RU2820581C1 - Complex containing non-denatured type ii collagen and chitosan oligosaccharide, and method for production thereof - Google Patents
Complex containing non-denatured type ii collagen and chitosan oligosaccharide, and method for production thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2820581C1 RU2820581C1 RU2023116493A RU2023116493A RU2820581C1 RU 2820581 C1 RU2820581 C1 RU 2820581C1 RU 2023116493 A RU2023116493 A RU 2023116493A RU 2023116493 A RU2023116493 A RU 2023116493A RU 2820581 C1 RU2820581 C1 RU 2820581C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- collagen
- chitosan oligosaccharide
- type
- undenatured type
- activating agent
- Prior art date
Links
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 title claims abstract description 73
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 title claims abstract description 73
- RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N chitotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](N)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)[C@@H](CO)O1 RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N 0.000 title claims abstract description 47
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 31
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 10
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims abstract description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 5
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 11
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 3
- 229930014669 anthocyanidin Natural products 0.000 claims description 3
- 235000008758 anthocyanidins Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 claims description 3
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims description 3
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 claims description 2
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 claims description 2
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 claims description 2
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001452 anthocyanidin derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 8
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 7
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 7
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- KJXSIXMJHKAJOD-LSDHHAIUSA-N (+)-dihydromyricetin Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)=O)O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 KJXSIXMJHKAJOD-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 235000003687 soy isoflavones Nutrition 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 150000001453 anthocyanidins Chemical class 0.000 description 2
- 229940055416 blueberry extract Drugs 0.000 description 2
- 235000019216 blueberry extract Nutrition 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N daidzein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KQILIWXGGKGKNX-UHFFFAOYSA-N dihydromyricetin Natural products OC1C(=C(Oc2cc(O)cc(O)c12)c3cc(O)c(O)c(O)c3)O KQILIWXGGKGKNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 210000001361 achilles tendon Anatomy 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 description 1
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 description 1
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 description 1
- 150000004636 anthocyanins Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000007240 daidzein Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001700 effect on tissue Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000004837 gut-associated lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940088592 immunologic factor Drugs 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
Abstract
Description
Область техникиField of technology
Настоящая заявка относится к способу получения белковых комплексов в биотехнологии, в частности к комплексу, содержащему неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана, и способу его получения.This application relates to a method for producing protein complexes in biotechnology, in particular to a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide, and a method for its production.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯBACKGROUND OF THE INVENTION
Коллаген представляет собой природный биополимер с тройной спиральной структурой, экспрессируемый клетками животных. Как основной компонент внеклеточного матрикса, он содержится почти во всех тканях, составляя приблизительно одну треть от общего количества белка у млекопитающих, и широко распространен в коже, ахилловом сухожилии, хрящах и других соединительных тканях животных. Коллаген выполняет опорную и соединительную функцию в тканях и влияет на клеточную дифференциацию, пролиферацию, миграцию и адгезию. Он также оказывает значительное влияние на морфологию тканей, механическую прочность и метаболизм в тканях. В настоящее время у млекопитающих идентифицировано двадцать восемь различных типов коллагенов. Различные типы коллагенов демонстрируют различные особенности распределения, формы существования, синтеза и пути метаболизма в организме животных.Collagen is a natural biopolymer with a triple helical structure expressed by animal cells. As a major component of the extracellular matrix, it is found in almost all tissues, accounting for approximately one-third of the total protein in mammals, and is widely distributed in the skin, Achilles tendon, cartilage and other connective tissues of animals. Collagen performs a supporting and connecting function in tissues and affects cell differentiation, proliferation, migration and adhesion. It also has a significant effect on tissue morphology, mechanical strength and tissue metabolism. Twenty-eight different types of collagens have now been identified in mammals. Different types of collagens exhibit different features of distribution, form of existence, synthesis and metabolic pathways in animals.
