкости в течение времени пребывания приблизительно 10 минут со скоростью в диапазоне от 0,1 до 1 м/с. Полиплексы с размером и зарядом, подходящими для трансдермального введения, замораживают и лиофилизируют для повторного суспендирования для терапевтического использования.
ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ:
1. Способ создания одного или нескольких полиплексов, включающий:
(а) обеспечение:
i. полимера в первом потоке жидкости;
ii. компонента нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости;
(b) приведение в контакт полимера в первом потоке жидкости с компонентом нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости с образованием полиплекса, имеющего размер и заряд, которые подходят для терапевтического введения; а также
(c) выделение полиплекса для получения стабилизированного полиплекса.
2. Способ по варианту осуществления 1, в котором выделение включает транспортировку полиплекса по каналу для жидкости в течение времени пребывания, достаточного для стабилизации полиплекса.
3. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, дополнительно включающий оценку и сбор одного или нескольких полиплексов.
4. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором первый поток жидкости и первые потоки жидкости являются растворами.
5. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, дополнительно включающий прохождение первого потока жидкости и второго потока жидкости через устройство регулирования потока со скоростью, которая обеспечивает полиплекс, имеющий размер и заряд, которые подходят для трансдермального введения.
6. Способ по варианту осуществления 5, в котором устройство регулирования потока выбирают из группы, состоящей из поршневого насоса прямого вытеснения, шприцевого насоса, нагнетательного насоса и гравитационного насоса.
7. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором на стадии приведения в контакт используется насадка, микрожидкостное смесительное устройство, сенсорная трубка, жидкостный мостик, вертикальный смеситель, вращающаяся двойная трубка или распылитель.
8. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором стадия приведения в контакт происходит в воздушном зазоре или в жидкости-носителе внутри канала для жидкости.
9. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором стабилизированный полиплекс заряжен слабо положительно.
10. Способ по любому из вариантов осуществления 2-9, в котором канал для жидкости заряжен слабо отрицательно.
11. Способ по варианту осуществления 10, в котором канал для жидкости содержит водную фазу, окруженную жидкостью-носителем.
12. Способ по варианту осуществления 11, в котором плотность жидкости-носителя имеет значение в диапазоне от около 1300 до около 2000 кг/м3 , а плотность водной фазы имеет значение в диапазоне от около 900 до 1200 кг/м3.
13. Способ по варианту осуществления 12, в котором водная фаза содержит натрий-ацетатный буфер.
14. Способ по любому варианту осуществления 11, в котором текучая среда-носитель представляет собой масло.
15. Способ по варианту осуществления 14, в котором масло выбирают из группы, включающей: (a) Fluorinert FC-40 (фторуглеродное масло), (b) силиконовое масло, (c) минеральное масло, (d) перфторированное аминное масло,(е) фенилметилполисилоксан и (f) масло на основе фенилметилполисилоксана и добавки.
16. Способ по варианту осуществления 15, в котором добавка имеет число гидрофильно-липофильного баланса в диапазоне от 2 до 8.
17. Способ по варианту осуществления 15, в котором добавка представляет собой полисорбат.
18. Способ по варианту осуществления 17, в котором добавка полисорбата представляет собой SPAN 80, SPAN 65 или Tween 20.
19. Способ по варианту осуществления 15, в котором концентрация добавки в водной фазе составляет от около 0,001% до около 10% (масс./масс.%).
20. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором выделение включает разделение полиплексов в канале для жидкости.
21. Способ по варианту осуществления 20, в котором пространство между разделенными полиплексами регулируется скоростью жидкости в канале.
22. Способ по любому из вариантов осуществления 2-21, в котором время пребывания составляет от около 1 секунды до около 20 минут.
23. Способ по варианту осуществления 22, в котором время пребывания составляет около 10 минут.
24. Способ по любому из вариантов осуществления 3-23, в котором оценка включает:
измерение показателя преломления полиплексов в канале для жидкости; и
необязательно удаление полиплексов с показателем преломления, не соответствующим спецификации.
25. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, дополнительно включающий фильтрование, промывку, замораживание и/или лиофилизацию стабилизированных полиплексов.
26. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер заряжен положительно, а компонент нуклеиновой кислоты заряжен отрицательно.
27. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении от около 0,1:1 до около 200:1 (масс./масс.).
28. Способ по варианту осуществления 27, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении от около 20:1 до около 80:1 (масс./масс.).
29. Способ по варианту осуществления 27, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении около 30:1 (масс./масс.).
30. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер представляет собой HPAE.
31. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении от около 0,1:1 до около 200:1 (масс./масс.).
32. Способ по варианту осуществления 31, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении от около 20:1 до около 80:1 (масс./масс.).
33. Способ по варианту осуществления 31, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты присутствуют в полиплексе в соотношении около 30:1 (масс./масс.).
34. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором размер частиц стабилизированного полиплекса составляет менее примерно 2 мкм.
35. Способ по варианту осуществления 34, в котором размер частиц стабилизированного полиплекса составляет от около 60 нм до около 250 нм.
36. Способ по варианту осуществления 34, в котором размер частиц стабилизированного полиплекса составляет от около 175 нм до около 250 нм.
37. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором дзета-потенциал стабилизированного полиплекса составляет от около 0 мВ до около 100 мВ.
38. Способ по варианту осуществления 37, в котором дзета-потенциал стабилизированного полиплекса составляет от около 30 мВ до около 34 мВ.
39. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором стабилизированный полиплекс имеет сферическую форму.
40. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер имеет MW около 10 кДа.
41. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором компонент нуклеиновой кислоты представляет собой плазмиду, наноплазмиду, нуклеиновую кислоту, миникольцо или систему редактирования генов.
42. Способ по варианту осуществления 41, в котором компонент нуклеиновой кислоты включает ген, ассоциированный с генетическим заболеванием или нарушением.
43. Способ по варианту осуществления 42, в котором генетическое заболевание или нарушение вызвано мутацией в одном или нескольких генах, которая приводит к низкой, отсутствующей или дисфункциональной экспрессии белка.
44. Способ по варианту осуществления 43, в котором ген выбирают из группы, состоящей из COL7A1, LAMB3, ADA, SERPINA1, CFTR, HTT, NF1, PHA, HBS, FERMT1, KRT14, DSP, SPINK5 и FLG.
45. Способ по варианту осуществления 44, в котором ген представляет собой COL7A1, а генетическое заболевание или нарушение представляет собой форму буллезного эпидермолиза.
46. Способ по варианту осуществления 45, в котором последовательность гена оптимизирована для максимальной экспрессии белка после доставки полиплекса в клетку.
47. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, меньше, чем около 0,5.
48. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, от около 0,2 до около 0,5.
49. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер имеет PDI от около 1,01 до около 8,0.
50. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер имеет PDI около 2,5.
51. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер имеет M W по меньшей мере 3 кДа.
52. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер имеет M W между около 5 кДа и 50 кДа.
53. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер имеет M W около 10 кДа.
54. Способ по любому из предыдущих вариантов осуществления, в котором полимер включает:
(a) ;
(b) ; и
(c) , где
J представляет собой O и Z представляет собой , где x равен 1-1000.
R1 представляет собой и
R2 представляет собой .
Ссылки
[1] L. Naldini, Gene therapy returns to centre stage. Nature 2015.
[2] H. Yin, R. L. Kanasty, A. A. Eltoukhy, A. J. Vegas, J. R. Dorkin, D. G. Anderson, Non-viral vectors for gene-based therapy. Nat. Rev. Genet. 2014.
[3] M. Foldvari, D. W. Chen, N. Nafissi, D. Calderon, L. Narsineni, A. Rafiee, J. Control. Release 2016.
[4] H. Lv, S. Zhang, B. Wang, S. Cui, J. Yan, Toxicity of cationic lipids and cationic polymers in gene delivery. J. Control. Release 2006.
