RU2816763C1 - Способ определения чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам - Google Patents
Способ определения чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам Download PDFInfo
- Publication number
- RU2816763C1 RU2816763C1 RU2022135247A RU2022135247A RU2816763C1 RU 2816763 C1 RU2816763 C1 RU 2816763C1 RU 2022135247 A RU2022135247 A RU 2022135247A RU 2022135247 A RU2022135247 A RU 2022135247A RU 2816763 C1 RU2816763 C1 RU 2816763C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cfu
- dish
- probiotic
- cup
- cultures
- Prior art date
Links
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims abstract description 44
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 32
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 32
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 16
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 13
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 claims description 10
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011338 personalized therapy Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 22
- 206010051226 Campylobacter infection Diseases 0.000 description 15
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 15
- 201000004927 campylobacteriosis Diseases 0.000 description 13
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 241000589877 Campylobacter coli Species 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 5
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 5
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 4
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 description 4
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- RCIMBBZXSXFZBV-UHFFFAOYSA-N piromidic acid Chemical compound N1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CN=C1N1CCCC1 RCIMBBZXSXFZBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 3
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 3
- 241000982579 Enterococcus faecium L3 Species 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 230000008108 anti-campylobacter effect Effects 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 101100238324 Arabidopsis thaliana MPC4 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 2
- 229960004099 azithromycin Drugs 0.000 description 2
- MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N azithromycin Chemical group O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)N(C)C[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N cefoperazone Chemical compound O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2C(C(O)=O)=C(CSC=3N(N=NN=3)C)CS[C@@H]21 GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N 0.000 description 2
- 229960004682 cefoperazone Drugs 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 2
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- CTBBEXWJRAPJIZ-VHPBLNRZSA-N (1S,2S,3S,6R,8R,9S,10R)-2-benzoyl-1,3,8,10-tetrahydroxy-9-(4-methoxy-6-oxopyran-2-yl)-5-oxatricyclo[4.3.1.03,8]decan-4-one Chemical compound O1C(=O)C=C(OC)C=C1[C@H]1[C@]([C@@H]2O)(O)[C@H](C(=O)C=3C=CC=CC=3)[C@@]3(O)C(=O)O[C@@H]2C[C@]31O CTBBEXWJRAPJIZ-VHPBLNRZSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 1
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- CTBBEXWJRAPJIZ-UHFFFAOYSA-N Enterocin Natural products O1C(=O)C=C(OC)C=C1C1C(C2O)(O)C(C(=O)C=3C=CC=CC=3)C3(O)C(=O)OC2CC31O CTBBEXWJRAPJIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- HBGOLJKPSFNJSD-UHFFFAOYSA-N Etamsylate Chemical compound CC[NH2+]CC.OC1=CC=C(O)C(S([O-])(=O)=O)=C1 HBGOLJKPSFNJSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010067035 Pancrelipase Proteins 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 102220602178 Synaptotagmin-3_L50A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 108010038854 colibacterin Proteins 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940092125 creon Drugs 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960004817 etamsylate Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 244000078673 foodborn pathogen Species 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000020215 hypoallergenic milk formula Nutrition 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002664 inhalation therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 108010006741 lactobacterin Proteins 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021395 porridge Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000011867 re-evaluation Methods 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 229960002181 saccharomyces boulardii Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам, заключающийся в том, что предварительно готовят образцы пробиотических микроорганизмов и выделенных из фекалий пациента аутопробиотических бактериальных культур, затем выделяют из фекалий пациента чистую культуру кампилобактерий, выращивают ее на поверхности кампилобакагара, готовят 3 чашки Петри, заполняют триптиказо-соевым агаром в количестве по 9 мл на чашку, готовят десятикратные разведения пробиотических и аутопробиотических культур, помещают в первую чашку 1 мл культуры в концентрации 9 lg КОЕ/мл, во вторую чашку- 8 lg КОЕ/мл и 7 lg КОЕ/мл в третью чашку, затем в каждой чашке формируют второй слой агара, добавляя дополнительно 10 мл той же среды, после ее застывания на поверхность верхнего слоя агара капельно наносят суспензию кампилобактерий в концентрации 6 lg КОЕ/мл, инкубируют в анаэробных условиях при 37°С в течение 48 ч, после чего визуально оценивают наличие или отсутствие роста этих бактерий в каждой чашке, выбирают чашку с минимальной концентрацией пробиотических или аутопробиотических культур, считают чувствительной культуру, которая не вырастала в третьей чашке, умеренно-устойчивой - во второй чашке, устойчивой - в первой чашке. Изобретение обеспечивает повышение точности оценки чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам при персонифицированной терапии. 2 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано для разработки медицинских технологий лечения кампилобактериоза.