Коллаген II типа преимущественно содержится в таких тканях, как суставной хрящ и кость, и в основном секретируется хондроцитами у животных. Коллаген II типа представляет собой фибриллообразующий коллаген, который переплетается в прочную сетчатую структуру внутри организма для поддержания структурной целостности хряща и обеспечения натяжения и несущей способности хрящевой ткани. Коллаген II типа обладает специфическими молекулярными сигналами распознавания, так что он может способствовать адгезии, пролиферации и дифференциации хондроцитов, и в большей степени, чем коллаген I типа, способствует формированию фенотипа хондроцитов и поддержанию структуры. Нарушения в экспрессии или метаболизме коллагена II типа, а также денатурация его нативной структуры могут привести к различным заболеваниям.Type II collagen is predominantly found in tissues such as articular cartilage and bone and is primarily secreted by chondrocytes in animals. Type II collagen is fibril-forming collagen that is woven into a strong mesh-like structure within the body to maintain the structural integrity of cartilage and provide tension and load-bearing capacity to cartilage tissue. Type II collagen has specific molecular recognition signals such that it can promote chondrocyte adhesion, proliferation and differentiation, and, to a greater extent than type I collagen, contributes to the formation of chondrocyte phenotype and structure maintenance. Disturbances in the expression or metabolism of type II collagen, as well as denaturation of its native structure, can lead to various diseases.
Ревматоидный артрит представляет собой заболевание, ассоциированное с аутоиммунным ответом в отношении коллагена II типа, которое представляет собой хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся, главным образом, синовитом суставов. Ключ к его патологическому механизму лежит в рецидивирующем воспалении суставов. Патологические особенности ревматоидного артрита в основном включают пролиферацию клеток синовиальной выстилки, обильную инфильтрацию воспалительных клеток в интерстиции, неоваскуляризацию и образование, а так же разрушение хрящевой и костной ткани. Ревматоидный артрит, который представляет собой иммунное заболевание, может вызывать различные заболевания человеческого организма, богатого коллагеном II типа.Rheumatoid arthritis is a disease associated with an autoimmune response to type II collagen, which is a chronic autoimmune disease characterized primarily by joint synovitis. The key to its pathological mechanism lies in recurrent inflammation of the joints. The pathological features of rheumatoid arthritis mainly include proliferation of synovial lining cells, abundant infiltration of inflammatory cells into the interstitium, neovascularization and formation, as well as destruction of cartilage and bone tissue. Rheumatoid arthritis, which is an immune disease, can cause various diseases in the human body, which is rich in type II collagen.
Было показано, что пероральное введение коллагена II типа имеет значительное влияние на предупреждение и лечение ревматоидного артрита путем стимулирования иммунной толерантности. Иммунные детерминанты коллагена II типа могут связываться с антигенами в организме, образуя комплексы, которые затем представлены на поверхности антигенпрезентирующих клеток, через секреторный путь для распознавания поверхностными рецепторами рецептор-специфических иммуннозависимых клеток для образования комплекса. Специфические иммуннозависимые клетки активируются, пролиферируют и секретируют различные иммунные факторы для инициирования иммунного ответа, что приводит к специфическому иммунитету местных лимфоидных тканей, связанных с кишечником, и, таким образом, подавляется системный иммунный ответ, представляющий собой форму периферической иммунологической толерантности.Oral administration of type II collagen has been shown to have a significant effect on the prevention and treatment of rheumatoid arthritis by promoting immune tolerance. Immune determinants of type II collagen can bind to antigens in the body, forming complexes that are then presented on the surface of antigen-presenting cells, through the secretory pathway for recognition by surface receptors of receptor-specific immune cells to form the complex. Specific immune-dependent cells are activated, proliferate and secrete various immune factors to initiate an immune response, resulting in specific immunity of local gut-associated lymphoid tissues and thus suppressing the systemic immune response, which is a form of peripheral immunological tolerance.
