RU2815400C2

RU2815400C2 - Комбинированная терапия

Info

Publication number: RU2815400C2
Application number: RU2019134757A
Authority: RU
Inventors: Весселина КУК
Original assignee: Новартис Аг
Priority date: 2017-05-02
Filing date: 2018-04-30
Publication date: 2024-03-14

Abstract

Группа изобретений относится к области медицины, в частности к онкологии, и раскрывает фармацевтическую комбинацию, содержащую соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, где траметиниба сольват представлен в форме диметилсульфоксидного сольвата, для лечения рака, где рак характеризуется мутацией, выбранной из группы, состоящей из мутации BRAF, NRAS, KRAS и их комбинаций, где соединение формулы (I) вводят в дозе от приблизительно 50 до приблизительно 1200 мг в день и траметиниб вводят в дозе от приблизительно 0,125 мг до приблизительно 10 мг в день. Также раскрыто применение соединения, которое представляет собой соединение формулы (I). Техническим результатом группы изобретений является обеспечение терапии для лечения рака и, в частности, опухолей с мутацией KRAS и/или опухолей с мутацией NRAS, которая обеспечивает эффективное и длительное лечение с хорошей переносимостью для пациентов, страдающих раком, в частности опухолями с мутацией KRAS и NRAS-мутантными опухолями. 2 н. и 17 з.п. ф-лы, 21 ил., 7 табл., 6 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей (а) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли или соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) ингибитор MEK, в частности траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват. Данное изобретение также относится к фармацевтической комбинации, содержащей (а) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли или соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Данное изобретение также относится к таким комбинациям для применения в лечении пролиферативного заболевания, в частности рака, вариантам применения таких комбинаций для получения лекарственного препарата для лечения пролиферативного заболевания, в частности рака; способам лечения пролиферативного заболевания, в частности рака, у нуждающегося в этом субъекта, включающим введение указанному субъекту совместно терапевтически эффективного количества указанных комбинаций; применению таких комбинаций для лечения пролиферативного заболевания, в частности рака; фармацевтическим композициям, содержащим такие комбинации, и их коммерческим упаковкам.

Данное изобретение также относится к соединению формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли или соединению формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, для применения в комбинированной терапии с ингибитором MEK, в частности траметинибом, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом. В данном документе также предусматривается ингибитор MEK, в частности траметиниб, или его фармацевтически приемлемая соль или сольват для применения в комбинированной терапии с соединением формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой солью или для применения в комбинированной терапии с соединением формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой солью.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сигнальный путь RAS/RAF/MEK/ERK или MAPK является ключевым сигнальным каскадом, который управляет пролиферацией, дифференцировкой и выживаемостью клеток. Нарушение регуляции этого сигнального пути лежит в основе многих случаев онкогенеза. Этот сигнальный путь активируется внеклеточными сигналами, которые, в свою очередь, индуцируют в малом G–белке RAS замену GDP на GTP. Активированная малая гуанидинтрифосфатаза (GTPаза) RAS способствует активации белков семейства RAF (также называемых в данном документе "Raf") (ARAF, BRAF и CRAF, также известного как RAF1). Активированные белки RAF приводят к фосфорилированию и активации белков MEK1/2, которые впоследствии фосфорилируют и активируют киназы, регулируемые внеклеточным сигналом (ERK). Белки ERK1/2 фосфорилируют ряд различных субстратов, в том числе несколько факторов транскрипции, и регулируют ключевые виды клеточной активности, в том числе пролиферацию, дифференцировку, миграцию, выживаемость и ангиогенез.

Наличие нарушенной передачи сигнала или неуместной активации сигнального пути MAPK было показано во многих типах опухолей, в том числе меланоме, раке легкого и поджелудочной железы, и может возникать посредством нескольких различных механизмов, в том числе активирующих мутаций в RAS и BRAF (гомологе B1 вирусного онкогена мышиной саркомы V–Raf). RAS, который представляет собой суперсемейство GTPаз, включает в себя KRAS (гомолог вирусного онкогена саркомы крысы Кирстена v–Ki–ras2), который представляет собой регулируемый сигнальный белок, который может быть включен (активирован) посредством различных точечных мутаций, которые известны как мутации с приобретением функции. Мутации RAS, в частности мутации с приобретением функции (GOF), были обнаружены в 9–30% всех видов рака, причем мутации KRAS характеризуются наибольшей распространенностью (86%), за которыми следуют NRAS (11%) и более редко встречающиеся HRAS (3%) (Cox AD, et al, Nat Rev Drug Discov 2014;13(11):828–51). Активирующие мутации KRAS также часто обнаруживаются при меланоме (Fedorenko IV, et al, Br J Cancer 2015;112(2):217–26), раке поджелудочной железы (di Magliano MP & Logsdon CD, Gastroenterology 2013;144(6):1220–9), колоректальном раке (Knickelbein K & Zhang L, Genes Dis 2015;2(1):4–12) и раке яичника (Nakayama N, et al, Br J Cancer 2008;99(12):2020–8).

Ингибиторы, нацеленные на находящие ниже по пути передачи сигнала эффекторы RAS, такие как киназы RAF, MEK и ERK, не продемонстрировали значительной клинической активности при опухолях, вызванных RAS. Например, ингибиторы RAF, как например вемурафениб, которые эффективны при BRAF^V600–мутантных меланомах, не эффективны при RAS–мутантных видах рака. Таким образом, в настоящее время нет эффективных способов терапии KRAS–мутантных опухолей и NRAS–мутантных опухолей. В частности, в отличие от BRAF–мутантной меланомы не существует одобренных целенаправленно воздействующих способов терапии для пациентов с NRAS–мутантной меланомой. Недавние данные из испытания ингибитора MEK1/2 продемонстрировали небольшое увеличение выживаемости без прогрессирования, но без улучшения общей выживаемости у этих пациентов (Dummer et al., Lancet Oncol, 18, 435–445, 2017).

Хотя некоторые комбинации ингибиторов MAPK для вертикального ингибирования оказались полезными, не всегда можно предсказать, будет ли какое–либо из различных сочетаний возможных комбинаций иметь клиническую пользу. Например, недавно сообщалось, что комбинация ингибитора MEK кобиметиниба в сочетании с ингибитором ERK1/2 GDC–0994 приводила к перекрывающейся и кумулятивной токсичности, что по мнению авторов может ограничить дальнейшие разработки в отношении этой конкретной комбинации. (Weekes et al. 2017, Abstract CT107:AACR Annual Meeting 2017; April 1–5, 2017 Combinations)

Рак легкого представляет собой распространенный тип рака, который поражает мужчин и женщин по всему миру. NSCLC является наиболее распространенным типом (ориентировочно 85%) рака легкого, причем у примерно 70% из этих пациентов на момент постановки диагноза присутствует поздняя стадия заболевания (стадия IIIB или стадия IV). Приблизительно 30% опухолей NSCLC содержат активирующие мутации KRAS, и эти мутации связаны с устойчивостью к ингибиторам тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста (EGFR TKI) (Pao W, et al, PLoS Med 2005;2(1):e17). На сегодняшний день нет утвержденных целенаправленно воздействующих способов терапии для пациентов, страдающих NSCLC с мутацией KRAS и NSCLC с мутациями BRAF, отличными от V600E.

Меланома представляет собой распространенный тип рака, который поражает мужчин и женщин по всему миру. 50% пациентов с метастатической кожной меланомой имеют активирующую мутацию BRAF, и 20% этих пациентов имеют активирующую мутацию NRAS (Zhang et al, Pigment Cell Melanoma Res 2016; 29:266–283). Мутации NRAS были идентифицированы как независимый прогностический фактор более короткого периода выживаемости после постановки диагноза IV стадии меланомы (Jakob JA et al. (2012), Cancer, Volume 118, Issue 16, Pages 4014–4023).

Таким образом, прямое ингибирование KRAS и NRAS все еще остается проблематичным, и до настоящего времени нет доступных утвержденных целенаправленно воздействующих способов терапии для пациентов с KRAS–мутантными видами рака, как например KRAS–мутантным NSCLC, и NRAS–мутантными видами рака, как например NRAS–мутантной меланомой. Таким образом, существует необходимость в целенаправленно воздействующей терапии, которая является безопасной, хорошо переносимой и/или сопровождается меньшим количеством побочных эффектов, таких как кожная сыпь. Также необходима терапия, которая приводит к долговременным и устойчивым ответам в клинических условиях.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящее время обнаружено, что комбинация ингибитора MEK и селективного ингибитора Raf, такого как соединение формулы (I), как определено в данном документе, который эффективно ингибирует активность как CRAF, так и BRAF, может быть эффективной в блокировании BRAF–мутантных опухолей и онкогенеза, обусловленного мутациями RAS. Было обнаружено, что комбинирование соединения формулы (I) и траметиниба приводит к синергетическому действию в MAPK–мутантных линиях раковых клеток, таких как NRAS–мутантных линиях клеток и KRAS–мутантных линиях клеток. На основании результатов, описанных в данном документе, комбинация ингибитора Raf, в частности ингибитора CRAF и BRAF, такого как соединение формулы (I), с ингибитором MEK, таким как траметиниб, может быть особенно эффективной и менее подверженной развитию устойчивости у пациентов, страдающих RAS–мутантными опухолями.

Комбинация соединения формулы (I) с траметинибом также продемонстрировала повышенный противоопухолевый ответ по сравнению с терапией каждым отдельным средством в ксенотрансплантатных моделях KRAS–мутантных NSСLC, CRC и PDAC человека и в ксенотрансплантатных моделях NRAS–мутантной меланомы человека. Комбинация соединения формулы (II) с траметинибом продемонстрировала повышенную эффективность ответа опухоли по сравнению с терапией каждым отдельным средством в мышиной ксенотрансплантатной модели опухоли поджелудочной железы человека, индуцированной клетками HPAFII. Следовательно, соединение формулы (I) или соединение формулы (II) отдельно и в комбинации с ингибитором MEK может быть полезным в лечении пациентов с видами рака, содержащими изменения сигнального пути MAPK. Такие виды рака включают KRAS–мутантный NSCLC (немелкоклеточный рак легкого), KRAS–мутантный рак поджелудочной железы (например, KRAS–мутантную аденокарциному протоков поджелудочной железы (PDAC)), KRAS–мутантный CRC (колоректальный рак) и NRAS–мутантную меланому.

Таким образом, в настоящем изобретении предусматривается фармацевтическая комбинация, содержащая (а) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) ингибитор MEK, в частности траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват. В настоящем изобретении также предусматривается такая комбинация для применения в лечении пролиферативного заболевания.

Кроме того, в настоящем изобретении предусматривается:

(a) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, для применения в комбинированной терапии с ингибитором MEK, в частности траметинибом, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом; и

(b) ингибитор MEK, в частности траметиниб, или его фармацевтически приемлемая соль или сольват для применения в комбинированной терапии с ингибитором Raf, выбранным из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

Соединение формулы (I) представляет собой соединение со следующей структурой:

(I).

Соединение формулы (II) представляет собой соединение со следующей структурой:

(II).

В настоящем изобретении дополнительно предусматривается фармацевтическая комбинация, содержащая соединение, представляющее собой ингибитор Raf, как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, в частности для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пролиферативного заболевания.

В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая комбинация по настоящему изобретению содержит (а) соединение формулы (I), представляющее собой ингибитор Raf, или его фармацевтически приемлемую соль и (b) траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, в частности его сольват.

В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая комбинация по настоящему изобретению содержит (а) соединение формулы (II), представляющее собой ингибитор Raf, или его фармацевтически приемлемую соль и (b) траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, в частности его сольват.

В частности, настоящее изобретение относится к комбинации по настоящему изобретению для применения в лечении рака, характеризующегося активирующими мутациями в сигнальном пути MAPK и, в частности, одной или несколькими мутациями в RAS (например, KRAS или NRAS) и/или BRAF.

В настоящем изобретении также предусматривается применение комбинации по настоящему изобретению для лечения пролиферативного заболевания, в частности рака. В частности, комбинация по настоящему изобретению может быть полезна для лечения немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), меланомы, аденокарциномы протоков поджелудочной железы (PDAC), рака шейки матки, рака яичника или колоректального рака (CRC).

В настоящем изобретении также предусматривается применение комбинации по настоящему изобретению для получения лекарственного препарата для лечения пролиферативного заболевания, в частности рака.

В настоящем изобретении также предусматривается способ лечения пролиферативного заболевания, включающий одновременное, раздельное или последовательное введение субъекту, нуждающемуся в этом, комбинации по настоящему изобретению в количестве, которое совместно является терапевтически эффективным в отношении указанного пролиферативного заболевания.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции или комбинированному препарату, содержащим количество комбинации по настоящему изобретению, которое совместно является терапевтически эффективным в отношении пролиферативного заболевания, и необязательно по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

В настоящем изобретении также предусматривается комбинированный препарат, содержащий (a) одну или несколько единиц дозирования ингибитора Raf, выбранного из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) одну или несколько единиц дозирования ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, для применения в лечении пролиферативного заболевания.

В настоящем изобретении также предусматривается коммерческая упаковка, содержащая в качестве активных ингредиентов комбинацию по настоящему изобретению и инструкции для одновременного, раздельного или последовательного введения комбинации по настоящему изобретению пациенту, нуждающемуся в этом, для применения в лечении пролиферативного заболевания, предпочтительно немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), меланомы, аденокарциномы протоков поджелудочной железы (PDAC), рака шейки матки, рака яичника или колоректального рака (CRC).

В настоящем изобретении также предусматривается коммерческая упаковка, содержащая ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, и инструкции для одновременного, раздельного или последовательного применения с ингибитором MEK, предпочтительно траметинибом, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, при лечении пролиферативного заболевания.

Ниже дополнительно подробно описаны различные аспекты настоящего изобретения. Дополнительные определения изложены по всему тексту настоящего описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фигуры 1–4. Эффект соединения формулы (I) в ксенотрансплантатных моделях раковой опухоли легкого у мышей, индуцированных клеточными линиями Calu–6 (мутант KRAS(Q61K)) на фигуре 1), NCI–H358 (мутант KRAS(G12C)) на фигуре 2), HLUX1156 (мутант KRAS(G12C)) на фигуре 3) и NCI–H727 (мутант KRAS(G12V)) на фигуре 4). Животных с подкожными ксенотрансплантатами обрабатывали соединением формулы (I), как указано. Соединение вводили перорально (PO) либо один раз в день (qd или QD), два раза в день (bid или BID), либо один раз в два дня (q2d или Q2D), как указано. Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки относительно объема опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли (т. е. объема опухоли после обработки по сравнению с исходным объемом (% регрессии) (обозначен как "% Reg" или "–% Reg" на фигурах 1–4)). SEM=стандартная ошибка среднего, PBS=фосфатно–буферный солевой раствор.

На фигурах 5 и 6 показана эффективность соединения формулы (I) и ингибитора MEK траметиниба, используемых в комбинации, в ксенотрансплантатных моделях опухоли Calu–6 у мышей. Животных с подкожными ксенотрансплантатами Calu–6 обрабатывали соединением формулы (I) и/или траметинибом, как указано. Продемонстрирована как интенсивность (фигура 5), так и продолжительность ответа (фигура 6). Как указано, соединения вводили перорально либо один раз в день (qd), либо один раз в два дня (q2d). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки относительно объема опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигурах 2A–2B).

Фигура 7. Клеточные линии, содержащие различные мутации BRAF или RAS, обрабатывали DMSO, дабрафенибом или соединением формулы (II) в указанных концентрациях в течение 2 часов. Ингибирование фосфорилирования MEK или ERK измеряли с помощью анализа посредством вестерн–блоттинга. Соединение формулы (II) ингибирует онкогенную передачу сигналов и пролиферацию в опухолевых клетках с мутациями BRAF, NRAS или KRAS с минимальной парадоксальной активацией.