Кампилобактерии вызывают инфекционный гастроэнтерит с такими тяжелыми последствиями, как реактивный артрит и синдром Гийена-Барре. Ежегодно в мире регистрируют около 140 миллионов случаев этого заболевания и более 30 тысяч случаев смерти, чаще всего среди детей в возрасте до 5 лет. Хотя кампилобактерии выделены впервые еще в 1963 г., до сих пор нет ни вакцин, ни средств для предотвращения инфекции.
Кампилобактериоз является одной из наиболее распространенных острых кишечных инфекций. Частота выявления данной инфекции у детей значительно выше, чем у взрослых. Согласно опубликованным данным, при надлежащей диагностике кампилобактериоз выявляется у 5-22% больных детского возраста с ОКИ. В США ежегодно регистрируется не менее 1,3-2 млн. случаев заболеваний, вызванных Campylobacter spp. [Kaakoush N.О. et al. Global epidemiology of Campylobacter infection //Clinical microbiology reviews. - 2015. - T. 28. - №. 3. - C. 687-720]. Особенно следует отметить частую регистрацию осложненного «негладкого течения кампилобактериоза у детей [Grzybowska-Chlebowczyk U. et al. Clinical course of Campylobacter infections in children // Pediatria polska. - 2013. - T. 88. - №. 4. - C. 329-334.]. Кроме того, за последние несколько десятилетий регистрируется значительный рост устойчивости кампилобактерий к антибактериальным препаратам [Ефимочкина Н.Р. и др. Антибиотикорезистентность штаммов Campylobacter jejuni, выделенных из пищевых продуктов // Вопросы питания. - 2017. - Т. 86. - №. 1. - С. 17-27; Economou V., Gousia P. Agriculture and food animals as a source of antimicrobial-resistant bacteria //Infection and drug resistance. - 2015. - T. 8. - C. 49]. Возможными механизмами преодоления данных трудностей является не только рациональное назначение антибиотиков, но и использование пробиотиков и аутопробиотиков, обладающих антагонистическим действием по отношению к кампилобактериям [Ермоленко К.Д., Болдырева Н.П., Мартене Э.А., Железова Л.И., Сидоренко С.В., Суворов А.Н., Ермоленко Е.И. Необходимость индивидуального подбора пробиотиков, содержащих лактобацилы и энтерококки для повышения эффективности терапии кампилобактериоза // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2021. №2(186). С. 88-93; Balta I. et al. Anti-Campylobacter probiotics: latest mechanistic insights // Foodborne Pathogens and Disease. - 2022. - T. 19. - №. 10. - C. 693-703].
Данные группы лекарственных препаратов и функциональные пищевые продукты могут применяться как в качестве дополнения, так и альтернативы антибактериальной терапии инфекционных заболеваний [Ермоленко Е.И., Молостова А.С., Гладышев Н.С. Эрадикационная терапия хеликобактериоза при помощи пробиотиков: проблемы и перспективы // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2021. №9 (193). С. 60-72].
Выбор адекватного антибактериального препарата в комплексе с дифференцированным подходом к назначению пробиотиков при кампилобактериозк также, как и в случае хеликобактерной инфекции необходим для быстрой элиминации возбудителя и восстановления микробиоценоза кишечника, профилактики осложненного течения болезни и хронической персистенции патогенных бактерий. Использование аутопробиотиков, индигенных лактобацилл, энтерококков и других представителей микробиоты организма хозяина, выделенные из кишечника и повторно введенные в организм, обладает рядом преимуществ по сравнению с применением других терапевтических средств, к которым относятся иммунологическая толерантность и отсутствие угнетения собственной микробиоты. Показано, что пробиотическиме средства не всегда бывают эффективны, не всегда вызывают эрадикацию возбудителей инфекционных заболеваний и безопасны. Это связано с неодинаковой чувствительностью штаммов возбудителя к действию пробиотиков и аутопробиотиков. Персонифицированный подход при терапии может обеспечиваться выбором пробиотиков и создание аутопробиотиков, эффективность которых предварительно устанавливается на основании исследований в системе in vitro.
Однако методические вопросы решения этой проблемы были разработаны недостаточно. Предложены различные подходы для оценки антимикробной активности, разработанные в основном с целью выявления антагонистической активности пробиотических штаммов лактобацилл, бифидобактерий и энтерококков по отношению к патогенным и условно-патогенным бактериям, представителям семейства Enterobacteriaceae, стафилококкам, стрептококкам, листериям.
В табл. 1 проведено сравнение известных методов оценки антагонистической активности пробиотических культур.
