RU2818588C2

RU2818588C2 - Биспецифические антитела

Info

Publication number: RU2818588C2
Application number: RU2021132993A
Authority: RU
Inventors: Прафулль С. ГАНДИ; Йенс БРЕЙНХОЛЬТ; Хенрик ЭСТЕРГААРД
Original assignee: Ново Нордиск А/С
Priority date: 2019-04-17
Filing date: 2020-04-15
Publication date: 2024-05-03

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложено биспецифическое антитело, содержащее первый антигенсвязывающий участок, способный к связыванию фактора VII(а), и второй антигенсвязывающий участок, способный к связыванию TLT-1. Также предложен фармацевтический состав, содержащий указанные антитела, который применяется в лечении коагулопатии. Изобретение обеспечивает получение биспецифических антител с улучшенными фармацевтическими свойствами. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 37 табл., 32 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к биспецифическим антителам, проявляющим улучшенные фармацевтические свойства, к композициям, содержащим такие антитела, и к вариантам применения таких антител и композиций, например, фармацевтическим и терапевтическим вариантам применения.

Перечень последовательностей

Настоящая заявка подается с перечнем последовательностей в электронной форме. Полное содержание перечня последовательностей включено в данный документ посредством ссылки.

Предпосылки изобретения

В процессе свертывания крови участвуют несколько белков, которые действуют совместно после повреждения сосудов с образованием тромба, который предупреждает тяжелую потерю жидкостей организма и/или инвазию патогенов. Каскад событий, ведущих к образованию тромба, может быть инициирован двумя путями, известными как внутренний (контактный) и внешний (тканевой фактор) путь. Каждый путь состоит из серии стадий активации зимогена, где вновь активированный фермент катализирует активацию следующего зимогена в серии до тех пор, пока протромбин не превратится в тромбин. Тромбин превращает фибриноген в фибриновую сеть и активирует тромбоциты с образованием тромбоцитарной пробки, что совместно приводит к образованию стабильного тромба. Инициирование внешнего пути образования тромба опосредуется образованием комплекса между связанным с мембраной тканевым фактором (TF), который подвергается воздействию в результате повреждения стенки сосуда, и низкими уровнями циркулирующего фактора VIIa (FVIIa). Комплекс FVIIa:TF инициирует каскад свертывания крови посредством активации небольших количеств фактора свертывания крови IX (FIX) и фактора свертывания крови X (FX). Во время начальной фазы при небольшой концентрации FXa производятся незначительные количества тромбина, который может активировать фактор XI и кофакторы VIII и V. Во время фазы распространения происходит сборка комплексов прокоагулянтов, и они значительно усиливают образование FXa и тромбина с помощью теназного (FIXa, FVIIIa, Ca²⁺, фосфолипиды) и протромбиназного (FXa, FVa, Ca²⁺, фосфолипиды) комплекса соответственно.

У людей с гемофилией A и B (HA и HB соответственно) функция различных стадий каскада свертывания крови нарушается по причине отсутствия или недостаточного наличия функционирующих FVIII и FIX соответственно. Это приводит к нарушению и недостаточности свертывания крови и развитию потенциально опасного для жизни кровотечения или повреждения внутренних органов, таких как суставы.

Рекомбинантный FVIIa (rFVIIa) широко применяется в качестве обходного средства для лечения кровотечений по требованию (OD) у людей с гемофилией (A и B) с наличием ингибиторов (HwI). rFVIIa характеризуется коротким системным периодом полужизни, составляющим 2-3 часа при внутривенном (в/в) введении, и низкой биодоступностью при подкожном (п/к) введении. Считается, что короткий системный период полужизни rFVIIa обусловлен участием нескольких механизмов, включая ингибирование плазменными ингибиторами - антитромбином III (AT) (Agers∅ H et al. (2010) J. Thromb. Haemost. 9: 333-8.) и альфа-2-макроглобулином (α2M), а также почечный клиренс. Короткий системный период полужизни и низкая биодоступность SC rFVIIa затрудняют применение rFVIIa для профилактического лечения. Кроме того, низкая собственная активность rFVIIa требует введения более высоких доз rFVIIa.

Следовательно, существует необходимость в улучшенных соединениях, которые могут поддерживать профилактическое лечение с менее частым введением доз и введением SC.

Недавно компания Roche выпустила биспецифическое антитело, эмицизумаб, которое показано для рутинной профилактики и вводится один раз в неделю посредством введения SC, для людей с HA и HA с наличием ингибиторов (HAwI). Тем не менее, разработка безопасных эффективных молекул с альтернативным механизмом действия остается областью ключевого интереса для улучшения и дополнения стандартного лечения для людей с гемофилией.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к биспецифическим антителам, демонстрирующим улучшенные фармацевтические свойства, в частности, оно относится к биспецифическим антителам, которые можно применять в лечении субъектов с врожденными и/или приобретенными коагулопатиями, например, в лечении людей с гемофилией A или B с наличием ингибиторов или без них. Кроме того, настоящее изобретение, в частности, относится к биспецифическим антителам, которые способны к связыванию фактора свертывания крови VII (FVII(a)) и TREM-подобного транскрипта 1 (TLT-1).

В одном аспекте биспецифические антитела по настоящему изобретению содержат (i) первый антигенсвязывающий участок, который связывает FVII(a), и (ii) второй антигенсвязывающий участок, который связывает TLT-1.

В одном аспекте настоящего изобретения биспецифическое антитело удлиняет активный период полужизни эндогенного FVIIa в кровотоке без потери активности эндогенного FVIIa и стимулирует активность эндогенного FVIIa посредством его селективной локализации на активированных тромбоцитах.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения биспецифическое антитело содержит Fc-область. Fc-область опосредует рециркуляцию биспецифического антитела, продлевая период его полужизни в кровотоке.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения первый антигенсвязывающий участок конкурирует за связывание с FVII(a) в конкурентном анализе ELISA с любым из антител к FVII(a), содержащих вариабельный домен легкой цепи (VL) и вариабельный домен тяжелой цепи (VH), как указано ниже:

- mAb0522 (VL: SEQ ID NO: 846 и VH: SEQ ID NO: 850),

- Fab0883 (VL: SEQ ID NO: 814 и VH: SEQ ID NO: 818),

- mAb0005 (VL: SEQ ID NO: 750 и VH: SEQ ID NO: 754),

- mAb0004 (VL: SEQ ID NO: 14 и VH: SEQ ID NO: 18),

- mAb0013 (VL: SEQ ID NO: 46 и VH: SEQ ID NO: 50),

- mAb0018 (VL: SEQ ID NO: 62 и VH: SEQ ID NO: 66),

- mAb0544 (VL: SEQ ID NO: 694 и VH: SEQ ID NO: 698),

- mAb0552 (VL: SEQ ID NO: 702 и VH: SEQ ID NO: 706),

- mAb0001 (VL: SEQ ID NO: 710 и VH: SEQ ID NO: 714),

- mAb0007 (VL: SEQ ID NO: 718 и VH: SEQ ID NO: 722),

- mAb0578 (VL: SEQ ID NO: 726 и VH: SEQ ID NO: 730),

- mAb0701 (VL: SEQ ID NO: 734 и VH: SEQ ID NO: 738) и

- mAb0587 (VL: SEQ ID NO: 742 и VH: SEQ ID NO: 746).

В дополнительном варианте осуществления настоящего изобретения первый антигенсвязывающий участок биспецифического антитела способен к связыванию эпитопа, содержащего аминокислотные остатки H115, T130, V131, и R392 из FVII(a) (SEQ ID NO: 1).

В одном аспекте настоящего изобретения биспецифические антитела составляют в фармацевтические составы, содержащие биспецифическое антитело по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном аспекте настоящего изобретения биспецифические антитела вводят парентерально, например, внутривенно, внутримышечно или подкожно. В одном аспекте настоящего изобретения биспецифические антитела обеспечивают возможность осуществления профилактического лечения субъектов с врожденной и/или приобретенной коагулопатией, такой как гемофилия A, гемофилия B, гемофилия A с наличием ингибиторов или гемофилия B с наличием ингибиторов. Следовательно, биспецифические антитела сконструированы для обеспечения гемостатической защиты, направленной против кровотечений. В одном аспекте настоящего изобретения биспецифические антитела сконструированы таким образом, чтобы они могли подходить для введения один раз в неделю, один раз в месяц или менее часто.

Консервативное лечение биспецифическими антителами по настоящему изобретению может иметь ряд преимуществ, таких как более длительный промежуток времени между инъекциями, более удобное введение и потенциально улучшенная гемостатическая защита между инъекциями. Следовательно, описанные в данном документе биспецифические антитела могут оказывать существенное влияние на качество жизни индивидуумов с гемофилией A или B с наличием ингибиторов или без них.

Краткое описание перечня последовательностей

Таблица 1 представляет собой обзор антител и их соответствующих SEQ ID NO для соответствующих последовательностей доменов VL и VL. Тип константных доменов тяжелой цепи является таким, как определено в таблице 2а («M» обозначает константный домен мышиного IgG1).

Таблица 2a представляет собой обзор различных форматов, используемых для рекомбинантной экспрессии бивалентных антител, моновалентных (ОА) антител и биспецифических антител. Перечислены SEQ ID NO, соответствующие первой тяжелой цепи (HC-1) и второй тяжелой цепи (HC-2, или для антител OA - усеченной тяжелой цепи (trHC)). Константный домен легкой цепи во всех случаях представлял собой человеческую каппа-цепь, соответствующую SEQ ID NO: 12.

Таблица 2b представляет собой обзор мышиных антител к FVII (a) по настоящему изобретению. Соответствие между названием клона, сокращением для полностью мышиных (полученных из гибридомы, за исключением mAb0765, которое было экспрессировано рекомбинантным способом) антител и соответствующих мышиных/человеческих химерных вариантов (мышиные вариабельные домены, константные домены S228P человеческого IgG4).

Таблица 2c представляет собой обзор антител в мышиной и гуманизированной линии 11F2.

Таблица 2d представляет собой обзор антител линии mAb0012 к TLT-1.

Таблица 1

Антитело	Мишень	VL SEQ ID NO	VH SEQ ID NO	Константный домен
mAb0004	FVII(a)	14	18	M
mAb0048	FVII(a)	22	26	A
Fab0076	FVII(a)	30	34	G
mAb0077(OA)	FVII(a)	38	42	E
mAb0013	FVII(a)	46	50	M
mAb0099	FVII(a)	54	58	F
mAb0018	FVII(a)	62	66	M
mAb0108	FVII(a)	70	74	A
mAb0109	FVII(a)	78	82	A
mAb0110	FVII(a)	86	90	A
mAb0111	FVII(a)	94	98	A
mAb0112	FVII(a)	102	106	A
mAb0113	FVII(a)	110	114	A
mAb0114	FVII(a)	118	122	A
mAb0115	FVII(a)	126	130	A
mAb0116	FVII(a)	134	138	A
mAb0117	FVII(a)	142	146	A
mAb0118	FVII(a)	150	154	A
mAb0119	FVII(a)	158	162	A
mAb0120	FVII(a)	166	170	A
mAb0121	FVII(a)	174	178	A
mAb0122	FVII(a)	182	186	A
mAb0123	FVII(a)	190	194	A
mAb0124	FVII(a)	198	202	A
mAb0125	FVII(a)	206	210	A
mAb0126	FVII(a)	214	218	A
mAb0127	FVII(a)	222	226	A
mAb0128	FVII(a)	230	234	A
mAb0129	FVII(a)	238	242	A
mAb0130	FVII(a)	246	250	A
mAb0137(OA)	FVII(a)	254	258	E
mAb0138(OA)	FVII(a)	262	266	E
mAb0139(OA)	FVII(a)	270	274	E
mAb0140(OA)	FVII(a)	278	282	E
mAb0141(OA)	FVII(a)	286	290	E
mAb0142(OA)	FVII(a)	294	298	E
mAb0143(OA)	FVII(a)	302	306	E
mAb0153	FVII(a)	310	314	A
mAb0154	FVII(a)	318	322	A
mAb0155	FVII(a)	326	330	A
mAb0156	FVII(a)	334	338	A
mAb0157	FVII(a)	342	346	A
mAb0158	FVII(a)	350	354	A
mAb0159	FVII(a)	358	362	A
mAb0160	FVII(a)	366	370	A
mAb0161	FVII(a)	374	378	A
mAb0162	FVII(a)	382	386	A
mAb0163	FVII(a)	390	394	A
mAb0164	FVII(a)	398	402	A
mAb0165	FVII(a)	406	410	A
mAb0166	FVII(a)	414	418	A
mAb0167	FVII(a)	422	426	A
mAb0168	FVII(a)	430	434	A
mAb0169	FVII(a)	438	442	A
mAb0170	FVII(a)	446	450	A
mAb0171	FVII(a)	454	458	A
mAb0172	FVII(a)	462	466	A
mAb0173	FVII(a)	470	474	A
mAb0174	FVII(a)	478	482	A
mAb0175	FVII(a)	486	490	A
mAb0176	FVII(a)	494	498	A
mAb0177	FVII(a)	502	506	A
mAb0178	FVII(a)	510	514	A
mAb0203	FVII(a)	518	522	A
mAb0228	FVII(a)	526	530	A
mAb0253	FVII(a)	534	538	A
mAb0278	FVII(a)	542	546	A
mAb0303	FVII(a)	550	554	A
mAb0328	FVII(a)	558	562	A
mAb0353	FVII(a)	566	570	A
mAb0378	FVII(a)	574	578	A
mAb0403	FVII(a)	582	586	A
mAb0428	FVII(a)	590	594	A
mAb0453	FVII(a)	598	602	A
mAb0478	FVII(a)	606	610	A
mAb0503	FVII(a)	614	618	A
mAb0528	FVII(a)	622	626	A
mAb0553	FVII(a)	630	634	A
mAb0578	FVII(a)	638	642	A
mAb0603	FVII(a)	646	650	A
mAb0705(OA)	FVII(a)	654	658	F
mAb0706(OA)	FVII(a)	662	666	F
mAb0707(OA)	FVII(a)	670	674	F
mAb0709(OA)	FVII(a)	678	682	F
mAb0710(OA)	FVII(a)	686	690	F
mAb0544	FVII(a)	694	698	M
mAb0552	FVII(a)	702	706	M
mAb0001	FVII(a)	710	714	M
mAb0007	FVII(a)	718	722	M
mAb0578	FVII(a)	726	730	M
mAb0701	FVII(a)	734	738	M
mAb0587	FVII(a)	742	746	M
mAb0005	FVII(a)	750	754	M
mAb0842(OA)	FVII(a)	758	762	F
mAb0864	FVII(a)	766	770	B
mAb0865	FVII(a)	774	778	B
mAb0872	FVII(a)	782	786	B
mAb0873	FVII(a)	790	794	B
mAb0874	FVII(a)	798	802	B
mAb0875	FVII(a)	806	810	B
Fab0883	FVII(a)	814	818	G
mAb7250	FVII(a)	822	826	M
mAb0350	FVII(a)	830	834	D
mAb0351	FVII(a)	838	842	C
mAb0522	FVII(a)	846	850	K
mAb0524	TLT-1	854	858	J
mAb0012	TLT-1	862	866	A
mAb0023	TLT-1	870	874	A
mAb0051	TLT-1	878	882	A
mAb0061	TLT-1	886	890	A
mAb0062	TLT-1	894	898	A
mAb0082	TLT-1	902	906	A
mAb1038	TLT-1	910	914	A
mAb1047	TLT-1	918	922	A
mAb1049	TLT-1	926	930	A
mAb1076	TLT-1	934	938	A

Таблица 2a

Тип константного домена	Описание	HC-1 SEQ ID NO:	HC-2 (или trHC) SEQ ID NO:
A	Бивалентное антитело	4	4
B	Бивалентное антитело (Duobody)	5	5
C	Бивалентное антитело (YTE)	6	6
D	Бивалентное антитело (Duobody и YTE)	7	7
E	Антитело OA (Duobody)	4	8
F	Антитело OA («выступ-во-впадину»)	9	10
G	Fab-фрагмент	11	не применимо
H	Биспецифическое антитело (Duobody)	5	4
I	Биспецифическое антитело (Duobody и YTE)	7	6
J	Бивалентное антитело (дельта-Lys)	942	942
K	Бивалентное антитело (Duobody, дельта-Lys)	943	943
L	Биспецифическое антитело (Duobody, дельта-Lys)	943	942

Таблица 2b

Клон	Мышиное	Химера
11F2	mAb0005/mAb0765	mAb0048
11F34	mAb0007	mAb0760
11F9	mAb0544	mAb0756
11F18	mAb0552	mAb0757
8F19	mAb0018	mAb0100
11F19	mAb0004	mAb0047
11F26	mAb0001	mAb0759
12F19	mAb0578	mAb0762
12F39	mAb0587	mAb0764
12F25	mab0013	mAb0096
17F227	mAb0701	mAb0763

Таблица 2c

Антитело	Вариабельный домен	Константный домен
mAb0005	Мышиный VL/VH	M
mAb0048	Мышиный VL/VH	A
Fab0076	Мышиный VL/VH	G
mAb0077(OA)	Мышиный VL/VH	E
mAb0705(OA)	Гуманизированный VL/VH	F
Fab0883	Гуманизированный VL/VH	G
mAb0865	Гуманизированный VL/VH	B
mAb0522	Гуманизированный VL/VH	K

Таблица 2d

Антитело	Вариабельный домен	Константный домен
mAb0012	Мышиный VL/VH	M
mAb0082	Мышиный VL C41A/VH T61A	A
mAb1076	Гуманизированный VL/VH	A
mAb0524	Гуманизированный VL/VH	J

В настоящем изобретении все полученные рекомбинантным способом антитела экспрессировались на основе IgG4 человека и все содержали стандартную стабилизирующую шарнир замену S228P (нумерация согласно EU). В некоторых вариантах С-концевой лизин тяжелой цепи (K447, который быстро отщепляется in vivo; см. Cai et al. Biotechnol. Bioeng. 2011 vol. 108, pp 404-412) был отброшен (упоминается как дельта-lys). В соответствии с таблицей 2a в константный домен тяжелой цепи были введены дополнительные замены для обеспечения требуемого спаривания цепей в биспецифических и моновалентных антителах (мутации формата Duobody F405L R409K (Labrijn et al. PNAS 2013, vol. 110, pp. 5145-5150) и мутации формата «выступ-во-впадину» (см. Carter et al. J. Imm. Methods 2001, vol. 248, pp. 7-15) T366W («выступ») и T366S L368A Y407V («впадина»)), или для продления периода полужизни in vivo (мутации YTE, M252Y S254T T256E (Dall'Acqua et al. J. Biol. Chem. 2006, vol. 18, pp. 23514-23524)). Все полученные рекомбинантным способом антитела по настоящему изобретению содержат человеческий константный домен легкой каппа-цепи (SEQ ID NO: 12).

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к конструированию и применению композиций на основе антител, демонстрирующих улучшенные фармацевтические свойства. В частности, оно относится к биспецифическим антителам, которые способны связывать фактор свертывания крови FVII(a) и TLT-1.

Антитела

Термин «антитело» в данном документе относится к белку, полученному из последовательности иммуноглобулина, который способен связываться с антигеном или его частью. Термин антитело включает без ограничения полноразмерные антитела любого класса (или изотипа), то есть IgA, IgD, IgE, IgG, IgM и/или IgY.

Особый интерес с точки зрения терапевтических антител представляет подкласс IgG, который у людей подразделяется на четыре подкласса, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, на основании последовательности их константных областей тяжелой цепи. Легкие цепи можно разделить на два типа: каппа- и лямбда-цепи, на основании различий в их составах последовательностей. Молекулы IgG состоят из двух тяжелых цепей, связанных двумя или более дисульфидными связями, и двух легких цепей, каждая из которых прикреплена к тяжелой цепи дисульфидной связью. Тяжелая цепь IgG может содержать вариабельный домен тяжелой цепи (V_H) и не более трех константных доменов тяжелой цепи (C_H): C_H1, C_H2 и C_H3. Легкая цепь может содержать вариабельный домен легкой цепи (V_L) и константный домен легкой цепи (C_L). Области V_H и V_L можно дополнительно подразделить на области гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), чередующиеся с более консервативными областями, называемыми каркасными областями (FR). Домены V_H и V_L обычно состоят из трех CDR и четырех FR, расположенных от амино-конца к карбокси-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные домены тяжелой и легкой цепей, содержащие гипервариабельные области (CDR), образуют структуру, которая способна взаимодействовать с антигеном, в то время как константная область антитела может опосредовать связывание антитела с Fc-рецепторами и первым компонентом, C1q, из комплекса C1 классической системы комплемента.

Термин «антигенсвязывающий участок» или «связывающая часть» относится к части антитела, которая обеспечивает связывание антигена.

Термин «антигенсвязывающий фрагмент» антитела относится к фрагменту антитела, который сохраняет способность связываться с родственным ему антигеном, таким как FVII(a), TLT-1 или другой целевой молекулой, как описано в данном документе. Примеры антигенсвязывающих фрагментов включают (без ограничения) Fab, Fab', Fab₂, Fab'₂, Fv, одноцепочечный Fv (scFv) или одиночный домен V_H или V_L.

Используемый в данном документе термин «одноплечее антитело» относится к конкретному типу фрагмента моновалентного антитела, состоящему из тяжелой цепи антитела, усеченной тяжелой цепи, в которой отсутствует область Fab, и одной легкой цепи.

Используемый в данном документе термин «моноспецифическое» антитело относится к антителу, которое способно к связыванию одного с одним конкретным эпитопом (включая без ограничения бивалентные антитела).

Используемые в данном документе термины «биспецифическое антитело» и «biAb» относятся к антителу, которое способно к связыванию с двумя разными антигенами, например, FVII(a) и TLT-1, или двумя разными эпитопами на одном и том же антигене.

Биспецифические антитела по настоящему изобретению получают из антител или их антигенсвязывающего фрагмента. Биспецифические антитела по настоящему изобретению могут представлять собой слияния или конъюгаты антител и антигенсвязывающих фрагментов антител, таких как, например, Fab, Fab', Fab2, Fab'2 или scFv. Биспецифические антитела по настоящему изобретению также могут представлять собой слияния или конъюгаты фрагментов антител. Из уровня техники известен широкий диапазон молекулярных форматов для биспецифических антител, полученных из антител и фрагментов антител, см., например, (Spiess et al.: Molecular Immunology 67, (2015), pp. 95-106) и (Brinkmann и Kontermann: MABS, 9 (2017), pp 182-212).

Биспецифические антитела могут быть получены различными способами, описанными в уровне техники, см., например, (Spiess et al.: Molecular Immunology 67, (2015), pp. 95-106) и (Brinkmann and Kontermann: MABS, 9 (2017), pp 182-212). Например, требуемое спаривание тяжелых цепей может достигаться за счет конструирования поверхности контакта для димеризации в Fc-области, чтобы способствовать гетеродимеризации. Одним из примеров этого являются так называемые мутации «выступ-во-впадину», где стерически громоздкие боковые цепи («выступы») вводят в один Fc, совпадающий со стерически малыми боковыми цепями («впадинами») на противоположном Fc, создавая тем самым стерическую комплементарность, способствующую гетеродимеризации. Другими способами конструирования поверхностей контакта на Fc для гетеродимеризации являются электростатическая комплементарность, гибридизация с доменами гетеродимеризации, отличными от IgG, или использование природного явления обмена Fab-плечами в человеческом IgG4 для осуществления гетеродимеризации in vitro. Примеры гетеродимеризованных биспецифических антител хорошо описаны в источниках литературы, например, (Klein C, et al.; MAbs. 2012 4, pp 653-663). Особое внимание следует уделить легким цепям в гетеродимерных антителах. Правильного спаривания LC и HC можно достичь путем применения общей легкой цепи. Конструирование поверхности контакта LC/HC можно использовать для содействия гетеродимеризации или конструирования перекреста легких цепей, как в CrossMabs. Повторную сборку антител in vitro в слегка восстанавливающих условиях из двух отдельных IgG, содержащих соответствующие мутации, также можно использовать для получения биспецифических антител (например, Labrijn et al., PNAS, 110 (2013), pp. 5145-5150). Также сообщается, что природный способ обмена Fab-плечами обеспечивает правильное спаривание легких цепей.

Используемый в данном документе термин «полиспецифическое» антитело относится к антителу, которое способно связываться с двумя или более разными антигенами или двумя или более разными эпитопами на одном и том же антигене. Таким образом, полиспецифические антитела включают биспецифические антитела.

Антитела по настоящему изобретению можно объединять с другими антителами и фрагментами антител, известными из уровня техники, с образованием молекул биспецифических, триспецифических или полиспецифических антител.

В одном аспекте антитело по настоящему изобретению представляет собой химерное антитело, человеческое антитело или гуманизированное антитело. Такое антитело можно получать с использованием, например, подходящих платформ для дисплея антител или иммунизации или других подходящих платформ или способов, известных из уровня техники.

Кроме того, если антитело содержит константную область, то константная область или ее часть также получены из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека. Человеческие антитела по настоящему изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии человека (например, мутации, вводимые случайным или сайт-специфичным мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo).

Человеческие антитела можно выделять из библиотек последовательностей, построенных на выборках последовательностей зародышевой линии человека, дополнительно модифицированных с помощью введения природного и синтетического разнообразия последовательностей.

Человеческие антитела можно получать посредством иммунизации человеческих лимфоцитов in vitro с последующей трансформацией лимфоцитов с помощью вируса Эпштейна-Барр. Человеческие антитела можно получать рекомбинантными способами, известными из уровня техники.

Используемый в данном документе термин «гуманизированное антитело» относится к человеческому/отличному от человеческого антителу, которое содержит последовательность (области CDR или их части), полученную из иммуноглобулина, отличного от человеческого. Таким образом, гуманизированное антитело представляет собой человеческий иммуноглобулин (реципиентное антитело), в котором остатки из по меньшей мере гипервариабельной области реципиента заменены остатками из гипервариабельной области антитела вида, отличного от человека (донорское антитело), такого как мышь, крыса, кролик или примат, отличный от человека, которое обладает необходимой специфичностью, аффинностью, составом и функциональностью последовательности. В некоторых случаях каркасные (FR) остатки человеческого иммуноглобулина заменяют соответствующими остатками, отличными от человеческих. Примером такой модификации является введение одной или более так называемых обратных мутаций, которые обычно представляют собой аминокислотные остатки, полученные из донорного антитела. Гуманизацию антитела можно осуществлять с использованием рекомбинантных методик, известных специалисту в данной области (см., например, Antibody Engineering, Methods in Molecular Biology, vol. 248, edited by Benny K. Lo). Подходящий человеческий реципиентный каркас для вариабельного домена как легкой, так и тяжелой цепи, можно идентифицировать, например, по гомологии последовательности или структуры. В качестве альтернативы можно использовать установленные реципиентные каркасы, например, на основе знания структуры, биофизических и биохимических свойств. Реципиентные каркасы могут быть получены из зародышевой линии или могут быть получены из последовательности зрелого антитела. Области CDR из донорного антитела можно переносить посредством прививания CDR. CDR-привитое гуманизированное антитело можно дополнительно оптимизировать, например, в отношении аффинности, функциональности и биофизических свойств, путем идентификации существенно важных каркасных положений, где повторное введение (обратная мутация) аминокислотного остатка из донорного антитела оказывает благотворное влияние на свойства гуманизированного антитела. В дополнение к обратным мутациям, полученным из донорных антител, гуманизированное антитело можно сконструировать путем введения остатков из зародышевой линии в CDR или каркасные области, удаления иммуногенных эпитопов, сайт-направленного мутагенеза, созревания аффинности и т.д.

Более того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не обнаружены ни в реципиентном антителе, ни в донорном антителе. Эти модификации осуществляют для дополнительного улучшения характеристик антитела. Гуманизированное антитело может также необязательно содержать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), как правило, иммуноглобулина человека.

Используемый в данном документе термин «химерное антитело» относится к антителу, содержащему части антител, полученные от двух или более видов. Например, гены, кодирующие такое антитело, включают гены, кодирующие вариабельные домены, и гены, кодирующие константные домены, происходящие от двух разных видов. Например, гены, кодирующие вариабельные домены мышиного моноклонального антитела, можно присоединять к генам, кодирующим константные домены антитела человеческого происхождения.

Антитела или их фрагменты можно определить с точки зрения их определяющих комплементарность областей (CDR). Используемый в данном документе термин «определяющая комплементарность область» относится к областям антитела, где, как правило, расположены аминокислотные остатки, участвующие в связывании антигена. CDR можно идентифицировать как области с самой высокой вариабельностью среди вариабельных доменов антител. Для идентификации CDR можно использовать базы данных, такие как база данных Кабата, при этом CDR, например, определяются как содержащие аминокислотные остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) вариабельного домена легкой цепи и 31-35 (H1), 50-65 (H2) и 95-102 (H3) в вариабельном домене тяжелой цепи (Kabat et al. 1991; Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Как правило, нумерацию аминокислотных остатков в этой области выполняют посредством способа, описанного в Kabat et al. выше. Такие фразы, как «положение по Кабату», «остаток по Кабату» и «в соответствии с Кабатом», в данном документе относятся к данной системе нумерации для вариабельных доменов тяжелой цепи или вариабельных доменов легкой цепи. При применении системы нумерации по Кабату, фактическая линейная аминокислотная последовательность пептида может содержать меньшее количество или дополнительные аминокислоты, соответствующие укорочению или вставке в каркас (FR) или CDR вариабельного домена. Например, вариабельный домен тяжелой цепи может включать аминокислотные вставки (остатки 52a, 52b и 52c в соответствии с Кабатом) после остатка 52 из CDR H2 и вставленные остатки (например, остатки 82a, 82b и 82c и т.д. в соответствии с Кабатом) после остатка 82 из FR тяжелой цепи. Нумерацию остатков по Кабату можно определить для данного антитела путем выравнивания по областям гомологии последовательности антитела со «стандартной» последовательностью, пронумерованной по Кабату. Нумерация осуществляется в соответствии с Кабатом, только если это конкретно указано, в противном случае нумерация является последовательной в соответствии с указанной SEQ ID NO.

Термин остатки «каркасной области» или «FR» относятся к тем аминокислотным остаткам V_H или V_L, которые не находятся в CDR, как определено в данном документе.

Антитело по настоящему изобретению может содержать область CDR из одного или более конкретных антител, раскрытых в данном документе.

Термин «антиген» (Ag) относится к молекулярному объекту, используемому для иммунизации иммунокомпетентного позвоночного животного с образованием антитела (Ab), которое распознает Ag. В данном документе термин Ag является более широким и, как правило, включает целевые молекулы, которые распознаются Ab.

Настоящее изобретение охватывает варианты антител или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению, которые могут содержать 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен, и/или делеций, и/или вставок в отдельных последовательностях, раскрытых в данном документе.

Варианты с «заменой» предпочтительно включают замену одной или более аминокислот тем же количеством аминокислот.

Используемый в данном документе термин «эпитоп» определен в контексте молекулярного взаимодействия между «антигенсвязывающим полипептидом», таким как антитело (Ab), и его соответствующим антигеном (Ag). Обычно «эпитоп» относится к области или участку на Ag, с которым связывается Ab, т.е. к области или участку физического контакта с Ab. В настоящем изобретении эпитопы определены с использованием кристаллической структуры, полученной с помощью рентгеноструктурного анализа, с определением пространственных координат комплекса между Ab, таким как Fab-фрагмент, и его Ag. Термин эпитоп в данном документе, если иное не указано или не противоречит контексту, определен как остатки Ag (в данном документе FVII(a) или TLT-1), характеризующиеся наличием тяжелого атома (т.е. атома, отличного от водорода) на расстоянии 4 Å от тяжелого атома в Fab.

Эпитопы, описанные на уровне аминокислот, например, определенные по рентгеновской структуре, считаются идентичными, если они содержат одинаковый набор аминокислотных остатков. Считается, что эпитопы перекрываются, если по меньшей мере один аминокислотный остаток является общим для эпитопов. Считается, что эпитопы являются отдельными (уникальными), если нет аминокислотных остатков, которые являются общими для эпитопов.

Определение термина «паратоп» получено из приведенного выше определения «эпитоп» путем изменения перспективы. Таким образом, термин «паратоп» относится к зоне или области на антителе или его фрагменте, с которыми связывается антиген, т.е. с участием которых оно вступает в физический контакт с антигеном. Термин паратоп в данном документе, если не указано иное или если это не противоречит контексту, определен как остатки Ab, характеризующиеся наличием тяжелого атома (т.е. атома, отличного от водорода) на расстоянии 4 Å от тяжелого атома в FVII(a) или TLT-1.

Эпитопы на антигене могут содержать один или более остатков-«горячих точек», т.е. остатков, которые особенно важны для взаимодействия с когнатным антителом, и где взаимодействия, опосредованные боковой цепью указанного остатка-«горячей точки», вносят значительный вклад в энергию связывания для взаимодействия антитело/антиген (Peng et al. PNAS 111 (2014), E2656-E2665). Остатки-«горячие точки» можно идентифицировать путем тестирования вариантов антигена, где отдельные остатки эпитопа были заменены, например, аланином, в отношении связывания с родственным антителом. Если замена остатка эпитопа аланином оказывает сильное влияние на связывание с антителом, то указанный остаток эпитопа считается остатком-«горячей точкой» и, следовательно, имеет особое значение для связывания антитела с антигеном.