Фигура 8. Определяли подавление роста клеточных линий через 5 дней обработки дабрафенибом (верхняя панель) или соединением формулы (II) (нижняя панель).

Фигура 9. Точечные диаграммы значений IC₅₀ для подавления роста в 357 линиях раковых клеток человека соединением формулы (II) или дабрафенибом после 3 дней обработки ингибитором. Пунктирная линия представляет IC₅₀, составляющую 5 мкМ, которую использовали в качестве порога чувствительности клеточных линий к ингибиторам. Количество чувствительных и устойчивых клеточных линий к каждому ингибитору среди BRAF–мутантных, KRAS–мутантных, NRAS–мутантных клеток или клеток дикого типа (WT) указано под графиком. Точный тест Фишера выполняли для определения статистической значимости активности ингибитора в BRAF– или RAS–мутантных клеточных линиях по сравнению с клеточными линиями WT.

Фигура 10. Образцы опухоли собирали в указанные моменты времени после введения однократной дозы среды–носителя или возрастающих доз соединения формулы (II) у животных, несущих опухоль Calu–6, для определения уровней фосфорилированной MEK (pMEK). Уровни pMEK представлены как отношение pMEK/общее количество MEK в группе обработки по сравнению с контролем со средой–носителем в каждый момент времени.

Фигура 11. Подавление роста ксенотрансплантата опухоли Calu–6 измеряли после обработки средой–носителем или соединением формулы (II) при четырех уровнях дозы. Объем опухоли представлен как средний объем опухолей от 6 животных на группу обработки ± стандартная ошибка среднего (SEM). Животные с подкожными ксенотрансплантатами Calu–6 получали обработку соединением формулы (II), как указано. Соединение формулы (II) вводили один раз в день (qd). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки относительно объема опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигуре 11).

Фигура 12. Противоопухолевую активность соединения формулы (II) in vivo оценивали в панели из 23 моделей на основе полученных от пациента ксенотрансплантатов (PDX) NSCLC, представляли в виде % изменения объема опухоли в момент измерения по сравнению с исходным объемом опухоли, причем положительные значения указывают на рост опухоли, а отрицательные значения указывают на регрессию опухоли. Соединение формулы (II) вводили перорально один раз в день в дозе 60 мг/кг или 200 мг/кг (обозначено как ▼). Для каждой опухоли отмечен статус мутации BRAF или RAS. Ответ опухоли на паклитаксел в панели моделей на основе PDX NSCLC был включен для сравнения. GOF=с приобретением функции, WT=дикий тип.

Фигура 13. Оценивали антипролиферативную комбинированную активность соединения формулы (II) и траметиниба в клетках HPAF–II (с мутацией KRAS(G12D)), полученных из поджелудочной железы. Верхняя левая панель: матрица доз, представляющая процент подавления роста относительно DMSO соединением формулы (II), траметинибом и комбинацией после 5 дней обработки. Верхняя правая панель: значения избыточного ингибирования, представляющие отклонение между эффектом комбинации и эффектом аддитивности двух отдельных средств, рассчитанным с использованием модели Loewe. Указан рассчитанный показатель синергии Loewe. Нижняя панель: анализ изоболограммы данных матрицы доз, темно–серая линия представляет точки данных, а светло–серая линия обозначает аддитивность. Указан рассчитанный показатель аддитивности Loewe (CI) при 50% подавлении роста.

Фигура 14. Активность соединения формулы (II) и траметиниба in vivo в качестве отдельных средств или в комбинации в модели на основе ксенотрансплантата HPAF–II. Ингибирование передачи сигнала после однократной дозы обработки, измеренное по уровням mRNA DUSP6 (фосфатазы 6 с двойной специфичностью). Кроме того, эффективную дозировку можно определить с помощью отслеживания биомаркеров, указывающих на ингибирование сигнального пути MAP–киназы. В частности, DUSP6 является известным биомаркером для этого сигнального пути, и было показано, что in vivo уровни DUSP6 снижаются в ответ на соединение формулы (II), что связано с эффективными уровнями соединения формулы (II) в плазме.

Уровни DUSP6 представлены как процентное изменение по сравнению с группой со средой–носителем после нормализации по контрольному гену RPLPO.

Фигура 15. Активность соединения формулы (II) и траметиниба in vivo в качестве отдельных средств или в комбинации в модели на основе ксенотрансплантата HPAF–II. Рост опухоли in vivo после десяти дней обработки, как указано. Соединение вводили один раз в день (qd). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигуре 15).

Фигура 16. A. Активность соединения формулы (I) (соединение I на фигуре) и траметиниба in vivo в качестве отдельных средств или в комбинации в модели на основе ксенотрансплантата HCT116. Рост опухоли in vivo после семнадцати дней лечения, как указано. Соединения вводили один раз в день (qd) или один раз в два дня (q2d). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигуре 16).

Фигура 17. A. Активность соединения формулы (I) (соединение I на фигуре) и траметиниба in vivo в качестве отдельных средств или в комбинации в модели на основе ксенотрансплантата 2043. Рост опухоли in vivo после 21 дня обработки, как указано. Соединения вводили один раз в день (qd) или один раз в два дня (q2d). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигуре 17).

Фигура 18. A. Активность соединения формулы (I) (соединение I на фигуре) и траметиниба in vivo в качестве отдельных средств или в комбинации в модели на основе ксенотрансплантата SKMEL30. Рост опухоли in vivo после 22 дней обработки, как указано. Соединения вводили один раз в день (qd) или два раза в день (bid). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигуре 18).

Фигура 19. A. Активность соединения формулы (I) (соединение I на фигуре) и траметиниба in vivo в качестве отдельных средств или в комбинации в модели на основе ксенотрансплантата 20667. Рост опухоли in vivo после 17 дней обработки (отдельными средствами) и 31 дня комбинированного лечения, как указано. Соединения вводили один раз в день (qd) или два раза в день (bid). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), в день 34 для отдельных средств или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигуре 19) в день 48 для комбинации.

Фигура 20. A. Активность соединения формулы (I) (соединение I на фигуре) и траметиниба in vivo в качестве отдельных средств или в комбинации в модели на основе ксенотрансплантата 21124. Рост опухоли in vivo после 21 дня обработки, как указано. Соединения вводили один раз в день (qd) или два раза в день (bid). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигуре 20).

Фигура 21. A. Активность соединения формулы (I) (соединение I на фигуре) и траметиниба in vivo в качестве отдельных средств или в комбинации в модели на основе ксенотрансплантата 20864. Рост опухоли in vivo после 14 дней обработки (отдельными средствами) и 36 дней комбинированного лечения, как указано. Соединения вводили один раз в день (qd) или два раза в день (bid). Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), в день 33 для отдельных средств или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии, обозначенный как "% Reg" на фигуре 21) в день 55 для комбинации.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей (a) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) ингибитор MEK, в частности, для применения в лечении пролиферативного заболевания.

Используемый в данном документе термин "ингибитор Raf" относится к аденозинтрифосфат(АТФ)–конкурентному ингибитору протеинкиназы B–Raf (также называемой в данном документе b–RAF, BRAF или b–Raf) и протеинкиназы C–Raf (также называемой в данном документе c–RAF, CRAF или c–Raf), который избирательно воздействует целенаправленным образом, снижает или ингибирует по меньшей мере одну активность сериновой/треониновой протеинкиназы B–Raf или C–Raf. Ингибитор Raf преимущественно ингибирует как мономеры Raf, так и димеры Raf.

Используемый в данном документе ингибитор Raf выбран из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

Соединение формулы (I) имеет следующую структуру:

(I).

Для удобства группу соединения и его солей в совокупности называют "соединение формулы (I)" или "соединение (I)", что означает, что ссылка на "соединение формулы (I)" или "соединение (I)" будет относиться к любому из соединения или его фармацевтически приемлемой соли в качестве альтернативы.

Соединение формулы (I), представляющее собой ингибитор Raf, и его фармацевтически приемлемые соли описаны в WO 2014/151616, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, и способы его получения описаны, например, в примере 1156, приведенном в ней.

Соединение формулы (II) имеет следующую структуру:

(II).

Для удобства группу соединения и его солей в совокупности называют "соединение формулы (II)" или "соединение (II)", что означает, что ссылка на "соединение формулы (II)" или "соединение (II)" будет относиться к любому из соединения или его фармацевтически приемлемой соли в качестве альтернативы.

Соединение формулы (II), представляющее собой ингибитор Raf, и его фармацевтически приемлемые соли описаны в WO 2014/151616, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, и способы его получения описаны, например, в примере 131, приведенном в ней.

В клеточных анализах соединение формулы (I) и соединение формулы (II), представляющие собой ингибиторы Raf, демонстрировали антипролиферативную активность в клеточных линиях, которые содержат ряд мутаций, активирующих передачу сигнала MAPK. In vivo обработка соединением формулы (I) или соединением формулы (II) приводила к регрессии опухоли в нескольких KRAS–мутантных моделях, в том числе полученных из NSCLC Calu–6 (KRAS Q61K) и NCI–H358 (KRAS G12C). В совокупности, подавление сигнального пути MAPК и антипролиферативная активность in vitro и in vivo, наблюдаемые для соединения формулы (I) или соединения формулы (II) в хорошо переносимых дозах, дают основания предполагать, что соединение формулы (I) или соединение формулы (II) может характеризоваться противоопухолевой активностью у пациентов с опухолями, содержащими активирующие нарушения в сигнальном пути MAPK. Кроме того, соединение формулы (I) и соединение формулы (II) представляют собой АТФ–конкурентный ингибитор типа 2 как для B–Raf, так и C–Raf, который удерживает карман киназы в неактивной конформации, уменьшая тем самым парадоксальную активацию, наблюдаемую при использовании многих ингибиторов B–Raf, и блокируя управляемую мутантным Ras передачу сигналов и пролиферацию клеток. Соединение формулы (I) и соединение формулы (II) продемонстрировали эффективность в многочисленных линиях клеток рака человека, обусловленного MAPK, и в ксенотрансплантатных опухолях, представляющих модельные опухоли, несущие возникшие у человека повреждения в онкогенах KRAS, NRAS и BRAF.

Фармацевтические комбинации по настоящему изобретению дополнительно содержат ингибитор MEK. Термин "ингибитор MEK" определен в данном документе как обозначающий соединение, которое целенаправленно воздействует на, уменьшает или ингибирует по меньшей мере одну активность MAP/ERK–киназ 1 и 2 (MEK1/2).

Подходящие ингибиторы MEK для применения в комбинации по настоящему изобретению включают без ограничения:

а) траметиниб (N–(3–{3–циклопропил–5–[(2–фтор–4–йодфенил)амино]–6,8–диметил–2,4,7–триоксо–3,4,6,7–тетрагидропиридо[4,3–d]пиримидин–1(2H)–ил}фенил)ацетамид), также называемый JPT–74057 или GSK1120212, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват. Траметиниб раскрыт в примере 4–1 в публикации согласно РСТ № WO 2005/121142, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В качестве монотерапии траметиниб был одобрен для лечения неоперабельной или метастатической злокачественной меланомы с мутациями B–Raf V600E или V600K, и это соединение является доступным для приобретения от Novartis AG под торговым названием Mekinist®.

b) PD0325901 (Pfizer) (раскрыто в публикации РСТ согласно № WO 02/06213); PD184352 (Pfizer); рефаметиниб (также называемый RDEA119 или Bay 86–9766); кобиметиниб, также называемый XL518 и доступный для приобретения от Roche под торговым названием Cotellic®; AS–701255 (Merck Serono); AS–701173 (Merck Serono); пимасертиб, также называемый AS–703026 или MSC1936369B (Merck Serono); RDEA436 (Ardea Biosciences); RO4987655, также называемый RG 7167 (Roche), и/или RG7420, также называемый GDC–0623 (Roche), или их фармацевтически приемлемую соль.

Предпочтительно ингибитор MEK представляет собой траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления траметиниб представлен в форме диметилсульфоксидного сольвата. В некоторых вариантах осуществления траметиниб представлен в форме натриевой соли. Соответственно, траметиниб представлен в форме сольвата, выбранного из гидрата, уксусной кислоты, этанола, нитрометана, хлорбензола, 1–пентанола, изопропилового спирта, этиленгликоля и 3–метил–1–бутанола. Эти сольваты и солевые формы могут быть получены специалистом в данной области исходя из описания, приведенного в WO 2005/121142.

Настоящее изобретение дополнительно относится к фармацевтической комбинации, содержащей (a) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) ингибитор MEK, в частности, для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пролиферативного заболевания.

Выбранные термины определены ниже и по всему тексту данной заявке. Соединения по настоящему изобретению описаны с использованием стандартной номенклатуры. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понятно специалисту в данной области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Следующие общие определения применяются в данной спецификации, если не указано иное.

Используемый в данном документе термин "комбинация по настоящему изобретению" относится к комбинированному введению, предусматривающему (a) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват. Соединение формулы (I), представляющее собой ингибитор Raf, или его фармацевтически приемлемая соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемая соль или сольват, или соединение формулы (II), представляющее собой ингибитор Raf, или его фармацевтически приемлемая соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемая соль или сольват можно применять в комбинации в соответствии с настоящим изобретением путем одновременного введения в единой фармацевтической композиции, включающей оба соединения. В качестве альтернативы комбинацию можно вводить раздельно в отдельных фармацевтических композициях, каждая из которых включает один из ингибиторов Raf и ингибитор MEK, последовательным образом, где, например, сначала вводят ингибитор Raf или ингибитор MEK, а затем второй из них. Такое последовательное введение может быть близким по времени (например, одновременно) или отдаленным по времени.

Используемые в данном документе термины в форме единственного числа и подобные ссылки в контексте описания настоящего изобретения следует истолковывать с охватом как формы единственного числа, так и формы множественного числа, если в данном документе не указано иное или нет явного противоречия по контексту. Когда форма множественного числа используется для соединений, солей и т. п., это также означает одно соединение, соль или т. п.

Термин "или" используется в данном документе для обозначения и используется взаимозаменяемо с термином "и/или", если контекст явно не указывает на иное.

Термины "приблизительно" и "примерно" будут обычно означать приемлемую степень погрешности для измеряемого количества с учетом природы или точности измерений. Иллюстративные значения степени погрешности находятся в пределах 20 процентов (%), как правило, в пределах 10%, и в большинстве случаев в пределах 5% от заданного значения или диапазона значений. При описании в данном документе дозировки в виде "приблизительно"определенного количества фактическая дозировка может варьировать на величину до 10% от заявленного количества: такое использование термина "приблизительно" принимает во внимание, что точное количество в данной лекарственной форме может немного отличаться от предполагаемого количества по различным причинам без существенного влияния на эффект in vivo вводимого соединения.

При описании в данном документе дозировки в виде определенного количества, т. е. без термина "приблизительно", фактическая дозировка может варьировать на величину до 10% (предпочтительно на величину до 5%) от заявленного количества: такое использование принимает во внимание, что точное количество в данной лекарственной форме может немного отличаться от предполагаемого количества по различным причинам без существенного влияния на эффект in vivo вводимого соединения.

Термины "содержащий" и "включающий" используются в данном документе в открытом и неограничивающем смысле, если не указано иное.

Термины "комбинация" или "в комбинации с" не предназначены для обозначения того, что терапия или терапевтические средства должны быть физически смешаны или введены в одно и то же время и/или составлены для доставки вместе, хотя эти способы доставки находятся в пределах объема, описанного в данном документе. Терапевтическое средство в этих комбинациях можно вводить одновременно с одним или несколькими дополнительными видами терапии или терапевтическими средствами, до или после них. Терапевтические средства можно вводить в любом порядке. Как правило, каждое средство будет вводиться в дозе и/или по временному графику, которые определены для данного средства. Также следует понимать, что дополнительное терапевтическое средство, применяемое в данной комбинации, можно вводить совместно в одной композиции или вводить по отдельности в разных композициях. В целом, ожидается, что дополнительные терапевтические средства, применяемые в комбинации, будут применяться при уровнях, которые не превышают уровни, при которых они применяются по отдельности. В некоторых вариантах осуществления уровни, используемые в комбинации, будут ниже уровней, применяемых в отношении лекарственных препаратов для монотерапии.