Традиционный коллаген II типа при пероральном введении может подвергаться деградации в желудке, что приводит к снижению скорости целевого высвобождения в кишечнике. Кроме того, распределение аминокислот на поверхности нативного коллагена II типа преимущественно обеспечивает отрицательный заряд, что препятствует его фагоцитозу клетками на поверхности кишечника. В результате эффективность традиционного коллагена II типа в пероральной форме часто ограничена. Повышение коэффициента целевого высвобождения неденатурированного коллагена II типа в кишечнике может увеличить скорость фагоцитоза клетками кишечника через соответствующие пути и, таким образом, повысить терапевтическую эффективность.Traditional type II collagen, when administered orally, may be subject to degradation in the stomach, resulting in a reduced rate of target release in the intestine. In addition, the distribution of amino acids on the surface of native type II collagen provides a predominantly negative charge, which prevents its phagocytosis by cells on the intestinal surface. As a result, the effectiveness of traditional type II collagen in oral form is often limited. Increasing the target release rate of undenatured type II collagen in the intestine may increase the rate of phagocytosis by intestinal cells through appropriate pathways and thus improve therapeutic efficacy.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯBRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION
В ответ на ограничение терапевтического эффекта при артрите, вызванное низким коэффициентом высвобождения и низкой скоростью фагоцитоза традиционного применяемого неденатурированного коллагена II типа, в настоящей заявке представлен комплекс, содержащий неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана, и способ его получения.In response to the limited therapeutic effect in arthritis caused by the low release rate and low phagocytosis rate of conventionally used undenatured type II collagen, the present application presents a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide, and a method for its preparation.
Согласно аспекту настоящей заявки, представлен способ получения комплекса, содержащего неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана, который включает следующие стадии:According to an aspect of the present application, a method is provided for preparing a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide, which includes the following steps:
(1) активация: смешивание определенного количества порошка или твердых частиц, содержащих неденатурированный коллаген II типа, с активирующим средством и выдерживание смеси при температуре, составляющей от 0°С до 80°С, в течение от 1 мин. до 300 мин.;(1) activation: mixing a certain amount of powder or solid particles containing undenatured type II collagen with an activating agent and maintaining the mixture at a temperature ranging from 0°C to 80°C for 1 min. up to 300 min;
(2) просеивание: просеивание смеси, полученной на стадии (1), с удалением непрореагировавшего активирующего средства;(2) sieving: sieving the mixture obtained in step (1) to remove unreacted activating agent;
(3) обеспечение реакции сочетания: добавление олигосахарида хитозана к смеси, полученной на стадии (2), из которой удалено непрореагировавшее активирующее средство, и динамическое перемешивание их при температуре, составляющей от 0°C до 80°C, в течение от 1 мин. до 300 мин.;(3) providing a coupling reaction: adding chitosan oligosaccharide to the mixture obtained in step (2) from which the unreacted activating agent has been removed, and dynamically mixing them at a temperature ranging from 0°C to 80°C for 1 minute. up to 300 min;
(4) высушивание: высушивание смеси, полученной на стадии (3), и осуществление контроля содержания воды на уровне 8% или меньше, так что полученный продукт представляет собой комплекс, содержащий неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана.(4) drying: drying the mixture obtained in step (3) and controlling the water content to 8% or less, so that the resulting product is a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide.
Предпочтительно активирующее средство, добавляемое на стадии (1), представляет собой дайдзеин, соевый изофлавон, антоцианидин, антоцианин, полифенол чая, дигидромирицетин или растительные экстракты, содержащие вышеуказанные вещества.Preferably, the activating agent added in step (1) is daidzein, soy isoflavone, anthocyanidin, anthocyanin, tea polyphenol, dihydromyricetin or plant extracts containing the above.
Предпочтительно массовое соотношение активирующего средства и неденатурированного коллагена II типа составляет от 100:1 до 1:10000.Preferably, the weight ratio of activating agent to undenatured type II collagen is from 100:1 to 1:10,000.
Предпочтительно олигосахарид хитозана, добавляемый на стадии (3), характеризуется степенью полимеризации, составляющей от 2 до 10.Preferably, the chitosan oligosaccharide added in step (3) has a degree of polymerization of 2 to 10.