Антитела, которые связываются с одним и тем же антигеном, можно охарактеризовать с точки зрения их способности связываться с их общим антигеном одновременно и можно подвергать «конкурентному связыванию»/«категоризации». В контексте настоящего изобретения термин «категоризация» относится к способу группировки антител, которые связываются с одним и тем же антигеном. «Категоризация» антител может быть основана на конкурентном связывании двух антител с их общим антигеном в анализах на основании стандартных методик. «Категорию» антитела определяют с использованием референтного антитела. Если второе антитело не способно связываться с антигеном в то же время, что и референтное антитело, то говорят, что второе антитело относится к той же «категории», что и референтное антитело. В данном случае референтное и второе антитело конкурентно связывают одну и ту же часть антигена и представляют собой «конкурирующие антитела». Если второе антитело способно связываться с антигеном одновременно с референтным антителом, то говорят, что второе антитело относится к отдельной «категории». В данном случае референтное и второе антитело не связывают конкурентно одну и ту же часть антигена и представляют собой «не конкурирующие антитела».

Конкурентные анализы для определения того, конкурирует ли антитело за связывание с антителом к FVII(a) или антителом к TLT-1, раскрытыми в данном документе, известны из уровня техники. Иллюстративные конкурентные анализы включают иммунологические анализы (например, анализы ELISA, анализы RIA), анализ с использованием поверхностного плазмонного резонанса (например, с использованием прибора BIAcore™), интерферометрию биослоев (ForteBio®) и проточную цитометрию.

Как правило, конкурентный анализ предусматривает применение антигена, связанного с твердой поверхностью или экспрессированного на клеточной поверхности, тестируемого антитела, связывающего FVII или FVIIa, и референтного антитела. Референтное антитело является меченым, а тестируемое антитело является немеченым. Конкурентное ингибирование измеряют путем определения количества меченого референтного антитела, связанного с твердой поверхностью или клетками в присутствии тестируемого антитела. Обычно тестируемое антитело присутствует в избытке (например, в 1, 5, 10, 20, 100, 1000, 10000 или 100000 раз). Антитела, идентифицированные как конкурентные в конкурентном анализе (т.е. конкурирующие антитела), включают антитела, связывающиеся с тем же эпитопом или с перекрывающимися эпитопами, что и референтное антитело, и антитела, связывающиеся с соседним эпитопом, достаточно проксимальным к эпитопу, связанному с референтным антителом, для возникновения стерических помех.

В иллюстративном конкурентном анализе референтное антитело к FVII или к FVIIa биотинилируют с использованием коммерчески доступных реагентов. Биотинилированное референтное антитело смешивают с серийными разведениями тестируемого антитела или немеченого референтного антитела (контроль самоконкуренции), что приводит к получению смеси различных молярных соотношений (например, в 1, 5, 10, 20, 100, 1000, 10000 или 100000 раз) тестируемого антитела (или немеченого референтного антитела) с меченым референтным антителом. Смесь антител добавляют в планшет для ELISA, покрытый полипептидом FVII или FVIIa. Затем планшет промывают и добавляют в планшет пероксидазу хрена (HRP)-стрепавидин в качестве реагента для выявления. Количество меченого референтного антитела, связанного с целевым антигеном, определяют после добавления хромогенного субстрата (например, TMB (3,3',5,5'-тетраметилбензидина) или ABTS (2,2''-азино-ди-(3-этилбензтиазолин-6-сульфоната)), которые известны из уровня техники. Показатели оптической плотности (единицы OD) получают с использованием спектрометра (например, спектрометра SpectraMax® M2 (Molecular Devices)). Ответ (единицы OD), соответствующий нулевому проценту ингибирования, определяют в лунках без какого-либо конкурирующего антитела. Ответ (единицы OD), соответствующий 100% ингибированию, т.е. фон анализа, определяют в лунках без какого-либо меченого референтного антитела или тестируемого антитела. Процент ингибирования меченого референтного антитела к FVII или FVIIa тестируемым антителом (или немеченым референтным антителом) в каждой концентрации рассчитывают следующим образом: % ингибирования = (1 - (единицы OD - показатель 100% ингибирования)/(показатель 0% ингибирования - показатель 100% ингибирования)) * 100.

Специалисту в данной области будет понятно, что сходные анализы можно осуществлять для определения того, характеризуются ли два или более антител к TLT-1 общей областью связывания, категорией и/или конкурентно связывают антиген. Специалистам в данной области будет также понятно, что конкурентный анализ можно осуществлять с использованием различных систем выявления, известных из уровня техники.

Тестируемое антитело конкурирует с референтным антителом за связывание с антигеном, если избыток одного антитела (например, в 1, 5, 10, 20, 100, 1000, 10000 или 100000 раз) подавляет связывание другого антитела, например, на по меньшей мере 50%, 75%, 90%, 95% или 99%, как измерено в анализе конкурентного связывания.

Если не указано иное, конкуренцию определяют с использованием конкурентного анализа ELISA, описанного выше и представленного в примере 7 и примере 32.

Термин «аффинность связывания» используется в данном документе как мера силы нековалентного взаимодействия между двумя молекулами, например, антителом или его фрагментом и антигеном. Термин «аффинность связывания» используется для описания моновалентных взаимодействий.

Аффинность связывания между двумя молекулами, например, антителом или его фрагментом и антигеном, посредством моновалентного взаимодействия можно количественно определить путем определения равновесной константы диссоциации (K_D). K_D можно определить путем измерения кинетики образования и диссоциации комплекса, например, посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR), как это осуществлялось в примерах 6 и 16, или другими способами, известными из уровня техники. Константы скорости, соответствующие ассоциации и диссоциации моновалентного комплекса, упоминаются как константа скорости ассоциации k_a (или k_on) и константа скорости диссоциации k_d (или k_off) соответственно. K_D соотносится с k_a и k_d через уравнение K_D = k_d / k_a.

Следуя приведенному выше определению, показатели аффинности связывания, ассоциированные с различными молекулярными взаимодействиями, такие как сравнение аффинности связывания различных антител для указанного антигена, можно сравнивать путем сравнения значений K_D для отдельных комплексов антитело/антиген.

K_D антитела по настоящему изобретению в отношении его мишени может составлять менее 1 пМ, например, менее 10 пМ, например, менее 100 пМ, например, менее 200 пМ, например, менее 400 пМ, например, менее 600 пМ, например, менее 1 нМ, например, менее 5 нМ, например, менее 10 нМ, например, менее 20 нМ, например, менее 50 нМ, например, менее 100 нМ, например, менее 200 нМ, например, менее 400 нМ, например, менее 600 нМ, например, менее 800 нМ.

В одном таком варианте осуществления антитело представляет собой биспецифическое антитело, содержащее плечо к FVII(a) с K_D в отношении FVIIa, составляющей менее 1 пМ, например, менее 10 пМ, например, менее 100 пМ, например, менее 200 пМ, например, менее 400 пМ, например, менее 600 пМ, например, менее 1 нМ, например, менее 5 нМ, например, менее 10 нМ, например, менее 20 нМ, например, менее 50 нМ, например, менее 100 нМ, например, менее 200 нМ, например, менее 400 нМ, например, менее 600 нМ, например, менее 800 нМ, и второе плечо к TLT-1 с K_D в отношении TLT-1, составляющей менее 1 пМ, например, менее 10 пМ, например, менее 100 пМ, например, менее 200 пМ, например, менее 400 пМ, например, менее 600 пМ, например, менее 1 нМ, например, менее 5 нМ, например, менее 10 нМ, например, менее 20 нМ, например, менее 50 нМ, например, менее 100 нМ, например, менее 200 нМ, например, менее 400 нМ, например, менее 600 нМ, например, менее 800 нМ.

Термин «идентичность», как известно из уровня техники, относится к взаимосвязи между последовательностями двух или более полипептидов, определяемой путем сравнения последовательностей. В данной области «идентичность» также означает степень родства последовательностей между полипептидами, определяемую по количеству совпадений между цепочками двух или более аминокислотных остатков. «Идентичность» измеряется в процентах идентичных совпадений между меньшей из двух или более последовательностей с выравниваниями гэпов (если они есть) с применением конкретной математической модели или компьютерной программы (т.е. «алгоритмов»). Идентичность родственных полипептидов можно легко рассчитать известными способами. В настоящем изобретении сходство и идентичность определяли с использованием алгоритма Needleman (Needleman et al. J. Mol. Biol. 1970; 48:443-453) из EMBOSS-6.6.0 с использованием параметров 10 и 0,5 для введения и продления гэпов соответственно (gapopen = 10, gapextend = 0,5).

Область кристаллизующегося фрагмента («Fc-область»/«Fc-домен») антитела представляет собой C-концевую область антитела, которая содержит шарнир и константные домены C_H2 и C_H3.

Антитела по настоящему изобретению могут содержать Fc-область, которая может иметь аминокислотную последовательность дикого типа, или она может содержать аминокислотные замены, которые модулируют эффекторные функции антитела, см., например, (Wang et al.: Protein Cell. 9 (2018), pp. 63-73). Конкретные примеры вариантов Fc с модифицированными эффекторными функциями представляют собой варианты, у которых связывание с Fcγ-рецепторами является сниженным. Один конкретный пример такого варианта представляет собой IgG1, содержащий замены L234A, L235E, G237A, A330S и P331S (нумерация остатков в соответствии с индексом EU), с пониженной аффинностью в отношении определенных Fcγ-рецепторов и C1q.

Биспецифические молекулы

Термин «биспецифические молекулы» в данном документе относится к молекулам, способным к связыванию с разными мишенями, такими как FVII(a) и TLT-1. Связывающие фрагменты биспецифической молекулы могут быть получены из антитела или могут иметь происхождение, отличное от происхождения из антител. Один конкретный пример биспецифической молекулы представляет собой биспецифическое антитело.

В одном аспекте настоящего изобретения биспецифическая молекула содержит первый антигенсвязывающий участок, способный к связыванию фактора VII(а), и второй антигенсвязывающий участок, способный к связыванию TREM-подобного транскрипта 1 (TLT-1).

Биспецифические молекулы по настоящему изобретению могут содержать связывающие фрагменты, не являющиеся производными антител, также называемые альтернативными каркасами. Биспецифические молекулы по настоящему изобретению могут представлять собой слияния или конъюгаты альтернативных каркасов. Биспецифические молекулы по настоящему изобретению могут представлять собой слияния или конъюгаты антител и альтернативных каркасов. Биспецифические молекулы по настоящему изобретению могут также представлять собой слияния или конъюгаты фрагментов антител и альтернативных каркасов.

Большое количество и разнообразие альтернативных каркасов известны из уровня техники, см., например, (Simeon and Chen: Protein Cell 9 (2018), pp. 3-14), (Könning and Kolmar: Microbial Cell Factories (2018), pp. 17-32) и (Nygren and Skerra: Journal of Immunological Methods 290 (2004), pp 3-28).

Конкретные примеры альтернативных каркасов представляют собой аднектины, аффилины, антикалины, авимеры, атримеры, каркасы FN3, финомеры, OBody, крингл-домены, домены Куница, ноттины, аффитела, DARPin, бициклические пептиды и цис-узлы.

Фактор VII(a)

Термины «фактор VII» и «FVII» в данном документе относятся к зимогену фактора свертывания крови VII. Термины «фактор VIIa» и «FVIIa» в данном документе относятся к активированному фактору свертывания крови VII, который представляет собой сериновую протеазу. Термины «фактор VII(а)» и «FVII(а)» в данном документе охватывают нерасщепленный зимоген, фактор VII (FVII), а также расщепленную и, таким образом, активированную протеазу, фактор VIIa (FVIIa). Термины «фактор VII(а)» и «FVII(а)» в данном документе включают природные аллельные варианты FVII(а), которые могут существовать. Одна последовательность человеческого фактора VII(а) дикого типа представлена под SEQ ID NO: 1.

Человеческий фактор свертывания крови VII(a) дикого типа (SEQ ID NO: 1):

ANAFLEELRPGSLERECKEEQCSFEEAREIFKDAERTKLFWISYSDGDQCASSPCQNGGSCKDQLQSYICFCLPAFEGRNCETHKDDQLICVNENGGCEQYCSDHTGTKRSCRCHEGYSLLADGVSCTPTVEYPCGKIPILEKRNASKPQGRIVGGKVCPKGECPWQVLLLVNGAQLCGGTLINTIWVVSAAHCFDKIKNWRNLIAVLGEHDLSEHDGDEQSRRVAQVIIPSTYVPGTTNHDIALLRLHQPVVLTDHVVPLCLPERTFSERTLAFVRFSLVSGWGQLLDRGATALELMVLNVPRLMTQDCLQQSRKVGDSPNITEYMFCAGYSDGSKDSCKGDSGGPHATHYRGTWYLTGIVSWGQGCATVGHFGVYTRVSQYIEWLQKLMRSEPRPGVLLRAPFP

FVII(а) дикого типа содержит 406 аминокислотных остатков и состоит из четырех доменов. Существует N-концевой домен, богатый гамма-карбоксиглутаминовой кислотой (Gla), где десять остатков глутамата (выделены жирным шрифтом в приведенной выше последовательности) могут быть гамма-карбоксилированы. За доменом gla следуют два домена, подобные эпидермальному фактору роста (EGF), и С-концевой домен сериновой протеазы. Как FVII, так и FVIIa присутствуют в кровотоке, но FVIIa присутствует только в небольшом количестве (приблизительно 1% от общего пула; Morrissey JH, Broze Jr GJ. Tissue factor and the initiation and regulation (TFPI) of coagulation. В: Marder VJ, Aird WC, Bennett JS, Schulman S, White II GC, editors. Hemostasis and thrombosis: basic principles and clinical practice. 6th ed. Wolters Kluwer & Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia; 2013. p. 163-78). FVII может активироваться до FVIIa посредством протеолитического расщепления между остатками Arg152 и Ile153, в результате чего получается двухцепочечная молекула FVIIa, состоящая из легкой цепи и тяжелой цепи. Две цепи в FVIIa соединены посредством дисульфидной связи. Легкая цепь содержит Gla- и EGF-подобные домены, и тяжелая цепь содержит протеазный домен. FVIIa требует связывания со своим кофактором на поверхности клетки, тканевым фактором (TF), для достижения своей полной биологической активности.

Предсказанная полноразмерная изоформа X1 FVII яванского макака (Macaca fascicularis) состоит из 406 аминокислот с референтной последовательностью в NCBI под ID XP_015295043.1. Термин «cFVIIa-химера» в данном документе относится к химерной конструкции FVIIa яванского макака. Аминокислотная последовательность cFVIIa-химеры такова, что домен Gla и первый EGF-подобный домен (аминокислоты 1-88 при выравнивании с последовательностью FVIIa человека) составлены из последовательности FVII человека (Uniprot ID P08709); тогда как второй EGF-подобный и протеазный домены (аминокислоты 89-406 при выравнивании с последовательностью FVIIa человека) составлены из последовательности изоформы X1 FVII яванского макака (ID референтной последовательности в NCBI XP_015295043.1)

Активный период полужизни рекомбинантного FVIIa (и эндогенного FVIIa) у человека составляет приблизительно 2-3 часа при внутривенном введении. Фактор VII(a) может быть эндогенным, полученным из плазмы крови, или может быть получен рекомбинантным путем с использованием хорошо известных способов получения и очистки. Степень и расположение гликозилирования, гамма-карбоксилирования и других посттрансляционных модификаций могут варьировать в зависимости от выбранной клетки-хозяина и условий ее роста.

Фактор VIIa может находиться в разных конформациях. Фактор VIIa циркулирует в крови в неактивной конформации или в неактивной форме. Данная конформация не обладает каталитической активностью. FVIIa также может находиться в активной конформации или активной форме, в данном документе он также упомянут как полностью активный или полностью активированный FVIIa. Термин FVIIa охватывает FVIIa в неактивной форме или конформации и FVIIa в активной форме или конформации. Например, активная конформация FVIIa может предусматривать комплекс между FVIIa и тканевым фактором (FVIIa/TF), например, в форме FVIIa/sTF(1-219), где sTF(1-219) представляет собой усеченную и растворимую форму тканевого фактора, или активная конформация FVIIa может предусматривать FVIIa с ингибированным активным сайтом (FVIIai). FVIIai представляет собой каталитически инертную форму FVIIa, которая может быть получена посредством обработки FVIIa дансил-Glu-Gly-Arg-хлорметилкетоном или Phe-Phe-Arg-хлорметилкетоном (FFR-хлорметилкетоном) (Wildgoose et al. (1990) Biochemistry 29: 3413-3420 и S∅rensen et al. (1997) J Biol Chem 272: 11863-11868). FVIIai сохраняет свою аффинность в отношении TF и, как полагают, принимает такую же конформацию, как конформация, индуцируемая в FVIIa посредством связывания TF. Таким образом, FVIIai имеет активированную конформацию, и связывание тестируемого соединения с FVIIai указывает на то, что тестируемое соединение также будет связываться с активированной формой FVIIa дикого типа.

Целевая молекула для антитела к FVII(a) может представлять собой любую молекулу FVII(a), как описано в данном документе.

TREM-подобный транскрипт 1 (TLT-1)

Триггерные рецепторы, экспрессируемые на миелоидных клетках (TREM), имеют хорошо известную роль в биологии различных миелоидных линий дифференцировки, при этом они играют важную роль в регуляции врожденного и адаптивного иммунитета. TREM-подобный транскрипт (TLT)-1 принадлежит к данному семейству белков, несмотря на то, что ген TLT-1 экспрессируется только в одной линии дифференцировки, а именно, в мегакариоцитах и тромбоцитах (кровяных пластинках), и находится исключительно в альфа-гранулах мегакариоцитов и тромбоцитов. TLT-1 представляет собой трансмембранный белок, который экспонируется на поверхности активированных тромбоцитов при высвобождении альфа-гранул. На сегодняшний день TLT-1 не обнаружен на поверхности покоящихся тромбоцитов или на поверхности клеток любого другого типа.

TLT-1 содержит внеклеточную глобулярную головку, область стебля, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, содержащий иммунорецепторные тирозиновые ингибирующие мотивы (Washington et al. Blood, 2002; 100: 3822-3824). Внеклеточная глобулярная головка человеческого TLT-1 (hTLT-1) представляет собой отдельный иммуноглобулиноподобный (Ig-подобный) домен. Он соединен с мембраной тромбоцита с помощью линкерного участка, состоящего из 37 аминокислот, называемого стеблем (Gattis et al., Jour Biol Chem, 2006, 281, 19, 13396-13403).

Предполагаемая длина трансмембранного сегмента hTLT-1 составляет 20 аминокислот. TLT-1 также содержит цитоплазматический иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (ITIM), который может функционировать в качестве мотива для передачи внутриклеточного сигнала.

Часть TLT-1 отделяется при активации тромбоцитов, образуя растворимую форму (sTLT-1) (Gattis et al., Jour Biol Chem, 2006, 281, 19, 13396-13403). Сайт расщепления расположен в непосредственной близости от мембраны тромбоцита. В тромбоцитах также существует более короткая изоформа TLT-1 с усеченным внутриклеточным доменом.

TLT-1 участвует в регулировании свертывания крови и, возможно, воспаления в участке повреждения. TLT-1 играет роль в агрегации тромбоцитов в ответ на субоптимальную концентрацию некоторых агонистов тромбоцитов (Giomarelli et al., Thromb Haemost 2007; 97: 955-963). Наиболее хорошо описанный лиганд TLT-1 представляет собой фибриноген (Washington et al. J Clin Invest 2009; 119: 1489-3824). Недавно было показано, что TLT-1 также связывает фактор фон Виллебранда (Doerr A et al., тезис доклада PB359 на собрании Международного общества по изучению тромбоза и гемостаза в 2019 году). Предполагается, что sTLT-1 играет роль при кровотечении, связанном с сепсисом, посредством подавления активации лейкоцитов и модулирования перекрестного взаимодействия тромбоцитов и нейтрофилов (Derive, J Immunol 2012, 188: 5585-5592).

В рамках настоящего изобретения TLT-1 может иметь происхождение от любого позвоночного животного, например, любого млекопитающего, например, грызуна (например, мыши, крысы или морской свинки), представителя отряда зайцеобразных (например, кролика), представителя отряда парнокопытных (например, свиньи, коровы, овцы или верблюда) или примата (например, обезьяны или человека). TLT-1 предпочтительно представляет собой человеческий TLT-1. TLT-1 может транслироваться с любого встречающегося в природе генотипа или аллеля, который дает начало функциональному белку TLT-1. Неограничивающий пример одного человеческого TLT-1 представляет собой полипептидную последовательность под SEQ ID NO: 2.

Целевая молекула для антитела к TLT-1 может представлять собой любую молекулу TLT-1, как описано в данном документе.

Антитела к FVII(a)

Термин «антитело к FVII(a)» в данном документе относится к антителу, мишенью которого является FVII(а). Антитело к FVII(а) способно к связыванию с молекулами FVII(а), как описано в данном документе; включая без ограничения эндогенный FVII(a), обнаруженный в плазме крови человека, экзогенный FVII(a), такой как рекомбинантный человеческий FVII(a) дикого типа, и эндогенный FVII(a), обнаруженный в плазме крови животных, таких как кролик, мышь, крыса, собака или обезьяна.

«Антитело к FVII(а)» может представлять собой моноклональное моноспецифическое антитело, мишенью которого является FVII(а). Моноспецифическое антитело к FVII(а), как правило, содержит два идентичных антигенсвязывающих сайта, которые связывают FVII(а); неограничивающие примеры представляют собой моноклональные антитела IgG4 к FVII(а).

Подходящие антитела к FVII(a) включают без ограничения любое из антител к FVII(a), показанных в таблице 3.

Таблица 3

Антитело	Мишень	VL SEQ ID NO	VH SEQ ID NO	Константный домен
mAb0522	FVII(a)	846	850	K
Fab0883	FVII(a)	814	818	G
mAb0005	FVII(a)	750	754	M
mAb0004	FVII(a)	14	18	M
mAb0013	FVII(a)	46	50	M
mAb0018	FVII(a)	62	66	M
mAb0544	FVII(a)	694	698	M
mAb0552	FVII(a)	702	706	M
mAb0001	FVII(a)	710	714	M
mAb0007	FVII(a)	718	722	M
mAb0578	FVII(a)	726	730	M
mAb0701	FVII(a)	734	738	M
mAb0587	FVII(a)	742	746	M

Антитело к FVII(a) может обладать способностью конкурировать с любым из антител, показанных в таблице 3, за связывание с FVII(a). Наличие или отсутствие конкуренции между антителом к FVII(a) и любым из антител, показанных в таблице 3, за связывание с FVII(a), можно определить способами (то есть посредством анализов конкурентного связывания), которые являются хорошо известными, такими как поверхностный плазмонный резонанс (SPR), ELISA или проточная цитометрия. В примере 7 описано, как конкурентное связывание с FVII(a) можно определить с помощью конкурентного ELISA.

В одном варианте осуществления антитело к FVII(a) связывается с FVII(a) с высокой степенью аффинности. Антитело к FVII(a) может характеризоваться K_D в отношении его мишени, составляющей менее 1 пМ, например, менее 10 пМ, например, менее 100 пМ, например, менее 200 пМ, например, менее 400 пМ, например, менее 600 пМ, например, менее 1 нМ, например, менее 5 нМ, например, менее 10 нМ, например, менее 20 нМ, например, менее 50 нМ, например, менее 100 нМ, например, менее 200 нМ, например, менее 400 нМ, например, менее 600 нМ, например, менее 800 нМ. In vivo высокоаффинное антитело к FVII(a) снижает клиренс FVII(a) посредством образования комплекса с ним. Тем самым оно продлевает период полужизни FVII(a) и обуславливает его накопление в кровотоке. Таким образом, антитело может обеспечивать повышенную равновесную концентрацию FVII(а).

В одном варианте осуществления антитело к FVII(a) не препятствует биологической функции FVII(a). В одном из вариантов осуществления антитело к FVII(a) не предупреждает активацию эндогенного FVII до FVIIa. Например, антитела к FVII(a) не нарушают способность FVII превращаться в FVIIa (т.е. аутоактивироваться), в то время как он связан с TF (как описано в примере 12). Также предпочтительно, чтобы антитело к FVII(a) не предупреждало образование так называемого комплекса инициации FVII(a) с тканевым фактором (TF) и активацию фактора X (FX) TF-зависимым или независимым образом (как описано в примере 10). В одном из вариантов осуществления антитело к FVII(а) не конкурирует с субстратами или кофакторами FVII(а). Однако антитело к FVII(a) может конкурировать с ингибиторами FVIIa, такими как антитромбин (AT) и альфа-2-макроглобулин (как описано в примере 11).

Антитела к TLT-1

Термин «антитело к TLT-1» в данном документе относится к антителу, мишенью которого является TLT-1. Антитело к TLT-1 способно к связыванию с молекулами TLT-1, как описано в данном документе. Антитело к TLT-1 может представлять собой моноклональное моноспецифическое антитело.

Подходящие антитела к TLT-1 включают без ограничения антитела к TLT-1, показанные в таблице 4

Таблица 4

Антитело	Мишень	VL SEQ ID NO	VH SEQ ID NO	Константный домен
mAb0524	TLT-1	854	858	J
mAb0012	TLT-1	862	866	A
mAb0082	TLT-1	902	906	A
mAb1038	TLT-1	910	914	A
mAb1047	TLT-1	918	922	A
mAb1049	TLT-1	926	930	A
mAb0061	TLT-1	886	890	A
mAb0023	TLT-1	870	874	A
mAb0051	TLT-1	878	882	A
mAb0062	TLT-1	894	898	A

Антитело к TLT-1 может обладать способностью конкурировать с любым из антител, показанных в таблице 4, за связывание с TLT-1. Наличие или отсутствие конкуренции между антителом к TLT-1 и любым из антител, показанных в таблице 4, за связывание с TLT-1, можно определить способами, которые являются хорошо известными (то есть посредством анализов конкурентного связывания), такими как поверхностный плазмонный резонанс (SPR), ELISA или проточная цитометрия. Конкурентное связывание с TLT-1 можно определить с помощью конкурентного ELISA. В примере 32 описано, как конкурентное связывание с TLT-1 можно определить с помощью конкурентного ELISA.

Антитело к TLT-1 может характеризоваться K_D в отношении его мишени, составляющей менее 1 пМ, например, менее 10 пМ, например, менее 100 пМ, например, менее 200 пМ, например, менее 400 пМ, например, менее 600 пМ, например, менее 1 нМ, например, менее 5 нМ, например, менее 10 нМ, например, менее 20 нМ, например, менее 50 нМ, например, менее чем 100 нМ, например, менее 200 нМ, например, менее 400 нМ, например, менее 600 нМ, например, менее 800 нМ.

Предпочтительно, чтобы антитело к TLT-1 не препятствовало осуществлению функций TLT-1 и, в частности, не подавляло агрегацию тромбоцитов.

В одном предпочтительном варианте осуществления антитела к TLT-1 способны к связыванию с TLT-1, не препятствуя агрегации тромбоцитов.

В другом предпочтительном варианте осуществления антитела к TLT-1 способны к связыванию с TLT-1, не конкурируя с фибриногеном за связывание с TLT-1.

В другом предпочтительном варианте осуществления антитела к TLT-1 не препятствуют отделению TLT-1.

Предпочтительно, чтобы антитела к TLT-1 не связывались или не демонстрировали низкую степень аффинности в отношении любого другого триггерного рецептора, экспрессируемого на миелоидных клетках (TREM), кроме TLT-1, или в отношении любого другого рецептора на покоящихся или активированных тромбоцитах.

В одном варианте осуществления антитело к TLT-1 связывается со стеблем TLT-1.

Биспецифические антитела к FVII(a)/TLT-1

Биспецифические антитела по настоящему изобретению содержат первый антигенсвязывающий участок, способный к связыванию FVII(a), и второй антигенсвязывающий участок, способный к связыванию TLT-1.

Антигенсвязывающий участок к FVII(a)

В одном аспекте биспецифические антитела по настоящему изобретению содержат первый антигенсвязывающий участок, способный к связыванию FVII(a).

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения первый антигенсвязывающий участок биспецифического антитела конкурирует за связывание с FVII(a) с любым из антител к FVII(a), указанных в таблице 3; имеет эпитоп, идентичный по отношению к любому из антител, указанных в таблице 3; содержит области CDR, идентичные по отношению к любому из антител, указанных в таблице 3; и содержит области VL и VH, идентичные по отношению к любому из антител, указанных в таблице 3.

Антигенсвязывающий участок к TLT-1

В одном аспекте биспецифические антитела по настоящему изобретению содержат второй антигенсвязывающий участок, способный к связыванию TLT-1.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения второй антигенсвязывающий участок биспецифического антитела конкурирует за связывание с TLT-1 с любым из антител к TLT-1, указанных в таблице 4; имеет эпитоп, идентичный по отношению к любому из антител, указанных в таблице 4; содержит области CDR, идентичные по отношению к любому из антител, указанных в таблице 4; и имеет области VL и VH, идентичные по отношению к любому из антител, указанных в таблице 4.

Модифицированные эффекторные функции

Биспецифические антитела по настоящему изобретению могут содержать Fc-область, которая может иметь аминокислотную последовательность дикого типа, или она может содержать аминокислотные замены, которые модулируют эффекторные функции антитела, см., например, (Wang et al.: Protein Cell. 9 (2018), pp. 63-73). Конкретные примеры вариантов Fc с модифицированными эффекторными функциями представляют собой варианты, у которых связывание с Fcγ -рецепторами является сниженным. Один конкретный пример такого варианта представляет собой IgG1, содержащий замены L234A, L235E, G237A, A330S и P331S (нумерация остатков в соответствии с индексом EU), с пониженной аффинностью в отношении определенных Fcγ-рецепторов и C1q.

Требуемое свойство биспецифических антител по настоящему изобретению представляет собой длинный период полужизни in vivo. Биспецифические антитела, содержащие Fc-область, могут быть рециркулированы и сохранены посредством рецептора FcRn, что, в свою очередь, может привести к требуемому удлинению периода полужизни. Для биспецифических антител по настоящему изобретению, у которых отсутствует Fc-область, период полужизни можно продлить другими способами. Различные способы и принципы получения продленного периода полужизни полипептидов и антител известны из уровня техники, см., например, Kontermann: Expert Opinion on Biological Therapy, 16 (2016), pp. 903-915) и ссылки в ней.

Помимо продления периода полужизни полипептидов и антител, основанного на Fc, гибридизация или конъюгация с альбумином или вариантами альбумина доказали свою эффективность в отношении удлинения периода полужизни. Другой подход представляет собой присоединение полимеров, таких как XTEN или PEG (вставить ссылку). Кроме того, продление периода полужизни in vivo может достигаться путем присоединения фрагмента, связывающего альбумин, см., например, Tan et al.: Current Pharmaceutical Design 24 (2018), pp. 4932-4946; Kontermann: Expert Opinion on Biological Therapy, 16 (2016), pp. 903-915) и Kontermann: Current Opinion in Biotechnology 22 (2011), pp 868-876).

Функциональные признаки

За счет связывания сFVII(a) биспецифические антитела по настоящему изобретению могут продлевать активный период полужизни в кровотоке FVIIa, присутствующего в кровотоке; за счет связывания с TLT-1 биспецифические антитела и связанный FVII(а) направляются на поверхность активированного тромбоцита. Это в свою очередь приводит к повышению накопления FVIIa на активированном тромбоците и, таким образом, к усилению прокоагулянтной активности FVIIa в месте повреждения сосудов. Таким образом, описанные в данном документе биспецифические антитела способны обеспечивать эндогенный пул FVII(a) улучшенными фармакокинетическими (PK) и фармакодинамическими (PD) свойствами.

Известно, что у людей активный период полужизни введенного рекомбинантного FVIIa составляет приблизительно 2-3 часа. Считается, что короткий период полужизни рекомбинантного FVIIa обусловлен участием нескольких механизмов, включая ингибирование антитромбином III (AT), ингибирование альфа-2-макроглобулином (α2M) и почечный клиренс. Считается, что сходные механизмы распространяются на эндогенный FVIIa, тем самым обеспечивая ему такой же короткий период полужизни.

Чтобы продлить активный период полужизни FVIIa, в том числе период полужизни эндогенного FVIIa, биспецифические антитела, описанные в данном документе, стремятся перехватить один или более из этих механизмов выведения с помощью своего плеча к FVII или так называемого «первого антигенсвязывающего участка» без потери эндогенной активности FVIIa. Fc-часть комплекса biAb:FVIIa будет опосредовать в эндосоме и путем связывания с FcRn рециркуляцию комплекса и сохранение его от разрушения. Кроме того, высокоаффинное плечо к FVII биспецифических антител защищает эндогенный FVIIa от ингибирования α2M и почечного клиренса за счет увеличенного размера молекулы комплекса biAb:FVIIa по сравнению с размером свободного эндогенного FVIIa. Плечо к TLT-1 биспецифических антител селективно локализует эндогенный FVIIa с пролонгированным действием на активированных тромбоцитах. Эта локализация FVIIa на активированных тромбоцитах усиливает активность FVIIa без увеличения его чувствительности к ингибированию AT.