Комбинации по настоящему изобретению имеют терапевтические или защитные функции или и то и другое. Например, эти молекулы можно вводить субъекту–человеку для лечения и/или предупреждения различных нарушений, таких как виды рака, как описано в данном документе.

Используемые в данном документе термины "комбинация", "терапевтическая комбинация" или "фармацевтическая комбинация" относятся либо к фиксированной комбинации в одной единичной дозированной форме, либо к нефиксированной комбинации, либо набору из частей для комбинированного введения, где два или более терапевтических средства можно вводить вместе, независимо в одно и то же время или по отдельности в пределах временных интервалов, в частности, когда такие временные интервалы обеспечивают возможность демонстрации кооперативного, например синергетического, эффекта партнеров по комбинации.

Термин "комбинированная терапия" относится к введению двух или более терапевтических средств для лечения терапевтического состояния или нарушения, описанного в настоящем изобретении. Такое введение охватывает совместное введение этих терапевтических средств по сути одновременно, например, в едином составе, имеющем фиксированное соотношение активных ингредиентов, или в отдельных составах (например, капсулах и/или внутривенных составах) для каждого активного ингредиента. Кроме того, такое введение также охватывает применение каждого типа терапевтического средства последовательно или раздельно либо приблизительно в одно и то же время, либо в разное время. Независимо от того, вводят ли активные ингредиенты в виде единого состава или в отдельных составах, лекарственные средства вводят одному и тому же пациенту в рамках одного и того же курса терапии. В любом случае схема лечения будет обеспечивать полезные эффекты при лечении состояний или нарушений, описанных в данном документе.

Под одновременным терапевтическим применением, как это определено в настоящем изобретении, подразумевается введение по меньшей мере двух активных ингредиентов одним и тем же путем и в одно и то же время или по сути в одно и то же время.

Под раздельным применением, как это определено в настоящем изобретении, подразумевается, в частности, введение по меньшей мере двух активных ингредиентов в одно и то же время или по сути в одно и то же время посредством разных путей.

Под последовательным терапевтическим применением подразумевается введение по меньшей мере двух активных ингредиентов в разное время, причем путь введения является одинаковым или различным. Более конкретно, под способом введения подразумевается, что полное введение одного из активных ингредиентов осуществляется до начала введения другого или других.

Используемые в данном документе термины "фиксированная комбинация", "фиксированная доза" и "единый состав" относятся к одному носителю или среде–носителю или лекарственной форме, составленной для доставки пациенту такого количества обоих терапевтических средств, которое совместно терапевтически эффективно в лечении рака. Одна среда–носитель предназначена для доставки количества каждого из средств вместе с любыми фармацевтически приемлемыми носителями или вспомогательными веществами. В некоторых вариантах осуществления среда–носитель представляет собой таблетку, капсулу, пилюлю или пластырь. В других вариантах осуществления среда–носитель представляет собой раствор или суспензию.

Термин "нефиксированная комбинация" или "набор частей" означает, что оба терапевтических средства комбинации по настоящему изобретению вводят пациенту в качестве отдельных объектов либо одновременно, параллельно, либо последовательно без конкретных сроков, при этом такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни двух соединений в организме субъекта, нуждающегося в этом. Последнее также применяется в отношении "коктейльной терапии", например к введению трех или более активных ингредиентов.

Используемая в данном документе фраза "фармацевтически приемлемый" относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые с медицинской точки зрения являются подходящими для контакта с тканями субъекта, например млекопитающего или человека, без избыточной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений в соответствии с разумным соотношением польза/риск.

Используемый в данном документе термин "фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество" или "фармацевтически приемлемый носитель" включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, поверхностно–активные вещества, антиоксиданты, консерванты (например, антибактериальные средства, противогрибковые средства), средства для обеспечения изотоничности, замедляющие абсорбцию средства, соли, консерванты, лекарственные средства, стабилизаторы лекарственных средств, связующие средства, вспомогательные вещества, разрыхляющие средства, смазывающие вещества, подслащивающие средства, ароматизирующие средства, красители и т. п. и их комбинации, которые будут известны специалистам в данной области техники. За исключением случаев, когда любой традиционный носитель является несовместимым с активным ингредиентом, предполагается его применение в терапевтических или фармацевтических композициях.

Термин "фармацевтическая композиция" определяется в данном документе для обозначения смеси или раствора, содержащих по меньшей мере одно терапевтическое средство, подлежащие введению субъекту, например млекопитающему или человеку, для того, чтобы лечить конкретное заболевание или состояние, поражающее субъекта. Фармацевтические комбинации по настоящему изобретению могут быть составлены в подходящие фармацевтические композиции для энтерального или парентерального введения, такие как таблетки, покрытые сахаром, таблетки, капсулы, или суппозитории, или ампулы. Если не указано иное, их получают известным способом per se, например, с помощью различных традиционных способов смешивания, измельчения, прямого прессования, гранулирования, нанесения сахарного покрытия, растворения, лиофилизации или методик изготовления, которые очевидны для специалистов в данной области техники. Следует понимать, что содержание отдельно партнера по комбинации, содержащегося в отдельной дозе каждой лекарственной формы, само по себе не должно составлять эффективное количество, поскольку необходимое эффективное количество может быть достигнуто путем введения множества однократных доз. Фармацевтическая композиция может содержать от приблизительно 0,1% до приблизительно 99,9%, предпочтительно от приблизительно 1% до приблизительно 60%, терапевтического(терапевтических) средства(средств). Специалист обычной квалификации в данной области техники может выбрать один или несколько из вышеуказанных носителей в отношении конкретных требуемых свойств лекарственной формы путем рутинных экспериментов и без излишних затруднений. Количество каждого из использованных носителей может варьировать в пределах традиционных диапазонов в данной области техники. Следующие ссылки раскрывают методики и вспомогательные вещества, использованные для составления пероральных лекарственных форм. The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th edition, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003) и Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2003). Эти необязательные дополнительные традиционные носители могут быть включены в пероральную лекарственную форму либо путем включения одного или нескольких традиционных носителей в изначальную смесь перед грануляцией или в ходе нее, либо путем комбинирования одного или нескольких традиционных носителей с гранулами, содержащими комбинацию средств или отдельные средства комбинации средств в пероральной лекарственной форме. В последнем варианте осуществления комбинированная смесь может быть дополнительно смешана, например с помощью V–образного смесителя, и впоследствии спрессована или сформована в таблетку, например монолитную таблетку, заключена в капсулу или заполнена в саше.

Фармацевтические композиции могут быть представлены в виде форм со стандартной дозой, содержащих заранее определенное количество активного ингредиента на стандартную дозу. В определенных вариантах осуществления стандартная доза включает одну или несколько сред–носителей, так что каждая среда–носитель включает эффективное количество по меньшей мере одного из терапевтических средств наряду с фармацевтически приемлемыми носителями и вспомогательными веществами. В некоторых вариантах осуществления стандартная доза представляет собой одну или несколько таблеток, капсул, пилюль, инъекций, инфузий, пластырей или т. п., вводимых пациенту одновременно. Как известно специалистам в данной области, количество ингредиента на дозу будет зависеть от состояния, подлежащего лечению, пути введения и возраста, веса и состояния пациента. Предпочтительными композициями с однократной дозировкой являются композиции, содержащие суточную дозу, или субдозу, или подходящую часть дозы активного ингредиента. Кроме того, такие фармацевтические композиции могут быть получены при помощи любого из способов, хорошо известных в области фармации.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут включать "терапевтически эффективное количество" или "эффективное количество" соединения по настоящему изобретению. Термин "фармацевтически эффективное количество", "терапевтически эффективное количество" или "клинически эффективное количество" комбинации терапевтических средств обозначает количество, достаточное в дозировках и в течение необходимых периодов времени, чтобы обеспечить наблюдаемое или клинически значимое улучшение по отношению к исходным уровням клинически наблюдаемых признаков и симптомов нарушений, лечение которых осуществляют с помощью комбинации. Терапевтически эффективное количество может варьировать в зависимости от таких факторов, как стадия заболевания, возраст, пол и вес индивидуума. Терапевтически эффективное количество также представляет собой такое, при котором благоприятные эффекты превосходят любые токсичные или вредные эффекты терапевтических средств. "Терапевтически эффективная дозировка" предпочтительно модулирует измеряемый параметр, такой как скорость роста опухоли или прогрессирование заболевания, желаемым образом. Способность соединения модулировать измеряемый параметр можно оценить на модельной системе животного, прогнозирующей эффективность в опухолях человека, для содействия установлению подходящих уровней и схем дозирования. В качестве альтернативы это свойство композиции можно оценить путем изучения способности соединения модулировать нежелательный параметр с использованием анализов in vitro, известных специалисту–практику.

Используемый в данном документе термин "совместно терапевтически активный" или "совокупный терапевтический эффект" означает, что терапевтические средства можно вводить совместно, раздельно или последовательно с такими временными промежутками, которые предпочтительны, так чтобы субъект, особенно человек, подлежащий лечению, все еще демонстрировал (предпочтительно синергетическое) взаимодействие (совокупный терапевтический эффект). Случай такого взаимодействия можно определить, inter alia, по последующим уровням соединений в крови, демонстрирующим, что оба соединения присутствуют в крови человека, подлежащего лечению, по меньшей мере в течение определенных промежутков времени.

Используемый в данном документе термин "средство" означает вещество, которое оказывает желаемый эффект на ткань, систему, животное, млекопитающее, человека или другого субъекта. Также следует понимать, что "средство" может представлять собой одно соединение или комбинацию или композицию из двух или более соединений.

Термин "пролиферативное заболевание" предпочтительно представляет собой рак.

Используемый в данном документе термин "рак" относится к заболеванию, которое характеризуется нежелательным и неконтролируемым ростом аберрантных клеток. Раковые клетки могут распространяться локально или через кровоток и лимфатическую систему в другие части организма. Используемые в данном документе термины "рак" или "опухоль" включают предраковые, а также злокачественные виды рака и опухолей. Термин "рак" используется в данном документе для обозначения широкого спектра опухолей, включая все солидные и гематологические злокачественные новообразования.

"Пероральная лекарственная форма" включает стандартную лекарственную форму, предписанную или предназначенную для перорального введения.

Используемые в данном документе термины "лечить", "лечение" и "осуществление лечения" относятся к уменьшению или ослаблению прогрессирования, тяжести и/или длительности нарушения, например пролиферативного нарушения, или ослаблению одного или нескольких симптомов, предпочтительно одного или нескольких явных симптомов, нарушения в результате введения одного или нескольких средств терапии. В конкретных вариантах осуществления термины "лечить", "лечение" и "осуществление лечения" относятся к ослаблению по меньшей мере одного измеряемого физического параметра пролиферативного нарушения, такого как рост опухоли, необязательно являющегося явным для пациента. В других вариантах осуществления термины "лечить", "лечение" и "осуществление лечения" относятся к подавлению прогрессирования пролиферативного нарушения либо физически, например посредством стабилизации явного симптома, либо физиологически, например путем стабилизации физического параметра, либо с помощью и того и другого. В других вариантах осуществления термины "лечить", "лечение" и "осуществление лечения" относятся к уменьшению или стабилизации размера опухоли или количества злокачественных клеток.

В пределах значения настоящего изобретения термин "лечить" также обозначает приостановку, задержку наступления (т. е. периода до клинического проявления заболевания) и/или снижение риска развития или обострения заболевания. Термин "защита" используется в данном документе для обозначения осуществления предупреждения, задержки или лечения, или всего перечисленного, в соответствии с необходимостью, в отношении развития, или течения, или обострения заболевания у субъекта, например млекопитающего или человека.

Термин "субъект" или "пациент", используемый в данном документе, включает животных, которые могут быть подвержены раку или любому нарушению, прямо или опосредовано связанному с раком, или страдать от него. Примеры субъектов включают млекопитающих, например людей, человекообразных обезьян, нечеловекообразных обезьян, собак, коров, лошадей, свиней, овец, коз, кошек, мышей, кроликов, крыс и трансгенных животных, отличных от человека. В предпочтительном варианте осуществления субъектом является человек, например человек, страдающий пролиферативным заболеванием, с риском развития пролиферативного заболевания, или потенциально способный страдать пролиферативным заболеванием, таким как рак.

Термины "ингибирование", "ингибитор" или "антагонист" включают снижение определенного параметра, например активности данной молекулы или сигнального пути. Например, данный термин включает ингибирование активности целевой киназы (Raf или MEK) на 5%, 10%, 20%, 30%, 40% или больше. Таким образом, ингибирование может, но не обязательно должно составлять 100%.

Используемые в данном документе "соли" (которые подразумеваются во фразе "или его соли" или "или его соль") могут присутствовать отдельно или в смеси со свободными соединениями из комбинации по настоящему изобретению, например соединением формулы (I), представляющим собой ингибитор Raf, или соединением формулы (II), представляющим собой ингибитор Raf, или ингибитором MEK, предпочтительно траметинибом, и предпочтительно представляют собой фармацевтически приемлемые соли. Такие соли образованы, например, в виде солей присоединения кислоты, предпочтительно с органическими или неорганическими кислотами, из соединений комбинации по настоящему изобретению с основным атомом азота, особенно фармацевтически приемлемых солей. Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединения, и которые, как правило, не являются биологически или иным образом нежелательными. Соединение может быть способно образовывать соли присоединения кислоты в силу присутствия аминогруппы.

Перечни подходящих солей можно найти, например, в "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985) и в "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley–VCH, Вайнхайм, Германия, 2002).

Для целей выделения или очистки также можно использовать фармацевтически неприемлемые соли, например, пикраты или перхлораты. Для терапевтического применения используются только фармацевтически приемлемые соли или свободные соединения (при необходимости в форме фармацевтических препаратов), и они, таким образом, являются предпочтительными. Ввиду тесной взаимосвязи между новыми соединениями в свободной форме и соединениями в форме их солей, включая те соли, которые могут быть использованы в качестве промежуточных соединений, например, при очистке или идентификации новых соединений, любую ссылку на свободные соединения следует понимать как относящуюся также к соответствующим солям, если это уместно и целесообразно. Соли соединений, используемых в комбинации по настоящему изобретению, предпочтительно представляют собой фармацевтически приемлемые соли; подходящие противоионы, образующие фармацевтически приемлемые соли, известны в данной области. Если не указано иное или явно не указано в тексте, ссылка на терапевтические средства, применимые в фармацевтической комбинации, предусмотренной в данном документе, включает как свободное основание соединений, так и все фармацевтически приемлемые соли соединений.

Используемый в данном документе термин "сольват" относится к комплексу с переменной стехиометрией, образованному растворенным веществом (в случае данного изобретения траметинибом) или его солью и растворителем. Такие растворители для целей настоящего изобретения не могут влиять на биологическую активность растворенного вещества. Примеры подходящих растворителей включают без ограничения воду, метанол, диметилсульфоксид, этанол и уксусную кислоту. Примеры подходящих фармацевтически приемлемых растворителей включают без ограничения воду, этанол и уксусную кислоту.

Используемый в данном документе термин "синергетический эффект" относится к действию двух средств, таких как, например, соединение формулы (I), представляющее собой ингибитор Raf, или его фармацевтически приемлемая соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемая соль или соединение формулы (II), представляющее собой ингибитор Raf, или его фармацевтически приемлемая соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемая соль, с получением эффекта, например, замедления симптоматического прогрессирования рака или его симптомов, который больше, чем простое суммирование эффектов каждого лекарственного средства, вводимого отдельно.