Предпочтительно олигосахарид хитозана, добавляемый на стадии (3), представляет собой смесь олигосахаридов хитозана с различной степенью полимеризации, при этом средняя степень полимеризации находится в диапазоне от 2 до 10.Preferably, the chitosan oligosaccharide added in step (3) is a mixture of chitosan oligosaccharides with varying degrees of polymerization, the average degree of polymerization being in the range of 2 to 10.
Предпочтительно массовое соотношение олигосахарида хитозана, добавляемого на стадии (3), и неденатурированного коллагена II типа составляет от 100:1 до 1:200.Preferably, the weight ratio of chitosan oligosaccharide added in step (3) and undenatured type II collagen is from 100:1 to 1:200.
Предпочтительно на стадии (2) смесь, полученную на стадии (1), просеивают с помощью сита.Preferably, in step (2), the mixture obtained in step (1) is sifted using a sieve.
Согласно другому аспекту настоящей заявки, представлен комплекс, содержащий неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана, полученный с помощью способа получения, описанного в вышеуказанном варианте осуществления.According to another aspect of the present application, there is provided a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide obtained using the production method described in the above embodiment.
Предпочтительно неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана присутствуют в комплексе в химически связанной форме.Preferably, undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide are present in the complex in a chemically bound form.
Предпочтительно соотношение неденатурированного коллагена II типа и олигосахарида хитозана находится в диапазоне от 1:200 до 100:1.Preferably, the ratio of undenatured type II collagen to chitosan oligosaccharide is in the range of 1:200 to 100:1.
Способ получения комплекса, содержащего неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана в вариантах осуществления настоящей заявки, обладает преимуществами простого процесса осуществления, меньшего количества технологических стадий и высокой эффективности. Вариант осуществления настоящей заявки включает иммобилизацию олигосахарида хитозана на поверхности неденатурированного коллагена II типа с применением активирующего средства и увеличение плотности положительных зарядов на поверхности неденатурированного коллагена II типа. Таким образом, после перорального введения комплекса, содержащего неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана в варианте осуществления настоящего изобретения, неденатурированный коллаген II типа, содержащийся в комплексе, менее подвержен деградации протеазами в организме человека, что повышает коэффициент целевого высвобождения неденатурированного коллагена II типа в кишечнике. Кроме того, включение неденатурированного коллагена II типа в комплекс по варианту осуществления настоящей заявки облегчает фагоцитоз коллагена клетками на поверхности кишечника, тем самым улучшая скорость фагоцитоза неденатурированного коллагена II типа клетками кишечника и дополнительно усиливая терапевтический эффект.The method for producing a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide in embodiments of the present application has the advantages of a simple implementation process, fewer processing steps and high efficiency. An embodiment of the present application involves immobilizing a chitosan oligosaccharide on the surface of undenatured type II collagen using an activating agent and increasing the density of positive charges on the surface of the undenatured type II collagen. Thus, after oral administration of the complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide in an embodiment of the present invention, the undenatured type II collagen contained in the complex is less susceptible to degradation by proteases in the human body, which increases the target release rate of undenatured type II collagen in the intestine . In addition, the inclusion of undenatured type II collagen in the complex of an embodiment of the present application facilitates phagocytosis of collagen by cells on the intestinal surface, thereby improving the rate of phagocytosis of undenatured type II collagen by intestinal cells and further enhancing the therapeutic effect.
Подробное описаниеDetailed description
Настоящая заявка будет описана подробно ниже на примере конкретных вариантов осуществления. Следует отметить, что варианты осуществления являются лишь примерами комплекса, содержащего неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана, и способа его получения в настоящей заявке, которые не могут представлять собой полностью весь патент на данное изобретение и не должны толковаться как ограничивающие объем охраны данного изобретения. Также могут быть внесены некоторые изменения или усовершенствования при условии, что они не отходят от основной концепции данного изобретения, и все они находятся в пределах объема охраны данного изобретения.The present application will be described in detail below using specific embodiments as examples. It should be noted that the embodiments are only examples of the complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide and the method for its preparation in this application, which may not constitute the entire patent for this invention and should not be construed as limiting the scope of protection of this invention. Certain changes or improvements may also be made provided they do not depart from the basic concept of this invention and all are within the scope of protection of this invention.