[5] C. Tros de Ilarduya, Y. Sun, N. Düzgüneş, Gene delivery by lipoplexes and polyplexes.
Eur. J. Pharm. Sci. 2010, pages 159-170.
Claims (50)
1. Способ создания одного или более полиплексов, включающий:
(а) обеспечение:
i) полимера, представляющего собой сильно разветвленный поли(аминоэфир) (HPAE), в первом потоке жидкости;
ii) компонента нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости;
(b) приведение в контакт полимера в первом потоке жидкости с компонентом нуклеиновой кислоты во втором потоке жидкости с образованием полиплекса, имеющего размер и заряд, которые подходят для терапевтического введения; а также
(c) выделение полиплекса для получения стабилизированного полиплекса.
2. Способ по п. 1, в котором выделение включает транспортировку полиплекса по каналу для жидкости в течение времени пребывания, достаточного для стабилизации полиплекса.
3. Способ по п. 1 или 2, дополнительно включающий оценку и сбор одного или более полиплексов.
4. Способ по п. 1, в котором первый поток жидкости и второй поток жидкости являются растворами.
5. Способ по п. 1, дополнительно включающий прохождение первого потока жидкости и второго потока жидкости через устройство регулирования потока при скорости, которая обеспечивает полиплекс, имеющий размер и заряд, которые подходят для трансдермального введения.
6. Способ по п. 5, в котором устройство регулирования потока выбирают из группы, состоящей из поршневого насоса прямого вытеснения, шприцевого насоса, нагнетательного насоса и гравитационного насоса.
7. Способ по п. 1, в котором на стадии приведения в контакт используется насадка, микрожидкостное смесительное устройство, сенсорная трубка, жидкостный мостик, вертикальный смеситель, вращающаяся двойная трубка или распылитель.
8. Способ по п. 1, в котором стадия приведения в контакт происходит в воздушном зазоре или в жидкости-носителе внутри канала для жидкости.
9. Способ по п. 1, в котором стабилизированный полиплекс заряжен слабо положительно.
10. Способ по п. 2, в котором канал для жидкости заряжен слабо отрицательно.
11. Способ по п. 10, в котором канал для жидкости содержит водную фазу, окруженную жидкостью-носителем.
12. Способ по п. 11, в котором плотность жидкости-носителя имеет значение в диапазоне от около 1300 до около 2000 кг/м3, а плотность водной фазы имеет значение в диапазоне от около 900 до 1200 кг/м3.
13. Способ по п. 12, в котором водная фаза содержит натрий-ацетатный буфер.
14. Способ по п. 11, в котором жидкость-носитель представляет собой масло.
15. Способ по п. 14, в котором масло выбирают из группы, включающей: (a) Fluorinert FC-40 (фторуглеродное масло), (b) силиконовое масло, (c) минеральное масло, (d) перфторированное аминное масло, (е) фенилметилполисилоксан и (f) масло на основе фенилметилполисилоксана и добавки.
16. Способ по п. 15, в котором добавка имеет число гидрофильно-липофильного баланса в диапазоне от 2 до 8.
17. Способ по п. 15, в котором добавка представляет собой полисорбат.
18. Способ по п. 17, в котором добавка полисорбата представляет собой SPAN 80, SPAN 65 или Tween 20.
19. Способ по п. 15, в котором концентрация добавки в водной фазе составляет от около 0,001% до около 10% (масс./масс.%).
20. Способ по п. 1, в котором выделение включает разделение полиплексов в канале для жидкости.
21. Способ по п. 20, в котором пространство между разделенными полиплексами регулируется скоростью жидкости в канале.
22. Способ по п. 2, в котором время пребывания составляет от около 1 с до около 20 мин.
23. Способ по п. 22, в котором время пребывания составляет около 10 мин.
24. Способ по п. 3, в котором оценка включает:
измерение показателя преломления полиплексов в канале для жидкости; и
необязательно удаление полиплексов с показателем преломления, не соответствующим спецификации.