Биспецифические антитела по настоящему изобретению могут увеличивать среднее время удержания (MRT) эндогенного или экзогенного FVII(a). Предпочтительно, чтобы биспецифические антитела были способны усиливать активность FVII(a) in vivo.

Среднее время удержания

Среднее время удержания (MRT) представляет собой среднее время пребывания молекулы в организме, доступное для терапевтической активности. MRT рассчитывают по уравнению 1 как функцию объема распределения в равновесном состоянии (Vss), деленного на системный клиренс (CL).

MRT = Vss/CL Ур. 1

Результаты выражают в единицах времени. MRT коррелирует с эффективным периодом полужизни в плазме крови (t_½) в соответствии с уравнением 2.

MRT = ln(2)*t_1/2 Ур. 2

Способность антитела увеличивать MRT FVII(a) можно определить хорошо известными способами, такими как способы, описанные в Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Data Analysis: Concepts & Applications (Gabrielsson and Weiner). Например, посредством анализа концентрации в плазме крови или профилей активности FVII(a) после в/в или п/к введения экспериментальным животным, например, мышам, крысам или обезьянам. Способность антитела увеличивать функциональное MRT для FVII(a) можно определить посредством анализа профилей активности FVII(a) в плазме крови, измеренных с помощью анализов, таких как без ограничения анализ активности FVIIa, описанный в примере 8.

Способность антитела увеличивать MRT и функциональное MRT для FVII(a) можно, например, определить, как описано в примерах 9 и 18.

В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела по настоящему изобретению способны увеличивать MRT для FVII(a) в по меньшей мере 2 раза, в по меньшей мере 3 раза, в по меньшей мере 5 раз, в по меньшей мере 10 раз, в по меньшей мере 20 раз, в по меньшей мере 30 раз или в по меньшей мере 40 раз по сравнению с введением FVII(a) в отсутствие антитела по настоящему изобретению (только полипептид FVII(a)).

В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела по настоящему изобретению способны увеличивать функциональное MRT для FVII(a), измеренное с помощью анализа активности FVIIa, описанного в примере 8, в по меньшей мере 2 раза, в по меньшей мере 3 раза, в по меньшей мере 5 раз, в по меньшей мере 10 раз, в по меньшей мере 20 раз, в по меньшей мере 30 раз или в по меньшей мере 40 раз по сравнению с введением FVII(а) в отсутствие биспецифического антитела по настоящему изобретению.

Накопление эндогенного FVIIa

Способность биспецифических антител по настоящему изобретению повышать уровень эндогенного функционально активного FVIIa в кровотоке можно, например, определить посредством измерения уровня эндогенного FVIIa до и после введения антитела экспериментальным животным, например, мышам, крысам или обезьянам, при измерении с помощью анализов, таких как без ограничения анализ активности FVIIa, описанный в примере 8.

Способность антитела повышать уровень эндогенного функционально активного FVIIa в кровотоке можно, например, определить, как описано в примерах 27 и 28.

В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела по настоящему изобретению способны повышать уровень эндогенного FVIIa в кровотоке в по меньшей мере 2 раза, в по меньшей мере 4 раза, в по меньшей мере 10 раз, в по меньшей мере 20 раз, в по меньшей мере 40 раз, в по меньшей мере 80 раз, в по меньшей мере 160 раз, в по меньшей мере 320 раз, в по меньшей мере 640 раз по сравнению с уровнем эндогенного FVIIa в кровотоке в отсутствие введенного биспецифического антитела.

TLT-1- и TF-независимое тромбинообразование

В одном из аспектов биспецифические антитела по настоящему изобретению способны поддерживать или увеличивать TLT-1- и TF-независимую способность фактора VIIa генерировать тромбин.

Способность антитела увеличивать тромбинообразование с помощью полипептида FVII(a) можно определить способами, хорошо известными из уровня техники, такими как, например, анализ тромбинообразования, описанный в примере 5. В ходе данного анализа тромбинообразование измеряют в плазме крови человека с индуцированной гемофилией А в присутствии фосфолипидов, 25 нМ FVIIa и антитела в концентрации, приближающейся к насыщению добавленного FVIIa. Насыщение наступает, если >90% FVIIa связывается антителом в соответствии с измеренной константой диссоциации, определенной для взаимодействия FVIIa-антитело, например, с помощью SPR, как проиллюстрировано в примере 6. На основании соотношения пикового значения образования тромбина в присутствии и отсутствии антител, антитела подразделяют на стимулирующие (> 120%), ингибирующие (<90%) или нейтральные (90-120%).

В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела по настоящему изобретению способны поддерживать (нейтральные)/повышать (стимулирующие) способность полипептида фактора VII(а) к тромбинообразованию, что измерено в анализе тромбинообразования, по сравнению с FVII(а) в отсутствие антитела.

В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела по настоящему изобретению способны увеличивать способность фактора VII(а) к тромбинообразованию, что измерено в анализе образования тромбина, на по меньшей мере 20% по сравнению с FVII(а) в отсутствие антитела.

Ингибирование антитромбином и/или альфа-2-макроглобулином

В одном аспекте биспецифические антитела по настоящему изобретению способны снижать чувствительность FVIIa к ингибированию антитромбином (AT) и/или альфа-2-макроглобулином.

Способность антитела снижать ингибирование FVIIa антитромбином (AT) и/или альфа-2-макроглобулином можно определить способами, хорошо известными из уровня техники, такими как способы, описанные в примерах 5 и 11.

В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела по настоящему изобретению способныснижать ингибирование FVIIa антитромбином (AT) и/или альфа-2-макроглобулином по сравнению с ингибированием FVIIa в отсутствие антитела.

TLT-1-зависимое образование FXa (анализ стимулирующей активности)

В одном из аспектов биспецифические антитела по настоящему изобретению способны поддерживать или увеличивать способность полипептида FVIIa стимулировать активацию FX в присутствии содержащей TLT-1 прокоагулянтной мембранной поверхности.

Способность биспецифического антитела по настоящему изобретению повышать способность полипептида FVIIa стимулировать активацию FX можно определить способами, хорошо известными из уровня техники, такими как, например, анализ TLT-1-зависимой стимулирующей активности, описанный в примере 21. В ходе данного анализа активацию FX измеряют в присутствии FX (150 нМ), FVIIa (2,5 нМ), фосфолипидных мембран, содержащих TLT-1 (4 нМ), и биспецифического антитела к FVII(a)/TLT-1. Так называемая стимулирующая активность биспецифического антитела (выраженная в виде кратного увеличения) представляет собой количество образованного FXa в присутствии 100 нМ биспецифического антитела по сравнению с количеством, образованным с помощью FVIIa в отсутствие биспецифического антитела.

В некоторых вариантах осуществления стимулирующая активность биспецифических антител по настоящему изобретению является по меньшей мере 2-кратной, по меньшей мере 5-кратной, по меньшей мере 10-кратной, по меньшей мере 20-кратной, по меньшей мере 30-кратной, по меньшей мере 40-кратной, по меньшей мере 60-кратной, по меньшей мере 80-кратной, по меньшей мере 100-кратной или по меньшей мере 150-кратной.

TLT-1-зависимое тромбообразование в цельной крови

В одном аспекте биспецифические антитела по настоящему изобретению способны стимулировать тромбообразование сходным или лучшим образом по сравнению с терапевтически эффективной концентрацией рекомбинантного FVIIa в условиях гемофилии А.

Способность биспецифического антитела улучшать тромбообразование в цельной крови можно определить способами, хорошо известными из уровня техники, такими как, например, тромбоэластография, описанная в примере 29. В ходе данного анализа тромбообразование измеряют в цельной крови человека с индуцированной гемофилией-А, к которой добавляют биспецифические антитела вместе с FVII, FVIIa и FVIIa:AT в концентрациях, имитирующих уровни соответствующих эндогенных факторов в плазме крови в равновесном состоянии in vivo при повторном введении биспецифического антитела, как описано в примерах 27, 28 и 29. Свертывание крови индуцируют посредством добавления пептида-агониста PAR1 SFLLRN и кальция. Время свертывания в данных условиях сравнивают со временем свертывания, достигаемым посредством добавления 25 нМ FVIIa в отсутствие антител.

В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела по настоящему изобретению способны сокращать время свертывания в цельной крови с индуцированной гемофилией А человека до уровня, сходного или ниже чем уровень, достигаемый посредством добавления 25 нМ FVIIa. В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела по настоящему изобретению способны сокращать время свертывания в цельной крови с индуцированной гемофилией A человека до уровня, сходного или ниже чем уровень, достигаемый посредством добавления 2 нМ FVIIa, 4 нМ FVIIa, 6 нМ FVIIa, 8 нМ FVIIa, 10 нМ FVIIa, 12 нМ FVIIa, 16 нМ FVIIa или 20 нМ FVIIa.

Фармацевтические составы

В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает композиции и составы, содержащие биспецифические антитела, описанные в данном документе. Например, настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, которая содержит биспецифическое антитело, составленное вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтический состав содержит биспецифическое антитело, которое присутствует в концентрации от 80 мг/мл до 200 мг/мл, например, 100-180 мг/мл, и где указанный состав имеет pH от 2,0 до 10,0. Состав может дополнительно содержать одно или более из буферной системы, консерванта, средства регуляции тоничности, хелатообразующего средства, стабилизатора или поверхностно-активного вещества, а также их различных комбинаций. Применение консервантов, изотонических средств, хелатообразующих средств, стабилизаторов и поверхностно-активных веществ в фармацевтических композициях хорошо известно специалисту в данной области. Можно сослаться на Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th edition, 1995.

В одном варианте осуществления фармацевтический состав представляет собой водный состав. Такой состав, как правило, представляет собой раствор или суспензию, но также может содержать коллоиды, дисперсии, эмульсии и многофазные материалы. Термин «водный состав» определяется как состав, содержащий по меньшей мере 50% вес/вес воды. Аналогичным образом, термин «водный раствор» определяется как раствор, содержащий по меньшей мере 50% вес/вес воды, а термин «водная суспензия» определяется как суспензия, содержащая по меньшей мере 50% вес/вес воды.

В другом варианте осуществления фармацевтический состав представляет собой высушенный сублимацией состав, к которому перед применением врач или пациент добавляет растворители и/или разбавители.

В дополнительном аспекте фармацевтический состав содержит водный раствор полипептида FVII(a), биспецифического антитела, описанного в данном документе, и буфера, где антитело присутствует в концентрации от 1 мг/мл или выше и где указанный состав имеет рН от приблизительно 2,0 до приблизительно 10,0.

Композицию по настоящему изобретению можно вводить парентерально, например, внутривенно, например, внутримышечно, например, подкожно; предпочтительно подкожно. Композицию по настоящему изобретению можно вводить профилактически.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно применять для лечения субъекта с коагулопатией. Используемый в данном документе термин «субъект» предусматривает любого пациента-человека или позвоночное животное, отличное от человека, с коагулопатией.

Варианты применения в медицине

Используемый в данном документе термин «лечение» относится к консервативной терапии любого человека или другого субъекта-животного, нуждающегося в этом. Предполагается, что указанный субъект подвергся физикальному осмотру практикующим врачом, который поставил предварительный или окончательный диагноз, который указывал бы на то, что применение указанного конкретного лечения является благоприятным для здоровья указанного человека или другого субъекта-животного. Время и цель указанного лечения могут варьировать от одного индивидуума к другому в зависимости от состояния здоровья субъекта. Также предусмотрено превентивное или профилактическое введение прокоагулянтных соединений по настоящему изобретению, при этом предупреждение определяется как замедление или предотвращение проявления или обострения одного или более симптомов заболевания или нарушения. Таким образом, указанное лечение может являться профилактическим, паллиативным, симптоматическим («по требованию») и/или радикальным.

В рамках настоящего изобретения профилактическое, паллиативное и/или симптоматическое лечение может представлять собой отдельные аспекты настоящего изобретения.

Коагулопатия, которая приводит к усилению склонности к кровотечению, может быть вызвана любым качественным или количественным дефицитом любого прокоагулянтного компонента нормального каскада свертывания крови или любой активацией фибринолиза. Такие коагулопатии могут быть врожденными, и/или приобретенными, и/или ятрогенными, и их определяет специалист в данной области.

Неограничивающие примеры врожденных гипокоагулопатий представляют собой гемофилию A, гемофилию B, дефицит фактора VII, дефицит фактора X, дефицит фактора XI, болезнь фон Виллебранда и виды тромбоцитопении, такие как тромбастения Гланцмана и синдром Бернара-Сулье.

Неограничивающий пример приобретенной коагулопатии представляет собой дефицит сериновой протеазы, вызванный дефицитом витамина K; такой дефицит витамина K может быть вызван введением антагониста витамина K, такого как варфарин. Приобретенная коагулопатия также может возникнуть после обширной травмы. В данном случае, также известном как «порочный круг кровотечения», она характеризуется гемодилюцией (тромбоцитопенией разведения и разбавлением факторов свертывания крови), гипотермией, истощением факторов свертывания и метаболическими нарушениями (ацидоз). Инфузионная терапия и повышенный фибринолиз могут усугубить эту ситуацию. Указанное кровотечение может иметь место в любой части тела.

Гемофилия A с наличием «ингибиторов» (то есть с наличием алло-антител к фактору VIII) и гемофилия B с наличием «ингибиторов» (то есть с наличием алло-антител к фактору IX) представляют собой неограничивающие примеры коагулопатий, которые являются частично врожденными и частично приобретенными.

Неограничивающий пример ятрогенной коагулопатии представляет собой коагулопатию, которая вызвана чрезмерной и/или несоответствующей инфузионной терапией, например, коагулопатию, которая может быть вызвана переливанием крови.

В одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения кровотечение связано с гемофилией A. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения кровотечение связано с гемофилией B. В другом предпочтительном варианте осуществления кровотечение связано с гемофилией A или B с наличием приобретенных ингибиторов. В другом предпочтительном варианте осуществления кровотечение связано с дефицитом FVII. В другом предпочтительном варианте осуществления кровотечение связано с тромбастенией Гланцмана. В другом варианте осуществления кровотечение связано с болезнью фон Виллебранда. В другом варианте осуществления кровотечение связано с тяжелым повреждением ткани. В другом варианте осуществления кровотечение связано с тяжелой травмой. В другом варианте осуществления кровотечение связано с хирургическим вмешательством. В другом варианте осуществления кровотечение связано с геморрагическим гастритом и/или энтеритом. В другом варианте осуществления кровотечение представляет собой профузное маточное кровотечение, такое как отслойка плаценты. В другом варианте осуществления кровотечение происходит в органах с ограниченной возможностью механического гемостаза, например, внутри черепной коробки, внутри уха или внутри глаза. В другом варианте осуществления кровотечение связано с антикоагулянтной терапией.

В дополнительном варианте осуществления кровотечение может быть связано с тромбоцитопенией. Пациентам с тромбоцитопенией биспецифические антитела, описанные в данном документе, можно вводить совместно с тромбоцитами.

Пути введения

Описанные в данном документе биспецифические антитела могут подходить для парентерального введения, предпочтительно внутривенного и/или подкожного введения. Подкожное введение представляет собой предпочтительный путь введения.

Схемы введения доз

Биодоступность и период полужизни биспецифических антител, описанных в данном документе, делают их особенно привлекательными лекарственными средствами для профилактического лечения посредством подкожного введения для субъектов с приобретенной и/или врожденной коагулопатией. Описанные в данном документе биспецифические антитела можно вводить один раз в неделю, например, один раз в две недели, предпочтительно один раз в месяц, субъектам, имеющим приобретенную и/или врожденную коагулопатию, но у которых отсутствует кровотечение. Описанные в данном документе биспецифические антитела можно вводить перед хирургической операцией субъектам, имеющим коагулопатию и подлежащим проведению инвазивной процедуры, такой как хирургическое вмешательство. Описанные в данном документе биспецифические антитела можно вводить субъектам, имеющим коагулопатию, и субъектам, которые подвергаются инвазивной процедуре, такой как хирургическое вмешательство.

Описанные в данном документе биспецифические антитела можно также вводить совместно с экзогенным FVIIa, таким как полученный из плазмы крови или полученный рекомбинантным способом FVIIa, для лечения по требованию или профилактического лечения субъектов, имеющих коагулопатию или переносящих приступ кровотечения.

Доза, вводимая субъектам, имеющим коагулопатию, будет зависеть от пути введения, вводится ли она профилактически или по требованию, а также от индивидуальных особенностей. Для подкожного введения потребуются большие дозы, чем для внутривенного введения.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения биспецифическое антитело вводят подкожно в дозе от 1,0 нмоль/кг до 30,0 нмоль/кг.

Если в описании не указано иное, термины, представленные в форме единственного числа, также включают множественное число.

Перечень вариантов осуществления

Настоящее изобретение дополнительно описано с помощью следующего неограничивающего перечня вариантов осуществления настоящего изобретения:

1. Биспецифическое антитело, содержащее

(i) первый антигенсвязывающий участок, способный к связыванию фактора VII(a), и

(ii) второй антигенсвязывающий участок, способный к связыванию TREM-подобного транскрипта 1 (TLT-1).

2. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок конкурирует за связывание с FVII(a) с любым из антител к FVII(a) из таблицы 3:

Антитело	Мишень	VL SEQ ID NO	VH SEQ ID NO	Константный домен
mAb0522	FVII(a)	846	850	B
Fab0883	FVII(a)	814	818	G
mAb0005	FVII(a)	750	754	M
mAb0004	FVII(a)	14	18	M
mAb0013	FVII(a)	46	50	M
mAb0018	FVII(a)	62	66	M
mAb0544	FVII(a)	694	698	M
mAb0552	FVII(a)	702	706	M
mAb0001	FVII(a)	710	714	M
mAb0007	FVII(a)	718	722	M
mAb0578	FVII(a)	726	730	M
mAb0701	FVII(a)	734	738	M
mAb0587	FVII(a)	742	746	M

3. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где антитело конкурирует согласно конкурентному анализу ELISA, описанному в примере 7.

4. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего аминокислотные остатки H115, T130, V131 и R392 из FVII(a) (SEQ ID NO: 1).

5. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего один или более из аминокислотных остатков H115, T130, V131 и R392 из FVII(a) (SEQ ID NO: 1).

6. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего следующие аминокислотные остатки: R113, C114, H115, E116, G117, Y118, S119, L120, T130, V131, N184, T185, P251, V252, V253, Q388, M391 и R392 из FVII(a) (SEQ ID NO: 1).

7. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего один или более из следующих аминокислотных остатков: R113, C114, H115, E116, G117, Y118, S119, L120, T130, V131, N184, T185, P251, V252, V253, Q388, M391 и R392 из FVII(a) (SEQ ID NO: 1).

8. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRL1, представленную под SEQ ID NO: 847 с 0, 1, 2 или 3 аминокислотными заменами,

- CDRL2, представленную под SEQ ID NO: 848 с 0, 1, 2 или 3 аминокислотными заменами,

- CDRL3, представленную под SEQ ID NO: 849 с 0, 1 или 2 аминокислотными заменами,

- CDRH1, представленную под SEQ ID NO: 851 c 0 или 1 аминокислотной заменой,

- CDRH2, представленную под SEQ ID NO: 852 с 0 или 1 аминокислотной заменой,

- CDRH3, представленную под SEQ ID NO: 853 с 0, 1, 2 и 3 аминокислотными заменами.

9. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRL1, представленную под SEQ ID NO: 847,

- CDRL2, представленную под SEQ ID NO: 848,

- CDRL3, представленную под SEQ ID NO: 849,

- CDRH1, представленную под SEQ ID NO: 851,

- CDRH2, представленную под SEQ ID NO: 852, и

- CDRH3, представленную под SEQ ID NO: 853.

10. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит последовательности вариабельного домена тяжелой цепи и вариабельного домена легкой цепи в соответствии с антителом, перечисленным в таблице 13 или 14, где аффинность (K_D) составляет 1 нМ или меньше.

11. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит последовательности вариабельного домена тяжелой цепи и вариабельного домена легкой цепи в соответствии с антителом, перечисленным в таблице 13 или 14, где аффинность (K_D) составляет 5 нМ или меньше.

12. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит последовательности вариабельного домена тяжелой цепи и вариабельного домена легкой цепи в соответствии с антителом, перечисленным в таблице 13 или 14, где аффинность (K_D) составляет 10 нМ или меньше.

13. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит последовательности вариабельного домена тяжелой цепи и вариабельного домена легкой цепи в соответствии с антителом, перечисленным в таблице 13 или 14, где аффинность (K_D) составляет 25 нМ или меньше.

14. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления, где антитело характеризуется аффинностью (K_D) в отношении FVII(a), составляющей менее 1 пМ, например, менее 10 пМ, например, менее 100 пМ, например, менее 200 пМ, например, менее 400 пМ, например, менее 600 пМ, например, менее 1 нМ, например, менее 5 нМ, например, менее 10 нМ, например, менее 20 нМ, например, менее 50 нМ, например, менее 100 нМ, например, менее 200 нМ, например, менее 400 нМ, например, менее 600 нМ, например, менее 800 нМ.

15. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен легкой цепи, определенный под SEQ ID NO:846, и вариабельный домен тяжелой цепи, определенный под SEQ ID NO:850.

16. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 15, где последовательности вариабельного домена легкой цепи и/или вариабельного домена тяжелой цепи содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 аминокислотных замен.

17. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где второй антигенсвязывающий участок конкурирует за связывание с TLT-1 с любым из антител к TLT-1 из таблицы 4:

Антитело	Мишень	VL SEQ ID NO	VH SEQ ID NO	Константный домен
mAb0524	TLT-1	854	858	H
mAb0012	TLT-1	862	866	A
mAb0023	TLT-1	870	874	A
mAb0051	TLT-1	878	882	A
mAb0062	TLT-1	894	898	A

18. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 17, где антитело конкурирует согласно конкурентному анализу ELISA, описанному в примере 32.

19. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где второй антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего следующие аминокислотные остатки: K8, I9, G10, S11, L12, A13, N15, A16, F17, S18, D19, P20, A21 из TLT-1 (SEQ ID NO: 13).

20. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где второй антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRL1, представленную под SEQ ID NO: 855 с 0, 1, 2 или 3 аминокислотными заменами,

- CDRL2, представленную под SEQ ID NO: 856 с 0, 1 или 2 аминокислотными заменами,

- CDRL3, представленную под SEQ ID NO: 857 с 0, 1 или 2 аминокислотными заменами,

- CDRH1, представленную под SEQ ID NO: 859 с 0 или 1 аминокислотной заменой,

- CDRH2, представленную под SEQ ID NO: 860 с 0, 1, 2 или 3 аминокислотными заменами,

- CDRH3, представленную под SEQ ID NO: 861 с 0 или 1 аминокислотной заменой.

21. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где второй антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRL1, представленную под SEQ ID NO: 855,

- CDRL2, представленную под SEQ ID NO: 856,

- CDRL3, представленную под SEQ ID NO: 857,

- CDRH1, представленную под SEQ ID NO: 859,

- CDRH2, представленную под SEQ ID NO: 860,

- CDRH3, представленную под SEQ ID NO: 861.

22. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где второй антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRL1, представленную под SEQ ID NO: 871,

- CDRL2, представленную под SEQ ID NO: 872,

- CDRL3, представленную под SEQ ID NO: 873,

- CDRH1, представленную под SEQ ID NO: 875,

- CDRH2, представленную под SEQ ID NO: 876, и

- CDRH3, представленную под SEQ ID NO: 877.

23. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где второй антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRL1, представленную под SEQ ID NO: 879,

- CDRL2, представленную под SEQ ID NO: 880,

- CDRL3, представленную под SEQ ID NO: 881,

- CDRH1, представленную под SEQ ID NO: 883,

- CDRH2, представленную под SEQ ID NO: 884, и

- CDRH3, представленную под SEQ ID NO: 885.

24. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где второй антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRL1, представленную под SEQ ID NO: 895,

- CDRL2, представленную под SEQ ID NO: 896,

- CDRL3, представленную под SEQ ID NO: 897,

- CDRH1, представленную под SEQ ID NO: 899,

- CDRH2, представленную под SEQ ID NO: 900, и

- CDRH3, представленную под SEQ ID NO: 901.

25. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где второй антигенсвязывающий участок состоит из вариабельного домена легкой цепи, определенного под SEQ ID NO: 854, и вариабельного домена тяжелой цепи, определенного под SEQ ID NO: 858.

26. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 25, где последовательности вариабельного домена легкой цепи и/или вариабельного домена тяжелой цепи содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 аминокислотных замен.

27. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления, где антитело характеризуется аффинностью (K_D) в отношении TLT-1, составляющей менее 1 пМ, например, менее 10 пМ, например, менее 100 пМ, например, менее 200 пМ, например, менее 400 пМ, например, менее 600 пМ, например, менее 1 нМ, например, менее 5 нМ, например, менее 10 нМ, например, менее 20 нМ, например, менее 50 нМ, например, менее 100 нМ, например, менее 200 нМ, например, менее 400 нМ, например, менее 600 нМ, например, менее 800 нМ.

28. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен легкой цепи, определенный под SEQ ID NO:846, и вариабельный домен тяжелой цепи, определенный под SEQ ID NO:850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из вариабельного домена легкой цепи, определенного под SEQ ID NO: 854, и вариабельного домена тяжелой цепи, определенного под SEQ ID NO: 858.

29. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления, где антитело содержит Fc-область.

30. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 29, где Fc-область представляет собой Fc-вариант Fc-области IgG1, содержащий замены L234A, L235E, G237A, A330S и P331S.

31. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления, где антитело представляет гибридную молекулу или конъюгат антигенсвязывающих фрагментов антител.

32. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 31, где один или более связывающих фрагментов выбраны из группы Fab, Fab', Fab2, Fab'2 и scFv.

33. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления, где антитело представляет собой полиспецифическое антитело.

34. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит первый вариабельный домен легкой цепи, определенный под SEQ ID NO:846, и первый вариабельный домен тяжелой цепи, определенный под SEQ ID NO:850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из второго вариабельного домена легкой цепи, определенного под SEQ ID NO:854, и второго вариабельного домена тяжелой цепи, определенного под SEQ ID NO: 858, и где константные домены тяжелой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам тяжелой цепи, определены под SEQ ID NO: 5 и 4 соответственно, и где оба константных домена легкой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам легкой цепи, определены под SEQ ID NO: 12.

35. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит первый вариабельный домен легкой цепи, определенный под SEQ ID NO:846, и первый вариабельный домен тяжелой цепи, определенный под SEQ ID NO:850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из второго вариабельного домена легкой цепи, определенного под SEQ ID NO:854, и второго вариабельного домена тяжелой цепи, определенного под SEQ ID NO: 858, и где константные домены тяжелой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам тяжелой цепи, определены под SEQ ID NO: 943 и 942 соответственно, и где оба константных домена легкой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам легкой цепи, определены под SEQ ID NO: 12.

36. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит первый вариабельный домен легкой цепи, определенный под SEQ ID NO:846, и первый вариабельный домен тяжелой цепи, определенный под SEQ ID NO:850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из второго вариабельного домена легкой цепи, определенного под SEQ ID NO:854, и второго вариабельного домена тяжелой цепи, определенного под SEQ ID NO: 858, и где константные домены тяжелой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам тяжелой цепи, определены под SEQ ID NO: 7 и 6 соответственно, и где оба константных домена легкой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам легкой цепи, определены под SEQ ID NO: 12.

37. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит первый вариабельный домен легкой цепи, определенный под SEQ ID NO:846, и первый вариабельный домен тяжелой цепи, определенный под SEQ ID NO:850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из второго вариабельного домена легкой цепи, определенного под SEQ ID NO:854, и второго вариабельного домена тяжелой цепи, определенного под SEQ ID NO: 858, и где константные домены тяжелой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам тяжелой цепи, определены под SEQ ID NO: 4 и 5 соответственно, и где оба константных домена легкой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам легкой цепи, определены под SEQ ID NO: 12.

38. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит первый вариабельный домен легкой цепи, определенный под SEQ ID NO:846, и первый вариабельный домен тяжелой цепи, определенный под SEQ ID NO:850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из второго вариабельного домена легкой цепи, определенного под SEQ ID NO:854, и второго вариабельного домена тяжелой цепи, определенного под SEQ ID NO: 858, и где константные домены тяжелой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам тяжелой цепи, определены под SEQ ID NO: 942 и 943 соответственно, и где оба константных домена легкой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам легкой цепи, определены под SEQ ID NO: 12.

39. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит первый вариабельный домен легкой цепи, определенный под SEQ ID NO:846, и первый вариабельный домен тяжелой цепи, определенный под SEQ ID NO:850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из второго вариабельного домена легкой цепи, определенного под SEQ ID NO:854, и второго вариабельного домена тяжелой цепи, определенного под SEQ ID NO: 858, и где константные домены тяжелой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам тяжелой цепи, определены под SEQ ID NO: 6 и 7 соответственно, и где оба константных домена легкой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам легкой цепи, определены под SEQ ID NO: 12.

40. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где антитело конкурирует за связывание с FVII(a) и конкурирует за связывание с TLT-1 с одним или более из биспецифических антител, изложенных в таблице 5 (где сокращение для константного домена определено в соответствии с таблицей 2a):

Таблица 5

biAb	mAb к FVII(a)	mAb к TLT-1	Константный домен
biAb0001	mAb0865	mAb1076	H
biAb0352	mAb0350	mAb0351	I
biAb0015	mAb0865	mAb1038	H
biAb0090	mAb0865	mAb1049	H
biAb0095	mAb0865	mAb1047	H
biAb0100	mAb0522	mAb0524	L
biAb0241	mAb0865	mAb0023	H
biAb0242	mAb0865	mAb0051	H
biAb0243	mAb0865	mAb0062	H
biAb0244	mAb0864	mAb1076	H
biAb0245	mAb0873	mAb1076	H
biAb0011	mAb0875	mAb1076	H
biAb0016	mAb0875	mAb1038	H
biAb0096	mAb0875	mAb1047	H
biAb0091	mAb0875	mAb1049	H
biAb0012	mAb0872	mAb1076	H
biAb0017	mAb0872	mAb1038	H
biAb0097	mAb0872	mAb1047	H
biAb0092	mAb0872	mAb1049	H
biAb0013	mAb0874	mAb1076	H
biAb0018	mAb0874	mAb1038	H
biAb0098	mAb0874	mAb1047	H
biAb0093	mAb0874	mAb1049	H
biAb0014	mAb0873	mAb1076	H
biAb0019	mAb0873	mAb1047	H
biAb0099	mAb0873	mAb1047	H
biAb0094	mAb0873	mAb1049	H

41. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 38, где антитело конкурирует за связывание с FVII(a) в конкурентном ELISA и конкурирует за связывание с TLT-1 с одним или более из биспецифических антител, изложенных в таблице 5.

42. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 38, где антитело конкурирует согласно конкурентному анализу ELISA, описанному в примере 7 и примере 32.

43. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего аминокислотные остатки H115, T130, V131 и R392 из FVII(a) (SEQ ID NO: 1), и где второй антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего следующие аминокислотные остатки: K8, I9, G10, S11, L12, A13, N15, A16, F17, S18, D19, P20, A21 из TLT-1 (SEQ ID NO: 13).

44. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRL1, представленную аминокислотными остатками (SEQ ID NO: 847) с 0, 1, 2 или 3 аминокислотными заменами,

- CDRL2, представленную аминокислотными остатками (SEQ ID NO: 848) с 0, 1, 2 или 3 аминокислотными заменами,

- CDRL3, представленную аминокислотными остатками (SEQ ID NO: 849) с 0, 1 или 2 аминокислотными заменами,

- CDRH1, представленную аминокислотными остатками (SEQ ID NO: 851),

- CDRH2, представленную аминокислотными остатками (SEQ ID NO: 852) с 0 или 1 аминокислотной заменой,

- CDRH3, представленную аминокислотными остатками (SEQ ID NO: 853) с 0, 1, 2 и 3 аминокислотными заменами, и

где второй антигенсвязывающий участок содержит:

- CDRH1, представленную под SEQ ID NO: 859, содержащую 0 или 1 аминокислотную замену

- CDRH2, представленную под SEQ ID NO: 860 c 0, 1, 2 или 3 аминокислотными заменами,

45. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления, где антитело увеличивает функциональное MRT для FVII(a), что измерено посредством анализа активности FVIIa, описанного в примере 8.

46. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 41, где антитело увеличивает функциональное MRT для FVII(a) в по меньшей мере 2 раза, в по меньшей мере 3 раза, в по меньшей мере 5 раз, в по меньшей мере 10 раз, в по меньшей мере 20 раз, в по меньшей мере 30 раз или в по меньшей мере 40 раз по сравнению с введением FVII(a) в отсутствие биспецифического антитела по настоящему изобретению.

47. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления, где антитело способно повышать уровень эндогенного функционально активного FVIIa в кровотоке, что определено в соответствии с примерами 27 и 28, по сравнению с уровнем эндогенного FVIIa в кровотоке в отсутствие введенного биспецифического антитела.

48. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 45, где антитело повышает уровень эндогенного функционально активного FVIIa в кровотоке по в меньшей мере 2 раза, в по меньшей мере 4 раза, в по меньшей мере 10 раз, в по меньшей мере 20 раз, в по меньшей мере 40 раз, в по меньшей мере 80 раз, в по меньшей мере 160 раз, в по меньшей мере 320 раз, в по меньшей мере 640 раз.

49. Биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления, где антитело способно увеличивать способность полипептида FVIIa стимулировать активацию FX, что определено посредством анализа стимулирующей активности, описанного в примере 21.

50. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 43, где стимулирующая активность является по меньшей мере 2-кратной, по меньшей мере 5-кратной, по меньшей мере 10-кратной, по меньшей мере 20-кратной, по меньшей мере 30-кратной, по меньшей мере 40-кратной, по меньшей мере 60-кратной, по меньшей мере 80-кратной, по меньшей мере 100-кратной или по меньшей мере 150-кратной.

51. Фармацевтический состав, содержащий биспецифическое антитело по любому из предыдущих вариантов осуществления и фармацевтически приемлемый носитель.

52. Биспецифическое антитело согласно вариантам осуществления 1-48, где фармацевтический состав согласно варианту осуществления 49 вводится подкожно.

53. Биспецифическое антитело согласно вариантам осуществления 1-48 или фармацевтический состав согласно варианту осуществления 49 для применения в качестве лекарственного препарата.

54. Биспецифическое антитело согласно любому из вариантов осуществления 1-48 и 50-51 или фармацевтический состав согласно варианту осуществления 49 для применения в лечении коагулопатии, где указанная коагулопатия является врожденной и/или приобретенной.

55. Биспецифическое антитело согласно варианту осуществления 52, где указанная коагулопатия выбрана из группы, состоящей из гемофилии А с наличием ингибиторов или без них, или гемофилии В с наличием ингибиторов или без них, дефицита FVII(а) и тромбастении Гланцмана.

56. Биспецифическое антитело согласно вариантам осуществления 1-48 и 50-51 для лечения кровотечения, где кровотечение обусловлено врожденной или приобретенной гемофилией A, врожденной или приобретенной гемофилией B, гемофилией A с наличием ингибиторов, гемофилией B с наличием ингибиторов или дефицитом фактора VII(a).

57. Применение по любому из вариантов осуществления 1-48, где указанное биспецифическое антитело или фармацевтический состав согласно варианту осуществления 49 вводится парентерально, например, внутривенно, внутримышечно или подкожно.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Получение мышиных моноклональных антител к FVII(a) с использованием гибридомной технологии

Моноклональные антитела получали посредством иммунизации мышей NMRCF1 (Charles River) связанным дисульфидами комплексом FVIIa Q64C-sTF (1-219) G109C, описанным в международной патентной заявке с номером публикации WO 07/115953.

Мышам осуществляли начальную подкожную инъекцию 20 мкг в FCA (полный адъювант Фрейнда), затем осуществляли бустерные внутрибрюшинные инъекции 20 мкг антигена в IFA (неполный адъювант Фрейнда). Селезенки удаляли в асептических условиях и диспергировали до суспензии отдельных клеток. Спленоциты сливали с клетками миеломы X63Ag8.653 посредством электрослияния.

Клетки высевали в планшеты для микротитрования и культивировали при 37°C, 5% CO2. Среду для культивирования тканей (RPMI 1640 + 10% эмбриональная телячья сыворотка), содержащую HAT (Sigma) для отбора, меняли дважды. После 10 дней роста клоны гибридомы, продуцирующие специфические антитела, идентифицировали с помощью скрининга ELISA с использованием следующего протокола. Планшеты NUNC Maxisorb покрывали связанным дисульфидами комплексом FVIIa Q64C-sTF (1-219) G109C или FVIIa (экспрессированным и очищенным, как описано в Thim et al. (1988) Biochemistry 27:7785-7793 и Persson et al. (1996) FEBS Lett 385:241-243), 50 мкл/лунка при 1 мкг/мл (буфер HEPES, содержащий 5 мМ CaCl₂), и инкубировали в течение ночи при 4°C. Планшеты промывали 5 раз и блокировали промывочным буфером в течение 15 мин (буфер HEPES, 5 мМ CaCl₂, 0,05% TWEEN 20). 50 мкл надосадочной жидкости переносили в каждую лунку и инкубировали в течение 1 часа. Планшеты промывали 5 раз и добавляли 50 мкл меченных HRP козьих антител к Ig мыши (специфичных в отношении фрагмента Fc-гамма; Jackson, рабочее разведение 1/10000). Планшеты инкубировали в течение 1 часа, промывали 5 раз и проявляли с помощью 50 мкл TMB (TMB ONE, готовый к применению; Kem-En-Tec) в течение 10 мин. Реакцию останавливали посредством добавления 50 мкл 4 М H₃PO₄ и считывали на устройстве для считывания микропланшетов FLUOStar Optima при 450 нМ и 620 нМ.

Клетки гибридомы, для которых получали положительные результаты, субклонировали по меньшей мере дважды посредством предельного разведения с целью сохранения моноклональности. Очистку антител выполняли посредством стандартной очистки с использованием белка А.

Клетки гибридомы, продуцирующие антитела для применения в исследованиях PK, наращивали в Т-образных колбах или встряхиваемых колбах в среде RPMI1640 + 10% FBS. Кондиционированную среду собирали центрифугированием и антитела очищали посредством аффинной хроматографии на основе связывания с белком А с последующим обессоливанием.

Пример 2. Клонирование и секвенирование мышиных антител к FVII(a)

В данном примере описано клонирование и секвенирование последовательностей кДНК мышиной тяжелой цепи (HC) и легкой цепи (LC), кодирующих вариабельные домены антитела к FVII(a).

Суммарную РНК экстрагировали из клеток гибридомы с помощью набора RNeasy-Mini Kit от Qiagen и использовали в качестве матрицы для синтеза кДНК. кДНК синтезировали в реакции 5’-RACE с использованием набора для амплификации кДНК SMARTer RACE от Clontech. Последующую целевую амплификацию последовательностей вариабельного домена HC (обозначенного VH) и вариабельного домена LC (обозначенного VL) осуществляли посредством ПЦР с использованием полимеразы Phusion Hot Start (Finnzymes) и смеси универсальных праймеров (UPM), включенной в набор SMARTer™ RACE в качестве прямого праймера. Последовательность обратного праймера, используемая для амплификации VH, представляла собой 5’ agctgggaaggtgtgcacac 3’. Последовательность обратного праймера, используемая для амплификации VL, представляла собой 5’ gctctagactaacactcattcctgttgaagctcttg 3’.

Продукты ПЦР разделяли посредством гель-электрофореза, экстрагировали с помощью GFX PCR DNA & Gel Band Purification Kit от GE Healthcare Bio-Sciences и клонировали для секвенирования с помощью Zero Blunt TOPO PCR Cloning Kit и химически компетентной E. coli TOP10 (Invitrogen). Секвенирование осуществляли в MWG Biotech, Мартинсрид, Германия, с использованием праймеров для секвенирования M13uni(-21)/M13rev(-29). Все наборы и реагенты использовались в соответствии с инструкциями производителя.

Пример 3. Рекомбинантная экспрессия бивалентных антител, моновалентных антител (ОА-антител) и Fab-фрагментов антител

Бивалентные антитела, моновалентные антитела (одноплечие, называемые OA-антителами) и Fab-фрагменты антител экспрессировали посредством временной трансфекции суспензии клеток HEK293 (293Expi, Invitrogen), при этом в основном следовали инструкциям производителя. Клетки 293Expi пересевали каждые 3-4 дня в среду для экспрессии Expi293F (Invitrogen, кат. номер A1435104), дополненную 1% P/S (GIBCO, кат. номер 15140-122). Клетки Expi293F трансфицировали при плотности клеток 2,5-3 млн/мл с использованием Expifectamine. Для каждого литра клеток Expi293F трансфекцию осуществляли посредством разведения суммарно 1 мг плазмидной ДНК в 50 мл Optimem (GIBCO, кат. номер 51985-026, разведение A) и посредством разведения 2,7 мл Expifectamine в 50 мл Optimem (разведение B). Бивалентные антитела получали посредством котрансфекции плазмиды VH-CH1-CH2-CH3 (HC) и VL-CL (LC) (в соотношении 1:1), а для Fab-фрагментов плазмиды представляли собой VH-CH1 и LC (в соотношении 1:1). Для получения ОА-антител клетки трансфицировали тремя плазмидами: HC- и LC-плазмидами и третьей плазмидой, кодирующей усеченную HC (trHC). HC из OA-антител содержала мутации «впадины» (T366S, L368A, Y407V), и trHC содержала мутацию «выступа» (T366W), но «выступы» и «впадины» также могут быть обратимы. Мутации «выступ-во-впадину» описаны в международном патенте EP0979281B1 и введены для оптимизации образования необходимого гетеродимера, т.е. спаривания HC и trHC, и подавления нежелательного образования гомодимеров, т.е. спаривания trHC с trHC и HC с HC. Разведения A и B смешивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 10-20 минут. После этого смесь для трансфекции добавляли к клеткам Expi293F и клетки инкубировали при 37°C в увлажненном инкубаторе с ротационным вращением (85-125 об/мин). Через день после трансфекции к трансфицированным клеткам добавляли 5 мл ExpiFectamine 293 Transfection Enhancer 1 и 50 мл ExpiFectamine 293 Transfection Enhancer 2. Надосадочную жидкость клеточных культур собирали через 4-5 дней после трансфекции посредством центрифугирования с последующей фильтрацией.

Бивалентные и моновалентные антитела очищали посредством стандартной аффинной хроматографии на основе белка А, известной специалисту в данной области, и при необходимости дополнительных стадий очистки, таких как гель-фильтрация или ионообменная хроматография. Fab-фрагменты очищали посредством аффинной хроматографии с использованием аффинной смолы, распознающей каппа-цепь Fab.

Пример 4. Получение биспецифических антител и ОА-антител посредством сборки in vitro

Биспецифические антитела, полученные посредством сборки in vitro

Биспецифические антитела получали посредством сборки in vitro двух родительских антител с применением способа, аналогичного таковому, описанному в Labrijn et al. PNAS 2013, vol. 110, pp. 5145-5150, и известного как технология DuoBody® (Genmab). Вместо подтипа IgG1, использованного Labrijn et al., в настоящем изобретении использовали IgG4. Реакцию обмена выполняли при 30°C в течение четырех часов в присутствии 75 мМ 2-меркаптоэтиламина (2-MEA). Полученное биспецифическое антитело очищали посредством ионообменной хроматографии с отделением остаточных родительских антител от биспецифического антитела. В настоящем примере константная область тяжелой цепи первого родительского антитела (антитела к FVII(a)) представляла собой IgG4 S228P F405L R409K, и константная область тяжелой цепи второго родительского антитела (антитела к TLT-1) представляла собой IgG4 S228P (в обоих случаях использовали нумерацию по EU). Константные домены легкой цепи представляли собой человеческую каппа-цепь. Два родительских антитела получали, как описано в примере 3. Биспецифические антитела к FVII(a)/TLT-1 также можно собрать из набора родительских антител, где константный домен антитела к FVII(a) представляет собой IgG4 S228P, а константный домен антитела к TLT-1 представляет собой IgG4 S228P F405L R409K.

Моновалентные антитела, полученные посредством сборки in vitro

Моновалентные антитела получали при сборке in vitro, как описано выше для биспецифических антител, за исключением того, что (1) вместо объединения двух антител с образованием биспецифического антитела, антитело и димер trHC объединяли с образованием моновалентного антитела. В данном примере trHC представляла собой IgG4 S228P F405L R409K, и HC представляла собой IgG4 S228P (в обоих случаях использовали нумерацию по EU). Константный домен легкой цепи представлял собой человеческую каппа-цепь. Как правило, реакцию обмена плечами осуществляли с использованием димера trHC в 20-50% молярном избытке, чтобы свести к минимуму количество бивалентного антитела в реакционной смеси. Моновалентное антитело очищали посредством эксклюзионной хроматографии, необязательно при необходимости с дополнительными стадиями очистки, такими как ионообменная хроматография.

Пример 5. Определение характеристик антитела к FVIIa(a) в функциональных анализах in vitro

С целью облегчения накопления эндогенного FVIIa и обеспечения ему возможности проявлять прокоагулирующую активность, антитела к FVII(a) по настоящему изобретению предпочтительно не должны нарушать активность FVIIa и аналогичным образом предпочтительно не должны способствовать инактивации FVIIa его первичным плазменным ингибитором антитромбином (Agers∅ H, et al. (2011) J Thromb Haemost 9:333-338). Для изучения данных аспектов влияние антител к FVII(a) на прокоагулирующую активность FVIIa и инактивацию FVIIa антитромбином определяли in vitro с использованием анализов, описанных ниже.

Влияние антител к FVII(a) на тромбинообразование в плазме крови человека с индуцированной гемофилией А

Влияние бивалентных или моновалентных антител к FVII(a) на тромбинообразование измеряли с помощью анализа каолин-активированного тромбинообразования (TGT) в 96-луночном формате. Если вкратце, плазму крови с индуцированной гемофилией А получали посредством добавления антитела к hFVIII 4F30 (описанного в международной патентной заявке с номером публикации WO 2012/035050) до конечной конц. 37,5 мкг/мл. Фосфолипиды в конечной концентрации 10 мкМ (Rossix) добавляли к плазме крови с гемофилией А и инкубировали при 37°C в течение 15 мин. К смеси добавляли очищенные антитела (100 нМ) и FVIIa (25 нМ) и инкубировали 10 мин. при комнатной температуре. Антитела к FVII(a) получали, как описано в примерах 1, 2 и 3. Стимуляцию осуществляли путем добавления 10 мкл каолина (Haemonetics) с последующим добавлением 10 мкл FIIa FluCa-kit (Thrombinoscope BV) и измеряли флуоресценцию (возбуждение при 390 нМ и излучение при 460 нМ) на многоканальном устройстве для считывания EnVision в течение двух часов.

Тромбограммы расчитывали как первую производную измеренной флуоресценции. Высоту пика тромбина расчитывали как максимальное значение на тромбограмме. Впоследствии его нормализовали и выражали в процентах путем деления наблюдаемой высоты пика на высоту пика, соответствующую высоте, наблюдаемой для 25 нМ FVIIa в отсутствие антитела. На основании этого антитела разделяли на стимулирующие (>120%), ингибирующие (<90%) или нейтральные (90-120%). Как показано в таблице 6, определяли антитела всех категорий. Предпочтительными антителами являлись стимулирующие или нейтральные в ходе анализа TGT.

Влияние антител к FVII(a) на инактивацию FVIIa антитромбином из плазмы крови

Ингибирование активности FVIIa антитромбином (АТ) из плазмы крови в присутствии бивалентного или моновалентного антитела к FVII(a) измеряли посредством инкубации FVIIa (200 нМ) с низкомолекулярным гепарином (Enoxaparin, 12 мкМ) и антителом (200-1000 нМ) в течение 10 мин в 50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 10 мМ CaCl₂, 0,1% PEG8000, 1 мг/мл BSA, pH 7,3. Затем добавляли AT (5 мкМ), и в моменты времени 10, 20, 30, 40, 60 и 80 мин образец переносили в новый планшет для микротитрования, где измеряли остаточную активность в присутствии 1 мМ хромогенного субстрата S-2288 (Chromogenix), 200 нМ растворимого тканевого фактора (sTF; получен, как описано в Freskgard et al. (1996) Protein Sci 5: 1531-1540) и полибрена (0,5 мг/мл) в приборе Spectramax (Molecular Devices) при 405 нМ в течение 5 мин. Образец, содержащий буфер вместо AT обеспечивал активность FVIIa без ингибирования.

Остаточную амидолитическую активность определяли как функцию времени относительно активности в отсутствие ингибитора. Константу ингибирования (kinh) оценивали посредством аппроксимации данных к модели однофазного распада. Значение kinh в присутствии антитела к FVII(a) в процентах от значения, определенного в отсутствие антитела, называется kinh% и приводится для каждого антитела в таблице 6.

Антитела с расчетным значением kinh% <60% классифицировали как защищающие FVIIa от ингибирования посредством AT. Антитела с расчетным значением 60% ≤ kinh% ≤ 150% классифицировали как нейтральные, в то время как антитела с расчетным значением kinh% > 150% классифицировали как ускоряющие ингибирование FVIIa посредством AT. Как показано в таблице 6, определяли антитела всех трех категорий. Предпочтительными антителами являлись нейтральные или защищающие FVIIa от ингибирования посредством AT.

Было обнаружено, что среди тестируемых антител подгруппа антител, включающая 11F2 (mAb005 и mAb0048, соответствующие полностью мышиному и химере мышиного/человеческого, соответственно), обладала необходимыми свойствами in vitro, как описано выше.

Таблица 6. Функциональная характеристика антител к FVII(а) в анализах тромбинообразования (TGT) и ингибирования антитромбином (AT), как описано в примере 2

Антитело к FVII(a)	Активность TGT (% FVIIa)	Ранжирование на основе активности TGT	Ингибирование посредством AT (k_inh%)	Ранжирование на основе ингибирования посредством AT
mAb0048	Не определено	Нейтральное	109	Нейтральное
mAb0005	115		133
mAb0007	113		121
mAb0544	103		111
mAb0552	104		118
mAb0018	141	Стимулирующее	525	Ускоряющее
mAb0004	75	Ингибирующее	24	Защитное
mAb0001	109	Нейтральное	82	Нейтральное
mAb0578	91	Нейтральное	77	Нейтральное
mAb0587	93	Нейтральное	103	Нейтральное
mAb0013	128	Стимулирующее	747	Ускоряющее
mAb7250	91	Нейтральное	23	Защитное
mAb0701	88	Ингибирующее	26	Защитное

Пример 6. SPR-анализ связывания антител с FVIIa и влияния pH и кальция

Связывание антител из примера 5 с FVIIa исследовали с помощью поверхностного плазмонного резонанса (Biacore T200). IgG к мышиным антителам (от GE Healthcare) иммобилизовали на сенсорном чипе CM4 с использованием стандартного химического набора для иммобилизации по амино-группе (оба поставляются GE Healthcare). Очищенные антитела к FVII(а) согласно таблице 7 (0,25 нМ) вводили со скоростью 10 мкл/мин в течение 1 мин. Впоследствии 5 нМ, 15 нМ, 45 нМ и 135 нМ FVIIa вводили со скоростью 30 мкл/мин в течение 7 мин с обеспечением возможности связывания с антителом к FVII(a), после чего следовала 9-минутная инъекция буфера, обеспечивающая возможность диссоциации от антитела к FVII(а). Рабочий буфер готовили посредством 10-кратного разбавления буфера 10x HBS-P (поставляется GE Healthcare) с добавлением 1 мг/мл BSA и 5 мМ CaCl₂ с получением 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,05% об./об. полисорбата 20 (P20), pH 7,4, 5 мМ CaCl₂, 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA). Рабочий буфер также использовали для разведения образцов антитела к FVII(a) и образцов FVII. Регенерацию чипа осуществляли с использованием буфера для регенерации, состоящего из 10 мМ Gly-HCl, pH 1,7 (поставляется GE Healthcare). Данные по связыванию анализировали в соответствии с моделью 1:1 с использованием BiaEvaluation 4.1, предоставляемого производителем (Biacore AB, Уппсала, Швеция). В результате анализа получали константы связывания, представленные в таблице 7, демонстрирующие высокоаффинное связывание нескольких антител с FVIIa, в том числе 11F2 (mAb005 и mAb0048, соответствующие полностью мышиному антителу и мышиному/человеческому химерному антителу соответственно).

Таблица 7. Расчетные константы связывания для взаимодействия антител к FVII(a) с FVIIa, определенные посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR) в соответствии с примером 6

Антитело к FVII(a)	K_D (M)
mAb0001	1,7E-10
mAb0007	2,5E-10
mAb0544	2,7E-10
mAb0552	7,6E-10
mAb0578	5,8E-10
mAb0587	4,9E-10
mAb0005	1,4E-10
mAb0004	1,6E-10
mAb0018	9,3E-9
mAb0048	2,9E-11

Влияние pH и CaCl₂ на связывание выбранных антител из примера 5 с FVIIa и cFVIIa-химерой исследовали посредством поверхностного плазмонного резонанса (Biacore T200) при 37°C. Последовательность cFVIIa-химеры указана в разделе, озаглавленном Подробное описание изобретения, и экспрессируется, как указано в примерах 16 и 26. IgG к мышиным антителам (от GE Healthcare) иммобилизовали на сенсорном чипе CM4 с использованием стандартного химического набора для иммобилизации по амино-группе (оба поставляются GE Healthcare). Предварительно уравновешенную смесь FVIIa в концентрации 1,2 нМ и 4F9 (новое внутреннее наименование мышиного антитела к FVII, связывающегося с EGF1-доменом FVIIa) в концентрации 0,5 нМ вводили со скоростью 10 мкл/мин. в течение 1 мин. Затем вводили 540 нМ, 180 нМ, 60 нМ, 20 нМ, 6,66 нМ, 2,22 нМ, 0,74 нМ, 0,25 нМ антитела к FVII(a) со скоростью 30 мкл/мин в течение 7 мин с обеспечением возможности связывания с FVIIa, после чего следовала 9-минутная инъекция буфера, обеспечивающая возможность диссоциации от FVIIa. Получали два рабочих буфера. Буфер 1 получали посредством 10-кратного разбавления 10х HBS-P+ (поставляется GE Healthcare) и добавления 1 мг/мл BSA и 5 мМ CaCl₂ с получением 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,05% об./об. полисорбата 20, pH 7,4, 5 мМ CaCl₂, 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA). Буфер 2 получали посредством 10-кратного разбавления 10х HBS-P+ (поставляется GE Healthcare) и добавления 1 мг/мл BSA, 5 мкМ CaCl₂, и доводили до pH 6,0 (с помощью 4 M HCl) с получением 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,05% об./об. полисорбата 20, pH 6,0, 5 мкМ CaCl₂, 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA). FVIIa, антитело к FVII 4F9 и антитело к FVII(a) разбавляли в обоих рабочих буферах по отдельности. Регенерацию чипа осуществляли с использованием буфера для регенерации, состоящего из 10 мМ Gly-HCl, pH 1,7 (поставляется GE Healthcare). Данные по связыванию анализировали в соответствии с моделью 1:1 с использованием BiaEvaluation 4.1, предоставляемого производителем (Biacore AB, Уппсала, Швеция). В результате анализа получали константы связывания, представленные в таблице 7b, демонстрирующие сохраненное высокоаффинное связывание между FVIIa и антителом к FVII(a).

Таблица 7b. Расчетные константы связывания и кратность отличия для взаимодействия FVIIa и антител к FVII(a) в двух разных буферах, определенные посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR) в соответствии с примером 6

mAb	Белок	K_D,1 в буфере 1, (M)	K_D,2 в буфере 2, (M)	Кратность отличия, (K_D,2/K_D,1)
mAb0077(OA)	FVIIa	304E-12	495E-12	1,6
mAb0077(OA)	cFVIIa-химера	469E-12	652E-12	1,4
mAb0842(OA)	FVIIa	599E-12	2200E-12	3,7
mAb0842(OA)	cFVIIa-химера	1020E-12	1600E-12	1,6

Пример 7. Определение антител, конкурирующих с mAb0005 (11F2) за связывание с FVII(a), в конкурентном ELISA

Чтобы определить, конкурируют ли антитела к FVII(a) с желаемыми свойствами из примера 5 с mAb0005 (11F2) и антителами, полученными из него, за связывание с FVIIa(a) in vitro, выполняли конкурентные исследования с соответствующим Fab-фрагментом, Fab0076. FVIIa, FVIIa с ингибированным посредством H-D-Phe-Phe-Arg-хлорметилкетона (FFR-cmk; Bachem, Швейцария) активным центром (FVIIai; см. пример 9), иммобилизовали на планшете NUNC maxisorp в концентрации 125 нг/мл в буфере для разбавления (20 мМ HEPES, 5 мМ CaCl2, 150 мМ NaCl, pH 7,2) в течение ночи при 4°C. Планшеты промывали и блокировали промывочным буфером (20 мМ HEPES, 5 мМ CaCl₂, 150 мМ NaCl, 0,5 мл/л Tween 20, pH 7,2) в течение 15 мин. 11F2-Fab0076 биотинилировали с использованием стандартного набора для биотинилирования (EZ-Link, Thermo), применяемого в соответствии с инструкциями производителя. Для конкурентного исследования биотинилированный Fab0076 в конечной фиксированной концентрации 10 нг/мл объединяли с серией разведений антитела к FVIIa(a) с получением конечных концентраций в диапазоне от 100 мг/мл до 9,5 нг/мл в буфере для разбавления. Смесь добавляли в лунки планшета и инкубировали в течение 1 часа. Затем планшет промывали и добавляли меченный HRP стрептавидин-HRPO (1:2000 в буфере для разведения; Kirkegaard & Perry Labs) и инкубировали в течение 1 ч. И в завершении планшет промывали и обрабатывали с помощью TMB ONE (KEMENTEC) в течение 10 мин. Реакцию останавливали посредством добавления H₃PO₄ (4 M) и считывали планшет на считывающем устройстве для планшетов FLUOStar Optima при 450 нМ с вычитанием фонового сигнала, измеренного при 620 нМ. Если не указано иное, все инкубации выполняли при комнатной температуре, и планшеты промывали 5 раз с использованием промывочного буфера.

По измеренным сигналам (единицы оптической плотности [OD]) конкуренцию при любой указанной концентрации антитела расчитывали как

% ингибирования = (1 - (единицы OD - показатель 100% ингибирования)/(показатель 0% ингибирования - показатель 100% ингибирования)) * 100,

где 0% ингибирование определяли по сигналу в лунках без какого-либо конкурирующего антитела к FVII(a), а 100% ингибирование определяли как сигнал из лунок без биотинилированного Fab0076 (т.е. соответствующий фону анализа). Считалось, что антитела конкурируют с 11F2 (mAb0005) за связывание с FVII(a), если наблюдалось по меньшей мере 50% ингибирование (% ингибирования) при тестировании концентрации антитела во вплоть до 10000-кратном избытке биотинилированного Fab0076. Результаты приведены в таблице 8.

Таблица 8. Конкуренция с 11F2-Fab0076 (mAb0005) за связывание с FVII(a) Как описано в примере 7, пороговое значение 50% было использовано для распределения антител на категории конкуренты или не являющиеся конкурентами

Антитело к FVII(a)	% ингибирования
mAb0765	Да
mAb0100	Нет
mAb0047	Нет
mAb0759	Да
mAb0762	Нет
mAb0764	Нет

Пример 8. Анализ активности FVIIa

Активность FVIIa измеряли с использованием реагентов из набора STAclot®VIIa-rTF (Diagnostica Stago), по сути как описано в Morissey J.H. et al. Blood, 1993; 81: 734-44. Анализ выполняли на автоматическом коагулометре ACLTOP500 от Instrumentation Laboratory. В анализе использовали 40 мкл разбавленного образца плазмы крови животного, калибратор (рекомбинантный референтный материал FVIIa (rFVIIa), калиброванный по международному стандарту ВОЗ) или образец для контроля качества (QC), смешанный с 40 мкл дефицитной по FVII плазмы крови и 40 мкл растворимого тканевого фактора (sTF) с фосфолипидами. Для начала реакции добавляли 25 мМ CaCl₂ в объеме 40 мкл и измеряли время свертывания крови в приборе. Время свертывания образца и QC сравнивали с калибровочными кривыми rFVIIa с той же концентрацией плазмы крови, что и в разбавленном образце, чтобы уменьшить влияние плазмы крови. Диапазон калибровочной кривой составлял 5-1000 мМЕ/мл и был аппроксимирован с использованием полиномиального уравнения третьей степени. Результаты для контроля качества и образцов рассчитывали с помощью программного обеспечения на приборе ACLTOP500. Результаты, выраженные в МЕ/мл, переводили в нМ с использованием удельной активности (МЕ/пмоль) вводимых соединений.

Пример 9. Фармакокинетика у крыс рекомбинантного FVIIa в совместном составе с антителами к FVII(a)

Моноклональные антитела к FVII(a) с требуемыми свойствами in vitro из примера 5 вводили в/в самцам крыс Спрег-Доули в совместном составе с 20 нмоль/кг человеческого FVIIa. Молярное соотношение FVIIa и антитела составляло 1:1 или 1:5, как указано в таблице 9. В ходе эксперимента животным был предоставлен свободный доступ к корму и воде. Активность FVIIa в плазме крови измеряли с использованием анализа активности FVIIa, описанного в примере 8.

Фармакокинетический анализ выполняли с помощью некомпартментных методов с использованием WinNonlin. На основании данных рассчитывали среднее время удержания (MRT). Результаты представлены в таблице 9.

Среди антител с требуемыми свойствами из примера 5 mAb0005 (11F2) и mAb0001 (11F26) придавали человеческому FVIIa наибольшее среднее время удержания, составляющее 7,9 и 7,5 часов соответственно, по сравнению со средним временем удержания в свободном состоянии, составляющим 1,1 часа для свободного человеческого FVIIa (см. таблицу 9). MAb0005 и mAb0001 (mAb0759) представляют собой антитела с высокой аффинностью (пример 6), конкурирующие за связывание с FVIIa (пример 7).

Таблица 9. Среднее время удержания (MRT) активности FVIIa в плазме крови крыс Cпрег-Доули после в/в дозы 20 нмоль/кг FVIIa при молярном соотношении 1:1 или 1:5 с антителом, как указано Среда-носитель указывает на то, что FVIIa вводили в комбинации с буфером вместо антитела.

Антитело к FVII(a)	Молярное соотношение FVIIa:антитело	MRT (ч)
Среда-носитель	н.°п.	1,1
mAb0005	1:5	7,9
mAb0007	1:1	3,9
mAb0018	1:5	1,1
mAb0004	1:5	3,6
mAb0001	1:1	7,5
mAb0587	1:1	4,0
mAb0578	1:1	4,2

Пример 10. Влияние антитела 11F2 к FVII(a) на активацию FX свободным или TF-связанным FVIIa

Предпочтительно, чтобы антитела к FVII(а) по настоящему изобретению не препятствовали фармакологической активности FVIIa на поверхности мембраны или инициации свертывания крови, то есть активации FX комплексом FVIIa-TF. Для исследования этих аспектов влияние 11F2 на TF-независимую и TF-зависимую протеолитическую активность FVIIa определяли в отсутствие липидированного TF или в его присутствии соответственно. Формат одноплечих моновалентных антител использовали для предотвращения эффектов авидности, возникающих из-за одновременного связывания двух молекул FVIIa с нормальным бивалентным антителом.

Влияние антитела 11F2 на активацию FX под действием FVIIa в присутствии фосфолипидной мембраны

Измерения активности выполняли в буфере для анализа (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 10 мМ CaCl₂, pH 7,3, 0,1% PEG8000 и 1 мг/мл BSA), содержащем 10 нМ FVIIa, 0 или 200 нМ антитела (см. таблицу 10) и 25 мкМ везикул из смеси 25:75 фосфатидилсерин:фосфатидилхолин (Haematologic Technologies Inc.). Реакцию инициировали добавлением 0-300 нМ фактора X (FX) из плазмы крови человека и инкубировали в течение 20 мин при комнатной температуре в общем объеме реакционной смеси 100 мкл в 96-луночном планшете (n = 2). После инкубации реакцию гасили добавлением 50 мкл гасящего буфера (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 10 мМ CaCl₂, 80 мМ EDTA, pH 7,3) с последующим добавлением 50 мкл 1 мМ хромогенного субстрата S-2765 (Chromogenix) в воде. Степень превращения хромогенного субстрата под действием образуемого FXa измеряли как наклон кривой линейного увеличения поглощения при 405 нМ в течение 10 мин с использованием спектрофотометра для микропланшетов Spectramax. Сравнивая измеренные наклоны с наклонами, получаемыми в аналогичных условиях с известными количествами человеческого FXa из плазмы крови, можно оценить начальные скорости образования FXa на молярной основе. Кинетические параметры фермента оценивали путем нелинейной аппроксимации кривой данных по уравнению Михаэлиса-Ментен (v = kcat * [FX] * [FVIIa-TF] / (Km + [FX])) с использованием GraphPad Prism.

В таблице 10 показано, что моновалентное 11F2 не влияло на скорость активации FX свободным FVIIa в присутствии фосфолипидных везикул.

Влияние антитела 11F2 на активацию FX под действием FVIIa в присутствии TF

Измерения активности выполняли в буфере для анализа (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 10 мМ CaCl₂, pH 7,3, 0,1% PEG8000 и 1 мг/мл BSA), содержащем 100 пМ FVIIa, 0 или 200 нМ антител (см. таблицу 10) и 2 пМ фрагмента TF 1-244, полученного из E. coli, включенного в везикулы из смеси 25:75 фосфатидилсерин:фосфатидилхолин (PS:PC), как описано в Smith and Morrissey (2005) J. Thromb. Haemost., 2:1155-1162. Реакцию инициировали добавлением 0-30 нМ фактора X (FX) из плазмы крови человека и инкубировали в течение 20 мин при комнатной температуре в общем объеме реакционной смеси 100 мкл в 96-луночном планшете (n = 2). После инкубации реакцию гасили и количественно определяли FXa в соответствии с описанным выше.