Согласно общей концепции настоящей заявки, представлен способ получения комплекса, содержащего неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана, который включает следующие стадии:According to the general concept of this application, a method is presented for producing a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide, which includes the following stages:
(1) активация: смешивание (например, равномерное) определенного количества порошка или твердых частиц, содержащих неденатурированный коллаген II типа (например, порошка или твердых частиц, полученных при предварительной обработке хрящей животных), с активирующим средством и выдерживание смеси при температуре, составляющей от 0°С до 80°С (например, от 35°С до 40°С или от 50°С до 55°С), в течение от 1 мин. до 300 мин. (например, 90 мин. или 200 мин.);(1) activation: mixing (e.g., uniformly) a specified amount of powder or solids containing undenatured type II collagen (e.g., powder or solids obtained from the pretreatment of animal cartilage) with an activating agent and maintaining the mixture at a temperature between 0°C to 80°C (e.g. 35°C to 40°C or 50°C to 55°C), for 1 min. up to 300 min. (e.g. 90 min or 200 min);
(2) просеивание: просеивание смеси, полученной на стадии (1), с удалением непрореагировавшего активирующего средства;(2) sieving: sieving the mixture obtained in step (1) to remove unreacted activating agent;
(3) обеспечение реакции сочетания: добавление олигосахарида хитозана к смеси, полученной на стадии (2), из которой удалено непрореагировавшее активирующее средство, и динамическое перемешивание их при температуре, составляющей от 0°С до 80°С (например, от 35°С до 40°С или от 50°С до 55°С), в течение от 1 мин. до 300 мин. (например, 90 мин. или 120 мин.);(3) providing a coupling reaction: adding chitosan oligosaccharide to the mixture obtained in step (2) from which the unreacted activating agent has been removed, and dynamically mixing them at a temperature ranging from 0°C to 80°C (for example, from 35°C to 40°C or from 50°C to 55°C), for 1 min. up to 300 min. (e.g. 90 min or 120 min);
(4) высушивание: высушивание смеси, полученной на стадии (3), и осуществление контроля содержания воды на уровне 8% или меньше (например, 7% или меньше или 6% или меньше), при этом полученный продукт представляет собой комплекс, содержащий неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана.(4) drying: drying the mixture obtained in step (3) and controlling the water content to 8% or less (for example, 7% or less or 6% or less), the resulting product being a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide.
В способе получения согласно вариантам осуществления настоящей заявки олигосахарид хитозана иммобилизирован на поверхности неденатурированного коллагена II типа с применением активирующего средства, что делает неденатурированный коллаген II типа менее восприимчивым к деградации протеазами в организме человека после перорального введения, тем самым повышая коэффициент целевого высвобождения неденатурированного коллагена II типа в кишечнике. Кроме того, добавление активирующего средства увеличивает плотность положительных зарядов на поверхности неденатурированного коллагена II типа, поэтому включение неденатурированного коллагена II типа в комплекс облегчает фагоцитоз коллагена клетками на поверхности кишечника, тем самым улучшая скорость фагоцитоза неденатурированного коллагена II типа клетками кишечника. Комплекс, полученный с помощью способа получения по настоящей заявке, усиливает терапевтический эффект неденатурированного коллагена II типа.In the production method according to embodiments of the present application, chitosan oligosaccharide is immobilized on the surface of undenatured type II collagen using an activating agent, which makes the undenatured type II collagen less susceptible to degradation by proteases in the human body after oral administration, thereby increasing the target release rate of undenatured type II collagen in the intestines. In addition, the addition of an activating agent increases the density of positive charges on the surface of undenatured type II collagen, so the inclusion of undenatured type II collagen in the complex facilitates phagocytosis of collagen by cells on the intestinal surface, thereby improving the rate of phagocytosis of undenatured type II collagen by intestinal cells. The complex obtained using the production method of this application enhances the therapeutic effect of undenatured type II collagen.