При использовании метода прямого антагонизма - метод штриховых посевов, когда осуществляется посев пробиотика и тестируемых культур на одну и ту же среду штрихами на расстоянии 2-5 мм индикаторные бактерии рекомендуется подсевать на середу МРС, на которой могут расти ограниченное число бактериальных таксонов и через 72-96 часов роста предполагаемого антагониста. Зоны роста зависят от качества посева и условий культивирования, характеризуется переменной величиной зоны подавления роста каждого тест-штамма, измеряемой в мм [ФС 42-3365-97 "Колибактерин сухой", Постникова Е.А., Ефимов Б.А., Володин Н.Н., Кафарская Л.И. Поиск перспективных штаммов бифидобактерий и лактобацилл для разработки новых биопрепаратов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 2004. - №2. С. 64-69].
При прямом совместном культивировании (капельный метод) происходит непосредственное взаимодействие пробиотика и испытуемой культуры на поверхности среды, остаются высокие ограничения по выбору питательной среды [Глушанова Н.А., Блинов А.И., Бахаев В.В. Об антагонизме пробиотических лактобацилл // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2004. - №6. С. 37-39; Методические указания по применению унифицированных микробиологических (бактериологических) методов исследования в клинико-диагностических лабораториях: приложение 1 к приказу Минздрава СССР №535. - 1986; Арзуманян В.Г., Михайлова Н.А., Гайдеров А.А., Баснакьян И.А., Осипова И.Г. Количественный способ оценки отсроченного антагонизма пробиотических культур против оппортунистических дрожжей // Клиническая лабораторная диагностика. - 2005. - №5. С. 53-54]. При использовании данного подхода отсутствует количественный контроль результатов и ограничен спектр индикаторных бактерий и пробиотических культур, что связано с применением в основном среды МРС.
Существует еще более сложный, но быстрый метод исследования антагонистической активности пробиотических микроорганизмов, основанный на использовании люминесцентных бактерий, реагирующих на интибирование их роста метаболитами пробиотиков снижением интенсивности люминесценции (А.с. СССР 1335569, кл. C12Q 1/04; G01N 33/48, 1987 и А.с. СССР 1540439, кл. G01N 33/18, 1987). Для выявления данного эффекта не требуется совместное культивирование бактерий испытуемой и контрольной культур [Способ определения антагонистической активности пробиотиков. Несчисляев В.А., Пшеничное Р.А., Арчакова Е.Г., Чистохина Л.П., Фадеева И.В. Патент RU 2187801, опубл. 20.08.2002].
Проявление данного эффекта поддается количественному учету при кратковременной совместной экспозиции препарата и тест-культуры (в течение 2 часов). Этот способ, исключая необходимость применения питательных сред, позволяет оценить антагонистическую активность препаратов, содержащих бактериальные культуры или культуральные жидкости. Достигаемый технический результат заключается в упрощении, снижении продолжительности и трудоемкости способа контроля пробиотиков. Однако для использования данного метода необходимы индикаторные бактерии, обладающие люминесценцией, связанной с продукцией люциферазы. Метод годится для только для быстрого тестирования пробиотических культур в отношении референс штамма эшерихий.
При использовании метода перевернутого агара метаболиты пробиотиков (лактобацилл и бифидобактерий) в течение двух суток инкубации насыщают питательную среду и влияют на рост тест-штамма [Патент RU 2412989 «Способ индивидуального выявления антагонистической активности пробиотических препаратов, содержащих лактобактерии и/или бифидобактерий, в отношении условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при диагностике дисбактериоза кишечника Оришак Е.А., Бойцов А.Г., Нилова Л.Ю. Патент RU 2412989. 27.02.2011. https://www.freepatent.ru/patents/2412989?ysclid=laso7h39hp891342346].
Метод перевернутого агара описан также для выявления антагонистической активности пробиотических препаратов, содержащих Bacillus subtilis и Escherichia coli, в отношении оппортунистических дрожжей [Арзуманян В.Г., Михайлова Н.А., Гайдеров А.А., Баснакьян И.А., Осипова И.Г. Количественный способ оценки отсроченного антагонизма пробиотических культур против оппортунистических дрожжей // Клиническая лабораторная диагностика. - 2005. - №5. С. 53-54.]. Этот метод трудоемок и требует специального подбора условий культивирования индикаторных бактерий и анатагонистов. Кроме того, не предусмотрена количественная оценка антагонистической активности пробиотиков.