В таблице 10 показано, что моновалентный 11F2 (mAb0077(OA)) не влиял на скорость активации FX комплексом FVIIa/TF.

Таблица 10. Влияние 200 нМ 11F2 в моновалентном формате на кинетические параметры активации FX комплексом FVIIa-TF согласно примеру 10 Параметры, представленные как среднее ± стандартное отклонение (n = 3), оценивали путем аппроксимации к уравнению Михаэлиса-Ментен. k_cat/K_M показано относительно значения, определенного в отсутствие антитела

Антитело 11F2	Активатор	K_m (нM)	k_cat (с^-1)	k_cat/K_M (%)
Отсутствует	TF-FVIIa	3,9 ± 0,6	1,5 ± 0,1	100
mAb0077(OA)	TF-FVIIa	3,9 ± 0,7	1,7 ± 0,1	110 ± 29
Отсутствует	FVIIa/PS:PC	137 ± 15	(2,8 ± 0,1) x 10-4	100
mAb0077(OA)	FVIIa/PS:PC	89 ± 9	(2,6 ± 0,1) x 10-4	147 ± 5

Пример 11. Влияние антитела 11F2 на ингибирование FVIIa плазменными ингибиторами

FVIIa демонстрирует относительно короткий период полужизни в кровотоке отчасти из-за его инактивации присутствующим в большом количестве плазменным ингибитором антитромбином (AT). Аналогичным образом исследования на животных показали, что другой плазменный ингибитор альфа-2-макроглобулин вовлечен в инактивацию FVIIa. Используя очищенные ингибиторы, полученные из плазмы крови, исследовали влияние моновалентного антитела 11F2 на инактивацию FVIIa под действием этих ингибиторов.

Влияние антитела 11F2 на ингибирование FVIIa антитромбином

Ингибирование FVIIa полученным из плазмы крови человека AT в присутствии моновалентного антитела 11F2 (mAb0048, mAb0077(OA)) выполняли в условиях кажущегося первого порядка. Анализ выполняли в объеме 200 мкл в буфере для анализа (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 10 мМ CaCl₂, 0,1% PEG8000, 1 мг/мл BSA, pH 7,3) при комнатной температуре, содержащем 200 нМ FVIIa, 12 мкМ низкомолекулярного гепарина (Enoxaparin, стандарт Европейской Фармакопеи, код E0180000, партия 5.0, идент. номер 00CK18) и 0 или 1000 нМ антитела. После 10 мин предварительной инкубации реакцию инициировали посредством добавления 5 мкМ AT (антитромбин III, Baxter, партия VNB1M007; повторно очищен на колонке с гепарин-сефарозой для удаления сывороточного альбумина из состава). В выбранные временные точки аликвоты по 10 мкл переносили в общий объем 200 мкл, содержащий 0,5 мг/мл полибрена (гексадиметринбромид, Sigma, кат. номер H9268, партия SLBC8683V), 200 нМ sTF и 1 мМ S-2288 (Chromogenix) для гашения реакции и насыщения FVIIa с sTF, что позволило измерить остаточную активность FVIIa по гидролизу хромогенного субстрата, считываемому при 405 нМ в течение 5 мин. Остаточную амидолитическую активность определяли как наклон линейных кривых реакции после вычитания холостой пробы, которые впоследствии были аппроксимированы к функции экспоненциального затухания первого порядка с использованием программного обеспечения GraphPad Prism для получения констант скорости реакции кажущегося первого порядка (kapp). Кажущуюся константу скорости второго порядка (kinh) определяли как kapp, деленную на концентрацию АТ.

На основании этого анализа было установлено, что скорость ингибирования FVIIa в присутствии моновалентного 11F2 (mAb0077(OA)) составляет 133 ± 10 M-1с-1 по сравнению с 124 ± 7 M-1с-1 для ингибирования свободного FVIIa.

Влияние антитела 11F2 на ингибирование FVIIa альфа-2-макроглобулином

Ингибирование FVIIa полученным из плазмы крови человека альфа-2-макроглобулином в присутствии 0 или 1000 нМ моновалентного антитела 11F2 (mAb0077(OA)) выполняли в условиях кажущегося первого порядка. Анализ выполняли в объеме 100 мкл в буфере для анализа (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,1% PEG8000, 0,01% Tween 80, pH 7,3) при комнатной температуре, содержащем 200 нМ FVIIa и 0 или 1000 нМ антитела. Реакцию инициировали посредством добавления 0 или 1000 нМ альфа-2-макроглобулина, выделенного из плазмы крови человека согласно Banbula et al. (2005) J. Biochem., 138:527-537. В выбранные временные точки аликвоты по 10 мкл переносили в 190 мкл буфера (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,1% PEG8000, 1 мг/мл BSA, pH 7,3), содержащего 200 нМ sTF и 1 мМ S-2288 (Chromogenix), что позволило измерить остаточную активность FVIIa по гидролизу хромогенного субстрата, считываемому при 405 нМ в течение 5 мин. Остаточную амидолитическую активность определяли как наклон линейных кривых реакции после вычитания холостой пробы, которые впоследствии были аппроксимированы к функции экспоненциального затухания первого порядка с использованием программного обеспечения GraphPad Prism для получения констант скорости реакции кажущегося первого порядка (kapp). Кажущуюся константу скорости второго порядка (kinh) определяли как kapp, деленную на концентрацию альфа-2-макроглобулина.

В отсутствие антитела кажущаяся константа скорости второго порядка для ингибирования FVIIa альфа-2-макроглобулином составила 475 ± 21 M^-1с^-1. Однако в присутствии моновалентного антитела 11F2 (mAb0077(OA)) не наблюдалось видимого ингибирования FVIIa до последней временной точки через 125 мин. Из этих исследований можно сделать вывод, что 11F2 не влияет на ингибирование FVIIa антитромбином, но защищает FVIIa от ингибирования альфа-2-макроглобулином.

Пример 12. Влияние антитела 11F2 на аутоактивацию FVII

При повреждении сосудов эндогенный FVII с высокой аффинностью связывается со своим кофактором - тканевым фактором (TF), который находится на клетках, окружающих эндотелий сосудов. В ходе этого процесса FVII превращается в FVIIa под действием ограниченного протеолиза. Полагают, что активация происходит в результате TF-опосредованной трансактивации FVIIa-FVII, также называемой аутоактивацией. Чтобы определить влияние антитела 11F2 на аутоактивацию FVII, активацию FVII измеряли в присутствии липидированного TF, FVII, предельной концентрации FVIIa и моновалентного антитела 11F2.

Измерения активности выполняли в буфере для анализа (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, pH 7,3, содержащем 0,1% PEG8000 и 1 мг/мл BSA), содержащем 2 нМ FVIIa, 145 нМ FVII, 0 или 200 нМ моновалентного антитела 11F2 (mAb0077(OA)). Реакцию инициировали посредством добавления 2 нМ липидированного фрагмента TF 1-244, полученного из E. coli, включенного в везикулы из смеси 25:75 PS:PC, как описано в Smith and Morrissey (2005) J. Thromb. Haemost., 2:1155-1162. Общий объем реакционной смеси составлял 100 мкл. В выбранные временные точки (обычно 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 и 60 минут) образуемый FVIIa количественно оценивали в соответствии с процедурой подвыборки, описанной ниже.

Количественное определение FVIIa путем подвыборки: в выбранные моменты времени 10 мкл образцов гасили посредством переноса в 140 мкл смеси 50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 5 мМ EDTA, содержащей 0,1% PEG8000, 1 мг/мл BSA и 215 нМ растворимого тканевого фактора (sTF). После сбора всех образцов хромогенную активность FVIIa измеряли путем добавления 50 мкл S-2288 (4 мМ) в 60 мМ CaCl₂. Степень превращения хромогенного субстрата под действием образуемого FVIIa измеряли как наклон линейного увеличения поглощения при 405 нМ в течение 10 мин с использованием устройства для считывания планшетов Spectramax. Сравнивая измеренные наклоны с наклонами, получаемыми в аналогичных условиях с известными количествами FVIIa, можно оценить молярные концентрации FVIIa.

Было обнаружено, что аутоактивация FVIIa зависит от TF, и судя по измеренным активностям FVIIa в таблице 11, она не нарушается в присутствии моновалентного антитела 11F2.

Таблица 11. TF-опосредованная аутоактивация FVIIa согласно примеру 12 в присутствии 200 нМ моновалентного антитела 11F2 mAb0077(OA) или в его отсутствие

Время (мин)	Активность Без антитела	Активность mAb0077(OA)
5	5,5 ± 0,1	6,0 ± 0,1
10	9,2 ± 0,1	11,2 ± 1,3
20	23,6 ± 1,1	27,6 ± 1,8
30	45,6 ± 1,6	52,7 ± 3,6
40	71,1 ± 2	78,2 ± 4,1
50	87,8 ± 1,4	100,0 ± 5,4

Пример 13. Кристаллическая структура 11F2-Fab0076 в комплексе с FVIIa с ингибированным активным центром и растворимым тканевым фактором

Для определения эпитопа, распознаваемого мышиным антителом 11F2 на FVII(a), осуществляли кристаллизацию соответствующего Fab-фрагмента (Fab0076) в комплексе с FVIIa с ингибированным посредством H-D-Phe-Phe-Arg-хлорметилкетона (FFR-cmk; Bachem, Швейцария) активным центром (FVIIai) и растворимым фрагментом тканевого фактора 1-219 (sTF) с использованием метода висячей капли в соответствии с Kirchhofer D., et al., Proteins Structure Function and Genetics. (1995), 22, 419-425.

Кристаллизация

Кристаллы Fab0076, смешанные в молярном соотношении 1:1 с комплексом FVIIai/sTF, выращивали с использованием методики диффузии паров в модификации «висячая капля» белка при 18°C. Раствор белка 1 мкл 4,6 мг/мл белкового комплекса в 10 мМ HEPES, 50 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, pH 7,0 смешивали с 0,5 мкл 100 мМ цитрата натрия, pH 6,2 и 20% PEG 6000 в качестве преципитирующего средства и инкубировали при температуре 18°C над 1 мл раствора преципитирующего средства с получением кристаллов комплекса.

Сбор данных дифракции

Кристалл подвергали криозащите в растворе, состоящем из 75 мМ цитрата натрия, pH 6,2, 15% PEG 6000, 4% глицерина, 4% этиленгликоля, 4,5% сахарозы и 1% глюкозы, перед мгновенным охлаждением в жидком азоте. Данные по дифракции получали при 100К в MAX-lab (Лунд, Швеция) в канале I911-3 с использованием детектора marCCD225 от MAR Research. Автоиндексирование, интеграцию и масштабирование данных выполняли с помощью программ из пакета XDS (статистические значения данных дифракции обобщены в таблице 12).

Определение и уточнение структуры

Структуру определяли путем молекулярной замены с использованием Phaser, реализованного в наборе программ Phenix, цепями А и В из записи 1YY8 в базе данных структуры белков и записи 3ELA в базе данных структуры белков. Асимметричная единица содержит два комплекса Fab:FVIIai/sTF. Модель уточняли с использованием стадий уточнения в Phenix и неавтоматизированной перестройки в COOT. Статистические значения уточнений приведены в таблице 12.

Таблица 12. Статистические характеристики сбора и уточнения данных из рентгеноструктурного анализа кристаллографической структуры комплекса между FVIIa с ингибированным активным центром, растворимого тканевого фактора (sTF) и Fab0076. Статистические значения для оболочки с наивысшим разрешением показаны в скобках

	Fab0076/FVIIai/sTF
Длина волны (Å)	1,0000
Диапазон разрешения	47,88-3,02 (3,128-3,02)
Пространственная группа	P 2₁ 2₁ 2₁
Элементарная ячейка	101,02 149,02 179,86 90 90 90
Общее количество отражений	842454 (26830)
Количество уникальных отражений	53490 (5172)
Кратность	15,7 (5,1)
Завершенность (%)	99 (99)
Среднее значение I/сигма(I)	4,45 (0,39)
B-фактор Уилсона	65,28
Показатель качества данных, зависящий от кратности (R-merge)	0,8138 (4,973)
Показатель качества данных, не зависящий от кратности (R-meas)	0,8409 (5,535)
Показатель точности для средней интенсивности (R-pim)	0,2063 (2,382)
CC1/2	0,967 (0,14)
CC*	0,992 (0,496)
Отражения, использованные при уточнении	53375 (5172)
Отражения, используемые для R-free	1995 (193)
Показатель качества модели для рабочего набора (R-work)	0,2820 (0,4497)
Показатель качества модели на основании тестируемого набора данных (R-free)	0,3393 (0,4832)
CC(рабочий)	0,897 (0,319)
CC(свободный)	0,846 (0,303)
Количество атомов, отличных от атома водорода	15284
Макромолекулы	15224
Лиганды	59
Растворитель	1
Белковые остатки	1966
RMS(связи)	0,003
RMS(углы)	0,59
Процент остатков в предпочитаемой области по карте Рамачандрана (%)	91
Процент остатков в допустимой области по карте Рамачандрана (%)	7,3
Маргинальные остатки по карте Рамачандрана (%)	1,2
Процент отклонения боковых цепей от ротамеров (%)	1,6
Индекс перекрывания	2,37
Средняя величина B-фактора	102,32
Макромолекулы	102,32
Лиганды	104,51
Растворитель	0,00
Количество групп TLS	78

Было обнаружено, что эпитоп (определяемый как остатки в FVIIai, имеющие атом, отличный от атома водорода, расположенный на расстоянии меньше или равном 4 Å от атома, отличного от атома водорода, в Fab0076) включает следующие остатки в соответствии с SEQ ID NO:1:

R113

C114

H115

E116

G117

Y118

S119

L120

T130

V131

N184

T185

I186

P251

V252

E265

M391

R392

E394

Было обнаружено, что паратоп (определяемый как остатки в Fab0076, имеющие атом, отличный от атома водорода, расположенный на расстоянии, меньшем или равном 4 Å, от атома, отличного от атома водорода, в FVIIai) включает следующие остатки легкой цепи:

Q27

G28

S30

D31

Y32

K49

Y50

Q53

H92

S93

F94

согласно SEQ ID NO: 64

и остатки тяжелой цепи:

D32

Y54

N59

N101

Y102

Y103

G104

N105

согласно SEQ ID NO: 63.

Пример 14. Гуманизация мышиного 11F2

Для гуманизации мышиного антитела 11F2 (mAb0005) с последовательностями доменов VH и VL, соответствующими SEQ ID NO: 754 и SEQ ID NO: 750 соответственно, при сохранении его высокой аффинности связывания с FVII(a) мы объединили информацию об идентичности последовательностей относительно зародышевых линий человека, кристаллической структуры комплекса Fab0076 (пример 12) и FVIIa с ингибированным активным центром (пример 9), а также данные о связывании in vitro. Первоначально провели поиск человеческих последовательностей VH, VL и VJ (как для тяжелой цепи (HC), так и для легкой цепи (LC)) с высокой идентичностью последовательностей с последовательностями вариабельных доменов мышиного 11F2 в базе данных зародышевых линий человека с использованием алгоритма Blast. Последовательности с наивысшей идентичностью последовательности для VH HC были: IGHV4-30-4*01, IGHV4-28*01, IGHV4-28*06 и IGHV459*01, а для VJ-сегмента HC приоритетными зародышевыми линиями были: IGHJ5*01, IGHJ4*01. Для LC приоритетными последовательностями для VL были: IGKV6D-41*01 и IGKV3-11*01, а для VJ-сегмента: IGKJ2*01 и IGKJ2*02 (таблица 12). Затем различия между последовательностями зародышевых линий человека и VH и VL мыши картировали на кристаллической структуре комплекса Fab0076/FVIIa. Предполагалось, что остатки в вариабельных доменах мыши, отделенные расстоянием более чем или равным 10 Å от остатков в эпитопе, практически не оказывают влияния на аффинность связывания, поэтому их заменяли на соответствующий аминокислотный элемент зародышевой линии человека. В свою очередь, остатки, составляющие паратоп, считались более проблематичным для замены без влияния на аффинность, поэтому в таком случае аминокислотный элемент мыши сохраняли. Идентифицировали подмножество остатков вблизи поверхности связывания, которые потенциально могут влиять на аффинность связывания. Гуманизированные варианты получали путем мутирования остатков, удаленных от эпитопа, с заменой на аминокислотный элемент человека, определенных в ходе выравнивания с зародышевой линией. Кроме того, остатки, близкие к паратопу, мутировали с заменой на человеческий элемент из подмножества, чтобы сделать варианты как можно более близкими зародышевой линии человека. В набор были включены варианты, в которых мышиные CDR были привиты к полностью человеческим HC и LC зародышевой линии. Исходя из первоначального анализа было получено 12 LC и 13 HC, которые объединили в 23 варианта в соответствии с таблицей 13.

Значения аффинности связывания с FVIIa (перечисленные в таблице 13) определяли для гуманизированных антител с использованием интерферометрии биослоев (Fortebio). Все стадии выполняли в рабочем буфере (20 мМ буфер HEPES (pH 7,4), 150 мМ NaCl, 5 мМ CaCl₂, 0,03% Tween 20, 1 мг/мл BSA без IgG) при 30°C. Антитела иммобилизовали на наконечниках с антителами к человеческим (AHC, Fortebio) в течение 3 мин в концентрации 10 мкг/мл. После этого следовала 3-минутная инкубация для установления исходного уровня. Затем ассоциацию контролировали в течение 3 минут с использованием четырех различных концентраций FVIIa (25 нМ, 50 нМ, 100 нМ и 200 нМ) с последующей 3-минутной диссоциацией. Сенсограммы анализировали с помощью программного обеспечения для анализа данных Fortebio. Для ранжирования использовали данные Fortebio, и абсолютные значения аффинности могут отклоняться от значений, определенных с помощью SPR (пример 6, таблица 7).

Таблица 12. Последовательности зародышевой линии человека, используемые для гуманизации мышиного 11F2. Числа в скобках отражают идентичность: ((n/m) обозначает n идентичных положений из общего количества m положений) между мышиными вариабельными доменами Fab0076 и указанной последовательностью зародышевой линии человека

VH-LC	VJ-LC	VH-HC	VJ-HC
IGKV3-1101 (81/95) IGKV3D-1101 (80/89)	IGKJ201 (11/11) IGKJ2012 (11/11)	IGHV4-2806 (87/98) IGHV4-6101 (90/99) IGHV4-30-4*01 (91/99)	IGHJ502(12/12) IGHJ101(11/11)

Таблица 13. Спаривание VH и VL в первом цикле гуманизации мышиного 11F2-mAb0048 с измеренными аффинностями соответствующих антител к FVIIa (определенными, как описано в данном документе). Для некоторых вариантов при измерении обнаружено отсутствие связывания (nb)

Антитело	SEQ ID NО (VH)	SEQ ID NО (VL)	K_D (нM)
mAb0108	74	70	nb
mAb0109	82	78	11
mAb0110	90	86	4,2E+4
mAb0111	98	94	nb
mAb0112	106	102	13
mAb0113	114	110	1,8
mAb0114	122	118	1,5
mAb0115	130	126	1,5
mAb0116	138	134	32
mAb0117	146	142	1,4
mAb0118	154	150	1,7
mAb0119	162	158	1,0
mAb0120	170	166	1,7
mAb0121	178	174	2,0
mAb0122	186	182	1,7
mAb0123	194	190	5,8
mAb0124	202	198	1,8
mAb0125	210	206	1,7
mAb0126	218	214	2,5
mAb0127	226	222	nb
mAb0128	234	230	1,7
mAb0129	242	238	2,2
mAb0130	250	246	1,8

Были идентифицированы варианты из первого цикла гуманизации, имеющие аффинность, равную или превышающую аффинность родительского мышиного антитела. Поэтому те мутации, которые, как было обнаружено, сохраняли или улучшали аффинность связывания, использовали для второго цикла конструирования вариантов. С использованием данного набора мутаций был проведен второй цикл конструирования вариантов путем вставки как можно большего количества этих мутаций над гуманизированными HC и LC, уже обладающими требуемой аффинностью. На основе анализа были сконструированы и экспериментально протестированы 19 последовательностей VH (соответствующих SEQ ID NO: 314, 514, 522, 530, 538, 546, 554, 562, 570, 578, 586, 594, 602, 610, 618, 626, 634, 642 и 650) и 25 последовательностей VL (соответствующих SEQ ID NO: 310, 318, 326, 334, 342, 350, 358, 366, 374, 382, 390, 398, 406, 414, 422, 430, 438, 446, 454, 462, 470, 478, 486, 494 и 502) путем объединения всех VH с VL, что дало в общей сложности 475 комбинаций. Значения константы диссоциации (KD) для связывания с FVIIa измеряли для полученных 475 гуманизированных антител с использованием интерферометрии биослоев (Fortebio), как описано выше. Измеренные значения KD приведены в таблице 14.

Таблица 14. Значения константы диссоциации (M, nb для отсутствия связывания) для гуманизированных вариантов мышиного антитела 11F2 к FVII(a). Антитела определены их соответствующими номерами SEQ ID для VH и VL:

VL VH	310	318	326	334	342	350	358	366
314	nb	1,7E-08	1,5E-08	2,1E-08	2,8E-08	1,9E-08	1,8E-08	nb
514	3,1E-09	9,9E-10	7,5E-10	1,1E-09	1,3E-09	9,4E-10	8,7E-10	1,4E-09
522	8,3E-09	9,7E-10	8,1E-10	1,2E-09	1,4E-09	1,3E-09	1,3E-09	1,4E-08
530	2,5E-09	1,2E-09	1,1E-09	1,2E-09	1,2E-09	9,6E-10	1,0E-09	3,2E-09
538	2,5E-09	6,4E-10	5,8E-10	9,7E-10	1,2E-09	1,0E-09	8,9E-10	6,2E-09
546	3,2E-09	8,6E-10	8,1E-10	1,1E-09	1,2E-09	9,6E-10	9,9E-10	5,7E-09
554	nb	1,5E-08	1,4E-08	1,8E-08	2,3E-08	1,9E-08	1,6E-08	nb
562	6,4E-09	9,2E-10	7,8E-10	1,2E-09	1,3E-09	9,3E-10	9,5E-10	8,3E-09
570	1,3E-08	8,3E-10	5,5E-10	9,2E-10	1,5E-09	1,0E-09	8,5E-10	1,4E-08
578	nb	1,7E-08	1,6E-08	2,2E-08	4,3E-08	2,1E-08	1,9E-08	nb
586	1,5E-06	9,8E-09	9,9E-09	1,3E-08	1,8E-08	1,2E-08	1,1E-08	2,1E-08
594	nb	2,3E-08	2,2E-08	3,2E-08	1,2E-07	3,4E-08	2,4E-08	nb
602	4,8E-08	9,0E-09	8,8E-09	1,0E-08	1,4E-08	1,0E-08	9,2E-09	5,1E-08
610	8,0E-08	1,0E-08	1,1E-08	1,3E-08	1,6E-08	1,1E-08	1,1E-08	3,3E-07
618	1,2E-08	1,1E-09	1,1E-09	1,3E-09	1,2E-09	1,0E-09	9,5E-10	2,1E-08
626	9,2E-09	7,1E-10	7,9E-10	9,5E-10	8,5E-10	6,5E-10	7,2E-10	8,7E-08
634	2,1E-09	8,6E-10	9,0E-10	1,0E-09	1,0E-09	1,2E-09	8,2E-10	3,1E-09
642	1,6E-06	8,1E-08	2,3E-08	1,0E-06	4,0E-08	1,2E-07	3,2E-07	nb
650	1,6E-08	1,2E-09	1,1E-09	1,5E-09	1,6E-09	9,9E-10	1,1E-09	3,5E-08

Таблица 14 (продолжение)

VL VH	374	382	390	398	406	414	422	430
314	nb	2,7E-08	nb	nb	nb	nb	nb	nb
514	nb	1,2E-09	4,7E-09	7,9E-09	5,3E-09	4,6E-09	6,8E-08	7,1E-09
522	1,4E-08	1,3E-09	1,5E-08	3,2E-07	1,7E-08	3,1E-08	1,1E-07	1,2E-08
530	4,2E-09	1,1E-09	4,1E-09	7,1E-09	4,3E-09	4,5E-09	2,6E-08	4,9E-09
538	7,4E-09	1,2E-09	7,0E-09	1,1E-08	6,1E-09	6,9E-09	2,1E-08	8,3E-09
546	6,8E-09	1,3E-09	7,0E-09	1,1E-08	6,7E-09	7,1E-09	2,4E-08	8,1E-09
554	nb	2,1E-08	nb	nb	nb	nb	nb	nb
562	nb	1,2E-09	1,0E-08	nb	7,7E-09	8,8E-09	1,8E-08	7,9E-09
570	nb	1,3E-09	4,8E-08	2,9E-08	2,0E-08	2,1E-08	2,4E-06	1,6E-08
578	nb	3,0E-08	nb	nb	nb	nb	nb	8,2E-07
586	nb	1,7E-08	3,8E-08	nb	1,9E-08	2,5E-08	nb	1,3E-08
594	nb	1,4E-07	nb	nb	nb	nb	nb	nb
602	nb	1,4E-08	3,7E-07	nb	9,0E-08	3,1E-07	nb	5,9E-07
610	nb	1,7E-08	3,8E-07	nb	4,8E-07	7,8E-07	nb	1,5E-06
618	nb	1,1E-09	3,3E-08	1,8E-07	2,4E-08	2,4E-08	5,8E-06	1,1E-07
626	nb	1,1E-09	2,7E-08	8,2E-07	8,7E-08	1,8E-08	2,4E-06	5,3E-08
634	4,5E-09	1,2E-09	4,3E-09	8,2E-09	4,2E-09	4,6E-09	2,6E-08	4,9E-09
642	nb	6,0E-07	nb	nb	nb	nb	nb	5,4E-07
650	4,6E-08	1,9E-09	9,9E-08	5,5E-08	1,8E-07	8,4E-08	2,6E-06	2,8E-08

Таблица 14 (продолжение)

VL VH	438	446	454	462	470	478	486	494	502
314	nb	nb	3,2E-08	2,6E-08	2,0E-08	6,4E-08	2,2E-08	2,8E-08	2,5E-08
514	5,4E-09	7,7E-09	1,3E-09	1,2E-09	1,2E-09	1,9E-09	9,5E-10	1,4E-09	9,2E-10
522	5,7E-08	1,7E-07	1,0E-09	1,2E-09	9,6E-10	1,6E-09	1,5E-09	1,7E-09	1,4E-09
530	4,6E-09	7,9E-09	1,1E-09	1,0E-09	9,6E-10	1,4E-09	9,9E-10	1,0E-09	9,4E-10
538	8,3E-09	1,2E-08	1,2E-09	1,3E-09	1,0E-09	1,8E-09	1,0E-09	1,1E-09	8,8E-10
546	8,0E-09	1,0E-08	1,1E-09	1,1E-09	1,2E-09	2,0E-09	1,1E-09	1,2E-09	1,1E-09
554	nb	nb	1,9E-08	2,0E-08	1,9E-08	2,1E-08	1,9E-08	2,2E-08	1,8E-08
562	1,1E-08	nb	1,4E-09	1,4E-09	1,4E-09	2,6E-09	1,3E-09	1,6E-09	1,1E-09
570	2,1E-07	2,4E-08	1,1E-09	1,1E-09	1,1E-09	1,9E-09	9,9E-10	1,1E-09	9,2E-10
578	nb	nb	2,5E-08	2,7E-08	2,5E-08	3,1E-07	2,3E-08	2,8E-08	2,4E-08
586	2,3E-08	nb	1,6E-08	1,8E-08	1,5E-08	2,7E-08	1,8E-08	1,7E-08	1,5E-08
594	nb	nb	3,2E-08	3,9E-08	3,5E-08	2,0E-07	3,3E-08	4,3E-08	3,0E-08
602	6,0E-07	nb	1,3E-08	1,5E-08	1,3E-08	2,4E-08	1,5E-08	1,4E-08	1,4E-08
610	6,2E-07	4,9E-08	1,6E-08	1,7E-08	1,6E-08	3,3E-08	1,7E-08	1,7E-08	1,7E-08
618	3,4E-08	2,0E-07	1,3E-09	1,4E-09	1,2E-09	2,0E-09	1,2E-09	1,4E-09	1,2E-09
626	7,7E-08	8,8E-07	1,4E-09	1,4E-09	1,1E-09	2,5E-09	1,6E-09	1,8E-09	1,8E-09
634	4,8E-09	7,7E-09	1,2E-09	1,2E-09	1,0E-09	1,8E-09	1,4E-09	1,3E-09	1,3E-09
642	3,3E-08	nb	2,5E-08	5,2E-08	4,7E-08	1,1E-08	7,7E-09	1,0E-08	4,6E-09
650	2,8E-08	3,9E-08	1,4E-09	1,6E-09	1,6E-09	3,0E-09	1,3E-09	1,6E-09	1,3E-09

SPR-анализ гуманизированных вариантов 11F2

Аффинность выбранных гуманизированных вариантов 11F2 определяли с помощью SPR-анализа, подробно описанного в примере 6. Измеренные константы диссоциации перечислены в таблице 15 и показывают сохраняющееся высокоаффинное связывание вариантов с человеческим FVIIa.

Таблица 15. Расчетные константы связывания (K_D) для взаимодействия гуманизированных антител 11F2 в моновалентном формате и формате biAb с FVIIa, определенные посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR) в соответствии с примером 6

Антитело к FVII(a)	K_D(M)
mAb0077(OA)	4,1E-11
mAb0099(OA)	1,2E-10
mAb0138(OA)	1,3E-10
mAb0140(OA)	8,3E-11
mAb0141(OA)	7,8E-11
mAb0142(OA)	1,0E-09
mAb0143(OA)	7,9E-11
mAb0705(OA)	5,05E-11
mAb0706(OA)	5,42E-11
mAb0707(OA)	1,06E-10
mAb0709(OA)	1,04E-10
mAb0710(OA)	1,28E-10
biAb0001	0,06E-09
biAb0245	600E-09

Функциональная характеристика гуманизированных вариантов 11F2

Влияние выбранных гуманизированных вариантов 11F2 на активность FVIIa и чувствительность к ингибированию антитромбином определяли так, как это подробно описано в примере 5. Результаты перечислены в таблице 16 и они показывают, что гуманизированные варианты сохраняют требуемые свойства в отношении этих параметров.

Таблица 16. Функциональная характеристика антител к FVII(а) в анализах тромбинообразования (TGT) и ингибирования антитромбином (AT), как описано в примере 5

Антитело к FVII(a)	Активность TGT (% FVIIa)	Ингибирование посредством AT (k_inh%)
mAb0077(OA)	103	119
mAb0099(OA)	98	117
mAb0137(OA)	102	105
mAb0138(OA)	99	105
mAb0139(OA)	100	110
mAb0140(OA)	100	106
mAb0141(OA)	103	109
mAb0142(OA)	106	114
mAb0143(OA)	107	109
mAb0705(OA)	100	129
mAb0706(OA)	101	132
mAb0707(OA)	102	129
mAb0709(OA)	103	137
mAb0710(OA)	102	136

Фармакокинетика у крыс FVIIa в совместном составе с гуманизированными вариантами 11F2

Семейство гуманизированных вариантов 11F2 вводили в/в самцам крыс Спрег-Доули в совместном составе с 20 нмоль/кг FVIIa, как подробно описано в примере 9.

Результаты представлены в таблице 17 и показывают, что несколько гуманизированных вариантов 11F2 придают FVIIa такой же длительный период полужизни, как и родительское антитело.

Таблица 17. Среднее время удержания (MRT) активности FVIIa в плазме крови крыс Спрег-Доули после в/в введения 20 нмоль/кг FVIIa при различных молярных соотношениях с антителом Значения представляют собой среднее ± стандартное отклонение, n = 3. Н. п.: не применимо

Антитело к FVII(a)	Молярное соотношение FVIIa:антитело	MRT (ч)
Среда-носитель	н. п.	1,1
mAb0005	1:5	7,9
mAb0077(OA)	1:1	11 ± 0,2
mAb0099(OA)	1:1	7,7 ± 0,4
mAb0137(OA)	1:1	7,0
mAb0139(OA)	1:1	2,7
mAb0140(OA)	1:1	7,7
mAb0141(OA)	1:1	7,7
mAb0705(OA)	1:1	7,7 ± 0,4
mAb0706(OA)	1:1	7,3 ± 0,3
mAb0707(OA)	1:1	6,4 ± 1,0
mAb0709(OA)	1:1	5,9 ± 0,4
mAb0710(OA)	1:1	5,7 ± 0,3

Пример 15. Кристаллизация и картирование эпитопов 11F2 Fab0883 в комплексе с FVIIa с ингибированным активным центром и растворимым тканевым фактором

Для определения эпитопа на FVII(a), распознаваемого гуманизированным 11F2, т.е. mAb0705 (OA) и mAb0842 (OA), осуществляли кристаллизацию соответствующего Fab-фрагмента (Fab0883) в комплексе с FVIIa с ингибированным посредством H-D-Phe-Phe-Arg хлорметилкетона (FFR-cmk; Bachem, Швейцария) активным центром (FVIIai) и растворимым фрагментом тканевого фактора 1-219 (sTF) с использованием метода висячей капли в соответствии с [Kirchhofer. D., et al., Proteins Structure Function and Genetics. (1995), 22, 419-425.