25. Способ по п. 1, дополнительно включающий фильтрование, промывку, замораживание и/или лиофилизацию стабилизированных полиплексов.
26. Способ по п. 1, в котором полимер заряжен положительно, а компонент нуклеиновой кислоты заряжен отрицательно.
27. Способ по п. 1, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении от около 0,1:1 до около 200:1 (масс./масс.).
28. Способ по п. 27, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении от около 20:1 до около 80:1 (масс./масс.).
29. Способ по п. 27, в котором полимер и компонент нуклеиновой кислоты смешивают в соотношении около 30:1 (масс./масс.).
30. Способ по п. 1, в котором компонент нуклеиновой кислоты представляет собой плазмиду, наноплазмиду, нуклеиновую кислоту, мини-кольцо или систему редактирования генов.
31. Способ по п. 30, в котором компонент нуклеиновой кислоты содержит ген, ассоциированный с генетическим заболеванием или нарушением.
32. Способ по п. 31, в котором компонент нуклеиновой кислоты, используемый в способе, содержит ген, связанный с генетическим заболеванием или нарушением, вызванными мутацией в одном или более генах, которая приводит к низкой, отсутствующей или дисфункциональной экспрессии белка.
33. Способ по п. 32, в котором компонент нуклеиновой кислоты, используемый в способе, содержит ген, выбранный из группы, состоящей из COL7A1, LAMB3, ADA, SERPINA1, CFTR, HTT, NF1, PHA, HBS, FERMT1, KRT14, DSP, SPINK5 и FLG.
34. Способ по п. 33, в котором компонент нуклеиновой кислоты, используемый в способе, содержит ген, представляющий собой COL7A1, а генетическое заболевание или нарушение представляет собой форму буллезного эпидермолиза.
35. Способ по п. 34, в котором последовательность гена, содержащаяся в компоненте нуклеиновой кислоты, используемом в способе, оптимизирована для максимальной экспрессии белка после доставки полиплекса в клетку.
36. Способ по п. 1, в котором полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, меньше чем около 0,5.
37. Способ по п. 1, в котором полимер имеет значение параметра альфа, определенное из уравнения Марка - Хаувинка, от около 0,2 до около 0,5.
38. Способ по п. 1, в котором полимер имеет PDI (индекс полидисперсности) от около 1,01 до около 8,0.
39. Способ по п. 1, в котором полимер имеет PDI от около 3,0 до около 5,8.
40. Способ по п. 1, в котором полимер имеет MW по меньшей мере 3 кДа.
41. Способ по п. 1, в котором полимер имеет MW между около 5 кДа и 50 кДа.
42. Способ по п. 1, в котором полимер имеет MW между около 19 кДа и 25 кДа.