В одном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретению содержит (a) соединение, представляющее собой ингибитор Raf, выбранное из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I),

(I),

или его фармацевтически приемлемой соли и

(ii) соединения формулы (II),

(II),

или его фармацевтически приемлемой соли и (b) ингибитора MEK.

В одном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретению содержит (a) соединение формулы (I), представляющее собой ингибитор Raf,

(I),

или его фармацевтически приемлемую соль и (b) ингибитор MEK.

В одном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретению содержит (a) соединение формулы (II), представляющее собой ингибитор Raf,

(II),

(I),

или его фармацевтически приемлемую соль и (b) ингибитор MEK, выбранный из группы, включающей траметиниб, PD0325901, PD184352, рефаметиниб, кобиметиниб, AS–701255, AS–701173, пимасертиб, RDEA436, RO4987655, RG 7167 и RG7420 или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

(II),

В предпочтительном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретению содержит (a) соединение, представляющее собой ингибитор Raf, выбранное из группы, состоящей из

(i) соединения формулы (I),

(I),

или его фармацевтически приемлемой соли и

(ii) соединения формулы (II),

(II),

или его фармацевтически приемлемой соли и (b) ингибитора MEK траметиниба или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

В крайне предпочтительном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретению содержит (a) соединение формулы (I), представляющее собой ингибитор Raf,

(I),

или его фармацевтически приемлемую соль и (b) ингибитор MEK траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват (например диметилсульфоксидный сольват).

В другом предпочтительном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретению содержит (a) соединение формулы (II), представляющее собой ингибитор Raf,

(II),

или его фармацевтически приемлемую соль и (b) ингибитор MEK траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Комбинации по настоящему изобретению продемонстрировали повышенную интенсивность и продолжительность опухолевого ответа по сравнению с терапией каждым отдельным средством на клеточных линиях и моделях человеческого ксенотрансплантата на основе Calu–6 (см. примеры), и, следовательно, могут быть эффективными при лечении пролиферативного заболевания, в частности рака. Соответственно, в настоящем изобретении предусматриваются композиции и способы с применением ингибитора Raf, выбранного из группы, состоящей из соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, в комбинации с ингибитором MEK, и в частности с траметинибом, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, для лечения солидных опухолей, в частности опухолей, которые содержат одно или несколько нарушений сигнального пути MAPK, например BRAF–мутантных, KRAS–мутантных и NRAS–мутантных форм рака.

Предпочтительно эти терапевтические средства вводят в терапевтически эффективных дозах, которые в комбинации обеспечивают полезный эффект. Настоящее изобретение, в частности, относится к комбинации по настоящему изобретению, применимой для раздельного, одновременного или последовательного введения субъекту, нуждающемуся в этом, для лечения пролиферативного заболевания. В качестве альтернативы указано, что настоящее изобретение, в частности, относится к комбинации по настоящему изобретению для применения в лечении пролиферативного заболевания.

Природа пролиферативного заболевания является многофакторной. При определенных обстоятельствах можно комбинировать терапевтические средства с различными механизмами действия. Однако простое рассмотрение любой комбинации терапевтических средств, отличающихся способом действия, не обязательно приводит к комбинациям с выгодными эффектами.

В настоящем изобретении ожидается, что введение комбинации по настоящему изобретению приведет к более благоприятному эффекту, например синергетическому или улучшенному антипролиферативному эффекту, например, в отношении задержки прогрессирования или ингибирования пролиферативного заболевания или его симптомов, а также, возможно, к дополнительным полезным эффектам, например меньшему количеству побочных эффектов, например, улучшению качества жизни или, например, снижению заболеваемости по сравнению с монотерапией отдельными средствами.

Терапевтические средства комбинации по настоящему изобретению можно раздельно, одновременно или последовательно вводить субъекту, нуждающемуся в этом. Предпочтительно эти терапевтические средства вводят в терапевтически эффективных дозах, которые в комбинации обеспечивают полезный эффект. Таким образом, в одном варианте осуществления настоящего изобретения комбинация по настоящему изобретению предназначена для применения в лечении пролиферативного заболевания, в частности рака.

В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой рак. Термин "рак" используется в данном документе для обозначения широкого спектра опухолей, включая все солидные и гематологические злокачественные новообразования. Рак может быть на ранней, промежуточной или поздней стадии. Рак может быть местнораспространенным или метастатическим.

Рак, подлежащий лечению при помощи комбинированной терапии, описанной в данном документе, мог подвергнуться прогрессированию после стандартного лечения, или для него не существует эффективной стандартной терапии.

Рак, подлежащий лечению с помощью описанных в данном документе комбинаций, может больше не отвечать на лечение ингибиторами BRAF, такими как вемурафениб, дабрафениб, и/или ингибиторами MEK, такими как кобиметиниб и траметиниб. Например, рак может представлять собой меланому, например BRAFV600–мутантную меланому (в том числе BRAFV600E–мутантную), которая невосприимчива к лечению комбинацией дабрафениба и траметиниба или которая невосприимчива к лечению комбинацией кобиметиниба и вемурафениба. NSCLC, например BRAFV600–мутантный NSCLC (в том числе BRAFV600E–мутантный), подлежащий лечению с помощью описанных в данном документе комбинаций, может быть невосприимчивым к лечению комбинацией ингибиторов BRAF, как например дабрафениб, и ингибиторов MEK, как например траметиниб.

В одном варианте осуществления рак выбран из группы, включающей меланому, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), колоректальный рак (CRC), включая MUTYH–ассоциированный полипоз (MAP), аденокарциному протоков поджелудочной железы (PADC), рак шейки матки и рак яичника.

В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой немелкоклеточный рак легкого (NSCLC).

В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой меланому.

В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой колоректальный рак (CRC), в том числе MUTYH–ассоциированный полипоз (MAP).

В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой аденокарциному протоков поджелудочной железы (PADC).

В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой рак шейки матки.

В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой рак яичника.

Комбинация по настоящему изобретению особенно применима для лечения пролиферативного заболевания, такого как рак, который содержит одно или несколько нарушений сигнального пути активируемой митогеном протеинкиназы (MAPK), как например KRAS–мутантные опухоли и NRAS–мутантные опухоли, и в частности опухоли, экспрессирующие по меньшей мере одну мутацию Ras с приобретением функции, как описано в данном документе, и/или по меньшей мере одну мутацию Raf с приобретением функции, как описано в данном документе.

Включены раковые заболевания или опухоли, имеющие мутации BRAF, в том числе V600D, V600E, V600K и другие, например NSCLC, имеющий по меньшей мере одну мутацию V600E или другую мутацию BRAF, являющуюся либо типичной, либо нетипичной, т. е. BRAFV600E–мутантный NSCLC или отличный от BRAFV600E–мутантного BRAF–мутантный NSCLC. Большинство мутаций BRAF сконцентрированы в двух областях: богатой глицином P–петле N–доли, а также сегменте активации и фланкирующих областях. Мутация V600E была выявлена при многих видах рака и обусловлена заменой тимина аденином в нуклеотиде 1799. Это приводит к тому, что валин (V) замещается глутаматом (E) в кодоне 600 (теперь называемом V600E). BRAF–мутантная меланома включает BRAFV600E–мутантную меланому и BRAFV600D–мутантную меланому.

Включены KRAS–мутантные виды рака или опухоли. Термин "KRAS–мутантная" опухоль или рак включает любую опухоль, которая характеризуется мутировавшим белком KRAS, в частности мутацией KRAS с приобретением функции; в особенности, любой KRAS–мутант G12X, G13X, Q61X или A146X, где X представляет собой любую аминокислоту, отличную от той, которая встречается в природе в этом в этом положении. Например, мутация G12V означает, что глицин замещен валином в кодоне 12. Примеры мутаций KRAS в опухолях включают Q61H, Q61K, G12V, G12C, G12D, G12R, G12S, G13D и A146T. Таким образом, KRAS–мутантный NSCLC включает опухоли, имеющие по меньшей мере одну мутацию KRAS, соответствующую G12X, G13X, Q61X или A146X, в частности NSCLC с по меньшей мере одной мутацией KRAS, выбранной из Q61K, G12V, G12C и A146T. Рак может быть на ранней, промежуточной или поздней стадии.

KRAS–мутантные виды рака включают рак яичника с мутацией KRAS G12D; колоректальный рак с мутацией KRAS G12V или G13D; NSCLC с мутацией KRAS Q61H, KRAS Q61K, KRAS G12C, KRAS G12S или KRAS G12V; рак поджелудочной железы с мутацией KRAS G12D, мутацией G12V или мутацией KRAS G12R.

Включены NRAS–мутантные виды рака или опухоли. Термин "NRAS–мутантная" опухоль или рак включает любую опухоль, которая характеризуется мутировавшим белком NRAS, в частности мутацией NRAS с приобретением функции; в особенности, любую опухоль с мутацией NRAS G13R, Q61K, Q61L, Q61R. Таким образом, NRAS–мутантная меланома включает меланому, имеющую по меньшей мере одну мутацию NRAS, соответствующую Q61K, Q61L или Q61R. Рак может представлять собой меланому с мутацией NRAS QG13R. Рак может быть на ранней, промежуточной или поздней стадии. Рак может быть местнораспространенным или метастатическим.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения рак характеризуется одной или несколькими мутациями в B–Raf.

В другом варианте осуществления рак является устойчивым или невосприимчивым к стандартной терапии.

В другом варианте осуществления рак является устойчивым или невосприимчивым к лечению ингибитором B–Raf, например дабрафенибом.

В другом варианте осуществления рак является устойчивым или невосприимчивым к лечению ингибитором MEK, например траметинибом.

В другом варианте осуществления рак является устойчивым или невосприимчивым к лечению ингибитором B–Raf, например дабрафенибом, и ингибитором MEK, например траметинибом.

В одном варианте осуществления рак характеризуется по меньшей мере одной мутацией белка, выбранного из группы, включающей белки BRAF и KRAS.

В одном варианте осуществления рак характеризуется мутацией, выбранной из группы, состоящей из мутации BRAF, NRAS, KRAS и их комбинаций.

В одном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретению относится к способу лечения пролиферативного заболевания, в частности рака.

Комбинация по настоящему изобретению может быть особенно полезна в лечении KRAS–мутантного NSCLC, KRAS–мутантного рака поджелудочной железы, KRAS–мутантного колоректального рака или NRAS–мутантной меланомы. В предпочтительном варианте осуществления пролиферативное заболевание или рак, подлежащий лечению, представляет собой KRAS–мутантный NSCLC. В другом предпочтительном варианте осуществления пролиферативное заболевание или рак, подлежащий лечению, представляет собой NRAS–мутантную меланому.

В одном варианте осуществления в данном документе предусмотрен способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической комбинации по настоящему изобретению, включающей (а) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) ингибитор MEK. В предпочтительном варианте осуществления ингибитор MEK представляет собой траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

В одном из вариантов осуществления в данном документе предусмотрен способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, путем одновременного, раздельного или последовательного введения субъекту, нуждающемуся в этом, комбинации по настоящему изобретению в количестве, которое совместно является терапевтически эффективным в отношении указанного пролиферативного заболевания, включающей (а) ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) ингибитор MEK. В предпочтительном варианте осуществления ингибитор MEK представляет собой траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение, в частности, относится к способу лечения рака, содержащего одно или несколько изменений сигнального пути митоген–активируемой протеинкиназы (MAPK). В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения рака, который характеризуется по меньшей мере одной мутацией белка, выбранного из группы, включающей белки BRAS, NRAS и KRAS. В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению комбинации по настоящему изобретению для получения лекарственного препарата для лечения пролиферативного заболевания, в частности рака. В одном варианте осуществления комбинация по настоящему изобретения предназначена для применения в получении лекарственного препарата для лечения рака.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению комбинации по настоящему изобретению для получения лекарственного препарата для лечения рака, характеризующегося мутацией с приобретением функции в сигнальном пути MAPK.

В одном из вариантов осуществления комбинация или композиция или и то и другое, предусмотренные в данном документе, проявляют синергетический эффект.

Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение может предоставить способ повышения эффективности противоракового соединения путем использования его в комбинации с другим противораковым соединением, в частности способ, в котором используют ингибитор Raf, выбранный из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, вместе с ингибитором MEK, предпочтительно траметинибом, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом для обеспечения повышенной эффективности, которую невозможно безопасно обеспечить при введении аналогичных доз либо соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, либо соединения (II) или его фармацевтически приемлемой соли, либо ингибитора MEK в качестве отдельного средства (монотерапии).

Дополнительным преимуществом может быть то, что можно использовать более низкие дозы терапевтических средств комбинации по настоящему изобретению, например так, что дозы не только часто могут быть меньшими, но также могут применяться реже или могут использоваться для того, чтобы уменьшить частоту побочных эффектов, наблюдаемых для какого–либо из партнеров по комбинации отдельно. Это соответствует желаниям и требованиям пациентов, подлежащих лечению.

В некоторых вариантах осуществления соединение, представляющее собой ингибитор Raf, выбранное из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) соединения формулы (II), как определено в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, и/или ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, можно вводить в терапевтической или меньшей чем терапевтическая дозе по сравнению с уровнем дозы для отдельных средств. В определенных вариантах осуществления концентрация или доза одного терапевтического средства, которая необходима для достижения ингибирования, например подавления роста или сокращения опухоли, является более низкой, если второе терапевтическое средство используют или вводят в комбинации с первым терапевтическим средством, чем когда каждое терапевтическое средство вводят индивидуально. В определенных вариантах осуществления в комбинированной терапии концентрация или доза одного терапевтического средства, которая необходима для достижения ингибирования, например подавления роста, является более низкой, чем терапевтическая доза для монотерапии, например ниже на 10–20%, 20–30%, 30–40%, 40–50%, 50–60%, 60–70%, 70–80%, или 80–90%.

При определении синергетического взаимодействия между одним или несколькими компонентами оптимальный диапазон для получения эффекта и диапазоны абсолютных доз каждого компонента для получения эффекта могут быть окончательно измерены при введении компонентов в различных диапазонах весовых соотношений и дозах пациентам, нуждающимся в лечении. В случае людей сложность и стоимость проведения клинических исследований на пациентах могут сделать применение этой формы тестирования в качестве основной модели для синергии непрактичным. Однако наблюдение синергии в определенных экспериментах (см., например, пример 2 и пример 6) может предсказать эффект у других видов, и существуют модели на животных, которые можно использовать для дополнительной количественной оценки синергетического эффекта. Наблюдение синергии у одного вида может быть прогностическим для наличия эффекта у других видов, и используя модели на животных, как описано в данном документе, можно измерить синергетический эффект, и результаты таких исследований также можно использовать для прогнозирования эффективных диапазонов соотношения доз и абсолютных доз и концентраций в плазме крови, необходимых для других видов, путем применения способов фармакокинетики/фармакодинамики (PK/PD). Установленные корреляции между моделями опухолей и эффектами, наблюдаемыми у человека, позволяют предположить, что синергия у животных может быть продемонстрирована, например, на ксенотрансплантатных моделях или в соответствующих клеточных линиях. С помощью утвержденных тестовых моделей можно показать, что комбинация по настоящему изобретению приводит к полезным эффектам, описанным в данном документе. Специалист в данной области в полной мере способен осуществить выбор подходящей тестовой модели, чтобы доказать такие полезные эффекты. Фармакологическую активность комбинации по настоящему изобретению можно, например, продемонстрировать в клиническом исследовании или в тестовой процедуре in vivo или in vitro, как по существу описано в данном документе.

Введение комбинации включает введение комбинации в едином составе или стандартной лекарственной форме, введение отдельных средств комбинации одновременно, но раздельно, или введение отдельных средств комбинации последовательно любым подходящим путем. Отдельные партнеры по комбинации из комбинации по настоящему изобретению можно вводить раздельно в разное время в течение курса терапии, или последовательно в любом порядке, или одновременно в раздельных или единых комбинированных формах, например одновременно или в совместно терапевтически эффективных количествах, предпочтительно в синергетически эффективных количествах, например в суточных или прерывистых (то есть не являющихся суточными) дозировках, соответствующих количествам, описанным в данном документе.

Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль и соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в раскрываемых в данном документе способах, средствах для лечения, комбинациях и композициях являются эффективными ингибиторами BRAF и CRAF. В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально. В одном варианте осуществления соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе приблизительно 50–1200 мг (например, в день). Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить в единичной дозе приблизительно 50 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 500 мг приблизительно 550 мг, приблизительно 600 мг, приблизительно 650 мг, приблизительно 700 мг, приблизительно 750 мг, приблизительно 800 мг, приблизительно 850 мг, приблизительно 900 мг, приблизительно 950 мг, приблизительно 1000 мг, приблизительно 1050 мг, приблизительно 1100 мг, приблизительно 1150 мг или приблизительно 1200 мг. Единичная доза соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли может вводиться один раз в день, или два раза в день, или три раза в день, или четыре раза в день с фактической дозировкой и сроками введения, определяемыми по таким критериям, как возраст пациента, вес и пол; степень и тяжесть рака, подлежащего лечению; и решение лечащего врача. Предпочтительно единичную дозу соединения формулы (I) или соединения формулы (II) вводят один раз в день. В другом предпочтительном варианте осуществления единичную дозу соединения формулы (I) или соединения формулы (II) вводят два раза в день.

Ингибитор MEK в составе комбинации согласно настоящему изобретению будут вводить субъекту, нуждающемуся в этом, в терапевтически эффективном количестве.

В предпочтительном варианте осуществления количество ингибитора MEK траметиниба или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, вводимых как часть комбинации по настоящему изобретению субъекту, нуждающемуся в этом, будет представлять собой количество, выбранное из диапазона от приблизительно 0,125 мг до приблизительно 10 мг в день; предпочтительно количество будет выбрано из диапазона от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 9 мг в день; предпочтительно количество будет выбрано из диапазона от приблизительно 0,25 мг до приблизительно 8 мг; предпочтительно количество будет выбрано из диапазона от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 8 мг в день; предпочтительно количество будет выбрано из диапазона от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 7 мг в день; предпочтительно количество будет выбрано из диапазона от приблизительно 1 мг до приблизительно 5 мг в день; предпочтительно количество будет составлять приблизительно 1 мг или 2 мг в день. В предпочтительном варианте осуществления траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват вводят в суточной дозе 0,5 мг, 1 мг или 2 мг в день.

В тех случаях, когда в данном документе упоминаются дозы или дозировки, упоминаемое количество относится к количеству терапевтического средства. Например, когда вводят дозу траметиниба 2 мг и траметиниб вводят в таблетке, содержащей диметилсульфоксид траметиниба, таблетка будет содержать диметилсульфоксид траметиниба в количестве, эквивалентном 2 мг траметиниба.

В некоторых вариантах осуществления траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват вводят перорально. В одном варианте осуществления траметиниб получают для введения посредством пероральной доставки и могут использовать в сольватированной форме в диметилсульфоксиде. В некоторых вариантах осуществления соединение получают в таблетированной форме для перорального введения. Таблетки могут быть изготовлены в различных дозировках для гибкого введения.

Единичную дозу траметиниба или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата можно вводить один раз в день, или два раза в день, или три раза в день, или четыре раза в день. Общую суточную дозу траметиниба или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, например диметилсульфоксидного сольвата, можно вводить один или два раза в день.

Например, как часть комбинированной терапии, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить в общей суточной дозе приблизительно 50 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 600 мг или приблизительно 800 мг и траметиниб, например в форме диметилсульфоксидного сольвата, можно вводить в общей суточной дозе приблизительно 1,0 или 2,0 мг. Суточную дозу соединения формулы (1) можно вводить один или два раза в день. Следовательно, дозу приблизительно 200 мг соединения формулы (I) можно вводить два раза в день (общая суточная доза приблизительно 400 мг) и дозу приблизительно 1,0 мг или приблизительно 2,0 мг траметиниба можно вводить один раз в день. В качестве альтернативы дозу приблизительно 200 мг соединения формулы (I) можно вводить два раза в день (общая суточная доза приблизительно 400 мг) и дозу приблизительно 1,0 мг или приблизительно 2,0 мг траметиниба можно вводить два раза в день.

Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, можно использовать совместно в соответствии со способами, раскрытыми в данном документе. Два соединения можно вводить совместно или раздельно в зависимости от предполагаемой величины дозы и частоты введения, поскольку предполагается, что способы лечения по настоящему изобретению можно осуществлять в течение 2 дней, 3 дней, 4 дней, 5 дней, 6 дней, 1 недели, 2 недель, 3 недель, 4 недель или более 4 недель согласно тому, что лечащий врач будет считать целесообразным, и дополнительно руководствуясь описанными в данном документе способами для определения подходящих дозы и частоты введения. Частота введения дозы может варьировать в зависимости от использованного соединения и конкретного состояния, подлежащего лечению. В целом, применение минимальной дозы, достаточной для обеспечения эффективной терапии, является предпочтительным и может определяться такими критериями, как возраст, вес и пол пациента; распространенность и тяжесть рака, подлежащего лечению; и решение лечащего врача. Пациентов, как правило, можно контролировать в отношении терапевтической эффективности с применением анализов, подходящих для состояния, подлежащего лечению, что будет известно специалистам в данной области техники.

Оптимальные соотношения, индивидуальные и комбинированные дозировки и концентрации партнеров по комбинации из комбинации по настоящему изобретению (т. e. соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата или соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли и ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата), которые характеризуются эффективностью без токсичности, основаны на кинетике доступности терапевтических средств для целевых участков и множестве факторов, включая без ограничения степень распространения заболевания, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и рацион питания индивидуума, время и путь введения и другие лекарственные препараты, которые принимает индивидуум. Оптимальные дозировки можно установить с использованием рутинного тестирования и процедур, которые хорошо известны в данной области. Например, можно вводить один болюс, можно вводить несколько разделенных доз в течение некоторого времени, или дозу можно пропорционально уменьшать или увеличивать в соответствии с потребностями терапевтической ситуации.

Терапевтические средства комбинации по настоящему изобретению можно вводить любым подходящим путем. Следует понимать, что предпочтительный путь может варьировать, например, в зависимости от состояния реципиента комбинации и рака, подлежащего лечению. Также следует понимать, что каждое из терапевтических средств можно вводить одним и тем же или разными путями и что терапевтические средства, например соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, можно совместно составлять в фармацевтическую композицию.

Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, можно использовать совместно, как раскрыто в данном документе. Два терапевтических средства комбинации по настоящему изобретению можно вводить совместно (одновременно), последовательно или раздельно.

Кроме того, не имеет значения, вводят ли соединения в одной и той же лекарственной форме, например одно соединение можно вводить местно, а другое соединение можно вводить перорально. Предпочтительно оба терапевтических средства вводят перорально.

Таким образом, в одном варианте осуществления одну или несколько доз соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или одну или несколько доз соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли вводят одновременно, последовательно или раздельно с одной или несколькими дозами ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

В одном варианте осуществления многократные дозы соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или многократные дозы соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли вводят одновременно, последовательно или раздельно с многократными дозами ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

В одном варианте осуществления многократные дозы соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или многократные дозы соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли вводят одновременно, последовательно или раздельно с одной дозой ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

В одном варианте осуществления одну дозу соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или одну дозу соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли вводят одновременно, последовательно или раздельно с многократными дозами ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

В одном варианте осуществления одну дозу соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или одну дозу соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли вводят одновременно, последовательно или раздельно с одной дозой ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.

Во всех приведенных выше вариантах осуществления соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить первыми, или ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват можно вводить первым.

Хотя возможно, что для применения в терапии ингибитор Raf, выбранный из группы, включающей (i) соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и (ii) соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль, и/или ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, можно вводить в виде непреобразованного химического вещества, причем активный ингредиент можно представить в виде фармацевтической композиции. Соответственно, в одном варианте осуществления в данном документе предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая (а) соединение, представляющее собой ингибитор Raf, выбранное из группы, состоящей из соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, и (b) ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват. В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит один или несколько фармацевтически приемлемых разбавителей, вспомогательных веществ или носителей. Носитель(носители), разбавитель(разбавители) или вспомогательное(вспомогательные) вещество(вещества) должны быть приемлемыми в том смысле, что они совместимы с другими ингредиентами состава, способны к образованию фармацевтического состава и не вредны для их реципиента. Такие элементы используемых фармацевтических композиций могут быть представлены в отдельных фармацевтических комбинациях или составлены вместе в одну фармацевтическую композицию. Раскрытые в данном документе комбинации можно вводить вместе в одной композиции или вводить раздельно в двух или более различных композициях, например композициях или дозированных формах, как описано, и компоненты можно вводить в виде одного и того же состава или в виде отдельных составов, по отдельности, например как указано выше, или в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями любым подходящим путем.

Используемая в данном документе единичная лекарственная форма относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для субъектов, подлежащих лечению; при этом каждая единица содержит заданное количество активного соединения (например, соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли или ингибитора MEK, предпочтительно траметиниба, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата), рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Стандартная лекарственная форма также может представлять собой фиксированную комбинацию.

Эффективная доза каждого из партнеров по комбинации может потребовать более частого введения одного терапевтического средства по сравнению с другим терапевтическим средством в комбинации. Таким образом, для обеспечения подходящей дозировки упакованные фармацевтические продукты могут содержать одну или несколько лекарственных форм, которые содержат комбинацию соединений, и одну или несколько лекарственных форм, которые содержат одно из терапевтических средств комбинации по настоящему изобретению, но не другое терапевтическое средство комбинации по настоящему изобретению.

Когда партнеры по комбинации, используемые в комбинации по настоящему изобретению, применяют в форме, которая продается на рынке в виде отдельного лекарственного средства, их дозировка и способ введения могут соответствовать информации, представленной во вкладыше упаковки соответствующего лекарственного средства, представленного на рынке, если не указано иное.

Таким образом, для обеспечения подходящей дозировки упакованные фармацевтические продукты могут содержать одну или несколько лекарственных форм, которые содержат комбинацию средств, и одну или несколько лекарственных форм, которые содержат одно из терапевтических средств комбинации, но не другое терапевтическое средство комбинации.

Также в объем настоящего изобретения входит комбинированный набор, содержащий в качестве терапевтических средств комбинацию по настоящему изобретению для одновременного, раздельного или последовательного введения, как описано в данном документе, вместе с одним или несколькими другими элементами: инструкциями по применению; другими реагентами для применения с комбинацией по настоящему изобретению; устройствами или другими материалами для получения соединения к введению, такими как контейнер для смешивания; фармацевтически приемлемыми носителями и устройствами или другими материалами для выполнения введения субъекту, такими как шприц.

Используемый в данном документе термин "комбинированный набор" или "набор частей" означает фармацевтическую композицию или композиции, которые используют в соответствии с настоящим изобретением. Когда оба соединения вводят одновременно, комбинированный набор может содержать соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, в одной фармацевтической композиции, такой как таблетка, или в отдельных фармацевтических композициях. Если соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват или соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват не вводят одновременно, комбинированный набор будет содержать соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват либо в отдельных фармацевтических композициях в одной упаковке, либо в отдельных фармацевтических композициях в отдельных упаковках.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения набор частей включает следующие компоненты: (а) соединение, представляющее собой ингибитор Raf, выбранное из группы, состоящей из (i) соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в сочетании с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, разбавителями и/или носителями и (ii) соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли в сочетании с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, разбавителями и/или носителями; и (b) ингибитор MEK, предпочтительно траметиниб, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват в сочетании с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, разбавителями или носителем, где компоненты представлены в форме, которая подходит для последовательного, раздельного и/или одновременного введения. Комбинированный набор также может быть снабжен инструкциями, такими как инструкции по дозировке и введению. Такие инструкции по дозировке и введению могут относиться к тем видам, которые предоставляются врачу, например на этикетке лекарственного средства, или могут быть такими, которые предоставляются врачом, такие как инструкции для пациента.

Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из описания и графических материалов, а также из формулы изобретения.

В следующих примерах проиллюстрировано настоящее изобретение, описанное выше, однако они никоим образом не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Благоприятные эффекты фармацевтической комбинации по настоящему изобретению также могут быть определены с помощью других тестовых моделей, известных как таковые специалисту в данной области техники.

ПРИМЕРЫ

Приведенные ниже примеры изложены в целях облегчения понимания настоящего изобретения, но не предназначены и не должны толковаться как ограничивающие его объем каким–либо образом.

Пример 1. N–(3–(2–(2–гидроксиэтокси)–6–морфолинопиридин–4–ил)–4–метилфенил)–2–(трифторметил)изоникотинамид

Соединение формулы (I) представляет собой морфолинзамещенное биарильное соединение следующей структуры:

Соединение (I).

Соединение формулы (I) представляет собой пример 1156 в опубликованной заявке согласно РСТ WO 2014/151616, содержание которой включено посредством ссылки.

Пример 1A

Соединение формулы (I) представляет собой ингибитор типа II, ингибирующий как b–Raf, так и c–Raf.

Таблица 1. Полумаксимальная ингибирующая концентрация (IC–50) соединения формулы (I) в отношении b–Raf и c–Raf

Соединение	IC–50 (мкM) b–Raf	IC–50 (мкM) c–Raf FL
Соединение формулы (I)	0,00073	0,00020

Пример 1B

Соединение формулы (I) характеризуется активностью в отношении многочисленных линий раковых клеток человека, которые экспрессируют мутации в сигнальном пути МАРК, как показано в нижеследующей таблице. Активность является особенно сильной в отношении клеточных линий, которые содержат по меньшей мере одну мутацию в BRAF или RAS.

Таблица 2. Эффект соединения формулы (I) в отношении пролиферации в панели линий раковых клеток человека

Линия клеток	IC₅₀ [мкМ]	Тип опухоли	BRAF	RAS
A375	0,24	Меланома	V600E	WT
WM2664	0,45	Меланома	V600D	WT
IPC298	0,25	Меланома	WT	NRAS Q61L
HeyA8	0,21	Яичника	G464E	KRAS G12D
HCT116	0,47	Колоректальная	WT	KRAS G13D
Calu–6	1,5	NSCLC	WT	KRAS Q61K
HuP–T4	0,65	Поджелудочной железы	WT	KRAS G12V
PSN1	0,68	Поджелудочной железы	WT	KRAS G12R
TCC–PAN2	0,42	Поджелудочной железы	WT	KRAS G12R
NCI–H2073	18,2	NSCLC	WT	WT
HCC827	>20	NSCLC	WT	WT
PC3	>20	Предстательной железы	WT	WT
Различные линии опухолевых клеток обрабатывали титрами доз соединения формулы (I) в течение 72 ч, и пролиферацию клеток определяли с применением люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter–Glo™.

Пример 1C

Для исследования активности соединения формулы (I) в клетках меланомы с мутацией B–Raf V600, невосприимчивых к ингибиторам B–Raf и/или MEK, оценивали антипролиферативную активность соединения формулы (I) в механистических моделях, полученных из клеточной линии A375 меланомы BRAF V600, экспрессирующей мутации MEK1/2, NRAS или вариант сплайсинга BRAF. Эти мутации, как было продемонстрировано как в доклинических исследованиях, так и в клинических образцах, придают устойчивость к ингибиторам B–Raf и/или MEK. Эффекты соединения формулы (I) в отношении ингибирования роста в исходной клеточной линии A375 и ее производных, экспрессирующих различные мутантные аллели, по сравнению с эффективностью ингибитора B–Raf вемурафениба и ингибитора MEK селуметиниба обобщены ниже. Мутации придавали устойчивость как к ингибиторам B–Raf, так и к ингибиторам MEK, что приводило к более чем 50–кратному увеличению значений IC₅₀. В то же время, резистентные модели, тем не менее, были чувствительны к соединению формулы (I), характеризуясь только 2–3–кратным увеличением IC₅₀. Эти данные свидетельствуют в пользу применения соединения формулы (I) у пациентов с меланомой B–Raf V600, которые стали невосприимчивыми к ингибиторам B–Raf и/или MEK.