Кристаллизация

Кристаллы очищенного посредством SEC комплекса Fab в совокупности с FVIIai/sTF выращивали с использованием метода диффузии паров в модификации «сидячая капля» при 18°C. Белковый раствор в виде 360 нл белкового комплекса (4,5 мг/мл) в 20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,1 мМ CaCl₂, pH 7,4 смешивали с 360 нл раствора преципитирующего средства, содержащего 0,15 М CsCl и 15% (вес/об.) полиэтиленгликоля 3350, и 360 нл воды и уравновешивали с 80 мкл раствора преципитирующего средства. Кристаллы росли в течение 6 недель.

Сбор данных дифракции

Кристалл подвергали криозащите в растворе, состоящем из 0,15 M CsCl, 15% (вес/об.) полиэтиленгликоля 3350 и 20% (об./об.) глицерина, перед мгновенным охлаждением в жидком азоте. Данные дифракции собирали при 100 K на генераторе с вращающимся анодом Rigaku FRX, оснащенном детектором Dectris Pilatus 1M. Обработку данных выполняли с помощью программ из пакета XDS (статистические значения данных дифракции обобщены в таблице 18).

Определение и уточнение структуры

Все кристаллографические расчеты выполнены с использованием набора кристаллографических программ Phenix. Структуру определяли посредством молекулярной замены с использованием программы Phaser с координатами структуры комплекса, полученной так, как это описано в примере 13, в качестве модели поиска. Асимметричная единица содержит четыре комплекса Fab:FVIIai/sTF. Итерационные циклы неавтоматизированной перестройки с использованием COOT и уточнения в Phenix дали окончательную модель (таблица 18).

Таблица 18. Статистические характеристики сбора и уточнения данных из рентгеноструктурного анализа кристаллографической структуры комплекса между FVIIa с ингибированным активным центром, растворимого тканевого фактора (sTF) и Fab0883. Статистические значения для оболочки с наивысшим разрешением показаны в скобках

	Fab0883
Длина волны	1,542
Диапазон разрешения	46,66-3,4 (3,52-3,4)
Пространственная группа	P 1 21 1 (№ 4)
Элементарная ячейка	144,78 100,79 181,74 90 101,23 90
Общее количество отражений	340556 (24056)
Количество уникальных отражений	69058 (6446)
Кратность	4,9 (3,7)
Завершенность (%)	96,4 (91,4)
Среднее значение I/сигма(I)	3,59 (0,86)
B-фактор Уилсона	63,67
Показатель качества данных, зависящий от кратности (R-merge)	0,31 (1,05)
Показатель качества данных, не зависящий от кратности (R-meas)	0,3465 (1,22)
Показатель точности для средней интенсивности (R-pim)	0,151 (0,603)
CC1/2	0,98 (0,697)
CC*	0,995 (0,906)
Отражения, использованные при уточнении	68475 (6424)
Отражения, используемые для R-free	1960 (180)
Показатель качества модели для рабочего набора (R-work)	0,2968 (0,4173)
Показатель качества модели на основании тестируемого набора данных (R-free)	0,3323 (0,4271)
CC(рабочий)	0,855 (0,660)
CC(свободный)	0,822 (0,503)
Количество атомов, отличных от атома водорода	29262
Макромолекулы	29251
Лиганды	11
Белковые остатки	3791
RMS(связи)	0,016
RMS(углы)	1,74
Процент остатков в предпочитаемой области по карте Рамачандрана (%)	90,11
Процент остатков в допустимой области по карте Рамачандрана (%)	7,73
Маргинальные остатки по карте Рамачандрана (%)	2,16
Процент отклонения боковых цепей от ротамеров (%)	0,12
Индекс перекрывания	30,81
Средняя величина B-фактора	57,11
Макромолекулы	57,11
Лиганды	68,66

Картирование эпитопов

Остаток считается частью эпитопа, если все четыре независимо определенные молекулы FVIIa в кристалле содержат отличный от водорода атом указанного остатка в местоположении на расстоянии меньше или равном 4 Å от отличного от водорода атома в Fab. Таким образом, было обнаружено, что эпитоп содержит следующие остатки в соответствии с SEQ ID NO:1:

R113

C114

H115

E116

G117

Y118

S119

L120

T130

V131

N184

T185

P251

V252

V253

Q388

M391

R392

Определение паратопа

Остаток считается частью паратопа, если все четыре независимо определенные молекулы Fab в кристалле содержат отличный от водорода атом указанного остатка в местоположении на расстоянии меньше или равном 4 Å от отличного от водорода атома в FVII(a). Было обнаружено, что паратоп содержит следующие остатки легкой цепи (в соответствии с SEQ ID NO: 814):

Q27

G28

Y32

Y50

H92

S93

F94

и остатки тяжелой цепи (в соответствии с SEQ ID NO: 818):

D32

Y54

Y103

N105

Пример 16. Анализ «горячих точек» 11F2 mAb0842 (OA) с использованием SPR

Экспрессия аланиновых вариантов FVIIa

Аланиновые варианты hFVII получили с использованием технологии QMCF, стабильной эписомальной системы экспрессии (Icosagen). Клетки CHOEBNALT85 культивировали в среде Qmix1 (1 л = 1:1 CD-CHO и SFM II (NVO11514701) + 10 мл пениц./стрепт. (Gibco, 15140-122) + 2 мл пуромицина (Gibco, A11138-03)) в колбах E125 в инкубаторе CO2 со встряхиванием. В день трансфекции 1×10e7 клеток CHOEBNALT85 трансфицировали с использованием 2 мкг плазмиды, кодирующей вариант hFVII, и 50 мкг ДНК молок лосося с использованием электропорации (система электропорации Bio-Rad Gene Pulser Xcell, 300 В, 900 мкФ, кювета 4 мм). Через день после трансфекции отбор G418 начинали путем переноса клеток в среду Qmix2 (1 л = 1:1 CD-CHO и SFM II (NVO11514701) + 10 мл пениц./стрепт. (Gibco, 15140-122) + 1 мл витамина K (K.vit 13A 01311) + 14 мл G418 (Gibco, 10131-027)). Через 10-14 дней отбора G418 клетки достигли > 95% жизнеспособности (счетчик клеток Vi-Cell XR). Клетки разделяли по 0,4×10е6 клеток/мл в 2 × 250 мл Qmix2 в колбах 2 х E1000. Через 3-4 дня клетки достигли плотности прибл. 4-5 × 10e6 клеток/мл. Экспрессию инициировали добавлением 20% CHO CD Efficient Feed B (Gibco A10240) + 6 мМ GlutaMax (Gibco, 35050). После 4 дней инициации добавляли еще 10% CHO CD Efficient Feed B + 6 мМ GlutaMAX. На 6 день после инициации культуры собирали и центрифугировали (200 g, 5 мин). Собирали супернатанты и добавляли 15 мМ HEPES (Gibco, 15630) и 5 мМ CaCl2 (Sigma, 21115). Супернатанты стерилизовали фильтрацией, используя фильтровальную насадку 0,22 мкм (Corning, CLS430049).

Экспрессия и очистка cFVIIa-химеры (22017-051)

cFVIIa-химеру получали с использованием аналогичной системы экспрессии, описанной выше. Зимоген cFVII-химеру выделяли из среды с использованием аффинной колонки, подготовленной путем связывания антитела к FVII(a) (F1A2) собственного производства с гранулами сефарозы, как описано в примере 26. Антитело F1A2 к FVII(a) связывается с доменом Gla FVII(a) зависимым от Са++ образом. Зимоген cFVII-химеры активировали с использованием человеческого FIXa и повторно очищали с использованием аффинной очистки F1A2 с получением конечной cFVIIa-химеры.

Анализ «горячих точек»

Анализ «горячих точек» с использованием моновалентного гуманизированного антитела mAb0842(OA) выполняли путем исследований связывания с панелью из 19 вариантов FVII(a) с использованием поверхностного плазмонного резонанса (Biacore T200) при 25°C. Антитело к FVII(a) (внутренний № Ab 4F6 (Nielsen AL et al., PNAS 114 (47) 12454-12459, 2017)), целенаправленно воздействующее на gla-домен FVII(a), в концентрации 25 мкг/мл иммобилизовали на сенсорном чипе CM4 с использованием стандартного химического набора для связывания аминов (оба поставляются GE Healthcare). Варианты FVII(a) в соответствии с таблицей 19 в супернатантах клеточных культур (как описано выше) разбавляли в рабочем буфере и вводили со скоростью 10 мкл/мин в течение 1 мин для достижения уровня захвата 5-55 ед. ответа. Захват каждого варианта FVII(a) осуществляли посредством иммобилизованного антитела к gla FVII(a). Затем 540 нМ (с 3х разведением) mAb0842(OA) вводили со скоростью 30 мкл/мин в течение 7 мин, чтобы обеспечить связывание с захваченным вариантом FVII(a), после чего следовала 9-минутное впрыскивание буфера для обеспечения возможности диссоциации одноплечего антитела к FVII(а). Рабочий буфер готовили путем 10-кратного разбавления буфера 10x HBS-P (поставляется GE Healthcare) с добавлением 1 мг/мл BSA и 5 мМ CaCl2 с получением 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,05% об./об. полисорбата 20, pH 7,4, 5 мМ CaCl2, 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA). Рабочий буфер также использовали для разведения образцов антитела к FVII(а) и образцов FVII(а). Регенерацию чипа проводили с использованием 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 20 мМ EDTA, 0,05 об./об. полисорбата 20, pH 7,4. Данные по связыванию анализировали в соответствии с кинетической моделью 1:1 и анализом равновесного состояния с использованием BiaEvaluation 4.1, предоставляемого производителем (Biacore AB, Уппсала, Швеция). По возможности приводятся значения ka, kd и KD из модели кинетической аппроксимации 1:1. Для 4 вариантов FVII(a) были приведены значения KD с использованием модели аппроксимации равновесного состояния. Кроме того, сигнал захвата сообщается для всех вариантов FVII(a). Аминокислотный остаток считается остатком «горячей точки», если замена этого аминокислотного остатка на аланин приводит к снижению аффинности в десять (10) или больше раз по сравнению с диким типом. На основании данных, представленных в таблице 19, можно сделать вывод, что аминокислотные остатки H115, T130, V131 и R392 являются «горячими точками».

Таблица 19. Взаимодействие связывания вариантов FVII(a) с моновалентным гуманизированным антителом mAb0842(OA), определенное посредством анализа поверхностного плазмонного резонанса (SPR) в соответствии с примером 16

Вариант FVII(a)	Захват (ед. ответа)	K_D (нM)	Кратность отличия (вариант/дикий тип)
Дикий тип	19,2	0,31	1,0
R113A	17,7	0,29	1,0
H115A	19,3	8,16	26,8
G117A	9,5	0,31	1,0
Y118A	54,8	1,48	4,9
L120A	15,2	0,60	2,0
T130A	16,9	32,10	105,2
V131A	18	5,22	17,1
N184A	8,4	1,91	6,3
T185A	15,4	1,01	3,3
I186A	28,2	0,39	1,3
P251A	9	0,85	2,8
V252A	15,6	0,28	0,9
E265A	8,3	0,98	3,2
M391A	5,5	0,25	0,8
R392A	14,1	43,40	142,3
E394A	26,9	0,79	2,6
E116A	9,5	0,50	1,6
S119A	51,6	0,31	1,0

Пример 18. Фармакокинетика рекомбинантного FVIIa в совместном составе с гуманизированным антителом 11F2 у яванских макак

Профили зависимости «активность-время» для FVIIa в плазме крови оценивали в исследованиях на яванских макаках после в/в или п/к введения рекомбинантного FVIIa (rFVIIa) по отдельности или в совместном составе с моновалентным одноплечим 11F2 mAb0705(OA) при молярном соотношении 1:3. Составы вводили в виде однократной дозы 5,4 нмоль/кг FVIIa (содержащей 16,2 нмоль/кг mAb0705(OA) для совместного состава) с образцами крови, отобранными в течение трехнедельного периода.

В ходе эксперимента на животных их содержание и манипуляции с ними выполняли в соответствии со стандартными процедурами, одобренными местными органами здравоохранения. Животным предоставляли свободный доступ к корму и воде. Активность FVIIa в плазме крови измеряли с использованием анализа активности FVIIa, описанного в примере 8. Уровень эндогенного FVIIa яванского макака был ниже LLOQ (0,1 нМ) до введения и поэтому не учитывался.

Фармакокинетический анализ профилей зависимости «активность-время» для FVIIa в плазме крови выполняли посредством некомпартментных методов с использованием Phoenix WinNonlin 6.4. На основании данных оценивали следующие параметры: клиренс (CL), среднее время удержания (MRT) и биодоступность при п/к введении (F). Параметры перечислены в таблице 20 и они показывают значительное увеличение активности FVIIa при совместном составлении с mAb0705(OA) как после в/в, так и п/к введения по сравнению с FVIIa в отсутствие антитела.

Таблица 20. Клиренс (CL), среднее время удержания (MRT) и биодоступность при п/к введении (F) в отношении активности FVIIa в плазме крови в исследованиях на яванских макаках после в/в или п/к введения дозы 5,4 нмоль/кг FVIIa по отдельности или в совместном составе с mAb0705(OA) при молярном соотношении 1:3 Значения представляют собой среднее (SD), n = 3

Состав	CL (мл/ч/кг)	MRT (ч)	F (%)
FVIIa	39 (5,2)	2,0 (0,2)	22
FVIIa	43,8 (2,2)	2,15 (0,08)	Не определено
FVIIa:mAb0705(OA)	2,7 (0,07)	53,5 (15,3)	61,4

Пример 19. Гуманизация и оптимизация мышиного антитела к TLT-1 mAb0012

Гуманизация

Мышиное антитело к человеческому TLT-1 mAb0082, раскрытое в WO2012/117091, использовали в качестве отправной точки для процесса гуманизации. MAb0082 получено из mAb0012 путем введения двух точечных мутаций, C41A в VL и T61A в VH, с удалением неспаренного цистеина в FR1 из VL и сайта N-гликозилирования в CDR2 из VH соответственно. Процесс гуманизации основан на стандартных методах молекулярной биологии, известных специалисту в данной области техники.

Если вкратце, то последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 mAb0082 прививали к последовательности зародышевой линии человека на основе последовательности VH3_74/JH1, определенной в базе данных IMGT. Кроме того, в привитую последовательность CDRH2 вводили три аминокислотные замены из VH3_74/JH1 человека, чтобы дополнительно гуманизировать эту последовательность CDR: P62D, L64V и D66G. Для достижения аффинности связывания, сопоставимой с аффинностью mAb0082, три обратные мутации вводили в последовательность VL в положениях S49G, D62P и R98S. Что касается гуманизации VL, то последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 mAb0082 прививали к последовательности зародышевой линии человека на основе в последовательности VKII_A23/JK2, определенной в базе данных IMGT. Последовательность VL содержит потенциальную «горячую точку» дезамидирования (мотив NG) в CDR1. С использованием насыщающего мутагенеза в этом положении было обнаружено, что мотив NG можно удалить посредством замены N33Q без ущерба для аффинности к TLT-1.

Конечный гуманизированный и оптимизированный вариант mAb0082 обозначен как mAb1076, что соответствует SEQ ID NO:934 (VL) и 938 (VH).

SPR-анализ гуманизированных вариантов TLT1

Связывание sTLT1 (соответствующего SEQ ID NO:3 с шестью остатками гистидина, добавленными с С-конца) с biAb (из примера 4) исследовали посредством поверхностного плазмонного резонанса (Biacore T200) при 25°C. Антитело к IgG человека иммобилизовали на сенсорном чипе CM5 (оба поставляются GE Healthcare) с использованием стандартных химических реактивов для связывания аминов. Очищенные biAb согласно таблице 21 (1 нМ) вводили со скоростью 10 мкл/мин в течение 1 мин. Затем вводили sTLT1 в диапазоне от 0 до 60 мкМ со скоростью 30 мкл/мин в течение 3 минут, чтобы обеспечить связывание с biAb, после чего следовало 3-минутное впрыскивание буфера, обеспечивающее диссоциацию от biAb. Рабочий буфер готовили путем 10-кратного разбавления буфера 10x HBS-P (поставляется GE Healthcare) с добавлением 1 мг/мл BSA и 5 мМ CaCl₂ с получением 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,05% об./об. полисорбата 20, pH 7,4, 5 мМ CaCl₂, 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA). Рабочий буфер также использовали для разведения образцов biAb и sTLT1. Регенерацию чипа выполняли с использованием рекомендованного буфера для регенерации, состоящего из 3 M MgCl₂ (поставляется GE Healthcare). Данные по связыванию анализировали в соответствии с моделью 1:1 с использованием BiaEvaluation 4.1, предоставляемого производителем (Biacore AB, Уппсала, Швеция). В результате анализа были получены константы связывания, представленные в таблице 21, демонстрирующие диапазон показателей аффинности от 2,9 нМ до 320 нМ для связывания sTLT1 посредством biAb.

Таблица 21. Расчетные константы связывания для взаимодействия sTLT1 с biAb, определенные при помощи анализа поверхностного плазмонного резонанса (SPR) в соответствии с примером X

biAb	Родительское антитело к FVII(a)	Родительское антитело к TLT-1	K_D (M)
biAb0001	mAb0865	mAb1076	2,9E-9
biAb0015	mAb0865	mAb1038	1,9E-8
biAb0090	mAb0865	mAb1049	3,2E-7
biAb0095	mAb0865	mAb1047	7,5E-8

Пример 20. Кристаллическая структура препарата на основе пептидного комплекса Hz-TLT1 и TLT-1

Fab-фрагмент, используемый для кристаллизации в комплексе со стержневым пептидом TLT-1, содержал последовательности доменов VL и VH, соответствующие mAb1076 (SEQ ID NO: 854 и 858 соответственно), домен CH1 IgG4 человека и CL-каппа человека с одной точечной мутацией (G157C). Замена G на C расположена в константном домене Fab-фрагмента, то есть вдали от антигенсвязывающего участка, и не влияет на связывание с TLT-1. 37-членный стержневой пептид, EEEEETHKIGSLAENAFSDPAGSANPLEPSQDEKSIP (SEQ ID NO: 13), соответствующий остаткам 111-147 SEQ ID NO: 2, получили посредством стандартных способов пептидного синтеза, известных специалисту в данной области техники. Fab и стержневой пептид смешивали при молярном соотношении 1:2 в буфере hepes (20 мМ Hepes (pH 7,3), 150 мМ NaCl). Комплекс Fab:пептид 1:1 выделяли с использованием гель-фильтрации на колонке superdex 200, элюированной буфером hepes, а затем концентрировали до ~11 мг/мл и использовали для кристаллизации.

Кристаллизация

Кристаллы комплекса Fab/пептид при молярном соотношении 1:1 после гель-фильтрации выращивали с использованием метода диффузии паров в модификации «сидячая капля» при 18°C. Белковый раствор из 150 нл 10,8 мг/мл комплекса Fab:пептид в 20 мМ Hepes, pH 7,3 и 150 мМ NaCl смешивали с 50 нл 1 М LiCl, 0,1 М Na цитрат-лимонная кислота, pH 4 и 20% (вес/об.) PEG 6000 в качестве преципитирующего средства и инкубировали над 60 мкл преципитирующего средства.

Сбор данных дифракции

Кристалл подвергали криозащите путем добавления 1 мкл преципитирующего средства с добавлением 20% этиленгликоля к кристаллизационной капле перед мгновенным охлаждением в жидком азоте. Данные дифракции собирали при 100 K в пучке синхротронного излучения BioMAX на синхротроне MAX IV (Лунд, Швеция) с использованием гибридного пиксельного детектора Eiger 16M от Dectris. Автоиндексирование, интеграцию и масштабирование данных выполняли с помощью программ из пакета XDS (статистические значения данных дифракции обобщены в таблице 22).

Определение и уточнение структуры

Асимметричная единица содержит два комплекса Fab:пептид, исходя из анализа коэффициента Мэтьюса. Структуру определяли путем молекулярной замены. Phaser, реализованный в наборе программ Phenix, использовали с цепями H и L из записи 5KMV базы данных структуры белков в качестве поисковой модели, локализующей два Fab. Их моделировали с использованием правильной аминокислотной последовательности при помощи COOT, а затем уточняли, используя уточнение в Phenix. Аминокислоты с 7 по 21 из пептида были четко видны на картах разностной электронной плотности и могли быть смоделированы вручную с использованием COOT. Модель дополнительно уточняли с использованием стадий уточнения в Phenix и неавтоматизированной перестройки в COOT. Статистические значения уточнений приведены в таблице 22.

Таблица 22. Статистические характеристики сбора и уточнения данных

Длина волны (Å)	0,9799
Диапазон разрешения (Å)	29,42-1,49 (1,543-1,49)
Пространственная группа	P 1
Элементарная ячейка (Å, град.)	53,23, 65,38, 67,15 91,88, 91,72, 92,89
Общее количество отражений	260187 (25653)
Количество уникальных отражений	140071 (9127)
Кратность	1,9 (1,9)
Завершенность (%)	91,03 (62,11)
Среднее значение I/сигма(I)	9,03 (1,37)
B-фактор Уилсона	18,72
Показатель качества данных, зависящий от кратности (R-merge)	0,05225 (0,593)
Показатель качества данных, не зависящий от кратности (R-meas)	0,07387 (0,8385)
Показатель точности для средней интенсивности (R-pim)	0,05222 (0,5928)
CC1/2	0,994 (0,0683)
CC*	0,999 (0,358)
Отражения, использованные при уточнении	134361 (9125)
Отражения, используемые для R-free	1784 (123)
Показатель качества модели для рабочего набора (R-work)	0,1582 (0,2655)
Показатель качества модели на основании тестируемого набора данных (R-free)	0,1779 (0,2932)
CC(рабочий)	0,966 (0,671)
CC(свободный)	0,962 (0,632)
Количество атомов, отличных от атома водорода	8094
Макромолекулы	7042
Растворитель	1052
Белковые остатки	897
RMS(связи)	0,009
RMS(углы)	1,36
Процент остатков в предпочитаемой области по карте Рамачандрана (%)	97,06
Процент остатков в допустимой области по карте Рамачандрана (%)	2,83
Маргинальные остатки по карте Рамачандрана (%)	0,11
Процент отклонения боковых цепей от ротамеров (%)	1,35
Индекс перекрывания	4,17
Средняя величина B-фактора (Å²)	25,71
Макромолекулы	24,26
Растворитель	35,47
Количество групп TLS	1

Статистические значения для оболочки с наивысшим разрешением показаны в скобках

Эпитоп и паратоп комплекса Fab/пептид

Эпитоп определяется как остатки в стержневом пептиде TLT-1, характеризующиеся наличием тяжелого атома (т.е. атома, отличного от водорода) на расстоянии 4,0 Å от тяжелого атома в Fab в обоих комплексах в асимметричной единице. Точно так же паратоп определяется как остатки в Fab-фрагменте, характеризующиеся наличием тяжелого атома на расстоянии 4,0 Å от тяжелого атома в стержневом пептиде TLT-1 в обоих комплексах в асимметричной единице. Было обнаружено, что эпитоп содержат следующие остатки пептида 37aa TLT-1 в соответствии с SEQ ID NO: 13:

K8

I9

G10

S11

L12

A13

N15

A16

F17

S18

D19

P20

A21,

соответствующие K118, I119, G120, S121, L122, A123, N125, A126, F127, S128, D129, P130 и A131 из SEQ ID NO:2 и 3).

Паратоп содержит следующие остатки вариабельного домена тяжелой цепи (SEQ ID NO: 938):

V2

F27

R31

Y32

W33

E50

T57

N59

S98

G99

V100

T102

S103

и вариабельного домена легкой цепи (SEQ ID NO: 934):

H31

Y37

H39

Y54

F60

S61

S96

T97

V99

Y101.

Пример 21. Влияние аффинности на стимулирующую активность биспецифического антитела к FVII(a)/TLT-1

Для определения влияния аффинности на активность биспецифического антитела ряд mAb к FVII(a) и к TLT-1 после гуманизации mAb0005 11F2 (см. пример 14) и mAb0012 (см. пример 19) и с различной аффинностью к FVIIa и TLT-1 соответственно, тестировали в биспецифическом формате в анализе образования FXa с использованием липидированного TLT-1, как описано в WO2011/023785.

На первой стадии активацию FX измеряли в присутствии 4 нМ рекомбинантного TLT-1, включенного в везикулы фосфатидилсерин:фосфатидилхолин 10:90 (WO2011023785), 2,5 нМ FVIIa и биспецифического антитела (biAb) в серии концентраций от 0 до 300 нМ. После 10-мин предварительной инкубации в буфере для анализа (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 10 мМ CaCl₂, pH 7,3 + 1 мг/мл BSA и 0,1% PEG8000) при комнатной температуре добавляли 150 нМ FX, полученного из плазмы крови (Haematologic Technologies), с получением общего объема 50 мкл, и активация продолжалась в течение 20 мин. Затем активацию останавливали добавлением 25 мкл гасящего буфера (50 мМ HEPES, 100 мМ NaCl, 80 мМ EDTA, pH 7,3) и получали FXa, количественно определяемый по его способности гидролизовать 0,5 мМ хромогенного субстрата S-2765 (Chromogenix) (добавляли в виде 2 мМ исходного раствора в 25 мкл объема), за которым следили при 405 нМ в течение 5 мин на считывателе для планшетов SPECTRAmax Plus384. По наклону линейного увеличения поглощения рассчитывали нормализованную активность (A_biAb) для каждого biAb в концентрации 100 нМ путем вычитания фоновой активности в отсутствие biAb и деления на концентрацию FVIIa в анализе.

На второй стадии тот же анализ выполняли с заменой biAb на буфер для анализа и серией концентраций FVIIa от 0 до 80 нМ. Наклон линейной зависимости между образованием FXa за вычетом фона и концентрацией FVIIa в анализе дает меру удельной активности свободного FVIIa (A_FVIIa) в используемых условиях анализа.

На основании измеренных значений активности рассчитывали стимулирующую активность каждого biAb в концентрации 100 нМ как соотношение A_biAb/A_FVIIa. Стимулирующая активность позволяет измерить кратность увеличения FXa, образуемого посредством FVIIa, при добавлении 100 нМ biAb.

Стимулирующая активность представлена в таблице 23 и показывает зависимость стимуляции biAb от сил (выраженных в виде значений константы диссоциации (KD)), с которыми связаны FVIIa и TLT-1 соответственно. Среди испытанных biAb наибольшую стимулирующую активность проявляет biAb0001.

Таблица 23. Стимулирующая активность биспецифических антител в присутствии FX, FVIIa и липидированного TLT-1, описанные в примере 21. Для каждого биспецифического антитела указана измеренная стимулирующая активность (среднее ± стандартное отклонение, n = 2) вместе с константами диссоциации для взаимодействия с FVIIa и TLT-1 соответственно

Биспецифичес-кое антитело	Плечо к FVIIa	Плечо к TLT-1	K_D (FVIIa) [нM]	K_D (TLT-1) [нM]	Стимуляция (кратность)
biAb0001	mAb0865	mAb1076	0,06	2,9	29,2 ± 1,7
biAb0015	mAb0865	mAb1038	0,06	19	18,7 ± 1,5
biAb0095	mAb0865	mAb1047	0,06	75	13,9 ± 1,1
biAb0090	mAb0865	mAb1049	0,06	320	11,1 ± 1
biAb0011	mAb0875	mAb1076	0,28	2,9	20,3 ± 1,3
biAb0016	mAb0875	mAb1038	0,28	19	17,3 ± 1,6
biAb0096	mAb0875	mAb1047	0,28	75	12,4 ± 1,1
biAb0091	mAb0875	mAb1049	0,28	320	11,3 ± 1,3
biAb0012	mAb0872	mAb1076	2,2	2,9	22,1 ± 0,4
biAb0017	mAb0872	mAb1038	2,2	19	13,6 ± 0,1
biAb0097	mAb0872	mAb1047	2,2	75	17,4 ± 0,1
biAb0092	mAb0872	mAb1049	2,2	320	11,2 ± 0,2
biAb0013	mAb0874	mAb1076	16,2	2,9	16 ± 0,1
biAb0018	mAb0874	mAb1038	16,2	19	12,8 ± 0,2
biAb0098	mAb0874	mAb1047	16,2	75	15,3 ± 0,1
biAb0093	mAb0874	mAb1049	16,2	320	9,6 ± 0,2
biAb0014	mAb0873	mAb1076	600	2,9	8 ± 0,2
biAb0019	mAb0873	mAb1038	600	19	9,4 ± 0,5
biAb0099	mAb0873	mAb1047	600	75	5,8 ± 0,5
biAb0094	mAb0873	mAb1049	600	320	5,4 ± 0,5

Пример 22. Влияние местоположения эпитопа на стимулирующую активность биспецифических антител к FVII(a)/TLT-1

Для определения влияния местоположения эпитопа на активность биспецифического антитела ряд mAb к TLT-1 и к FVIIa, связывающихся с различными эпитопами на TLT-1 и FVIIa соответственно, тестировали в биспецифическом формате в анализе образования FXa согласно выполненному в примере 21.

Результаты представлены в таблице 24 и показывают зависимость стимулирующей активности biAb от местоположения эпитопа. В частности, mAb к TLT-1 mAb1076, mAb0023, mAb0051 и mAb0062 в комбинации с mAb к FVIIa mAb0865 проявляют сопоставимую стимулирующую активность.

Таблица 24. Стимулирующая активность биспецифических антител в присутствии FX, FVIIa и липидированного TLT-1, описанных в примере 22. Для каждого биспецифического антитела указана измеренная стимулирующая активность (среднее ± стандартное отклонение, n = 2) вместе с константами диссоциации для взаимодействия с FVIIa и TLT-1 соответственно

biAb	Плечо к FVIIa	Плечо к TLT-1	Стимуляция (кратность)
biAb0001	mAb0865	mAb1076	29,2 ± 1,7
biAb0241	mAb0865	mAb0023	35,3 ± 2,4
biAb0242	mAb0865	mAb0051	21,8 ± 0,9
biAb0243	mAb0865	mAb0062	25,5 ± 2,0
biAb0244	mAb0864	mAb1076	2,7 ± 0,2

Пример 23. Антигенный анализ человеческого IgG (LOCI)

Присутствие человеческого IgG (hIgG) в плазме крови яванского макака измеряли посредством люминесцентного иммуноанализа с каналированием кислорода (LOCI). Если вкратце, то реагенты LOCI включали два реагента с латексными гранулами (донорные и акцепторные гранулы) и биотинилированное моноклональное антитело к hIgG (Biosite, кат. номер AFC4249). Реагент с донорными гранулами, содержащий светочувствительный краситель, покрывали стрептавидином. Второй реагент с гранулами, акцепторными гранулами, конъюгировали с моноклональным антителом собственного производства (0421) к hIgG, что в результате давало структура «сэндвич». В ходе анализа три реагента объединялись с hIgH в плазме крови с образованием иммунного комплекса гранул-агрегата. Возбуждение комплекса высвобождало молекулы синглетного кислорода из донорных гранул, которые каналировались в акцепторные гранулы и инициировали хемилюминесцентный ответ. Затем этот ответ измеряли в считывателе для планшетов EnVision. Количество генерируемого света, выраженное в количестве импульсов в секунду (имп./с), было пропорционально концентрации hIgG. Образцы разбавляли в по меньшей мере 100x в буфере для анализа и строили калибровочную кривую на основе hIgG, добавленного к 1% плазме крови яванского макака.

Пример 24. Антигенный анализ FVII(a) (LOCI)

Антигены FVII(a), включая зимоген FVII, FVIIa и комплексы FVIIa:антитромбин (FVIIa:AT), измеряли посредством анализа LOCI, описанного в примере 23, за исключением того, что анализ на FVII(a) состоял из акцепторных гранул, покрытых антителом собственного производства к FVII(a) (4F9) и биотинилированным моноклональным антителом собственного производства к FVII(a) (4F7). Образцы разбавляли в по меньшей мере 100x в буфере для анализа и строили калибровочную кривую, добавляя известные количества rFVIIa человека в буфер для анализа.

Пример 25. Антигенный анализ FVIIa:AT (антитромбин) (EIA)

Комплексы FVIIa:AT (антитромбин) измеряли с помощью иммуноферментного анализа (EIA), как это описано в Agers∅ H et al, J Thromb Haemost 2011; 9: 333-8. Моноклональное антитело к FVIIa (Dako Denmark A/S, Глоструп, Дания, код продукта O9572), которое связывается с N-концевым EGF-доменом и не блокирует связывание антитромбина, использовали для захвата комплекса FVIIa:AT. Предварительно образованный комплекс человеческого FVIIa и антитромбина яванского макака (FVIIa:AT) получали путем инкубации FVIIa с 2-кратным молярным избытком антитромбина в присутствии 10 мкМ низкомолекулярного гепарина (эноксапарин). Было подтверждено, что остаточная амидолитическая активность FVIIa (см. пример 11) после инкубации в течение ночи при комнатной температуре составляет менее 10% от начальной активности FVIIa. Комплекс использовали для построения калибровочных кривых EIA. Для выявления использовали конъюгат пероксидазы и поликлонального антитела к антитромбину человека (Siemens Healthcare Diagnostics ApS, Баллеруп, Дания, код продукта OWMG15). Добавляли TMB, продолжали реакцию до появления достаточного цвета, останавливали ее добавлением H2SO4 и измеряли абсорбцию при 450 нМ с показателем при 650 нМ в качестве референтного на спектрофотометре для планшетов (BioTek). Интенсивность окраски пропорциональна концентрации FVIIa:AT.