В вариантах осуществления активирующее средство, добавляемое на стадии (1), представляет собой флавон, антоцианидин, полифенолы или растительные экстракты, содержащие вышеуказанные вещества.In embodiments, the activating agent added in step (1) is a flavone, anthocyanidin, polyphenols, or plant extracts containing the foregoing.
В вариантах осуществления массовое соотношение активирующего средства и порошка или твердых частиц неденатурированного коллагена II типа составляет от 100:1 до 1:10000, например 1:10.In embodiments, the weight ratio of activator to undenatured type II collagen powder or solids is from 100:1 to 1:10,000, for example 1:10.
В вариантах осуществления олигосахарид хитозана, добавляемый на стадии (3), характеризуется степенью полимеризации, составляющей от 2 до 10, например 3 или 4.In embodiments, the chitosan oligosaccharide added in step (3) has a degree of polymerization of 2 to 10, such as 3 or 4.
В примере олигосахарид хитозана, добавляемый на стадии (3), представляет собой смесь олигосахаридов хитозана с различной степенью полимеризации, при этом средняя степень полимеризации находится в диапазоне от 2 до 10, например 3 или 4.In the example, the chitosan oligosaccharide added in step (3) is a mixture of chitosan oligosaccharides with varying degrees of polymerization, the average degree of polymerization being in the range of 2 to 10, such as 3 or 4.
В одном примере массовое соотношение олигосахарида хитозана, добавляемого на стадии (3), и порошка или твердых частиц неденатурированного коллагена II типа составляет от 100:1 до 1:200, например 2,5:1 или 1:5.In one example, the weight ratio of chitosan oligosaccharide added in step (3) and undenatured type II collagen powder or solids is from 100:1 to 1:200, for example 2.5:1 or 1:5.
В вариантах осуществления на стадии (2) смесь, полученную на стадии (1), просеивают с помощью сита. Например, смесь, полученную на стадии (1), просеивают с применением сита с размером ячеек от 200 до 500 меш.In embodiments, in step (2), the mixture obtained in step (1) is sieved using a sieve. For example, the mixture obtained in step (1) is screened using a 200 to 500 mesh screen.
Согласно другой концепции настоящей заявки, также представлен комплекс, содержащий неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана, полученный с помощью способа получения по любому из вышеуказанных вариантов осуществления.According to another concept of the present application, there is also provided a complex containing undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide obtained by the production method of any of the above embodiments.
В вариантах осуществления неденатурированный коллаген II типа и олигосахарид хитозана присутствуют в комплексе в химически связанной форме.In embodiments, the undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide are present in the complex in a chemically bound form.
В вариантах осуществления соотношение неденатурированного коллагена II типа и олигосахарида хитозана находится в диапазоне от 1:200 до 100:1.In embodiments, the ratio of undenatured type II collagen to chitosan oligosaccharide ranges from 1:200 to 100:1.
Ниже для иллюстративного примера показана только часть вариантов осуществления настоящей заявки; другие возможные варианты осуществления настоящей заявки будут понятны специалистам в данной области техники и не будут повторяться в данном документе.Only a portion of the embodiments of the present application are shown below for illustrative purposes; other possible embodiments of the present application will be apparent to those skilled in the art and will not be repeated herein.
Вариант осуществления 1Embodiment 1
В качестве сырья применяли твердые частицы, содержащие 20% неденатурированного коллагена II типа, полученного путем предварительной обработки хряща животных, содержание воды в которых составляло приблизительно 20%, а в качестве активирующего средства применялся соевый изофлавон.The raw material used was solid particles containing 20% undenatured type II collagen obtained by pre-treatment of animal cartilage, the water content of which was approximately 20%, and soy isoflavone was used as an activating agent.
(1) Активация: 200 г порошка куриного хряща со средним размером частиц 300 меш механически равномерно смешивали с 4 г соевого изофлавона и полученную смесь выдерживали при температуре, составляющей от 35°C до 40°C, в течение 200 мин.(1) Activation: 200 g of chicken cartilage powder with an average particle size of 300 mesh was mechanically evenly mixed with 4 g of soy isoflavone, and the resulting mixture was kept at a temperature ranging from 35°C to 40°C for 200 min.