Известен способ индивидуального выявления антагонистической активности пробиотических препаратов, содержащих лактобактерии и/или бифидобактерий, в отношении условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при диагностике дисбактериоза кишечника [Патент RU 2412989. Оришак Е.А., Бойцов А.Г., Нилова Л.Ю. (27.02.2011), https://www.freepatent.ru/patents/2412989?ysclid=laso7h39hp891342346], в котором для оценки чувствительности условно-патогенных микроорганизмов к пробиотическим лактобациллам и бифидобактериям применяется комбинация методов двуслойного агара, перевернутого агара и капельный метод. Предлагаемый авторами подход для определения чувствительности представляет значительные практические трудности. Каждый этап проводимого исследования крайне трудоемок, происходит дублирование повторяющихся рутинных процедур, а также постоянно требуется контроль результатов и их критическая переоценка в принятии решения о необходимости перехода к дополнительным методам исследования. Кроме того, в указанном способе оценки антагонистической активности не введен количественный показатель (такой как МИК), не предложен вариант исследования антагонистической активности пробиотических и аутопробиотических бактерий и грибов по отношению к Campylobacter различных видов.
В качестве прототипа по наиболее близкой технической сущности выбран разработанный нами метод двухслойного агара, применяемый при оценке антагонистической активности пробиотических лактобацилл и энтерококков к условно патогенным энтеробактериям и стафилококкам [Ермоленко Е.И., Исаков В.А., Ждан-Пушкина С.Х., Тец В.В. Количественная оценка антагонистической активности лактобацилл // Журнал микробиологии, вирусологии и иммунологии. - 2004. - №5. - С. 94-98]. Используют две среды: МРС4 для формирования нижнего слоя с молочнокислыми бактериями и мясопептонный агар для культивирования перечисленных условно-патогенных бактерий на поверхности верхнего слоя. Для выявления антагонистической активности пробиотиков по отношению стрептококкам верхний слой был заменен на кровяной агар [Ермоленко Е. И., Черныш А. Ю., Берлов М. Н., Тотолян А. А., Суворов А. Н. Антагонистическая активность энтерококков в отношении Streptococcus pyogenes // Вестник Санкт-Петербургского университета. Медицина. 2008. №3. URL: https://cyberleninka.ru/article/ri/antagonisticheskaya].
Техническим результатом описанных изобретений является повышение точности выявления антагонистической активности пробиотических препаратов, содержащих лактобациллы и/или энтерококки, в отношении условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при диагностике дисбактериоза кишечника у конкретного пациента и расширение спектра оптимально подобранных препаратов. Однако в этих методах предлагается использование МРС4 агара, предназначенного в основном для культивирования лактобацилл. В этом случае нет возможности культивирования кампилобактерий, а также отсутствуют методы оценки чувствительности к аутопробиотикам.
Метод двухслойного агара является одним из наиболее эффективных методов оценки антагонистической активности пробиотических и аутопробиотических в отношении патогенных микроорганизмов. В методе двухслойного агара пробиотики растут в условиях, близких к анаэробным, и могут максимально проявлять свои свойства. Однако до этого времени не было предложено использования универсальной среды для культивирования широкого спектра индикаторных бактерий, в частности, весьма требовательных к условиям роста кампилобактерий.
Предлагаемый способ основан на использовании метода двухслойного агара и реализуется следующим образом.
Предварительно готовят образцы пробиотических микроорганизмов и выделенных из фекалий пациента аутопробиотических бактериальных культур, помещают их в морозильную камеру с температурой -80°С, затем выделяют из фекалий пациента чистую культуру кампилобактерий, выращивают ее на поверхности кампилобакагара и смывают газон в пробирку изотоническим раствором хлорида натрия. В три чашки Петри, содержащие расплавленный и остуженный до температуры 40-50°С слой триптиказо-соевого агара в количестве 9 мл на чашку, вносят, тщательно перемешивая, пробиотическую или аутопробиотическую культуру для достижения итоговой концентрации в нижнем слое агара в каждой чашке соответственно 9, 8 и 7 lg КОЕ/мл. После застывания агара на поверхность нижнего слоя наливают второй слой той же питательной среды в количестве 10 мл. Далее на поверхность застывшего верхнего слоя капельно наносят стандартизированную путем разведения в изотоническом растворе хлорида натрия до концентрации 6 lg КОЕ/мл суспензию кампилобактерий, затем инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 48 часов, после чего визуально оценивают наличие или отсутствие роста этих бактерий в каждой чашке и выбирают чашку с минимальной концентрацией пробиотических или аутопробиотических культур. Контролем является двухслойный агар без культур антагонистов. Чувствительной считали культуру кампилобактерий, которая не вырастала при наличии в нижнем слое агара антагониста в концентрации 7 lgKOE/мл, умеренно-устойчивой - при 8 lgKOE/мл, устойчивой - при 9 lgKOE/мл.
Для тестирования чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам лучше использовать один посев и контролировать их количество при помощи титрования и использования стандарта мутности. Пробиотики или индигенные культуры, выделенные из фекалий хозяина, проявляющие высокую антикампилобактерную активность, рекомендуют для персонифицированной терапии кампилобактериоза.