43. Способ по п. 1, в котором дзета-потенциал стабилизированного полиплекса составляет от около 30 мВ до около 45 мВ.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/786,050 | 2018-12-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2021122218A RU2021122218A (ru) | 2023-01-30 |
| RU2821521C2 true RU2821521C2 (ru) | 2024-06-25 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016020474A1 (en) * | 2014-08-06 | 2016-02-11 | National University Of Ireland, Galway | HYPERBRANCHED POLY( ß -AMINO ESTER) FOR GENE THERAPY |
| RU2670512C2 (ru) * | 2013-09-23 | 2018-10-23 | Ренссилэйер Политекник Инститьют | Доставка генов, опосредованная наночастицами, геномная коррекция и лиганд-направленная модификация в различных клеточных популяциях |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2670512C2 (ru) * | 2013-09-23 | 2018-10-23 | Ренссилэйер Политекник Инститьют | Доставка генов, опосредованная наночастицами, геномная коррекция и лиганд-направленная модификация в различных клеточных популяциях |
| WO2016020474A1 (en) * | 2014-08-06 | 2016-02-11 | National University Of Ireland, Galway | HYPERBRANCHED POLY( ß -AMINO ESTER) FOR GENE THERAPY |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| KASPER J. C. ET AL. THE ESTABLISHMENT OF AN UP-SCALED MICRO-MIXER METHOD ALLOWS THE STANDARDIZED AND REPRODUCIBLE PREPARATION OF WELL-DEFINED PLASMID/LPEI POLYPLEXES // EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACEUTICS AND BIOPHARMACEUTICS. - 2011. - Т. 77. - С. 182-185. NAEINI A. T. ET AL. AUTOMATED IN-LINE MIXING SYSTEM FOR LARGE SCALE PRODUCTION OF CHITOSAN-BASED POLYPLEXES //JOURNAL OF COLLOID AND INTERFACE SCIENCE. - 2017. - Т. 500. - С. 253-263. * |
| KOSTINA N. Y., GORSHKOVA M. Y., IZUMRUDOV V. A. WATER-SOLUBLE POLYPLEXES OF MODIFIED CHITOSAN //POLYMER SCIENCE SERIES A. - 2011. - Т. 53. - С. 947. LV H. ET AL. TOXICITY OF CATIONIC LIPIDS AND CATIONIC POLYMERS IN GENE DELIVERY //JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE. - 2006. - Т. 114. - С. 100-109. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhou et al. | The effect of conjugation to gold nanoparticles on the ability of low molecular weight chitosan to transfer DNA vaccine | |
| KR101288729B1 (ko) | 약물 전달용 중합체성 마이셀 | |
| Jiang et al. | A “top-down” approach to actuate poly (amine-co-ester) terpolymers for potent and safe mRNA delivery | |
| Tang et al. | Synthetic multi-layer nanoparticles for CRISPR-Cas9 genome editing | |
| EP2964244B1 (en) | Modified poly(beta-amino ester)s for drug delivery | |
| Fay et al. | Gene delivery using dimethyldidodecylammonium bromide-coated PLGA nanoparticles | |
| EP1309904A1 (en) | Improved poloxamer and poloxamine compositions for nucleic acid delivery | |
| JP2008537943A5 (ru) | ||
| US20180000968A1 (en) | Poly(Beta-Amino Ester)s With Additives for Drug Delivery | |
| EP3423106B1 (en) | Biodegradable activated polymers for therapeutic delivery | |
| KR20230133986A (ko) | 에스테르-연결된 아세탈을 포함하는 나노물질 | |
| Mandke et al. | Cationic nanomicelles for delivery of plasmids encoding interleukin-4 and interleukin-10 for prevention of autoimmune diabetes in mice | |
| Xia et al. | Polyglutamic acid based polyanionic shielding system for polycationic gene carriers | |
| KR20230152014A (ko) | 에어로졸 형성을 위한 제형 및 핵산 전달을 위한 에어로졸 | |
| RU2821521C2 (ru) | Способы образования полиплексов | |
| Chen et al. | Cationic polymeric nanoformulation: Recent advances in material design for CRISPR/Cas9 gene therapy | |
| US20220096660A1 (en) | Methods for forming polyplexes | |
| CN100553612C (zh) | 一种c-FLIP反义寡核苷酸纳米粒的制备方法 | |
| CN115671045B (zh) | 非肝靶向的核酸纳米制剂及其制备方法和应用 | |
| Zhang et al. | Efficacy and mechanism of poloxamine‐assisted polyplex transfection | |
| RU2815001C2 (ru) | Составы на основе липидов для доставки рнк | |
| Choi et al. | Effects of water-soluble tacrolimus-PEG conjugate on insulin-dependent diabetes mellitus and systemic lupus erythematosus | |
| Wang et al. | Preparation and Evaluation of Polymeric Hybrid Micelles to Co-deliver Small Molecule Drug and siRNA for Rheumatoid Arthritis Therapy | |
| WO2016168469A1 (en) | Fatty acid analogs and methods of use thereof | |
| Sujeevan | Lipid-based nanoparticles and their recent advances |