(2) Просеивание: смесь, полученную на стадии (1), просеивали с применением сита с разером ячеек 500 меш и собирали ретентат.(2) Screening: The mixture obtained in step (1) was screened using a 500 mesh screen, and the retentate was collected.
(3) Обеспечение реакции сочетания: 100 г олигосахарида хитозана со средней степенью полимеризации 4 добавляли в ретентат, полученный на стадии (2), и перемешивали путем встряхивания при температуре, составляющей от 35°С до 40°С, в течение 200 мин.(3) Providing a coupling reaction: 100 g of chitosan oligosaccharide with an average degree of polymerization of 4 was added to the retentate obtained in step (2) and stirred by shaking at a temperature of 35°C to 40°C for 200 minutes.
(4) Высушивание: смесь, полученную на стадии (3), высушивали в вакууме при низкой температуре, пока содержание воды в ней не достигало 7% или меньше.(4) Drying: The mixture obtained in step (3) was dried under vacuum at a low temperature until its water content reached 7% or less.
Смесь содержала комплекс неденатурированного коллагена II типа и олигосахарида хитозана, в котором олигосахарид хитозана был ковалентно связан с поверхностью неденатурированного коллагена II типа. Результаты испытаний показали, что соотношение неденатурированного коллагена II типа и олигосахарида хитозана в комплексе составило 22,3:1.The mixture contained a complex of undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide, in which the chitosan oligosaccharide was covalently bound to the surface of undenatured type II collagen. Test results showed that the ratio of undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide in the complex was 22.3:1.
Вариант осуществления 2Embodiment 2
В качестве сырья применяли лиофилизированный порошок неденатурированного коллагена II типа, выделенного из куриного хряща, содержание воды в котором составляло приблизительно 10%, а в качестве активирующего средства применяли экстракт черники, содержащий 20% дигидромирицетина, содержание воды в котором составляло приблизительно 6%.The raw material was lyophilized powder of undenatured type II collagen isolated from chicken cartilage, the water content of which was approximately 10%, and the activating agent was blueberry extract containing 20% dihydromyricetin, the water content of which was approximately 6%.
(1) Активация: 100 г лиофилизированного порошка неденатурированного коллагена II типа механически равномерно смешивали с 10 г экстракта черники и полученную смесь выдерживали при температуре, составляющей от 50°C до 55°C, в течение 90 мин.(1) Activation: 100 g of lyophilized undenatured type II collagen powder was mechanically evenly mixed with 10 g of blueberry extract, and the resulting mixture was kept at a temperature ranging from 50°C to 55°C for 90 min.
(2) Просеивание: смесь, полученную на стадии (1), просеивали с применением сита с размером ячеек 200 меш и собирали лиофилизированный порошок неденатурированного коллагена II типа.(2) Sieving: The mixture obtained in step (1) was sieved using a 200 mesh sieve, and the lyophilized undenatured type II collagen powder was collected.
(3) Обеспечение реакции сочетания: 20 г олигосахарида хитозана со средней степенью полимеризации 3 добавляли в лиофилизированный порошок, полученный на стадии (2), и перемешивали путем встряхивания при температуре, составляющей от 50°C до 55°C, в течение 120 мин.(3) Providing a coupling reaction: 20 g of chitosan oligosaccharide with an average degree of polymerization of 3 was added to the lyophilized powder obtained in step (2) and mixed by shaking at a temperature of 50°C to 55°C for 120 minutes.
(4) Высушивание: смесь, полученную на стадии (3), высушивали в вакууме при низкой температуре, пока содержание воды в ней не достигало 6% или меньше.(4) Drying: The mixture obtained in step (3) was dried under vacuum at a low temperature until its water content reached 6% or less.