Набор для обнаружения Campylobacter jejuni или Campylobacter coli, содержащий следующую конфигурацию: i) цефоперазон, ванкомицин, триметоприм и циклогексимид и рифампицин не менее 5 мг/л; ii) mCCDA (агар с модифицированным древесным углем цефоперазондезоксихолат) или агаровая среда Campyfood ID для селективного культивирования.
Идентификация кампилобактерий осуществляется на основании культуральных свойств, световой микроскопии препаратов чистых культур бактерий, окрашенных по методу Грама, и MALDI-Tof масс-спектрометрии.
Таким образом достигается технический результат изобретения -повышение точности и быстроты оценки чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам.
Эффективность предлагаемого способа диагностики и его клиническая актуальность подтверждена клиническими и лабораторными примерами.
Пример 1.
Из фекалий пациента выделяли аутопробиотические бактериальные культуры и помещали их в морозильную камеру с температурой -80°С.
Пробиотические культуры выделяли из пробиотических препаратов или продуктов, используя метод истощающего штрихового посева на средах МРС (аципол, ламинолакт), триптиказо-соевый агар для выделения бифидобактерий и сахаромицетов (бифиформ, энтерол), азидная среда для выделения энтерококков (ламинолакт), приготовленные из этих культур инокулюмы помещали в морозильную камеру с температурой -80°С, затем выделяли из фекалий пациента чистую культуру кампилобактерий, выращивали ее на поверхности кампилобакагара, после чего смывали газон в пробирку изотоническим раствором хлорида натрия, заполняли 3 чашки Петри предварительно расплавленным и остуженным до 40-50°С триптиказо-соевым агаром в количестве по 9 мл на чашку, перед исследованием пробиотические и аутопробиотические культуры размораживали, готовили их десятикратные разведения и помещали в первую чашку 1 мл культуры в концентрации 9 lg КОЕ/мл, во вторую чашку 8 lg КОЕ/мл и 7 lg КОЕ/мл в третью чашку, затем в каждой чашке формировали второй слой агара, добавляя дополнительно 10 мл той же среды, после ее застывания на поверхность верхнего слоя агара капельно наносили стандартизированную до концентрации 6 lg КОЕ/мл суспензию кампилобактерий, затем инкубировали в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 48 часов.
Клинические изоляты Campylobacter spp., были посеяны на кампилобакагар с добавлением 5% бараньих эритоцитов и селективной добавки с антибиотиками, полученные колонии были идентифицированы при помощи MaldiTof масс-спектрометрии. Для исследования антагонистической активности пробиотических и аутопробиотических культур по отношению к кампилобактериям были использованы: метод штриховых посевов, метод совместного культивирования и метод двухслойного агара с разными составами сред.
Использование метода штриховых посевов со средой МРС было невозможно, так как на этой среде кампилобактерий не росли, а замена среды на триптиказо-соевый агар даже при подсеве индикаторных культур через 72 часа в анаэробных или аэробных условиях не приводила к задержке роста культур кампилобактерий. Установлено, что культуры лактобацилл и бифидобактерий, в отличие от культур сахаромицетов и энтерококков, росли только при создании анаэробных условий.
Использование метода двухслойного агара с использованием МРС агара для роста лактобацилл и энтерококков и формированием верхнего слоя из мясопептонного агара, в том числе с добавлением бараньих эритроцитов, не являлось приемлемым для контроля роста кампилобактерий, так как они не росли на указанной среде.
Использование совместного роста кампилобактерий, пробиотических или пробиотических культур на поверхности триптиказо-соевого агара не выявило ингибирования роста кампилобактерий, хотя все культуры в течение 48 часов культивирования в анаэробных условиях были способны расти на этой среде.
В табл.2 приведены результаты исследования антагонистического действия чистых культур, выделенных из готовых пробиотиков и аутопробиотиков в отношении кампилобактерий (МИК lg КОЕ /мл).
Saccharomyces boulardii (энтерол) не ингибировали рост всех штаммов кампилобактерий при добавлении в нижний слой агара культуры сахаромицетов в концентрации 7 lg КОЕ/мл. Как видно из описания антикампилобактерной активности S. boulardii, для задержки роста кампилобактерий под влиянием метаболитов сахаромицетов требовалась конечная концентрация более 7 lg КОЕ/мл. Для более активно действующих культур молочнокислых бактерий и бифидобактерий доза антагониста также была важна и имела особенности для каждой культуры или их смеси. Максимальное действие при концентрации 6 lg КОЕ/мл проявляли культуры, выделенные из ламинолакта и бифиформа, которые ингибировали индикаторные культуры во всех использованных концентрациях. Смесь L. acidophilus (аципол) слабо действовала на три индикаторные культуры (C.coli 1,2, 6, С.jejuni 1,3 и 4 (МИК 7 lg КОЕ/мл). Штамм Lactobacillus plantarum 8R-A3 (лактобактерин) был менее активен, он подавлял размножение только культуры С.jejuni 3 в количестве 8 lg КОЕ/мл, был эффективен in vitro в отношении трех культур С.jejuni 9, C.coli 8. (табл.2).