Таблица 3. Антипролиферативный эффект соединения формулы (I) в отношении механистических моделей A375, устойчивых к ингибиторам BRAF и MEK

Линия клеток	IC₅₀ соединения формулы (I) [мкM]	IC₅₀ вемурафениба [мкМ]	IC₅₀ селуметиниба [мкМ]
A375	0,42	0,066	0,036
A375/BRAFp61–V600E	0,72	8,51	>10
A375/MEK1 Q56P	1,15	9,62	5,35
A375/MEK1 C121S	1,14	8,7	2,33
A375/MEK1 E203K	1,05	5,58	1,81
A375/MEK2 Q60P	1,12	5,28	4,84
A375/NRAS Q61K	0,95	9,38	5,5
Клеточные линии A375 были сконструированы для индуцибельной экспрессии моделей устойчивости после обработки доксициклином. Затем клетки обрабатывали серийными разведениями соединения формулы (I), вемурафениба или селуметиниба в течение 72 часов для оценки антипролиферативной активности. Пролиферацию клеток определяли с применением люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter–Glo™ и рассчитывали как процент относительно контроля с DMSO.

Пример 1D

Соединение формулы (I) составляли для перорального введения в виде таблеток, содержащих приблизительно 50 мг соединения формулы (I), в соответствии с принципами, хорошо известными в данной области. Количество таблеток, достаточных для обеспечения желаемой дозировки, вводили один раз в день субъектам натощак. Субъектам вводили дозы, составляющие 100 мг один раз в день или 200 мг один раз в день. Серийные образцы крови для оценки фармакокинетики (PK) собирали не более чем через 48 часов после введения первой дозы соединения формулы (I) (цикл 1, день 1) и не более чем через 24 часа после введения многократных доз (цикл 1, день 15). Предварительно доступные данные являются следующими. Максимальные концентрации в плазме крови (Cmax), составляющие 447 нг/мл и 889 нг/мл, достигали в течение 4 часов после введения однократной дозы, составляющей 100 мг, и однократной дозы, составляющей 200 мг, соответственно. Среднее содержание в плазме крови на протяжении интервала между введением доз, составляющего 24 часа (AUCtau), в день 1 введения доз составило 5679 нг·ч/мл и 10019 нг·ч/мл после введения доз соединения формулы (I), составляющих 100 мг и 200 мг соответственно. По расчетам, период полувыведения у пациентов составлял около 23–24 часов. Дозировка, составляющая 100 мг один раз в день, приводила к незначительному накоплению соединения формулы (I) в плазме крови с коэффициентом накопления, составляющим 1,8. На основании этих данных была составлена схема дозирования с частотой один раз в день.

Пример 2. Противоопухолевая активность соединения формулы (I) в моделях KRAS–мутантного NSCLC

В клеточных анализах соединение формулы (I) продемонстрировало антипролиферативную активность в клеточных линиях, которые содержат ряд разнообразных мутаций, активирующих передачу сигнала посредством MAPK. Например, соединение формулы (I) подавляло пролиферацию линии клеток немелкоклеточного рака легких Calu–6 (KRAS Q61K) и линии клеток колоректального рака HCT116 (KRAS G13D) со значениями IC50 в диапазоне 0,2–1,2 мкМ.

Активность соединения формулы (I) тестировали in vivo на нескольких ксенотрансплантатных моделях. Как показано на фигурах 1–4, соединение формулы (I) в качестве отдельного средства продемонстрировало активность на моделях KRAS–мутантного рака легких.

Модель Calu6 (KRAS(Q61K)–мутантный NSCLC)

Самок голых мышей, несущих опухоль Calu6, n=8 на группу, рандомизировали на группы обработки, когда средний объем опухоли составлял 324 мм3. Обработку соединением формулы (I) начинали в день 15 после имплантации ксенотрансплантата. Животным во время курса обработки вводили пероральную дозу либо среды–носителя, либо соединения формулы (I) в количестве 15 мг/кг два раза в день (bid), 30 мг/кг один раз в день (qd), 50 мг/кг bid, 100 мг/кг bid, 200 мг/кг qd или 300 мг/кг один раз в два дня (q2d) в течение 13 последовательных дней при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли во время рандомизации и затем два раза в неделю в течение всего периода проведения исследования, используя цифровые штангенциркули (фигура 1). Незначительная потеря массы тела наблюдалась в группах обработки, получавших 200 мг/кг qd (4% потеря массы тела) и 300 мг/кг q2d (9% потеря массы тела).

Модель H358 (KRAS(G12C)–мутантный NSCLC)

Опухоленесущих самок SCID–мышей NCI–H358 бежевого цвета, n=8 на группу, рандомизировали на 3 группы через 14 дней после инокуляции опухолевых клеток со средним объемом опухоли в пределах 261 мм³.

Животным во время курса обработки вводили пероральную дозу либо среды–носителя, либо соединения формулы (I) в количестве 30 мг/кг или 200 мг/кг один раз в день в течение 14 последовательных дней при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 3 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки (фигура 2). Незначительная потеря массы тела наблюдалась в группах обработки, получавших 30 мг/кг (4% потеря массы тела) и 200 мг/кг (6% потеря массы тела).

Модель PTX HLUX1156 KRAS(G12C)–мутантного NSCLC

Самок голых мышей, несущих ксенотрансплантатную опухоль, индуцированную клетками HLUX1156 первичного рака легкого, полученными от пациента, n=6 на группу, рандомизировали на 2 группы со средним объемом опухоли в пределах 262 мм3. Обработку начинали в день 38 после имплантации ксенотрансплантата. Животным во время курса обработки вводили пероральную дозу либо среды–носителя, либо соединения формулы (I) в количестве 100 мг/кг один раз в день в течение 14 последовательных дней при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 2 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки (фигура 3). Лечение хорошо переносилось, если судить по отсутствию значительной потери массы тела.

Модель H727 KRAS(G12V)–мутантного NSCLC

Самок голых мышей Foxn1, несущих опухоль NCI–H727, n=8 на группу, рандомизировали на 2 группы со средним объемом опухоли в пределах 275 мм3. Обработку начинали в день 21 после имплантации ксенотрансплантата. Животным во время курса обработки вводили пероральную дозу либо среды–носителя, либо соединения формулы (I) в количестве 100 мг/кг один раз в день в течение 14 последовательных дней при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 3 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки (фигура 4). Незначительная потеря массы тела наблюдалась в группе обработки, получавшей 100 мг/кг (4,5% потеря массы тела).

Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии). In vivo обработка соединением формулы (I) приводила к регрессии опухоли в нескольких KRAS–мутантных моделях ксенотрансплантата от человека, включая ксенотрансплантаты на основе Calu–6, полученной из NSCLC (KRAS Q61K) и NCI–H358 (KRAS G12C). Во всех случаях противоопухолевые эффекты были дозозависимыми. Модель Calu–6 была чувствительной к соединению формулы (I) с регрессией опухоли, наблюдаемой у мышей при дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг два раза в день (BID), и 100 и 200 мг/кг один раз в день (QD), и 300 мг/кг раз в два дня (Q2D). Регрессия была также достигнута во второй модели NSCLC человека, NCI–H358, при дозе 200 мг/кг QD. Кроме того, данные по исследованию эффективности разделения дозы в ксенотрансплантатах Calu–6 продемонстрировали, что при разных уровнях вводимых доз соединение формулы (I) при введении QD и введении, разделенном на два раза в день (BID), демонстрировало аналогичные уровни противоопухолевой активности. Эти результаты свидетельствуют в пользу апробирования схем введения дозы QD или BID в клинической практике.

В совокупности, подавление сигнального пути MAPK и антипролиферативная активность in vitro и in vivo, наблюдаемые для соединения формулы (I) в хорошо переносимых дозах, дают основание предполагать, что соединение формулы (I) может характеризоваться противоопухолевой активностью у пациентов с опухолями, содержащими активирующие нарушения в сигнальном пути MAPK, и поэтому, в частности, может быть применимо в качестве отдельного средства или в комбинации со вторым средством, таким как ингибитор, влияющий на другой участок сигнального пути MAPK, для лечения пациентов с NSCLC, имеющих мутации KRAS. Было показано, что соединение формулы (I) обладает активностью в качестве отдельного средства против различных других видов рака, которые экспрессируют мутации с приобретением функции в сигнальном пути MAPK, например в RAS или RAF, в том числе рака яичника, рака поджелудочной железы и меланомы.

Пример 2. Синергетические эффекты комбинации соединения формулы (I) и траметиниба на рост клеток

Эффекты комбинирования соединения формулы (I) и ингибитора MEK1/2 траметиниба в отношении пролиферации и передачи сигналов в NRAS–мутантной меланоме, KRAS–мутантном NSCLC, KRAS–мутантной PDAC и KRAS–мутантном CRC тестировали следующим образом.

Посредством набора для люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter–Glo® (CTG) (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) измеряли количество ATP, присутствующего в лунке после лизиса клеток. ATP, высвобождаемый при лизисе, измеряли в ходе ферментативной реакции, в которой участвуют люцифераза и ее субстрат люциферин. Количество излучаемого света пропорционально количеству ATP, которое в свою очередь пропорционально количеству живых клеток в лунке. Этот анализ применяли для определения доли жизнеспособных клеток после обработки лекарственным средством.

Клеточные линии NRAS–мутантной меланомы и клеточные линии KRAS–мутантного NSCLC поддерживали в соответствующих средах.

Линия клеток	Мутация	Среды^*	Тип рака
Calu–6	KRASQ61K	EMEM+10%FBS	NSCLC
A549	KRASG12S	F12+10%FBS	NSCLC
HCC–2108	KRASQ61H	RPMI+10%FBS	NSCLC
NCI–H2122	KRASG12C	RPMI+10%FBS	NSCLC
NCI–H23	KRASG12C	RPMI+10%FBS	NSCLC
NCI–H358	KRASG12C	RPMI+10%FBS	NSCLC
NCI–H2030	KRASG12C	RPMI+10%FBS	NSCLC
Hs 944.T	NRASQ61K	RPMI+10%FBS	Меланома
IPC–298	NRASQ61L	RPMI+10%FBS	Меланома
MEL–JUSO	NRASQ61L	RPMI+10%FBS	Меланома
MM127	NRASG13R	RPMI+10%FBS	Меланома
MM415	NRASQ61L	RPMI+10%FBS	Меланома
MM485	NRASQ61R	RPMI+10%FBS	Меланома
SK–MEL–2	NRASQ61R	EMEM+10%FBS	Меланома

^*RPMI: среда Мемориального института Розуэлла Парка.

FBS: фетальная бычья сыворотка

EMEM: минимальная питательная среда Игла

Для линий NRAS–мутантной меланомы комбинации оценивали в матрице полной сетки для интерполяции с использованием концентраций соединения формулы (I) в диапазоне от 0,002 до 10 мкМ и концентраций траметиниба в диапазоне от 1,52E–4 до 1 мкМ. Для линий KRAS–мутантного NSCLC комбинации оценивали в матрице полной сетки для интерполяции или в шахматно упорядоченной матрице с использованием концентраций соединения формулы (I) в диапазоне от 0,014 до 10 мкМ и концентраций траметиниба в диапазоне от 0,004 до 2,7 мкМ. Являлась ли комбинация синергетической в отношении конкретной клеточной линии или нет определяли с помощью показателя синергии (SS) и показателя аддитивности (CI) при величинах эффекта ингибирования 50% (CI50) (CI₅₀) (Lehar et al., 2009). Краткое описание этих значений для каждой клеточной линии показано в таблице ниже.

Таблица. Краткое описание значений показателя синергии и CI50 для соединения формулы (I) и траметиниба

Линия клеток	Тип рака	Мутация KRAS	Показатель синергии Loewe	Ошибка показателя синергии Loewe	CI₅₀	Ошибка CI₅₀	Определение синергии
Hs 944.T	Меланома	NRASQ61K	3,48	0,13	0,34	0,06	Синергия
IPC–298	Меланома	NRASQ61L	4,22	0,20	0,40	0,16	Синергия
MEL–JUSO	Меланома	NRASQ61L	5,44	0,18	0,31	0,05	Синергия
MM127	Меланома	NRASG13R	6,28	0,33	0,30	0,04	Синергия
MM415	Меланома	NRASQ61L	2,69	0,11	0,29	0,04	Синергия
MM485	Меланома	NRASQ61R	3,85	0,12	0,38	0,17	Синергия
SK–MEL–2	Меланома	NRASQ61R	6,58	0,11	0,11	0,03	Синергия
SK–MEL–30	Меланома	NRASQ61K	4,18	0,12	0,00	0,00	Синергия
A549	NSCLC	KRASG12S	5,65	0,26	0,42	0,06	Синергия
Calu–6	NSCLC	KRASQ61K	6,12	0,15	0,16	0,02	Синергия
HCC–2108	NSCLC	KRASQ61H	4,16	0,12	0,64	0,05	Синергия
NCI–H2122	NSCLC	KRASG12C	6,67	0,18	0,34	0,02	Синергия
NCI–H23	NSCLC	KRASG12C	2,59	0,12	0,41	0,11	Синергия
NCI–H358	NSCLC	KRASG12C	2,17	0,06	0,28	0,04	Синергия
NCI–H2030^@	NSCLC	KRASG12C	0,83	0,06	0,62	0,03	Отсутствие синергии/аддитивности

^@: клеточная линия, вероятно, не зависит от MAPK, так как также не наблюдалось эффекта при обработке каким–либо отдельным средством.

Исследования повторяли с использованием моделей KRAS–мутантных PDAC и CRC, и получили следующие результаты.

Таблица. Краткое описание значений показателя синергии и CI ₅₀ для соединения формулы (I) и траметиниба в KRAS ^mut PDAC и CRC

Линия клеток	Тип рака	Мутация KRAS	Показатель синергии Loewe	Ошибка показателя синергии Loewe	CI₅₀	Ошибка CI₅₀	Определение синергии
HCC–56	CRC	KRAS^G12V	3,12	0,16	0,88	0,07	Синергия
HCT 116	CRC	KRAS^G13D	5,57	0,15	0,39	0,03	Синергия
HCT–15	CRC	KRAS^G13D	6,27	0,34	0,16	0,05	Синергия
SK–CO–1	CRC	KRAS^G12V	2,34	0,13	0,36	0,04	Синергия
CFPAC–1	PDAC	KRAS^G12V	3,65	0,23	0,09	0,02	Синергия
HPAF–II	PDAC	KRAS^G12D	4,94	0,18	0,44	0,05	Синергия
HUP–T4	PDAC	KRAS^G12V	4,21	0,15	0,00	0,00	Синергия
MIA PaCa–2	PDAC	KRAS^G12C	3,65	0,06	0,46	0,02	Синергия
PSN1	PDAC	KRAS^G12R	7,51	0,07	0,27	0,01	Синергия
QGP1	PDAC	KRAS^G12V	1,55	0,07	0,42	0,03	Аддитивность/синергия
SU.86.86	PDAC	KRAS^G12D	3,44	0,21	0,55	0,05	Синергия
TCC–PAN2	PDAC	KRAS^G12R	3,34	0,12	0,00	0,00	Синергия

Общее руководство по интерпретации показателей/значений приведено в таблице ниже.