Смесь содержала комплекс неденатурированного коллагена II типа и олигосахарида хитозана. Результаты испытаний показали, что соотношение неденатурированного коллагена II типа и олигосахарида хитозана в комплексе составило 20,6:1.The mixture contained a complex of undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide. Test results showed that the ratio of undenatured type II collagen and chitosan oligosaccharide in the complex was 20.6:1.
Claims (13)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110114882.4 | 2021-01-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2820581C1 true RU2820581C1 (en) | 2024-06-05 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6285497B2 (en) * | 2016-06-07 | 2018-02-28 | 株式会社エバーライフ | Oral composition containing chicken crown extract and method for improving ingestion difficulty derived from flavor of chicken crown extract |
| CN109043518A (en) * | 2016-02-15 | 2018-12-21 | 北京东方兴企食品工业技术有限公司 | A kind of functional nutrient food improving bone and joint diseases symptom |
| CN110214947A (en) * | 2019-06-12 | 2019-09-10 | 宁波依萃健生物科技有限公司 | A kind of prevention and treatment osteoarthritis composition |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109043518A (en) * | 2016-02-15 | 2018-12-21 | 北京东方兴企食品工业技术有限公司 | A kind of functional nutrient food improving bone and joint diseases symptom |
| JP6285497B2 (en) * | 2016-06-07 | 2018-02-28 | 株式会社エバーライフ | Oral composition containing chicken crown extract and method for improving ingestion difficulty derived from flavor of chicken crown extract |
| CN110214947A (en) * | 2019-06-12 | 2019-09-10 | 宁波依萃健生物科技有限公司 | A kind of prevention and treatment osteoarthritis composition |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ram Prabhoo et al., Undenatured collagen type II for the treatment of osteoarthritis: a review / International Journal of Research in Orthopaedics, 2018, Vol 4, Issue 5, pp.684-689. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230340076A1 (en) | Complex containing undenatured type ii collagen and chitosan oligosaccharide, and preparation method therefor | |
| US20180186899A1 (en) | Compositions of partially deacetylated chitin derivatives | |
| US6025327A (en) | Hydrolyzed collagen type II and use thereof | |
| JP6272891B2 (en) | Collagen hydrolyzate and use thereof | |
| JP2006512059A (en) | Dietary supplement and aquatic animal feeding method | |
| EP2188315A1 (en) | Method of preparing fibre-containing pectin product and pectin products hereof | |
| EP3673926B1 (en) | Semi-synthetic powdery material obtained by modifying the composition of a natural marine biomaterial, method for manufacturing same, uses thereof | |
| WO2012035869A1 (en) | Method for extracting undenatured type ii collagen having active epitope | |
| RU2820581C1 (en) | Complex containing non-denatured type ii collagen and chitosan oligosaccharide, and method for production thereof | |
| CN114099771A (en) | Gradient injection containing mixed polymer microspheres | |
| CN1974602A (en) | Production technology of extracting oat starch and oat protein powder from oat | |
| CN114306130A (en) | Composition for promoting interaction of collagen and hyaluronic acid and application thereof | |
| CN1041689C (en) | Konjak (Moyu) rice | |
| JPWO2018159714A1 (en) | Sugar and / or lipid metabolism improver | |
| US5298243A (en) | Colony stimulating factor-gelatin conjugate | |
| CN113151385A (en) | Method for efficiently preparing livestock and poultry cartilage collagen polypeptide | |
| CA2783146C (en) | Compositions and methods for encapsulating vaccines for the oral vaccination and boostering of fish and other animals | |
| US9205151B2 (en) | Compositions and methods for encapsulating vaccines for the oral vaccination and boostering of fish and other animals | |
| CN114766684A (en) | Protein composition, preparation method and application | |
| JP2005089388A (en) | Agent for enhancing immunopotentiative action | |
| RU2814817C1 (en) | Method of producing protein from dead black soldier fly hermetia illucens | |
| Mallik et al. | Biodegradability and biocompatibility of natural polymers | |
| RU2562595C2 (en) | Production of product with biologically active properties from holothurians | |
| CN113088551A (en) | Preparation method of bone collagen peptide | |
| CN114376178A (en) | Appetite-suppressing konjak powder and preparation method thereof |