Таким образом, проведенное исследование подтвердило, что заявляемый метод позволяет осуществлять подбор пробиотических средств и аутопробиотиков и рекомендовать дозы их введения. Пример №2.
У пациента А, возраст 6 лет, при негладком течении кампилобактериоза не был выделен аутопробиотический энтерококк.
Пробиотические культуры выделяли из пробиотических препаратов или продуктов, используя метод истощающего штрихового посева на средах МРС (аципол, ламинолакт), триптиказо-соевый агар для выделения бифидобактерий и сахаромицетов (бифиформ, энтерол), азидная среда для выделения энтерококков (ламинолакт), приготовленные из этих культур инокулюмы помещали в морозильную камеру с температурой -80°С, затем выделяли из фекалий пациента чистую культуру кампилобактерий, выращивали ее на поверхности кампилобакагара, после чего смывали газон в пробирку изотоническим раствором хлорида натрия, заполняли 3 чашки Петри предварительно расплавленным и остуженным до 40-50°С триптиказо-соевым агаром в количестве по 9 мл на чашку, перед исследованием пробиотические и аутопробиотические культуры размораживали, готовили их десятикратные разведения и помещали в первую чашку 1 мл культуры в концентрации 9 lg КОЕ/мл, во вторую чашку 8 lg КОЕ/мл и 7 lg КОЕ/мл в третью чашку, затем в каждой чашке формировали второй слой агара, добавляя дополнительно 10 мл той же среды, после ее застывания на поверхность верхнего слоя агара капельно наносили стандартизированную до концентрации 6 lg КОЕ/мл суспензию кампилобактерий, затем инкубировали в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 48 часов.
Наиболее низкие МИК среди пробиотических культур были выявлены у штамма Е. faecium L3, входящего в состав ламинолакта, (МИК 6 lg КОЕ/мл). Больной был успешно пролечен данным пробиотиком в дозе 6 lg КОЕ/мл.
Для доказательства влияния бактериоцинов как ведущего компонента метаболитов с антикампилобактерной активностью проведен эксперимент с синтетическими бактериоцинами. Антагонистическая активность химически синтезированных (AppliedBiosystems 430-А, США) бактериоцинов: EntB, Епха и Enxp\ L50A, L50B, Ent Р, Ent Ашгантарицин NC8a и NC8p в отношении Campylobacter spp.была определена капельным методом. Капли антимикробных пептидов в концентрации 500 мкг/мл и 50 мкг/мл были добавлены на поверхность засеянных ex tempere штаммов Campylobacter spp.(6 lg КФЕ/мл). Обнаружена зона подавления роста кампилобактерий после нанесения энтероцина Ent В в концентрации 500 мкг/мл.
Следовательно, высокая антагонистическая активность штамма Е. faecium L3 могла быть обусловлена его способностью продуцировать бактериоцины, информация о возможности синтеза которых закодировано в его геноме [Karaseva A., Tsapieva A., Pachebat J., Suvorov A. Draft Genome Sequence of Probiotic Enterococcus faecium StrainL-3 // Genome announcements. -2016.-T.4, №1].
Пример 3.
Пациент Д, возраст 6 месяцев, поступил в приемное отделение на 3 сутки заболевания. Заболеванию предшествовал эпизод острой респираторной инфекции: более 2 недель назад родители заметили у пациента повышение температуры до 38,3°С, насморк и кашель. Лечился -местные антисептики, ингаляционная терапия, антибиотики (амоксициллин 5 дней, панцеф 7 дней). На фоне проводимой терапии отмечалось улучшение состояния. Однако через 2 дня после завершения курса терапии - появление боли в животе, жидкий стул, в связи с чем и был госпитализирован
Эпидемиологический анамнез: накануне болезни ребенка в семье у сестры 4 лет жидкий стул, отказ от еды.
Из анамнеза также известно, что ребенок находится на искусственном вскармливании, получает смесь, предназначенную гипоаллергенную смесь для кормления детей с пищевой аллергией.
При поступлении общее состояние средней тяжести, температура 36,9°С. В биохимическом анализе крови уровень С-реактивного белка повышен (29,1 мг/л). В копрограмме: макроскопически - консистенция жидкая, видимая слизь и кровь; микроскопически - лейкоциты, эритроциты в большом количестве. По результатам посева в кале выявлены Campylobacter coli (штамм 2 из таблицы 1).