Параметры комбинации	Описание эффекта
SS > 3,0 и лучший C.I. > 0,5	Синергия
SS > 2,0 и лучший C.I. < 0,5	Синергия
SS > 2,0 и лучший C.I. > 0,5	Аддитивность/синергия
SS > 1,0, но < 2,0 и лучший C.I. < 0,5	Аддитивность/синергия
SS < 1,0 и лучший C.I. < 0,5	Аддитивность

Как показано в приведенных выше таблицах, соединение формулы (I) и траметиниб оказывают синергетические эффекты в отношении роста клеток в KRAS– и NRAS–мутантных линиях клеток. Комбинация соединения формулы (I) и траметиниба характеризовалась от умеренной до сильной синергией во всех испытанных клеточных линиях, кроме одной. В одной клеточной линии NSCLC, представляющей собой NCI–H2030, в которой не наблюдалось никакой синергии/аддитивности, отсутствие ответа на отдельное средство, представляющее собой либо соединение формулы (I), либо траметиниб, весьма вероятно имеет место вследствие того факта, что эта модель не является MAPK–зависимой.

Комбинация соединения формулы (I) и траметиниба характеризовалась от умеренной до сильной синергией во всех клетках NRAS–мутантной меланомы. Тестировали линии KRAS–мутантной PDAC, KRAS–мутантного CRC. Комбинация соединения формулы (I) и траметиниба характеризовалась от умеренной до сильной синергией в 14 из 15 протестированных клеточных линий KRAS–мутантного NSCLC.

В примере с NCI–H2122, который показал наибольшую синергию среди протестированных линий KRAS–мутантного NSCLC, сетка значений избытка Loewe показывает разницу > 40% между значениями согласно модели аддитивности доз Loewe и наблюдаемыми значениями при низких дозах соединения формулы (I) и траметиниба (от 0,041 до 0,37 мкМ соединения формулы (I) и 0,11 мкМ траметиниба). Фактически, соединение формулы (I) в качестве отдельного средства практически не проявляет активности при этих низких дозах с максимальными значениями ингибирования <30% ниже дозы 1 мкМ, но комбинация с траметинибом при тех же дозах соединения формулы (I) обладает значительной синергией (со значениями избытка Loewe > 40%).

В SK–MEL–2, которая характеризовалась наиболее сильной синергией из всех протестированных клеточных линий NRAS–мутантной меланомы, наблюдается значительная синергия при низких дозах как траметиниба, так и соединения формулы (I) ) (от 0,002 до 0,371 мкМ соединения формулы (I) и от 0,000152 до 0,001 мкМ траметиниба). При двух самых низких дозах траметиниба (0,000152–0,000457 мкМ траметиниба) наблюдается сильная синергия при дозах соединения формулы (I) в диапазоне от 0,014 до 0,124 мкМ, что приводит к антипролиферативному эффекту в концентрациях, при которых активность отдельных средств проявляется незначительно или не наблюдается вовсе.

Соединение формулы (I) и траметиниб ингибируют фармакодинамические биомаркеры в KRAS– и NRAS–мутантных клеточных линиях

Чтобы исследовать механизм, лежащий в основе синергетических антипролиферативных эффектов комбинации соединения формулы (I) и траметиниба, влияние этой комбинации на передачу сигналов MAPK исследовали с помощью анализа посредством вестерн–блоттинга. Клетки обрабатывали дозами отдельных средств и комбинации соединения формулы (I) (300 нМ) и траметиниба (3 нМ) в течение 4 или 24 часов. В качестве дополнительного сравнения с дозами комбинации клетки также обрабатывали 10–кратно более высокими дозами отдельных средств, составляющими 3000 нМ и 30 нМ для соединения формулы (I) и траметиниба соответственно.

В исследованных клеточных линиях как NRAS–мутантной меланомы (IPC–298 и MM415), так и KRAS–мутантного NSCLC (NCI–H23 и NCI–H358) обработка клеток комбинацией соединения формулы (I) и траметиниба превосходила любое из отдельных средств в подавлении сигнального пути, судя по более сильному подавлению уровней pMEK1/2 и pERK1/2 в случае комбинации по сравнению с обработкой отдельными средствами. Кроме того, подавление, обусловленное низкими дозами комбинации, превосходило тот уровень, который мог быть достигнут при 10–кратно более высоких уровнях соединения формулы (I), и аналогично, хотя и несколько менее явно, чем наблюдалось при более высоких уровнях траметиниба. Таким образом, комбинированное лечение соединением формулы (I) и траметинибом приводило к подавлению передачи сигналов MAPK с высокой степенью синергии.

Пример 3. Противоопухолевая активность in vivo комбинации соединения формулы (I) с траметинибом

Как описано ниже, было обнаружено, что комбинированное лечение соединением формулы (I) и траметинибом приводит к увеличению интенсивности и продолжительности опухолевого ответа по сравнению с любым отдельным средством в ксенотрансплантатных моделях KRAS–мутантных NSCLC, CRC, PDAC и NRAS–мутантной меланомы человека. Таким образом, активность комбинации соединения формулы (I) и траметиниба, вероятно, приведет к достижению более сильных и продолжительных ответов у пациентов с типами рака, который характеризуется активированным сигнальным путем MAPK.

Противоопухолевая активность комбинации соединения формулы (I) и ингибитора MEK в моделях рака, представляющего собой KRAS–мутантный NSCLC

Противоопухолевую активность комбинации соединения формулы (I) и ингибитора MEK в опухолевых моделях KRAS–мутантного NSCLC, индуцированных клетками NSCLC Calu–6, определяли у самок голых мышей. Когда опухоли достигали примерно 250 мм³, мышей рандомизировали в соответствии с объемом опухоли на группы обработки (n=7). Обработку начинали в день 10 после имплантации ксенотрансплантата. Противоопухолевую активность определяли в день 27 после имплантации опухолевых клеток; через 17 дней после начала обработки.

Тестируемые средства во время курса обработки вводили перорально один раз в день (qd) или один раз в два дня (q2d) при уровнях дозы, указанных на фигурах 5 и 6, при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Отдельное средство вводили в течение 28 дней, а комбинацию соединения формулы (I) и траметиниба вводили в течение 56 дней. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 2 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки.

Противоопухолевая активность, среднее изменение объема опухоли, среднее процентное изменение массы тела и выживаемость через 17 дней после начала обработки (27 дней после имплантации) представлены в таблице ниже.

Таблица. Противоопухолевая эффективность и переносимость соединения формулы (I) и траметиниба в ксенотрансплантатной модели подкожной опухоли NSCLC человека Calu–6 у мышей в день 27 после имплантации

Лекарственное средство	Доза (мг/кг) и график введения	% T/C	% регрессии опухоли	Изменение объема опухоли (мм3), среднее +/– SEM	Изменение массы тела (%), среднее +/– SEM	Выживаемость (выжившие /всего мышей)
Среда–носитель	–			1086,91 ± 112,22	6,19 ± 0,93	7/7
Соединение формулы (I)	30 qd	26*		282,92 ± 91,55	–2,26 ± 0,89	7/7
Траметиниб	0,3 qd	36		395,32 ± 36,43	–1,55 ± 1,04	7/7
Траметиниб	0,3 q2d	53		574,17 ± 30,67	1,71± 1,01	7/7
Соединение формулы (I) + траметиниб	30 qd+0,3 qd		41**	–107,68 ± 21,01	–2,49 ± 1,60	7/7
Соединение формулы (I) + траметиниб	30 qd+0,3 q2d		13**	–33,86 ± 10,09	–3,43 ± 0,93	7/7

Среда–носитель: без обработки qd: один раз в день

q2d: один раз в два дня

Эксперимент оценивали в день 27 исследования. * р=0,0039 (30 мг/кг соединения формулы (I) qd относительно группы, получавшей среду–носитель), р <0,0001 (30 мг/кг соединения формулы (I) qd+0,3 мг/кг траметиниба qd и 30 мг/кг соединения формулы (I) qd+0,3 мг/кг траметиниба q2d относительно группы, получавшей среду–носитель) (однофакторный дисперсионный анализ с критерием Данна для множественных сравнений).

Соединение формулы (I), вводимое в дозе 30 мг/кг qd, обеспечивало 26% Т/С, в то время как траметиниб, вводимый в дозе 0,3 мг/кг qd или 0,3 мг/кг q2d, обеспечивал 36% Т/С и 53% Т/С соответственно через 17 дней после введения доз. Комбинирование соединения формулы (I), вводимого в дозе 30 мг/кг qd, с траметинибом, вводимым в дозе 0,3 мг/кг qd или 0,3 мг/кг q2d, приводило к 41% и 13% регрессии соответственно через 17 дней после введения доз (фигура 5).

Чтобы количественно оценить время до прогрессирования опухоли среди групп, отмечали день, когда опухоли превышали в объеме произвольный порог 700 мм³. Вновь комбинация соединения формулы (I) с любой из доз траметиниба обеспечивала повышенную статистически значимую противоопухолевую активность по сравнению с отдельными средствами. В то время как опухоли у мышей, которым вводили дозы соединения формулы (I) и траметиниба в качестве отдельных средств, прогрессировали при обработке, совместная комбинация соединения формулы (I) и траметиниба поддерживала регрессию опухоли в течение более длительного периода, чем монотерапия, характеризуясь значительной противоопухолевой активностью через 28 дней после введения доз (38 дней после имплантации опухоли) по сравнению с отдельными средствами.

Вместе с тем все группы обработки хорошо переносили обработку с минимальной потерей массы тела на протяжении всего исследования. В дополнение к увеличенной интенсивности ответа комбинация соединения формулы (I) и траметиниба также приводила к увеличению продолжительности ответа (таблица ниже и фигура 6).

Таблица. Противоопухолевая эффективность и переносимость соединения формулы (I) и траметиниба в ксенотрансплантатной модели подкожной опухоли NSCLC человека Calu–6 у мышей в день 38 после имплантации

Лекарственное средство	Доза	%	% регрессии опухоли	Изменение	Изменение	Выживаемость (выжившие /всего)	День достижения
	(мг/кг)	T/C		опухолевого	массы		среднего
	и			объема	тела		опухоли
	график			(мм3)	(%)		объема
				среднее +/–	среднее +/–		~
				SEM	SEM		700
							мм³
Среда–носитель	–		–	–	–
Соединение формулы (I)	30 qd	76	–	1040,54 ±	2,72 ±	7/7	31
				194,73	0,66
Траметиниб	0,3 q2d	100	–	1364,31 ±	2,75 ±	7/7	24
				107,51	1,93
Траметиниб	0,3 qd	70	–	961,52 ±	2,51 ±	7/7	27
				39,00	1,48
Соединение формулы (I) + траметиниб	30 qd +	14*	–	195,78 ±	2,57 ±	7/7	45
	0,3 q2d			28,15	2,88
Соединение формулы (I) + траметиниб	30 qd +		17**	–44,63 ±	2,59 ±	7/7	59
	0,3 qd			17,46	1,50

q2d: один раз в два дня

% T/C рассчитывали, используя группу, получавшую 0,3 мг/кг траметиниба q2d, в качестве контроля.

Эксперимент оценивали в день 38 исследования. * р=0,0041 (30 мг/кг соединения формулы (I) qd+0,3 мг/кг траметиниба q2d относительно группы, обработанной 0,3 мг/кг траметиниба q2d), ** p<0,0001 (30 мг/кг соединения формулы (I) qd+0,3 мг/кг траметиниба qd относительно группы, обработанной 0,3 мг/кг траметиниба q2d) (однофакторный дисперсионный анализ с критерием Данна для множественных сравнений).

Противоопухолевая активность комбинации соединения формулы (I) и ингибитора MEK в моделях KRAS–мутантного колоректального рака

Опухоли колоректального рака (CRC) HCT116 (KRAS G13D) приживляли самкам голых мышей. Когда опухоли достигали примерно 230 мм³, мышей рандомизировали в соответствии с объемом опухоли на группы обработки (n=6). Обработку начинали в день 14 после имплантации ксенотрансплантата. Противоопухолевую активность определяли в день 31 после имплантации опухолевых клеток (последний день для мышей, обработанных средой–носителем).

Тестируемые средства во время курса обработки вводили перорально один раз в день (qd) или один раз в два дня (q2d) при уровнях дозы, указанных на фигуре 16 (А), при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 2 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки. Соединение формулы (I), вводимое в дозе 100 мг/кг qd, обеспечивало 30% Т/С, в то время как траметиниб, вводимый в дозе 0,3 мг/кг qd, обеспечивал 44% Т/С через 17 дней после введения доз. Комбинирование соединения формулы (I), вводимого в дозе 100 мг/кг qd, с траметинибом, вводимым в дозе 0,3 мг/кг q2d, приводило к 26% регрессии через 17 дней после введения доз (фигура 16). В день 24 после имплантации опухоли одну мышь умерщвляли из–за повышенной потери массы тела. В день 31, являющийся последним днем обработки средой–носителем, у мышей, которых обрабатывали соединением формулы (I), суммарная потеря массы тела составила 4%; мыши, получавшие траметиниб, продемонстрировали 3,5% потерю массы тела, а мыши, получавшие комбинацию соединения формулы (I) и траметиниба, показали 9% потерю массы тела.

Противоопухолевая активность комбинации соединения формулы (I) и ингибитора MEK в моделях рака PDAC

Опухоли 2043 PDAC (KRAS^G12D), полученные от пациентов, приживляли самкам голых мышей. Когда опухоли достигали примерно 230 мм³, мышей рандомизировали в соответствии с объемом опухоли на группы обработки (n=6). Обработку начинали в день 52 после имплантации ксенотрансплантата. Противоопухолевую активность определяли в день 73 после имплантации опухолевых клеток.

Тестируемые средства во время курса обработки вводили перорально один раз в день (qd) или один раз в два дня (q2d) при уровнях дозы, указанных на фигуре 17 А, при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 2 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки. Соединение формулы (I), вводимое в дозе 100 мг/кг qd, обеспечивало 55% Т/С, в то время как траметиниб, вводимый в дозе 0,3 мг/кг qd, обеспечивал 32% Т/С через 21 день после введения доз. Комбинирование соединения формулы (I), вводимого в дозе 100 мг/кг qd, с траметинибом, вводимым в дозе 0,3 мг/кг q2d, приводило к 35% регрессии через 21 день после введения доз (фигура 17). В день 66 после имплантации опухоли одну мышь умерщвляли из–за повышенной потери массы тела. В день 73, являющийся последним днем обработки комбинацией, у мышей, получавших соединение формулы I, суммарная потеря массы тела составила 0,6%; мыши, получавшие траметиниб, продемонстрировали 0,3% прирост массы тела, а мыши, получавшие комбинацию соединения формулы (I) и траметиниба, показали 9,6% потерю массы тела.

Противоопухолевая активность комбинации соединения формулы (I) и ингибитора MEK в моделях рака, представляющего собой меланому

Противоопухолевую активность комбинации соединения формулы (I) и ингибитора MEK в нескольких ксенотрансплантатах NRAS–мутантной меланомы человека

изучали следующим образом.

(i) Модели меланомы SKMEL30

Опухоли меланомы SKMEL30 (NRAS^Q61K) приживляли самкам голых мышей. Средства для обработки вводили при объеме дозы 10 мл/кг. Мышей рандомизировали на группы обработки (n=9) в день 12 после имплантации опухоли, когда средний объем опухоли составлял 190 мм3. Противоопухолевую активность определяли в день 34 после имплантации опухолевых клеток; через 22 дня после начала обработки.

Тестируемые средства во время курса обработки вводили перорально один раз (qd) или два раза в день (bid) при уровнях дозы, указанных на фигуре 18, при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 2 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки. В день 34, являющийся последним днем участия в исследовании группы, получавшей среду–носитель, соединение формулы (I) приводило к 5% регрессии опухоли, в то время как 0,3 мг/кг траметиниба приводили к 8% T/C. Комбинация соединения формулы (I) с траметинибом в дозе 0,15 мг/кг qd приводила к дополнительному увеличению противоопухолевой активности до 48% регрессии опухоли по сравнению с группой, получавшей среду–носитель (фигура 18). Все группы обработки хорошо переносили обработку с минимальной потерей массы тела на протяжении всего исследования. Группам, получавшим отдельные средства, вводили дозы непрерывно на протяжении всего исследования; для группы, получавшей комбинацию соединения формулы I и траметиниба, был предоставлен краткий перерыв только в отношении траметиниба (с дня 28 по день 31 день), после чего возобновляли введение полной комбинации до конца исследования.