Пример 26. Получение человеческого FVIIa, FVII (зимоген) и комплекса FVIIa:AT (антитромбин)

Получение человеческого FVIIa (активированного FVII)

Если не указано иное, рекомбинантный активированный FVII человека (FVIIa) получали так, как это описано в Thim et al. (1988) Biochemistry 27:7785-7793 и Persson et al. (1996) FEBS Lett 385:241-243.

Получение человеческого FVII (зимоген FVII)

Рекомбинантный человеческий FVII, продуцируемый в клетках СНО, очищали посредством одностадийной кальций-зависимой аффинной хроматографии, как это описано в Thim et al. (1988) Biochemistry 27:7785-7793. После очистки зимоген FVII подвергали диализу в буфере 10 мМ MES, 100 мМ NaCl, 10 мМ CaCl2, pH 6,0. Уровень активированного FVII (FVIIa) в препарате определяли путем измерения амидолитической активности в присутствии 1 мМ хромогенного субстрата S-2288 и 200 нМ sTF (см. пример 11). Связав это со стандартной кривой, построенной с известной концентрацией FVIIa, измеренную активность можно преобразовать в молярную концентрацию FVIIa в препарате зимогена FVII.

Получение комплекса человеческого FVIIa:AT (антитромбин)

Комплекс FVIIa:AT (антитромбин) получали путем инкубирования эквимолярных концентраций рекомбинантного FVIIa человека, полученного из плазмы крови человека AT (Baxter) и низкомолекулярного гепарина (эноксапарин натрия) в течение 16 часов при 4°C. Для удаления загрязняющих вспомогательных веществ AT повторно очищали перед использованием на колонке с гепарин-сефарозой 6 Fast Flow (GE Healthcare) с применением градиента хлорида натрия. Элюированный AT концентрировали ультрафильтрацией с получением конечного препарата в 10 мМ HEPES, 25 мМ NaCl, pH 7,3, содержащем 50% глицерина. Комплекс FVIIa:AT очищали посредством SEC-хроматографии при 4°C в 20 мМ MES, 100 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, pH 5,5, чтобы повысить до максимума стабильность комплекса. Остаточные уровни FVIIa в препарате определяли согласно описанному выше. Чтобы свести к минимуму разрушение комплекса, препараты хранили в аликвотах при -80°C, а затем незамедлительно оттаивали и держали на льду перед использованием.

Пример 27. Фармакокинетика biAb к FVII(a)/TLT-1 после введения однократной дозы у яванских макак

biAb0001 и соответствующий YTE-вариант, biAb0352, в котором в константный домен тяжелой цепи были введены три дополнительные замены, увеличивающие период полужизни (M252Y, S254T и T256E), вводили яванским макакам внутривенно (в/в) в концентрации 3,0, 9,49 или 30 нмоль/кг или подкожно (п/к) в концентрации 9,49 нмоль/кг. Каждая группа состояла из двух обезьян (самец и самка). Образцы крови, стабилизированные цитратом натрия, в объеме 1 мл отбирали перед введением дозы и для групп внутривенным введением через 0,5 часа; 2,5 ч; 6 ч; 12 ч; 24 ч; 48 ч; 72 ч и в дни 8; 10 и 15 после введения дозы. Для групп с п/к введением образцы крови отбирали до введения дозы и через 0,5 часа; 3 ч; 6 ч; 12 ч; 16 ч; 24 ч; 30 ч, 38 ч; 48 ч; 54 ч; 72 ч; 78 ч; 96 ч; 120 ч и в дни 8, 10 и 15 после введения дозы. Образцы крови центрифугировали 10 мин при 2000 g, плазму крови удаляли, разделяли на аликвоты и хранили при -80°C до анализа на hIgG (см. пример 23), суммарный антиген FVII(a) (см. пример 24), активность FVIIa (см. пример 8) и комплексы FVIIa:AT (пример 25). Фармакокинетический (PK) анализ профилей зависимости «концентрация-время» для hIgG выполняли посредством некомпартментных методов с использованием Phoenix WinNonlin 6.4. Следующие PK-параметры показаны в таблице 24: период полужизни (t½), клиренс (Cl), объем распределения (Vz), среднее время удержания (MRT) и биодоступность при п/к введении (F).

Таблица 24. PK-параметры для biAb с мутацией YTE и без нее, проанализированные в образцах плазмы крови яванских макак*

Соединение	Доза (нмоль/кг)	Путь введения	t_½ (ч)	Cl или Cl/F** (мл/ч × кг)	V_z (мл/кг)	MRT (ч)	AUC (ч × нM)
biAb 0001	3,0	в/в	80	0,64	73,6	106	4084
	3,0	в/в	100	0,47	67,7	132	5325
	9,49	в/в	127	0,43	78,3	177	16269
	9,49	в/в	121	0,33	58,1	161	21647
	30	в/в	207	0,48	143,4	305	33046
	30	в/в	207	0,36	106,9	277	49476
	9,49	п/к	127	0,70	-	193	9672
	9,49	п/к	138	0,43	-	205	15059
biAb 0352	3,0	в/в	98	0,27	37,9	133	8445
	3,0	в/в	212	0,21	65,7	285	8040
	9,49	в/в	218	0,20	63,5	296	26397
	9,49	в/в	201	0,26	75,0	267	21870
	30	в/в	206	0,26	78,2	282	65712
	30	в/в	226	0,27	87,4	304	62075
	9,49	п/к	249	0,31	-	376	13966
	9,49	п/к	218	0,33	-	342	13932

*) каждая линия представляет данные по одной яванской макаке, **) Cl отмечен для групп с в/в введением, а Cl/F для групп с п/к введением. F соответствует биодоступности при п/к введении.

Накопление эндогенного FVII(а) наблюдали у обезьян, которым вводили BiAb0001 или соответствующий YTE-вариант, biAb0352. В таблице 25 показаны уровни антигена FVII(a) перед введением дозы, активности FVIIa и FVII:AT вместе со средними накопленными уровнями, измеренными между 72 и 240 ч после введения. Наблюдали зависимое от дозы антитела накопление антигена FVII(a), повышение активности FVIIa и FVIIa:AT. Антиген FVII(a) повышался в 3 раза по сравнению с уровнем до введения дозы, а FVIIa и FVIIa:AT - до 5 раз. Данные демонстрируют, что в/в или п/к введение однократной дозы biAb0001 или biAb0352 с мутацией YTE приводит к накоплению эндогенного антигена FVII(a), повышению активности FVIIa и комплексов FVIIa:AT in vivo.

Таблица 25. Накопление антигена FVII(a), FVIIa и FVIIa:AT после однократного в/в или п/к введения biAb с мутацией YTE или без нее яванским макакам

Соединение	Путь введения	Доза (нмоль/кг)	Уровень, достигнутый между 72 и 240 часами после введения дозы*
Соединение	Путь введения	Доза (нмоль/кг)	Антиген FVII(a) (нM)	Активность FVIIa (нM)	FVIIa:AT (нM)
biAb0001	в/в	3	11,2 ± 2,7	0,21 ± 0,05	1,98 ± 0,44
biAb0001	в/в	9,49	15,9 ± 2,4	0,59 ± 0,20	4,67 ± 1,15
biAb0001	в/в	30	19,7 ± 4,8	0,91 ± 0,56	8,50 ± 0,62
biAb0001	п/к	9,49	14,6 ± 3,4	0,43 ± 0,13	3,36 ± 0,68
biAb0352	в/в	3	8,9 ± 2,6	0,37 ± 0,16	3,21 ± 1,42
biAb0352	в/в	9,49	17,6 ± 4,5	0,66 ± 0,12	4,62 ± 0,64
biAb0352	в/в	30	17,6 ± 4,5	2,04 ± 1,19	8,05 ± 1,15
biAb0352	п/к	9,49	20,4 ± 3,0	0,81 ± 0,15	3,88 ± 0,27
До введения дозы			6,2 ± 1,4	0,16 ± 0,04	1,63 ± 0,37

*) данные представляют собой среднее значение и SD измерений от n = 2 животных на группу и 3 временных точек для групп с в/в введением и 6 временных точек для групп с п/к введением. Значения перед введением дозы основаны на одной временной точке (до введения дозы) для всех 16 животных.

Пример 28. Фармакокинетика моновалентного антитела 11F2 к FVII(a) mAb0705(OA) после введения однократной и многократной доз у яванских макак

Накопление in vivo FVII, FVIIa и FVIIa:AT анализировали путем введения моновалентного антитела 11F2 к FVII(a) mAb0705(OA) яванским макакам с последующим измерением антигена FVII, активности FVIIa и FVIIa:AT в образцах плазмы крови. Двум самцам яванского макака весом приблизительно 2,5 кг в/в вводили в подкожную, головную или боковую хвостовую вену 40 нмоль/кг mAb0705(ОА), а 3 самцам яванского макака вводили через день в течение двух недель подкожно (п/к) в бедро (попеременно левое и правое бедро) 20 нмоль/кг одноплечего антитела к FVIIa (т.е. антитело вводили в дни 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 и 15). Образцы крови отбирали в 3,8% тринатрий цитрат из головной вены или бедренной вены в моменты времени до 21 дня после введения дозы.

Кровь центрифугировали 10 мин при 2300 g и аликвоты плазмы крови хранили при -80°C до анализа на hIgG (см. пример 23), суммарный антиген FVII(a) (см. пример 24), активность FVIIa (см. пример 8) и комплексы FVIIa:AT (пример 25). PK-анализ профилей концентрации в зависимости от времени проводили некомпартментными методами с использованием Phoenix WinNonlin 6.4. PK-параметры для в/в введения показаны в таблице 26. Период полужизни (t½) одноплечего антитела составлял в среднем 116 ч (4,8 дня) после однократного в/в введения. Расчетный период полужизни для п/к введенного антитела составлял 181 ± 20 ч (среднее значение и SD при n = 3). Антитела накапливались в течение двух недель введения, что приводило к максимальному уровню 1179 ± 140 нМ в моменты времени между 336 и 366 часами после введения начальной дозы (среднее и SD данных при n = 3 животных и 3 временных точках).

Таблица 26. PK-параметры mAb0705(ОА), в/в вводимого яванским макакам в дозе 40 нмоль/кг

Животное	t_½ (ч)	Cl (мл/ч × кг)	V_z (мл/кг)	MRT (ч)	AUC (ч × нM)
№ 1	113	0,487	79,5	167	82207
№ 2	119	0,417	71,4	175	95894

Однократное в/в или повторное п/к введение mAb0705(ОА) приводило к накоплению эндогенного FVII(а). Суммарный антиген FVII(a), FVIIa:AT и FVIIa после однократной в/в дозы 40 нмоль/кг показаны в таблице 27. Суммарный антиген FVII повысился с 7,0 нМ перед введением дозы до 35,0 ± 4,7 нМ на 7-14 дни. Аналогичным образом FVIIa повысился с нижнего предела обнаружения (0,009 нМ) до 2,3 ± 0,7 нМ, а FVIIa:AT повысился с 1,0 до 6,3 ± 0,8 нМ на 7-14 дни. Уровень зимогена FVII после введения 40 нмоль/кг одноплечего антитела составил 26,4 нМ, рассчитанный путем вычитания FVIIa и FVIIa:AT из суммарного антигена FVII(a).

Таблица 27. Уровни FVII(а) после в/в введения однократной дозы 40 нмоль/кг mAb0705(ОА), измеренные на 7-14 дни после введения дозы

FVII(a)	Уровень до введения дозы (нM)	Концентрация в равновесном состоянии (нM)
Суммарный антиген FVII(a)	7,0	35,0 ± 4,7
FVIIa:AT	1,0	6,3 ± 0,8
FVIIa	< 0,009	2,3 ± 0,7

Равновесный уровень суммарного FVII(a), FVIIa и FVIIa:AT после многократного п/к введения дозы показан в таблице 28. Суммарный антиген FVII(a) повысился с 6,5 ± 1,5 нМ перед введением дозы до 36,9 ± 9,8 нМ на 12-21 дни. Аналогичным образом FVIIa повысился с нижнего предела обнаружения (0,009 нМ) до 3,9 ± 1,6 нМ на 12-21 дни, а FVIIa:AT увеличился с 1,0 ± 0,3 до 9,1 ± 0,6 нМ на 12-21 дни. Равновесный уровень зимогена FVII, рассчитанный путем вычитания FVIIa и FVIIa:AT из суммарного антигена FVII(a), составил 24 нМ.

Данные демонстрируют, что введение одноплечего антитела к FVII(a) mAb0705(OA) приводило к накоплению эндогенных FVII(a), FVIIa и FVIIa:AT in vivo. Клиренс одноплечего антитела к FVII(a) (0,42-0,49 мл/кг × кг, таблица 26) был сопоставим с клиренсом biAb0001 после в/в введения (0,33-0,64 мл/кг × кг, пример 27, таблица 24). Поэтому ожидается, что равновесные уровни антигена FVII(a), FVIIa и FVIIa:AT, измеренные после повторного введения одноплечего антитела к FVII(a), будут репрезентативными для уровней, которые могут быть достигнуты в равновесном состоянии после повторного введения biAb с тем же самым плечом связывания FVII(a).

Таблица 28. Равновесные уровни FVII(а) после многократного п/к введения 20 нмоль/кг mAb0705(ОА), измеренные на 12-21 дни после введения начальной дозы

FVII(a)	Уровень до введения дозы (нM)	Концентрация в равновесном состоянии (нM)
Суммарный антиген FVII(a)	6,5 ± 1,5	36,9 ± 9,8
FVIIa:AT	1,0 ± 0,3	9,1 ± 0,6
FVIIa	< 0,009	3,9 ± 1,6

Пример 29. Тромбоэластография при подобных гемофилии A состояниях человеческой цельной крови с добавлением biAb0001 к FVII(a)/TLT-1 и равновесных уровней зимогена FVII, FVIIa и FVIIa:AT

Влияние биспецифического антитела biAb0001 к FVII(a)/TLT-1 (где родительским антителом к FVII(a) является mAb0865, а родительским антителом к TLT-1 является mAb1076) и накопленные уровни зимогена FVII, FVIIa и FVIIa:AT из примера 28 оценивали с помощью тромбоэластографии цельной крови человека при подобных гемофилии A состояниях и сравнивали с влиянием добавления в кровь rFVIIa. В общем, анализ посредством тромбоэластографии выполняли с использованием приборов TEG® (тромбоэластографический коагулограф, Haemoscope Corp.) как это описано в Viuff D, et al. Thromb Res 2010; 126: 144-9. Цельную кровь здоровых доноров, стабилизированную цитратом, инкубировали в течение 30 мин с 0,1 мг/мл нейтрализующего поликлонального овечьего антитела к FVIII (Haematological Technologies Inc, кат. номер PAHFVIII-SC) и 5 мкг/мл нейтрализующего мышиного моноклонального антитела к TF (1F44, синтезированного самостоятельно). biAb0001 в конечной концентрации в плазме крови 100 нМ в буфере HBS/BSA (20 мМ Hepes, 140 мМ NaCl, pH 7,4, 2% BSA) смешивали с rFVIIa (Novo Seven®, Novo Nordisk, конечная концентрация в плазме крови 3,9 нМ), зимогеном FVII (получен в примере 26, конечная концентрация в плазме крови 24 нМ) и комплексами FVIIa:AT (получены в примере 26, конечная концентрация в плазме крови 9 нМ) и добавляли к образцу крови. Предварительные разведения FVIIa:AT готовили на холоде в 20 мМ MES, 100 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, pH 5,5 + 2% BSA и добавляли к оставшимся белкам непосредственно перед началом анализа. Препараты зимогена FVII и FVIIa:AT содержали следовые количества FVIIa, поэтому добавляли соответствующее меньшее количество FVIIa для компенсации этого и для ожидаемой концентрации FVIIa в плазме донорской крови (0,1 нМ, Morissey JH et al. Blood, 1993; 81: 734-44). Аналогичным образом количество добавленного зимогена FVII компенсировалось ожидаемой концентрацией 10 нМ зимогена FVIIa в плазме крови донора. Отдельный образец содержал 25 нМ rFVIIa, что соответствует теоретической максимальной концентрации в плазме крови после введения 90 мкг/кг rFVIIa (NovoSeven®) субъектам-людям с гемофилией A (Lindley CM et al. Clin Pharmacol Ther 1994; 55: 638-48). Контрольные образцы включали только biAb и смесь FVII/FVIIa/FVIIa:AT без biAb. Тромбоциты максимально активировали добавлением пептида-агониста PAR1 SFLLRN (Tocris Biosciences, кат. номер 3497) до конечной концентрации 30 мкМ и агониста GPVI конвульксина (5-Diagnostics, кат. номер 5D-1192-50UG) до конечной концентрации 10 нг/мл. В чашку для TEG добавляли в объеме 20 мкл 0,2 М CaCl₂ в 20 мМ Hepes, pH 7,4, затем 340 мкл образца крови и немедленно начинали анализ. Время свертывания (R-время), определяемое как время до 2 мм амплитуды TEG-кривой, рассчитывали посредством программного обеспечения (TEG® Analytical Software, версия 4.1.73). Данные от 4 доноров показаны в таблице 29. Время свертывания возрастало с 290 ± 12 с в нормальной крови до 3506 ± 1561 с после индукции подобных гемофилии А состояний путем нейтрализации FVIII. Добавление 25 нМ rFVIIa приводило к сокращению времени свертывания крови, имитирующего гемофилию А, до 694 ± 158 с. Добавление в кровь 100 нМ biAb приводило к умеренному сокращению времени свертывания до 2198 ± 712 с, скорее всего, из-за потенцирования действия эндогенного FVIIa в крови. Добавление равновесных уровней FVII/FVIIa/FVIIa:AT сокращало время свертывания до 1440 ± 275 с. Комбинирование 100 нМ biAb и равновесных уровней FVII/FVIIa/FVIIa:AT сокращало время свертывания до 495 ± 39 с, то есть до уровня, сопоставимого или несколько ниже времени свертывания после добавления 25 нМ FVIIa. Данные демонстрируют, что biAb усиливает эффект накопленного уровня FVII/FVIIa/FVIIa:AT, приводя к сокращению времени свертывания, аналогичному или немного лучшему, чем сокращение времени свертывания, достигаемое с использованием терапевтически эффективной концентрацией rFVIIa.

Таблица 29. Анализ посредством тромбоэластографии эффекта biAb0001 (100 нМ) в цельной крови человека с равновесными уровнями FVII/FVIIa/FVIIa:AT или без них

Дата экспери-мента	Время свертывания (R-время, с)
Дата экспери-мента	Нормальное	Гемофилия A (HA)	HA + FVIIa в концентрации 25 нМ	HA + BiAb	HA + FVII/FVIIa/FVIIa:AT	HA + biab + FVII/FVIIa/ FVIIa:AT
14.03.2018	295	3160	615	2460	1690	445
15.03.2018	280	1660	540	1145	1065	495
22.03.2018	280	3770	715	2720	1415	500
21.03.2018	305	5433	905	2465	1590	540
Среднее значение	290	3506	694	2198	1440	495
SD	12	1561	158	712	275	39

Пример 30. Тромбоэластография при подобных гемофилии A состояниях человеческой цельной крови с добавлением биспецифических антител к FVII(a)/TLT-1 с различной аффинностью к TLT-1 и равновесных уровней зимогена FVII, FVIIa и FVIIa:AT

В данном примере тестировали следующие биспецифические антитела к FVII(a)/TLT-1 с различной аффинностью к TLT-1:

biAb	антитело к FVII(a)	антитело к TLT-1	K_D (TLT-1) [нM]
biAb0001	mAb0865	mAb1076	2,9
biAb0015	mAb0865	mAb1038	19
biAb0090	mAb0865	mAb1049	320
biAb0095	mAb0865	mAb1047	75

Биспецифические антитела в концентрации 100 нМ оценивали посредством тромбоэластографии согласно описанному в примере 29. Время свертывания (R-время) указано в таблице 30. Время свертывания возросло с 340 с до 5433 с после индукции гемофилии А (НА) путем добавления антител к FVIII. Присутствие biAb с наивысшей аффинностью к TLT-1 (biAb0001) сокращает время свертывания до 2465 с, то есть в большей степени, чем сокращение времени свертывания, наблюдаемое для трех других biAb по отдельности: biAb0015 сокращает время свертывания до 3645 с; biAb0090 до 4335 с и biAb0095 до 4110 с. Аналогично комбинация biAb с равновесными уровнями FVII, FVIIa и FVII:AT приводила к более выраженному сокращению времени свертывания для biAb0001 (до 540 с), чем для трех других biAb; то есть до 1100 с для biAb0015, до 1040 с для biAb0090 и до 815 с для biAb0095. Данные демонстрируют, что biAb0001 с наивысшими показателями аффинности (т.е. наименьшей KD) для TLT-1 было наиболее эффективным в сокращении времени свертывания.

Таблица 30. Анализ посредством тромбоэластографии эффекта biAb0001, biAb0015 или biAb0090(100 нМ) в цельной крови человека с равновесными уровнями FVII/FVIIa/FVIIa:AT или без них

Образец	Время свертывания (R-время, с)
Нормальное	340
Гемофилия A (HA)	5433
Гемофилия A (HA) + 25 нМ FVIIa	905
HA + FVII/FVIIa/FVIIa:AT	1590
HA + biAb0001	2465
HA + FVII/FVIIa/FVIIa:AT + biAb0001	540
HA + biAb0015	3645
HA + FVII/FVIIa/FVIIa:AT + biAb0015	1100
HA + biAb0090	4335
HA + FVII/FVIIa/FVIIa:AT + biAb0090	1040
HA + biAb0095	4110
HA + FVII/FVIIa/FVIIa:AT + biAb0095	815

Пример 31. Эффект in vivo биспецифического антитела biAb0001 к FVII(a)/TLT-1 на модели кровотечения при рассечении хвостовой вены у трансгенных мышей с дефицитом FVIII и нокаутом человеческого TLT-1

Эффективность in vivo биспецифического антитела biAb0001 к FVII(a)/TLT-1 определяли с использованием модели кровотечения при рассечении хвостовой вены (TVT) трансгенных мышей с нокаутом по FVIII (т.е. гемофилия A), нокаутом мышиного TLT-1 и нокином человеческого TLT-1. Поскольку антитело к FVII(a) не распознает мышиный FVII(a), biAb вводили совместно с человеческими FVIIa, FVII, FVII:AT, чтобы получить целевые уровни этих компонентов в плазме крови мыши (3,8, 26,2 и 9,0 нМ соответственно), имитируя их ожидаемые клинические равновесные уровни в плазме крови согласно примеру 28. Концентрация biAb составляла 40 или 100 нМ. Если вкратце, мышей анестезировали изофлураном и помещали на грелку-подушку, настроенную на поддержание температуры тела животного на уровне 37°C, при этом их хвосты погружали в физиологический раствор (37°C). Введение дозы выполняли в правую боковую хвостовую вену за 5 минут до нанесения повреждения. В настоящей модели TVT (Johansen et al., Haemophilia, 2016, 625-31) рассекали боковую вену. Если кровотечение прекращалось через 10, 20 или 30 мин, хвост вынимали из физиологического раствора и осторожно протирали рану марлевым тампоном, смоченным физиологическим раствором. Общую кровопотерю определяли через 40 мин путем определения количества гемоглобина в физиологическом растворе. Через 40 минут после введения отбирали образец крови из орбитального сплетения в 3,8% тринатрий цитрат. Кровь центрифугировали 5 мин при 4000 g и аликвоты плазмы крови хранили при -80°C до анализа на hIgG (см. пример 23), суммарный антиген FVII(a) (см. пример 24) и активность FVIIa (см. пример 8).

В таблице 31 показано, что все комбинации FVIIa и biAb приводили к значительному снижению кровопотери по сравнению с отдельно biAb или введением дозы FVII(a) без biAb. Для всех комбинаций количество тромбоцитов, измеренное через 45 мин после обработки, было сопоставимо с тем, которое наблюдалось для группы введения среды-носителя.

И заключение, эти данные демонстрируют значительный гемостатический эффект biAb0001 in vivo в присутствии ожидаемых равновесных уровней FVIIa, FVII и FVII:AT.

Таблица 31. Кровопотеря после рассечения хвостовой вены (TVT) у мышей с нокаутом FVIII/нокаутом мышиного TLT-1/нокином человеческого TLT-1, которым вводили комбинации biAb0001, FVIIa, FVII и FVIIa:AT согласно указанному. Введенные дозы, ожидаемые и измеренные концентрации в плазме крови, а также определенная кровопотеря показаны в виде среднего значения ± SEM (n = 10). Используя однофакторный дисперсионный анализ с последующим критерием множественного сравнения Даннета, было выявлено, что кровопотеря в группах 3-5 значительно отличается от группы 1 и 2. Суммарные концентрации антигена FVII(a) (измеренные в соответствии с примером 23) перечислены в строках, обозначенных «FVII», а значения отмечены звездочками

Груп-па	Совместно вводимое соедине-ние	Доза (нмоль/ кг)	Ожидаемая концентрация в плазме крови (нM)	Измеренная концентрация в плазме крови (нM)	Кровопотеря (нмоль гемогл.)
1	biAb0001	0,5	4	7,1 ± 0,4	3935 ± 711
	FVIIa
	FVII
	FVIIa:AT
2	biAb0001				3225 ± 731
	FVIIa	0,5	3,8	1,8 ± 0,2
	FVII	3,45	26,2	37,2 ± 1,9*
	FVIIa:AT	1,18	9,0
3	biAb0001	0,5	4	5,5 ± 0,6	820 ± 187
3	FVIIa	0,5	3,8	3,9 ± 0,1
	FVII			3,8 ± 0,2*
	FVIIa:AT
4	biAb0001	5,13	40	126,3 ± 11,1	381 ± 63
	FVIIa	0,5	3,8	6,3 ± 0,5
	FVII	3,45	26,2	72,4 ± 5,5*
	FVIIa:AT	1,18	9,0
5	biAb0001	12,83	100	586,0 ± 115,9	598 ± 150
	FVIIa	0,5	3,8	5,9 ± 0,4
	FVII	3,45	26,2	124 ± 14,2*
	FVIIa:AT	1,18	9,0

Хотя определенные признаки настоящего изобретения были проиллюстрированы и описаны в данном документе, специалистам средней квалификации в данной области техники будут очевидны многие модификации, замены, изменения и эквиваленты. Поэтому следует понимать, что прилагаемая формула изобретения предназначена для охвата всех таких модификаций и изменений, которые соответствуют истинной сущности настоящего изобретения.

Пример 32. Идентификация антител, конкурирующих с антителом к TLT-1 mAb1076 за связывание с TLT-1 в конкурентном ELISA

Fab-фрагмент (Fab к TLT-1), который будет использоваться в конкурентных экспериментах, содержит последовательности VH- и VL-доменов, соответствующие mAb1076 (SEQ ID NO: 938 и 934 соответственно), домен CH1 IgG4 человека и CL-каппа человека с одной точечной мутацией (G157C). Замена G на C расположена в константном домене Fab-фрагмента, то есть вдали от антигенсвязывающего участка, и не влияет на связывание с TLT-1 (см. пример 20). Рекомбинантный продукт получали в виде TLT-1 согласно описанному в WO2011/023785. Fab к TLT-1 биотинилировали с использованием стандартных способов, включая применение набора для биотинилирования (EZ-link, Thermo), в соответствии с инструкциями производителя.

Чтобы определить, конкурируют ли антитела к TLT-1 с Fab к TLT-1 и производными от него антителами за связывание с TLT-1, выполняли конкурентные исследования. Рекомбинантный TLT-1 иммобилизовали в планшете NUNC maxisorp в течение ночи при 4°C в буфере для разведения (20 мМ HEPES, 5 мМ CaCl₂, 150 мМ NaCl, pH 7,2). Планшеты промывали и блокировали промывочным буфером (20 мМ HEPES, 5 мМ CaCl₂, 150 мМ NaCl, 0,5 мл/л Tween 20, pH 7,2) в течение 15 мин. Для конкурентного исследования биотинилированный Fab к TLT-1 в конечной фиксированной концентрации объединяли с серией разведений антитела к TLT-1 с получением конечных концентраций в диапазоне от 0 до 100 мг/мл в буфере для разведения. Смесь добавляли в лунки планшета и инкубировали в течение 1 часа. Затем планшет промывали и добавляли меченный HRP стрептавидин-HRPO (1:2000 в буфере для разведения; Kirkegaard & Perry Labs) и инкубировали в течение 1 ч. И в завершении планшет промывали и обрабатывали с помощью TMB ONE (KEMENTEC) в течение 10 мин. Реакцию останавливали посредством добавления H3PO4 (4 M) и считывали планшет на считывающем устройстве для планшетов FLUOStar Optima при 450 нМ с вычитанием фонового сигнала, измеренного при 620 нМ. Если не указано иное, все инкубации выполняли при комнатной температуре, и планшеты промывали 5 раз с использованием промывочного буфера.

Концентрацию рекомбинантного TLT-1, подлежащего иммобилизации в планшете NUNC maxisorp, а также фиксированную концентрацию биотинилированного Fab к TLT-1, смешиваемого с конкурирующим антителом для конкурентного исследования, определяли отдельными титрованиями двух компонентов с целью получения достаточного сигнала с тем, чтобы можно было выявить конкуренцию (т.е. снижение сигнала) со стороны антител-конкурентов. Концентрация TLT-1 для иммобилизации обычно находится в диапазоне от 0 до 1 мг/мл, например 125 нг/мл. Концентрация биотинилированного Fab к TLT-1 обычно находится в диапазоне от 0 до 1 мг/мл, например 10 нг/мл.