На основании жалоб, анамнеза заболевания, умеренно выраженного синдрома общей инфекционной интоксикации, превалирования синдрома диареи (энтерит, гемоколит) и данных лабораторного исследования, установлен диагноз: Кампилобактериоз энтероколитическая форма, вызванный Campylobacter coli, средней степени тяжести. Осложнение: Эксикоз 1 ст.
С поступления назначена лечебная диета - смесь безлактозная и прикорм (безмолочная каша безглютеновая); этиотропные (энтерофурил) и патогенетические средства (аципол, креон, аминокапроновая кислота, этамзилат). Однако в связи с сохранением диареи интоксикационного синдрома со 2-ого дня госпитализации энтерофурил был заменен на азитромицин. Курс терапии азитромицином составил 5 дней. В связи с профузной водянистой диареей со 2 дня стационарного лечения также проведена коррекция лечебного питания: безлактозная смесь заменена на лечебную смесь на основе аминокислот.Длительность применения аминокислотной смеси составила 5 дней. В дальнейшем был осуществлен возврат к безлактозной смеси. На фоне коррекции отмечалось улучшение самочувствия ребенка, стул стал кашицеобразный, температура нормализовалась. Однако при контрольном обследовании в кале повторно обнаружены Campylobacter coli.
Из фекалий пациента выделяли аутопробиотические энтерококки и помещали их в морозильную камеру с температурой -80°С.
Пробиотические культуры выделяли из пробиотических препаратов или продуктов, используя метод истощающего штрихового посева на средах МРС (аципол, ламинолакт), триптиказо-соевый агар для выделения бифидобактерий и сахаромицетов (бифиформ, энтерол), азидная среда для выделения энтерококков (ламинолакт), приготовленные из этих культур инокулюмы помещали в морозильную камеру с температурой -80°С, затем выделяли из фекалий пациента чистую культуру кампилобактерий, выращивали ее на поверхности кампилобакагара, после чего смывали газон в пробирку изотоническим раствором хлорида натрия, заполняли 3 чашки Петри предварительно расплавленным и остуженным до 40-50°С триптиказо-соевым агаром в количестве по 9 мл на чашку, перед исследованием пробиотические и аутопробиотические культуры размораживали, готовили их десятикратные разведения и помещали в первую чашку 1 мл культуры в концентрации 9 lg КОЕ/мл, во вторую чашку 8 lg КОЕ/мл и 7 lg КОЕ/мл в третью чашку, затем в каждой чашке формировали второй слой агара, добавляя дополнительно 10 мл той же среды, после ее застывания на поверхность верхнего слоя агара капельно наносили стандартизированную до концентрации 6 lg КОЕ/мл суспензию кампилобактерий, затем инкубировали в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 48 часов.
Показано, что МИК Е. faecium L3, все клоны индигенных E.faecium составляет 6 lg КОЕ/мл, компонентов бифиформа 6 lg КОЕ/мл. Рекомендовано использование аутопробиотика. Произведена замена безлактозной смеси на кисломолочную, дополнительно назначен жидкий продукт основе аутоштамма Enterococcus faecium в виде закваски с титром 6 lg КОЕ/мл в дозе по 5 мл после утреннего и дневного приема пищи на 10 дней.
В результате проведенного лечения у пациента достигнута устойчивая положительная динамика клинических данных: нормализация температуры тела, частоты и консистенции стула, исчезновение примеси крови в стуле; положительная динамика данных копрограммы. В контрольном бактериологическом исследовании кала на кампилобактериоз - возбудителя не выявлено, что свидетельствовало о выздоровлении от кампилобактериоза. Определение чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам занимает важное место в курации пациентов с кампилобактериозом. Данные, получаемые при проведении исследования, способствуют снижению негативных последствий кампилобактериоза и делают возможным не использовать антибиотики повторно.