По измеренным сигналам (единицы оптической плотности [OD]) конкуренцию при любой указанной концентрации антитела рассчитывали как

где 0% ингибирование определяют по сигналу в лунках без какого-либо конкурирующего антитела к TLT-1, а 100% ингибирование определяют как сигнал в лунках без биотинилированного Fab к TLT-1 (т.е. соответствующий анализу фон). Считается, что антитела конкурируют с Fab к TLT-1 за связывание с TLT-1, если наблюдается по меньшей мере 50% ингибирование (% ингибирования) при тестировании антитела в концентрации с 10000-кратным избытком биотинилированного Fab к TLT-1.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Novo Nordisk A/S

<120> Bispecific antibodies

<130> 190051WO01

<160> 943

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 406

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 1

Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro Gly Ser Leu Glu Arg Glu

1 5 10 15

Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Ile Phe Lys

20 25 30

Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile Ser Tyr Ser Asp Gly Asp

35 40 45

Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Gln

50 55 60

Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro Ala Phe Glu Gly Arg Asn

65 70 75 80

Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile Cys Val Asn Glu Asn Gly

85 90 95

Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr Gly Thr Lys Arg Ser Cys

100 105 110

Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala Asp Gly Val Ser Cys Thr

115 120 125

Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile Pro Ile Leu Glu Lys Arg

130 135 140

Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val Gly Gly Lys Val Cys Pro

145 150 155 160

Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu Leu Val Asn Gly Ala Gln

165 170 175

Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile Trp Val Val Ser Ala Ala

180 185 190

His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg Asn Leu Ile Ala Val Leu

195 200 205

Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly Asp Glu Gln Ser Arg Arg

210 215 220

Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr Val Pro Gly Thr Thr Asn

225 230 235 240

His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln Pro Val Val Leu Thr Asp

245 250 255

His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg Thr Phe Ser Glu Arg Thr

260 265 270

Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser Gly Trp Gly Gln Leu Leu

275 280 285

Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met Val Leu Asn Val Pro Arg

290 295 300

Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser Arg Lys Val Gly Asp Ser

305 310 315 320

Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala Gly Tyr Ser Asp Gly Ser

325 330 335

Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Ala Thr His Tyr

340 345 350

Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val Ser Trp Gly Gln Gly Cys

355 360 365

Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr Arg Val Ser Gln Tyr Ile

370 375 380

Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu Pro Arg Pro Gly Val Leu

385 390 395 400

Leu Arg Ala Pro Phe Pro

405

<210> 2

<211> 296

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

Gln Gly Ile Val Gly Ser Leu Pro Glu Val Leu Gln Ala Pro Val Gly

1 5 10 15

Ser Ser Ile Leu Val Gln Cys His Tyr Arg Leu Gln Asp Val Lys Ala

20 25 30

Gln Lys Val Trp Cys Arg Phe Leu Pro Glu Gly Cys Gln Pro Leu Val

35 40 45

Ser Ser Ala Val Asp Arg Arg Ala Pro Ala Gly Arg Arg Thr Phe Leu

50 55 60

Thr Asp Leu Gly Gly Gly Leu Leu Gln Val Glu Met Val Thr Leu Gln

65 70 75 80

Glu Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Gly Cys Met Val Asp Gly Ala Arg Gly

85 90 95

Pro Gln Ile Leu His Arg Val Ser Leu Asn Ile Leu Pro Pro Glu Glu

100 105 110

Glu Glu Glu Thr His Lys Ile Gly Ser Leu Ala Glu Asn Ala Phe Ser

115 120 125

Asp Pro Ala Gly Ser Ala Asn Pro Leu Glu Pro Ser Gln Asp Glu Lys

130 135 140

Ser Ile Pro Leu Ile Trp Gly Ala Val Leu Leu Val Gly Leu Leu Val

145 150 155 160

Ala Ala Val Val Leu Phe Ala Val Met Ala Lys Arg Lys Gln Gly Asn

165 170 175

Arg Leu Gly Val Cys Gly Arg Phe Leu Ser Ser Arg Val Ser Gly Met

180 185 190

Asn Pro Ser Ser Val Val His His Val Ser Asp Ser Gly Pro Ala Ala

195 200 205

Glu Leu Pro Leu Asp Val Pro His Ile Arg Leu Asp Ser Pro Pro Ser

210 215 220

Phe Asp Asn Thr Thr Tyr Thr Ser Leu Pro Leu Asp Ser Pro Ser Gly

225 230 235 240

Lys Pro Ser Leu Pro Ala Pro Ser Ser Leu Pro Pro Leu Pro Pro Lys

245 250 255

Val Leu Val Cys Ser Lys Pro Val Thr Tyr Ala Thr Val Ile Phe Pro

260 265 270

Gly Gly Asn Lys Gly Gly Gly Thr Ser Cys Gly Pro Ala Gln Asn Pro

275 280 285

Pro Asn Asn Gln Thr Pro Ser Ser

290 295

<210> 3

<211> 147

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Gln Gly Ile Val Gly Ser Leu Pro Glu Val Leu Gln Ala Pro Val Gly

1 5 10 15

Ser Ser Ile Leu Val Gln Cys His Tyr Arg Leu Gln Asp Val Lys Ala

20 25 30

Gln Lys Val Trp Cys Arg Phe Leu Pro Glu Gly Cys Gln Pro Leu Val

35 40 45

Ser Ser Ala Val Asp Arg Arg Ala Pro Ala Gly Arg Arg Thr Phe Leu

50 55 60

Thr Asp Leu Gly Gly Gly Leu Leu Gln Val Glu Met Val Thr Leu Gln

65 70 75 80

Glu Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Gly Cys Met Val Asp Gly Ala Arg Gly

85 90 95

Pro Gln Ile Leu His Arg Val Ser Leu Asn Ile Leu Pro Pro Glu Glu

100 105 110

Glu Glu Glu Thr His Lys Ile Gly Ser Leu Ala Glu Asn Ala Phe Ser

115 120 125

Asp Pro Ala Gly Ser Ala Asn Pro Leu Glu Pro Ser Gln Asp Glu Lys

130 135 140

Ser Ile Pro

145

<210> 4

<211> 327

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 4

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 5

<211> 327

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 5

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser

275 280 285

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 6

<211> 327

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 6

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 7

<211> 327

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 7

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser

275 280 285

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 8

<211> 230

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 8

Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

1 5 10 15

Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

20 25 30

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

35 40 45

Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

50 55 60

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

65 70 75 80

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

85 90 95

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

100 105 110

Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

115 120 125

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn

130 135 140

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

145 150 155 160

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Lys

180 185 190

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

195 200 205

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Gly Lys

225 230

<210> 9

<211> 327

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 9

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 10

<211> 229

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 10

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 11

<211> 98

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 11

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val

<210> 12

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 12

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 13

<211> 37

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 13

Glu Glu Glu Glu Glu Thr His Lys Ile Gly Ser Leu Ala Glu Asn Ala

1 5 10 15

Phe Ser Asp Pro Ala Gly Ser Ala Asn Pro Leu Glu Pro Ser Gln Asp

20 25 30

Glu Lys Ser Ile Pro

35

<210> 14

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 14

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Ile Met Ser Thr Leu Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Pro Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Tyr Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 15

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 15

Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Pro Ala Val Ala

1 5 10

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 16

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 17

Gln Gln Tyr Ser Lys Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 18

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 18

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Asn Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Lys His Gly Tyr Tyr Gly Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 19

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 19

Asp Tyr Gly Val Ser

1 5

<210> 20

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 20

Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Asn Asn Ser Ala Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 21

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 21

His Gly Tyr Tyr Gly Tyr Val Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 22

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 22

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 23

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 23

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 24

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 24

Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser

1 5

<210> 25

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 25

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 26

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 26

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Cys Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 27

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 27

Ser Asp Cys Ala Trp Ser

1 5

<210> 28

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 28

Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 29

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 29

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 30

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 30

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 31

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 31

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 32

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 32

Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser

1 5

<210> 33

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 33

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 34

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 34

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Cys Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 35

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 35

Ser Asp Cys Ala Trp Ser

1 5

<210> 36

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 36

Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 37

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 37

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 38

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 38

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 39

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 39

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 40

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 40

Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser

1 5

<210> 41

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 41

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 42

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 42

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Cys Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 43

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 43

Ser Asp Cys Ala Trp Ser

1 5

<210> 44

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 44

Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 45

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 45

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 46

<211> 113

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 46

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Val Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asp Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Phe Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 47

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 47

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asp Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Thr

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 48

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 49

Gln Asn Asp Phe Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 50

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 50

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Ile Gln Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Pro Ser Tyr Ala Asp Asp Leu

50 55 60

Lys Gly Arg Ser Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Gly Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Arg Asp Asp Tyr Tyr Gly Arg Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 51

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 51

Asp Tyr Ser Ile Gln

1 5

<210> 52

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 52

Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Pro Ser Tyr Ala Asp Asp Leu Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 53

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 53

Asp Asp Tyr Tyr Gly Arg Glu Asp Tyr

1 5

<210> 54

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 54

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 55

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 55

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 56

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 56

Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser

1 5

<210> 57

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 57

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 58

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 58

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 59

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 59

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 60

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 60

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 61

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 61

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 62

<211> 113

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 62

Asp Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Asn Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln

85 90 95

Tyr Tyr Asn Tyr Leu Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu

100 105 110

Lys

<210> 63

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 63

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 64

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 64

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 65

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 65

His Gln Tyr Tyr Asn Tyr Leu Leu Thr

1 5

<210> 66

<211> 123

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 66

Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Leu Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Thr Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Tyr Pro Pro

50 55 60

Leu Lys Ser Gln Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val

65 70 75 80

Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Gly Tyr Tyr Gly Pro Met Glu Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 67

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 67

Thr Ser Gly Leu Gly Val Gly

1 5

<210> 68

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 68

His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Tyr Pro Pro Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 69

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 69

Arg Ala Phe Tyr Asp Gly Tyr Tyr Gly Pro Met Glu Tyr

1 5 10

<210> 70

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 70

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 71

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 71

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr Leu His

1 5 10

<210> 72

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 72

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 73

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 73

Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 74

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 74

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 75

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 75

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 76

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 76

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 77

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 77

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 78

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 78

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 79

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 79

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 80

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 80

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 81

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 81

Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 82

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 82

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 83

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 83

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 84

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 84

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 85

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 85

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 86

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 86

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 87

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 87

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 88

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 88

Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser

1 5

<210> 89

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 89

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 90

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 90

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Trp Val Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 91

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 91

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 92

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 92

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 93

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 93

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Trp Val Asp Pro

1 5 10

<210> 94

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 94

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 95

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 95

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr Leu His

1 5 10

<210> 96

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 96

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 97

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 97

Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 98

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 98

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Trp Val Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 99

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 99

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 100

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 100

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 101

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 101

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Trp Val Asp Pro

1 5 10

<210> 102

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 102

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 103

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 103

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 104

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 104

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 105

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 105

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 106

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 106

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Trp Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 107

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 107

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 108

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 108

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 109

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 109

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Trp Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 110

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 110

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 111

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 111

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 112

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 112

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 113

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 113

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 114

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 114

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 115

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 115

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 116

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 116

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 117

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 117

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 118

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 118

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 119

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 119

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 120

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 120

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 121

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 121

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 122

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 122

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 123

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 123

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 124

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 124

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 125

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 125

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 126

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 126

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 127

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 127

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 128

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 128

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 129

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 129

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 130

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 130

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 131

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 131

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 132

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 132

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 133

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 133

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 134

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 134

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 135

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 135

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 136

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 136

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 137

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 137

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 138

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 138

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 139

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 139

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 140

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 140

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 141

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 141

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Asp Tyr

1 5 10

<210> 142

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 142

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 143

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 143

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 144

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 144

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 145

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 145

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 146

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 146

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 147

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 147

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 148

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 148

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 149

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 149

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 150

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 150

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 151

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 151

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 152

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 152

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 153

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 153

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 154

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 154

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 155

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 155

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 156

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 156

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 157

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 157

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 158

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 158

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 159

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 159

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 160

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 160

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 161

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 161

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 162

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 162

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 163

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 163

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 164

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 164

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 165

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 165

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 166

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 166

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 167

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 167

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 168

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 168

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 169

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 169

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 170

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 170

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 171

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 171

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 172

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 172

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 173

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 173

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 174

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 174

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 175

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 175

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 176

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 176

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 177

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 177

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 178

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 178

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 179

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 179

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 180

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 180

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 181

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 181

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 182

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 182

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 183

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 183

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 184

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 184

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 185

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 185

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 186

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 186

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 187

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 187

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 188

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 188

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 189

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 189

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 190

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 190

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 191

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 191

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu His

1 5 10

<210> 192

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 192

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 193

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 193

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 194

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 194

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 195

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 195

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 196

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 196

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 197

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 197

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 198

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 198

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 199

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 199

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 200

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 200

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 201

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 201

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 202

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 202

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 203

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 203

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 204

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 204

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 205

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 205

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 206

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 206

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 207

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 207

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 208

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 208

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 209

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 209

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 210

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 210

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 211

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 211

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 212

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 212

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 213

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 213

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 214

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 214

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 215

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 215

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 216

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 216

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 217

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 217

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 218

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 218

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 219

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 219

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 220

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 220

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 221

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 221

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 222

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 222

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 223

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 223

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 224

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 224

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 225

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 225

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 226

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 226

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 227

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 227

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 228

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 228

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 229

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 229

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 230

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 230

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 231

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 231

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 232

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 232

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 233

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 233

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 234

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 234

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 235

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 235

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 236

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 236

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 237

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 237

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 238

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 238

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 239

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 239

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 240

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 240

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 241

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 241

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 242

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 242

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 243

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 243

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 244

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 244

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 245

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 245

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 246

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 246

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 247

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 247

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 248

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 248

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 249

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 249

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 250

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 250

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 251

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 251

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 252

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 252

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 253

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 253

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 254

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 254

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 255

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 255

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 256

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 256

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 257

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 257

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 258

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 258

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 259

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 259

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 260

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 260

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 261

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 261

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 262

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 262

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 263

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 263

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 264

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 264

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 265

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 265

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 266

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 266

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 267

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 267

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 268

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 268

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 269

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 269

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 270

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 270

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 271

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 271

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 272

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 272

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 273

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 273

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 274

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 274

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 275

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 275

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 276

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 276

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 277

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 277

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Asp Tyr

1 5 10

<210> 278

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 278

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 279

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 279

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 280

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 280

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 281

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 281

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 282

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 282

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 283

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 283

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 284

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 284

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 285

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 285

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 286

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 286

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 287

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 287

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 288

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 288

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 289

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 289

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 290

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 290

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 291

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 291

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 292

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 292

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 293

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 293

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 294

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 294

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 295

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 295

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu His

1 5 10

<210> 296

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 296

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 297

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 297

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 298

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 298

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 299

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 299

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 300

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 300

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 301

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 301

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 302

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 302

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 303

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 303

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 304

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 304

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 305

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 305

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 306

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 306

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 307

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 307

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 308

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 308

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 309

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 309

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 310

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 310

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 311

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 311

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 312

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 312

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 313

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 313

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 314

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 314

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 315

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 315

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 316

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 316

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 317

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 317

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 318

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 318

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 319

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 319

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 320

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 320

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 321

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 321

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 322

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 322

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 323

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 323

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 324

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 324

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 325

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 325

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 326

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 326

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 327

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 327

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 328

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 328

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 329

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 329

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 330

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 330

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 331

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 331

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 332

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 332

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 333

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 333

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 334

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 334

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 335

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 335

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 336

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 336

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 337

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 337

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 338

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 338

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 339

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 339

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 340

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 340

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 341

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 341

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 342

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 342

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 343

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 343

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 344

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 344

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 345

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 345

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 346

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 346

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 347

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 347

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 348

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 348

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 349

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 349

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 350

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 350

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 351

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 351

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 352

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 352

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 353

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 353

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 354

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 354

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 355

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 355

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 356

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 356

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 357

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 357

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 358

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 358

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 359

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 359

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 360

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 360

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 361

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 361

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 362

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 362

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 363

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 363

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 364

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 364

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 365

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 365

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 366

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 366

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 367

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 367

Arg Ala Ser Gln Gly Leu Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 368

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 368

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 369

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 369

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 370

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 370

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 371

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 371

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 372

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 372

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 373

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 373

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 374

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 374

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 375

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 375

Arg Ala Ser Gln Gly Leu Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 376

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 376

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 377

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 377

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 378

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 378

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 379

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 379

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 380

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 380

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 381

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 381

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 382

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 382

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 383

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 383

Arg Ala Ser Gln Gly Leu Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 384

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 384

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 385

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 385

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 386

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 386

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 387

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 387

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 388

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 388

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 389

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 389

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 390

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 390

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 391

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 391

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 392

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 392

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 393

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 393

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 394

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 394

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 395

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 395

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 396

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 396

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 397

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 397

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 398

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 398

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 399

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 399

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 400

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 400

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 401

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 401

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 402

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 402

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 403

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 403

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 404

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 404

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 405

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 405

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 406

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 406

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 407

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 407

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 408

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 408

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 409

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 409

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 410

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 410

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 411

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 411

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 412

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 412

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 413

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 413

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 414

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 414

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 415

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 415

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 416

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 416

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 417

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 417

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 418

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 418

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 419

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 419

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 420

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 420

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 421

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 421

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 422

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 422

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 423

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 423

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 424

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 424

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 425

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 425

Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 426

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 426

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 427

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 427

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 428

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 428

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 429

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 429

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 430

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 430

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 431

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 431

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 432

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 432

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 433

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 433

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 434

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 434

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 435

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 435

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 436

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 436

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 437

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 437

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 438

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 438

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 439

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 439

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 440

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 440

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 441

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 441

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 442

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 442

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 443

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 443

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 444

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 444

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 445

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 445

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 446

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 446

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 447

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 447

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 448

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 448

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 449

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 449

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 450

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 450

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 451

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 451

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 452

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 452

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 453

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 453

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 454

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 454

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 455

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 455

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 456

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 456

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 457

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 457

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 458

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 458

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 459

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 459

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 460

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 460

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 461

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 461

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 462

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 462

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 463

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 463

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 464

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 464

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 465

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 465

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 466

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 466

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 467

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 467

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 468

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 468

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 469

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 469

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 470

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 470

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 471

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 471

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 472

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 472

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 473

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 473

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 474

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 474

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 475

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 475

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 476

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 476

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 477

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 477

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 478

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 478

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 479

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 479

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 480

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 480

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 481

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 481

Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 482

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 482

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 483

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 483

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 484

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 484

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 485

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 485

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 486

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 486

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 487

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 487

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 488

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 488

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 489

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 489

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 490

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 490

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 491

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 491

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 492

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 492

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 493

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 493

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 494

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 494

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 495

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 495

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 496

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 496

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 497

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 497

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 498

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 498

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 499

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 499

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 500

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 500

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 501

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 501

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 502

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 502

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 503

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 503

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 504

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 504

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 505

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 505

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 506

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 506

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 507

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 507

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 508

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 508

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 509

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 509

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 510

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 510

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 511

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 511

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 512

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 512

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 513

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 513

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 514

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 514

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 515

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 515

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 516

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 516

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 517

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 517

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 518

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 518

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 519

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 519

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 520

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 520

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 521

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 521

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 522

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 522

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 523

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 523

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 524

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 524

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 525

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 525

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 526

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 526

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 527

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 527

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 528

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 528

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 529

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 529

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 530

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 530

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 531

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 531

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 532

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 532

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 533

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 533

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 534

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 534

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 535

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 535

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 536

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 536

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 537

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 537

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 538

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 538

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 539

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 539

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 540

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 540

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 541

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 541

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 542

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 542

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 543

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 543

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 544

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 544

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 545

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 545

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 546

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 546

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 547

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 547

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 548

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 548

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 549

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 549

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 550

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 550

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 551

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 551

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 552

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 552

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 553

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 553

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 554

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 554

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 555

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 555

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 556

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 556

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 557

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 557

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 558

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 558

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 559

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 559

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 560

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 560

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 561

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 561

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 562

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 562

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 563

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 563

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 564

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 564

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 565

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 565

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 566

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 566

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 567

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 567

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 568

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 568

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 569

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 569

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 570

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 570

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 571

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 571

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 572

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 572

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 573

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 573

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 574

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 574

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 575

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 575

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 576

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 576

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 577

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 577

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 578

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 578

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 579

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 579

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 580

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 580

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 581

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 581

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 582

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 582

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 583

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 583

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 584

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 584

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 585

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 585

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 586

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 586

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 587

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 587

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 588

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 588

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 589

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 589

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 590

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 590

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 591

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 591

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 592

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 592

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 593

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 593

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 594

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 594

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 595

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 595

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 596

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 596

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 597

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 597

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 598

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 598

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 599

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 599

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 600

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 600

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 601

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 601

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 602

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 602

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 603

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 603

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 604

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 604

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 605

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 605

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 606

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 606

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 607

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 607

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 608

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 608

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 609

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 609

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 610

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 610

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 611

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 611

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 612

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 612

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 613

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 613

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 614

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 614

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 615

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 615

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 616

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 616

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 617

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 617

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 618

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 618

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 619

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 619

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 620

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 620

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 621

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 621

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 622

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 622

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 623

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 623

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 624

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 624

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 625

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 625

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 626

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 626

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 627

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 627

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 628

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 628

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 629

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 629

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 630

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 630

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 631

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 631

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 632

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 632

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 633

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 633

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 634

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 634

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 635

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 635

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 636

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 636

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 637

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 637

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 638

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 638

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 639

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 639

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 640

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 640

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 641

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 641

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 642

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 642

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 643

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 643

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 644

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 644

Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 645

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 645

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 646

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 646

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 647

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 647

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 648

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 648

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 649

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 649

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 650

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 650

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 651

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 651

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 652

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 652

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 653

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 653

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 654

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 654

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 655

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 655

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 656

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 656

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 657

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 657

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 658

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 658

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 659

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 659

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 660

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 660

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 661

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 661

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 662

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 662

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 663

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 663

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 664

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 664

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 665

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 665

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 666

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 666

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 667

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 667

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 668

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 668

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 669

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 669

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 670

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 670

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 671

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 671

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 672

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 672

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 673

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 673

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 674

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 674

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 675

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 675

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 676

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 676

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 677

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 677

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 678

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 678

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 679

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 679

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 680

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 680

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 681

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 681

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 682

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 682

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 683

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 683

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 684

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 684

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 685

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 685

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 686

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 686

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 687

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 687

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 688

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 688

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 689

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 689

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 690

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 690

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 691

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 691

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 692

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 692

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 693

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 693

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Pro

1 5 10

<210> 694

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 694

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Arg Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Ser Val Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Thr Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 695

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 695

Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 696

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 696

Tyr Thr Ser Gln Ser Val Ser

1 5

<210> 697

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 697

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 698

<211> 122

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 698

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Cys Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Gln Asn His Phe Phe

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Ile Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 699

<211> 6

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 699

Ser Asp Cys Ala Trp Asn

1 5

<210> 700

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 700

Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 701

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 701

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 702

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 702

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ser Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 703

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 703

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 704

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 704

Tyr Ser Ser Gln Ser Ile Ser

1 5

<210> 705

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 705

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 706

<211> 122

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 706

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Cys Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Phe

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asp Tyr Phe Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Ala Val Ser Ser

115 120

<210> 707

<211> 6

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 707

Ser Asp Cys Ala Trp Asn

1 5

<210> 708

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 708

Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 709

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 709

Ser Val Asp Tyr Phe Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 710

<211> 112

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 710

Asp Val Met Val Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Asn Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asp Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 711

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 711

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 712

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 712

Arg Val Ser Asp Arg Phe Ser

1 5

<210> 713

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 713

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr

1 5

<210> 714

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 714

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Thr Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ile Met Val Trp Met Lys Gln Ser Gln Gly Lys Thr Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Lys Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Asp Ile Ser Tyr Asn Leu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Phe Tyr Tyr Asp Tyr Phe Asp Gln Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 715

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 715

Asp Tyr Ile Met Val

1 5

<210> 716

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 716

Lys Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Asp Ile Ser Tyr Asn Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 717

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 717

Gly Phe Tyr Tyr Asp Tyr Phe Asp Gln

1 5

<210> 718

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 718

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln His Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Val Ser Gln Pro Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 719

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 719

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 720

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 720

Tyr Val Ser Gln Pro Ile Ser

1 5

<210> 721

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 721

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 722

<211> 122

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 722

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Cys Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Gly Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 723

<211> 6

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 723

Ser Asp Cys Ala Trp Ser

1 5

<210> 724

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 724

Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 725

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 725

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 726

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 726

Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 727

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 727

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile His

1 5 10

<210> 728

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 728

Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser

1 5

<210> 729

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 729

Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Phe Thr

1 5

<210> 730

<211> 119

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 730

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Arg Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Ile Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Gly Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Thr Pro Leu Ser Leu Arg Thr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 731

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 731

Thr Tyr Trp Ile Glu

1 5

<210> 732

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 732

Glu Ile Leu Pro Gly Arg Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 733

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 733

Leu Thr Pro Leu Ser Leu Arg Thr Gly Tyr

1 5 10

<210> 734

<211> 111

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 734

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala

20 25 30

Gly Thr Ser Leu Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro

35 40 45

Lys Val Leu Met Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Ile

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg

85 90 95

Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 735

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 735

Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala Gly Thr Ser Leu Met Tyr

1 5 10 15

<210> 736

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 736

Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala

1 5

<210> 737

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 737

Gln Gln Ser Arg Glu Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 738

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 738

Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ala Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Leu His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Thr Arg Val Leu Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 739

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 739

Asp Tyr Tyr Leu His

1 5

<210> 740

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 740

Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 741

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 741

Val Leu Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 742

<211> 106

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 742

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Phe Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 743

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 743

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Phe

1 5 10

<210> 744

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 744

Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 745

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 745

Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 746

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 746

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Leu Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Asp Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Val Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Ile Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Glu Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Thr Pro Tyr Leu Gln Arg Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ala

115

<210> 747

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 747

Arg Tyr Trp Ile Glu

1 5

<210> 748

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 748

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Val Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Ile Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 749

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 749

Thr Pro Tyr Leu Gln Arg Gly Ala Tyr

1 5

<210> 750

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 750

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 751

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 751

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 752

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 752

Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser

1 5

<210> 753

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 753

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 754

<211> 122

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 754

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Cys Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 755

<211> 6

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 755

Ser Asp Cys Ala Trp Ser

1 5

<210> 756

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 756

Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 757

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 757

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 758

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 758

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 759

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 759

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 760

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 760

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 761

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 761

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 762

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 762

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 763

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 763

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 764

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 764

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 765

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 765

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 766

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 766

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Ile Met Ser Thr Leu Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Pro Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Tyr Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 767

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 767

Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Pro Ala Val Ala

1 5 10

<210> 768

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 768

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5

<210> 769

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 769

Gln Gln Tyr Ser Lys Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 770

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 770

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr

20 25 30

Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Asn Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Lys His Gly Tyr Tyr Gly Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 771

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 771

Asp Tyr Gly Val Ser

1 5

<210> 772

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 772

Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Asn Asn Ser Ala Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 773

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 773

His Gly Tyr Tyr Gly Tyr Val Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 774

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 774

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 775

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 775

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 776

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 776

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 777

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 777

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 778

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 778

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 779

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 779

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 780

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 780

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 781

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 781

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 782

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 782

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 783

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 783

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 784

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 784

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 785

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 785

Gln Ser Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 786

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 786

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 787

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 787

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 788

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 788

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 789

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 789

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 790

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 790

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Glu Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 791

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 791

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 792

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 792

Tyr Thr Ser Gln Pro Val Ser

1 5

<210> 793

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 793

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 794

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 794

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Trp Val Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 795

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 795

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 796

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 796

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 797

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 797

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Trp Val Asp Pro

1 5 10

<210> 798

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 798

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 799

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 799

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 800

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 800

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 801

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 801

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 802

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 802

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 803

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 803

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 804

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 804

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 805

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 805

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Asp Tyr

1 5 10

<210> 806

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 806

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 807

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 807

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 808

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 808

Tyr Ala Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 809

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 809

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 810

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 810

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 811

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 811

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 812

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 812

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 813

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 813

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 814

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 814

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 815

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 815

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 816

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 816

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 817

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 817

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 818

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 818

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 819

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 819

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 820

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 820

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 821

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 821

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 822

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 822

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Ala Ala Leu Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 823

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 823

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 824

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 824

Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr

1 5

<210> 825

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 825

Gln Gln Val Ala Ala Leu Pro Pro Thr

1 5

<210> 826

<211> 123

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 826

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Arg Ser Ser Tyr Ile Cys Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Asp Thr Gly Ser Ile Gly Gly Asp Tyr Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 827

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 827

Ser Tyr Ser Met Ser

1 5

<210> 828

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 828

Ser Ile Ser Ser Arg Ser Ser Tyr Ile Cys Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 829

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 829

Glu Gly Asp Thr Gly Ser Ile Gly Gly Asp Tyr Met Asp Val

1 5 10

<210> 830

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 830

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 831

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 831

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 832

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 832

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 833

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 833

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 834

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 834

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 835

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 835

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 836

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 836

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 837

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 837

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 838

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 838

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Gln Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 839

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 839

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Gln Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 840

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 840

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 841

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 841

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 842

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 842

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 843

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 843

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 844

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 844

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 845

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 845

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 846

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 846

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 847

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 847

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 848

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 848

Tyr Thr Ser Gln Pro Ala Thr

1 5

<210> 849

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 849

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 850

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 850

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 851

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 851

Ser Asp Ser Ala Trp Ser

1 5

<210> 852

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 852

Tyr Ile Gln Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 853

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 853

Ser Val Asn Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Val Gly Tyr

1 5 10

<210> 854

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 854

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Gln Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 855

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 855

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Gln Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 856

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 856

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 857

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 857

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 858

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 858

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 859

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 859

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 860

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 860

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 861

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 861

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 862

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 862

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Cys Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 863

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 863

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 864

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 864

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 865

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 865

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 866

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 866

Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Glu Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ala

<210> 867

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 867

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 868

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 868

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 869

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 869

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 870

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 870

Asp Ile Val Val Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Tyr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 871

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 871

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 872

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 872

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 873

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 873

Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Leu Thr

1 5

<210> 874

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 874

Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Phe Met Tyr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Asn Gly Gly Asp Ser Ser Ser Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Arg Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Lys Asn Trp Asp Asp Tyr Tyr Asp Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 875

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 875

Asp Tyr Phe Met Tyr

1 5

<210> 876

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 876

Tyr Ile Ser Asn Gly Gly Asp Ser Ser Ser Tyr Pro Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 877

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 877

Asn Lys Asn Trp Asp Asp Tyr Tyr Asp Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 878

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 878

Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Asn Tyr Ala Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu

100 105

<210> 879

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 879

Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 880

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 880

Tyr Ala Ser Ser Arg Tyr Thr

1 5

<210> 881

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 881

Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 882

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 882

Gln Val Gln Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Val Arg Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Ala Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Pro Met Ile Thr Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 883

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 883

Asp Tyr Ser Met His

1 5

<210> 884

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 884

Val Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Val Arg Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 885

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 885

Ala Pro Met Ile Thr Thr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 886

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 886

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Ala Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 887

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 887

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 888

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 888

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 889

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 889

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 890

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 890

Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Glu Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ala

<210> 891

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 891

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 892

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 892

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 893

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 893

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 894

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 894

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Thr Lys Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys

100 105

<210> 895

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 895

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 896

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 896

Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser

1 5

<210> 897

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 897

Gln Gln Asp Thr Lys Leu Pro Tyr Thr

1 5

<210> 898

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 898

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Pro Met Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser His

20 25 30

Trp Ile Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Leu Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp

100 105 110

Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 899

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 899

Ser His Trp Ile Glu

1 5

<210> 900

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 900

Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 901

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 901

Gly Tyr Tyr Gly Leu Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 902

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 902

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Ala Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 903

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 903

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 904

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 904

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 905

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 905

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 906

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 906

Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Glu Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ala

<210> 907

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 907

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 908

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 908

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 909

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 909

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 910

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 910

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Pro Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 911

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 911

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Pro Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 912

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 912

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 913

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 913

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 914

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 914

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 915

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 915

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 916

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 916

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 917

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 917

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 918

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 918

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 919

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 919

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 920

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 920

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 921

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 921

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 922

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 922

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 923

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 923

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 924

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 924

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 925

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 925

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 926

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 926

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 927

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 927

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 928

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 928

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 929

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 929

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 930

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 930

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 931

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 931

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 932

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 932

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 933

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 933

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 934

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 934

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Gln Gly Asn Thr Tyr Phe His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 935

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 935

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Gln Gly Asn Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 936

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 936

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 937

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 937

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 938

<211> 114

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 938

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Val Phe Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 939

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 939

Arg Tyr Trp Met Thr

1 5

<210> 940

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 940

Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 941

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 941

Gly Val Phe Thr Ser

1 5

<210> 942

<211> 326

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 942

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly

325

<210> 943

<211> 326

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Recombinant protein

<400> 943

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser

275 280 285

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly

325

<---

Claims

1. Биспецифическое антитело, которое специфически связывается с фактором VII(a) и TREM-подобным транскриптом 1 (TLT-1), содержащее

(ii) второй антигенсвязывающий участок, способный к связыванию TLT-1,

где первый антигенсвязывающий участок содержит:

CDRL1, представленную SEQ ID NO: 847,

CDRL2, представленную SEQ ID NO: 848,

CDRL3, представленную SEQ ID NO: 849,

CDRH1, представленную SEQ ID NO: 851,

CDRH2, представленную SEQ ID NO: 852, и

CDRH3, представленную SEQ ID NO: 853, и

CDRL1, представленную SEQ ID NO: 855,

CDRL2, представленную SEQ ID NO: 856,

CDRL3, представленную SEQ ID NO: 857,

CDRH1, представленную SEQ ID NO: 859,

CDRH2, представленную SEQ ID NO: 860, и

CDRH3, представленную SEQ ID NO: 861.

2. Биспецифическое антитело по п. 1, где антитело содержит Fc-область.

3. Биспецифическое антитело по п. 1 или 2, где первый антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего аминокислотные остатки H115, T130, V131 и R392 из FVII(a) (SEQ ID NO: 1).

4. Биспецифическое антитело по п. 1 или 2, где первый антигенсвязывающий участок способен к связыванию эпитопа, содержащего следующие аминокислотные остатки: R113, C114, H115, E116, G117, Y118, S119, L120, T130, V131, N184, T185, P251, V252, V253, Q388, M391 и R392 из FVII(a) (SEQ ID NO: 1).

5. Биспецифическое антитело по п. 1 или 2, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен легкой цепи, определенный SEQ ID NO:846, и вариабельный домен тяжелой цепи, определенный SEQ ID NO:850.

6. Биспецифическое антитело по п. 1 или 2, где второй антигенсвязывающий участок связывает эпитоп, содержащий следующие аминокислотные остатки: K8, I9, G10, S11, L12, A13, N15, A16, F17, S18, D19, P20, A21 из TLT-1 (SEQ ID NO: 13).

7. Биспецифическое антитело по п. 1 или 2, где второй антигенсвязывающий участок состоит из вариабельного домена легкой цепи, определенного SEQ ID NO: 854, и вариабельного домена тяжелой цепи, определенного SEQ ID NO: 858.

8. Биспецифическое антитело по п. 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит вариабельный домен легкой цепи, определенный SEQ ID NO: 846, и вариабельный домен тяжелой цепи, определенный SEQ ID NO: 850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из вариабельного домена легкой цепи, определенного SEQ ID NO: 854, и вариабельного домена тяжелой цепи, определенного SEQ ID NO: 858.

9. Биспецифическое антитело по п. 1, где первый антигенсвязывающий участок содержит первый вариабельный домен легкой цепи, определенный SEQ ID NO: 846, и первый вариабельный домен тяжелой цепи, определенный SEQ ID NO: 850, и где второй антигенсвязывающий участок состоит из второго вариабельного домена легкой цепи, определенного SEQ ID NO: 854, и второго вариабельного домена тяжелой цепи, определенного SEQ ID NO: 858, и где константные домены тяжелой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам тяжелой цепи, определены SEQ ID NO: 943 и 942 соответственно, и где оба константных домена легкой цепи, присоединенные к первому и второму вариабельному доменам легкой цепи, определены SEQ ID NO: 12.

10. Фармацевтический состав для применения в лечении коагулопатии, содержащий биспецифическое антитело по любому из предыдущих пунктов и фармацевтически приемлемый носитель.

11. Биспецифическое антитело по любому из пп. 1-9 или фармацевтический состав по п. 10 для применения в лечении коагулопатии, где указанная коагулопатия выбрана из группы, состоящей из гемофилии А с наличием ингибиторов или без них или гемофилии В с наличием ингибиторов или без них, дефицита FVII(а) и тромбастении Гланцмана.