Claims (1)
- Способ определения чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам, заключающийся в том, что предварительно готовят образцы пробиотических микроорганизмов и выделенных из фекалий пациента аутопробиотических бактериальных культур, помещают их в морозильную камеру с температурой -80°С, затем выделяют из фекалий пациента чистую культуру кампилобактерий, выращивают ее на поверхности кампилобакагара и смывают газон в пробирку изотоническим раствором хлорида натрия, готовят 3 чашки Петри, заполняют их предварительно расплавленным и остуженным до 40-50°С триптиказо-соевым агаром в количестве по 9 мл на чашку, перед исследованием пробиотические и аутопробиотические культуры размораживают, готовят их десятикратные разведения и помещают в первую чашку 1 мл культуры в концентрации 9 lg КОЕ/мл, во вторую чашку 8 lg КОЕ/мл и 7 lg КОЕ/мл в третью чашку, затем в каждой чашке формируют второй слой агара, добавляя дополнительно 10 мл той же среды, после ее застывания на поверхность верхнего слоя агара капельно наносят стандартизированную путем разведения в изотоническом растворе хлорида натрия до концентрации 6 lg КОЕ/мл суспензию кампилобактерий, затем инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 48 ч, после чего визуально оценивают наличие или отсутствие роста этих бактерий в каждой чашке, выбирают чашку с минимальной концентрацией пробиотических или аутопробиотических культур и считают чувствительной культуру, которая не вырастала в третьей чашке, умеренно-устойчивой - во второй чашке, устойчивой - в первой чашке.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2816763C1 true RU2816763C1 (ru) | 2024-04-04 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2317332C1 (ru) * | 2006-06-27 | 2008-02-20 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук | Способ оценки антагонистической активности молочнокислых бактерий и бактерий кишечной группы к патогенным микобактериям с использованием двухслойной среды |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2317332C1 (ru) * | 2006-06-27 | 2008-02-20 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук | Способ оценки антагонистической активности молочнокислых бактерий и бактерий кишечной группы к патогенным микобактериям с использованием двухслойной среды |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| БОЛДЫРЕВА Н.П. и др. "Антагонистическая активность пробиотиков и бактериоцинов в отношении Campylobacter spp."; Здоровье-основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения", 2019, с.462. * |
| ЕРМОЛЕНКО Е.И. и др. "Антагонистическая активность энтерококков в отношении Streptococcus pyogenes"; Вестник Санкт-Петербургского университета, 2008, серия 11, N 3, c.137-144. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Igbinosa et al. | Antimicrobial resistance, virulence determinants, and biofilm formation of Enterococcus species from ready-to-eat seafood | |
| da Silva et al. | Safety and probiotic functionality of isolated goat milk lactic acid bacteria | |
| BR112020013712A2 (pt) | composições anidras compreendendo uma microbiota co-selecionada, método de uso das mesmas e medicamento | |
| Zhang et al. | Screening probiotic strains for safety: Evaluation of virulence and antimicrobial susceptibility of enterococci from healthy Chinese infants | |
| JP2014001245A (ja) | Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｏａｇｕｌａｎｓによる病原体の阻害 | |
| Todorov et al. | Safety of Lactobacillus plantarum ST8Sh and its bacteriocin | |
| Mansour et al. | Inhibition of Clostridium difficile in mice using a mixture of potential probiotic strains Enterococcus faecalis NM815, E. faecalis NM915, and E. faecium NM1015: novel candidates to control C. difficile infection (CDI) | |
| Meleh et al. | Isolation and safety characterisation of lactobacilli strains with antimicrobial properties as potential probiotics for human use | |
| WO2018218694A1 (zh) | 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用 | |
| RU2460778C1 (ru) | Способ получения аутопробиотика на основе enterocuccus faecium, представителя индигенной микрофлоры кишечника хозяина | |
| CN112839650A (zh) | 微生物混合物、从其衍生的分子、及其使用方法 | |
| Wang et al. | Probiotic and safety properties screening of Enterococcus faecalis from healthy Chinese infants | |
| Anadón et al. | Probiotics: safety and toxicity considerations | |
| Babot et al. | Compatibility and safety of five lectin-binding putative probiotic strains for the development of a multi-strain protective culture for poultry | |
| Cai et al. | In vitro evaluation of probiotic properties and antioxidant activities of Bifidobacterium strains from infant feces in the Uyghur population of northwestern China | |
| Kesen et al. | Beneficial characteristics and evaluation criteria of probiotics | |
| Gladysheva et al. | Probiotic potential, safety properties, and antifungal activities of Corynebacterium amycolatum ICIS 9 and Corynebacterium amycolatum ICIS 53 strains | |
| WO2018218693A1 (zh) | 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的嗜酸乳杆菌及其应用 | |
| Zhang et al. | In vitro evaluation of probiotic properties of lactic acid bacteria isolated from the vagina of yak (Bos grunniens) | |
| Dbeibia et al. | Probiotic potential of lactic acid bacteria isolated from colostrum of 3 different mammals | |
| RU2816763C1 (ru) | Способ определения чувствительности кампилобактерий к пробиотикам и аутопробиотикам | |
| RU2546253C2 (ru) | Способ получения персонифицированного аутопробиотического продукта и способ лечения синдрома раздраженной кишки с использованием этого продукта | |
| Suryani et al. | New Probiotic Isolation of Coconut Water's Helpful Lactic Acid Bacteria Cure Covid-19 Patients | |
| Hai et al. | Protective effect of Lactobacillus reuteri Lb11 from chicken intestinal tract against Salmonella Enteritidis SE05 in vitro | |
| US20200281991A1 (en) | Methods and compositions for treating disorders related to a gut dysbiosis |