(ii) Модель NRAS–мутантной меланомы 20667

Опухоли меланомы "20667" (NRAS^Q61R), полученные от пациента, приживляли самкам голых мышей. Когда опухоли достигали примерно 300 мм³, мышей рандомизировали в соответствии с объемом опухоли на группы обработки (n=7). Обработку начинали в день 17 после имплантации ксенотрансплантата. Противоопухолевую активность отдельных средств определяли в день 34 после имплантации опухоли, тогда как противоопухолевую активность комбинации соединения формулы (I) и траметиниба определяли в день 48 после имплантации опухолевых клеток.

Тестируемые средства во время курса обработки вводили перорально один раз в день (qd) или два раза в день (bid) при уровнях дозы, указанных на фигуре 19, при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 2 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки. Соединение формулы (I), вводимое в дозе 100 мг/кг qd, обеспечивало 87% Т/С, в то время как траметиниб, вводимый в дозе 0,3 мг/кг qd, обеспечивал 82% Т/С через 17 дней после введения доз. Комбинирование соединения формулы (I), вводимого в дозе 50 мг/кг bid, с траметинибом, вводимым в дозе 0,3 мг/кг qd, приводило к 68% регрессии через 31 день после введения доз (фигура 19). Все группы обработки хорошо переносили обработку с минимальной потерей массы тела на протяжении всего исследования.

(iii) Модель NRAS–мутантной меланомы 21124

Опухоли меланомы "21124" (NRAS^Q61H), полученные от пациента, приживляли самкам голых мышей. Когда опухоли достигали примерно 300 мм³, мышей рандомизировали в соответствии с объемом опухоли на группы обработки (n=5). Обработку начинали в день 45 после имплантации ксенотрансплантата. Противоопухолевую активность определяли в день 66 после имплантации опухолевых клеток.

Тестируемые средства во время курса обработки вводили перорально один раз в день (qd) или два раза в день (bid) при уровнях дозы, указанных на фигуре 20, при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 2 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки. Соединение формулы (I), вводимое в дозе 100 мг/кг qd, обеспечивало 10% Т/С, в то время как траметиниб, вводимый в дозе 0,3 мг/кг qd, обеспечивал 54% Т/С через 17 дней после введения доз. Комбинирование соединения формулы (I), вводимого в дозе 50 мг/кг bid, с траметинибом, вводимым в дозе 0,0375 мг/кг qd, приводило к 40% регрессии через 21 день после введения доз (фигура 20). Все группы обработки хорошо переносили обработку без потери массы тела на протяжении всего исследования.

(iv) Модель NRAS–мутантной меланомы "20864"

Опухоли меланомы "21124" (NRAS^Q61H), полученные от пациента, приживляли самкам голых мышей. Когда опухоли достигали примерно 300 мм³, мышей рандомизировали в соответствии с объемом опухоли на группы обработки (n=5). Обработку начинали в день 19 после имплантации ксенотрансплантата. Противоопухолевую активность отдельных средств определяли в день 33 после имплантации опухоли, тогда как противоопухолевую активность комбинации соединения формулы (I) и траметиниба определяли в день 55 после имплантации опухолевых клеток.

Тестируемые средства во время курса обработки вводили перорально один раз в день (qd) или два раза в день (bid) при уровнях дозы, указанных на фигуре 21, при объеме вводимых доз, составляющем 10 мл/кг массы тела животного. Объемы опухолей измеряли с помощью цифрового штангенциркуля 2 раза в неделю, а массу тела каждого животного регистрировали на протяжении курса обработки. Соединение формулы (I), вводимое в дозе 50 мг/кг bid, обеспечивало 30% Т/С, в то время как траметиниб, вводимый в дозе 0,3 мг/кг qd, обеспечивал 84% Т/С через 14 дней после введения доз. Комбинирование соединения формулы (I), вводимого в дозе 50 мг/кг bid, с траметинибом, вводимым в дозе 0,0375 мг/кг qd, приводило к 12% регрессии через 36 дней после введения доз (фигура 21). В день 33 2 мыши в группе, получавшей комбинацию, умерщвляли для исследований фармакодинамики, и эффективность оценивали при n=3 в течение оставшейся части исследования. Все группы обработки хорошо переносили обработку с минимальной потерей массы тела на протяжении всего исследования.

В совокупности, эти данные предполагают, что комбинированное лечение соединением формулы (I) и траметинибом может обеспечивать достижение более сильных и более продолжительных ответов у пациентов с активированным сигнальным путем MAPK вследствие мутаций с приобретением функции в сигнальном пути MAPK. Некоторые из испытанных доз комбинации показали небольшую потерю массы тела (до 10%), однако большинство испытанных доз комбинации являлись хорошо переносимыми, о чем можно судить по минимальной потере массы тела.

Пример 3. Фаза I исследования соединения формулы (I) отдельно и в комбинации с траметинибом у взрослых пациентов с солидными опухолями на поздней стадии, которые характеризуются нарушениями сигнального пути MAPK

Рекомендованная начальная доза и схема для соединения формулы (I) в качестве отдельного средства в этом исследовании составляет 100 мг один раз в день (QD) перорально исходя из доклинических данных по безопасности, переносимости, данных фармакокинетики (PK) и/или фармакодинамики (PD), полученных в доклинических исследованиях, а также предварительного прогнозирования диапазона эффективных доз для человека, чтобы минимизировать воздействие потенциально токсичных уровней лекарственного средства при одновременном ограничении числа пациентов, которые могут получить неактивные дозы.

Предусмотрены начальные дозы, составляющие 100 мг, 200 мг, 250 мг, 300 мг или 400 мг; предварительные данные свидетельствуют о том, что начальная доза, составляющая 250 мг один раз в день (QD), может быть эффективной в отношении солидных опухолей. Для максимальной гибкости введения доз соединение формулы (I) можно получать в виде 50 мг и/или 100 мг таблеток для перорального введения. В доклинических исследованиях было продемонстрировано, что схема QD является эффективной и переносимой. В ксенотрансплантатах Calu6 аналогичные уровни эффективности достигались при использовании схем, предусматривающих либо введение QD, либо разделенное введение два раза в день (BID), свидетельствуя о том, что эффективность связана с общим воздействием. Прогнозирование PK и прогнозирование периода полувыведения (~9 ч.) у человека также дает основания предполагать, что эффективное воздействие может достигаться при использовании дозирования QD.

Повышение дозы соединения формулы (I) в комбинации с ингибитором MEK, например траметинибом, будет начинаться согласно схеме введения доз, определенной для соединения формулы (I) в качестве отдельного средства: начальная доза соединения формулы (I) может быть ниже, чем доза отдельного средства. Таким образом, выбор этой дозы должен минимизировать воздействие потенциально токсичных уровней лекарственного средства, сокращая при этом количество пациентов, которые могли бы получить дозы, слишком низкие для обеспечения надлежащей эффективности. Ингибитор MEK, например траметиниб, будет вводиться в фиксированной дозе 2 мг, которая является рекомендуемой дозой для отдельного средства.

В части исследования с расширенным применением максимально переносимой дозы пациенты в группе комбинированной терапии будут получать лечение в соответствии с рекомендуемыми дозой и схемой введения для комбинации лекарственных средств исходя из данных, полученных в ходе исследования с повышением дозы.

В исследованиях комбинации предусматриваются суточная доза 400 мг соединения формулы (I) QD и суточная доза 1 мг траметиниба или суточная доза 400 мг соединения формулы (I) и суточная доза 2 мг траметиниба. Суточную дозу соединения формулы (I) предпочтительно можно вводить два раза в день, тогда как суточную дозу траметиниба вводят один раз в день. Также можно вводить другие дозы, такие как указанные в таблице ниже.

Таблица. Уровни доз комбинации соединения формулы (I) и траметиниба

Суточная доза для соединения формулы (I)^*	Суточная доза для траметиниба^*
100 мг	0,5 мг, 1,0 мг, 1,5 мг или 2,0 мг
200 мг	0,5 мг, 1,0 мг, 1,5 мг или 2,0 мг
400 мг	0,5 мг, 1,0 мг, 1,5 мг или 2,0 мг
800 мг	0,5 мг, 1,0 мг, 1,5 мг или 2,0 мг
1200 мг	0,5 мг, 1,0 мг, 1,5 мг или 2,0 мг

*Суточные дозы соединения формулы (I) или траметиниба, или и того и другого, можно вводить один или два раза в день.

Кроме того, эффективную дозировку можно определить с помощью отслеживания биомаркеров, указывающих на ингибирование сигнального пути MAP–киназы. В частности, DUSP6 (фосфатаза 6 с двойной специфичностью) является известным биомаркером для этого сигнального пути, и было показано, что in vivo уровни DUSP6 у субъекта, получающего дозу соединения формулы (I), снижаются, что связано с эффективными уровнями соединения формулы (I) в плазме. Таким образом, DUSP6 можно использовать в качестве фармакодинамического биомаркера у субъектов, получающих лечение соединением формулы (I) либо в виде отдельного средства, либо в комбинации с ингибитором MEK.

Пример 4. N–(2–метил–5'–морфолино–6'–((тетрагидро–2H–пиран–4–ил)окси)–[3,3'–бипиридин]–5–ил)–3–(трифторметил)бензамид

Соединение формулы (II) представляет собой морфолинзамещенное биарильное соединение следующей структуры:

Соединение (II).

Соединение формулы (II) представляет собой ингибитор B–Raf и C–Raf. Раскрыто данное соединение, и его получение описано в примере 131 в опубликованной заявке согласно РСТ на патент WO 2014/151616.

Пример 4A

Соединение формулы (II) представляет собой ингибитор типа II, ингибирующий как мутантные B–Raf и C–Raf, так и B–Raf и C–Raf дикого типа.

Таблица 5. Полумаксимальная ингибирующая концентрация (IC–50) соединения формулы (II) в отношении B–Raf, B–Raf V600E и C–Raf

Мишень	IC₅₀ [мM] ингибирования киназной активности	% связывания мишени в концентрации 1 мM
BRAF	0,0015	99,7
BRAF^V600E	0,001	99,9
CRAF	0,0004	99,8

Пример 4B

Соединение формулы (II) характеризуется активностью в отношении многочисленных линий раковых клеток человека, которые экспрессируют мутации в сигнальном пути МАРК, как показано в нижеследующей таблице. Активность является особенно сильной в отношении клеточных линий, которые содержат по меньшей мере одну мутацию в BRAF или RAS.

Таблица 6. Эффект соединения формулы (II) в отношении пролиферации в панели линий раковых клеток человека

Линия клеток	IC₅₀ дабрафениба, [мM]	IC₅₀ соединения формулы (II) [мM]	Нарушение B–Raf/Ras
A375	0,003	0,13	Мутация BRaf
IPC–298	0,27	0,07	Мутация NRas
Calu–6	23	1,4	Мутация KRas
HCT116	17	0,98	Мутация KRas
Различные линии опухолевых клеток обрабатывали титрами доз соединения формулы (II) в течение 5 дней, и пролиферацию клеток определяли с применением люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter–Glo™.

Пример 4C

Сравнивали активность соединения формулы (II) и дабрафениба в линиях клеток, содержащих мутации BRAFV600, NRAS или KRAS (фигура 7). В клетках A375 как дабрафениб, так и соединение формулы (II) ингибировали фосфорилирование MEK и ERK до почти полного прекращения при 0,05 и 0,5 мкМ соответственно. Напротив, в трех клеточных линиях, содержащих либо мутацию NRAS, либо KRAS, обработка дабрафенибом при 0,05 и 0,5 мкМ приводила к увеличению фосфорилирования MEK и ERK и только при 5 мкМ показала умеренное ингибирование. Для сравнения, соединение формулы (II) продемонстрировало дозозависимое ингибирование фосфорилирования MEK и ERK без явной активации сигнального пути во всех трех RAS–мутантных моделях (минимальная активация pMEK в IPC–298 и HCT116) (фигура 7). Способность соединения формулы (II) ингибировать передачу сигналов пути была сопоставимой в клетках, несущих различные мутации RAS, и в клетках с мутацией BRAF V600 достигалось почти полное ингибирование pMEK и pERK при 0,5 мкМ.

Также исследовали антипролиферативную активность соединения формулы (II) и дабрафениба в этих клеточных линиях (фигура 8). Согласуясь с данными в отношении передачи сигналов, дабрафениб показал наиболее сильную антипролиферативную активность в клетках A375 с мутацией BRAF^V600E (IC₅₀=0,003 мкM), примерно в 100 раз меньшую активность в клетках IPC–298 NRAS^mut (IC₅₀=0,27 мкM) и очень слабую активность в двух клеточных линиях KRAS^mut (Calu–6 с IC₅₀=23 мкM, HCT116 с IC₅₀=17 мкM). Напротив, соединение формулы (II) показало меньший сдвиг дозы IC₅₀ на моделях RAS^mut по сравнению с моделью BRAF^mut и продемонстрировало зависимое от дозы подавление роста во всех исследованных клеточных линиях со значениями IC₅₀ 0,13 мкM, 0,07 мкM, 1,4 мкM и 0,98 мкM в A375, IPC–298, Calu–6 и HCT116 соответственно.

Аналогичный эксперимент с соединением формулы (I) также продемонстрировал, что соединение формулы (I) давало сходные результаты (см. таблицу ниже).

	Мономер BRAFV600E, pERK IC50 [мкM]	Мономер 2–госайта димера RAF дикого типа (WT), pERK IC50 [мкM]	Соотношение ингибирования димера/мономера
Дабрафениб	0,005	3	600
Соединение формулы (I)	0,059	0,078	1,3

Эти данные демонстрируют, что соединение формулы (I) и соединение формулы (II) проявляют способ ингибирования, отличный от такового у класса ингибиторов мономеров RAF. Их активность, ингибирующая как мономеры, так и димеры RAF, предполагает, что они должны быть эффективными в лечении опухолей, содержащих мутации BRAF или RAS, в отличие от дабрафениба, который вряд ли будет эффективен в RAS–мутантных опухолях.

Пример 4D

Антипролиферативную активность соединения формулы (II) проанализировали на широкой панели генетически охарактеризованных моделей линий раковых клеток человека. Активность соединения формулы (II) сравнивали с активностью дабрафениба в 357 клеточных линиях с мутациями в BRAF, KRAS или NRAS или дикого типа как для BRAF, так и для RAS (фигура 9). Каждая точка данных представляет значение IC50 ингибитора в клеточной линии после 3 дней обработки. С использованием IC50 ингибитора 5 мкМ в качестве порога, число чувствительных (IC50<5 мкМ) и нечувствительных (IC50 > 5 мкМ) линий указывали в каждой генетической группе для соединения формулы (II) и дабрафениба. Например, соединение формулы (II) проявляет антипролиферативную активность в линиях раковых клеток, которые несут мутацию, отличную от V600, с сопутствующей мутацией KRAS или без нее, в том числе в линии клеток рака яичника Hey–A8 (KRAS^G12D/BRAF^G464E, IC₅₀=0,63 мкM), клеточной линии рака молочной железы MDA–MB–231 (KRAS^G13D/BRAF^G464V, IC₅₀=3,4 мкM) и клеточной линии рака легкого NCI–H1666 (BRAF^G466V, IC₅₀=3,97 мкM). Для сравнения, ингибитор мономера BRAF дабрафениб имел IC₅₀ > 30 мкM во всех трех моделях клеточных линий. Данные проанализировали с помощью точного критерия Фишера, чтобы оценить, была ли значительно повышена чувствительность клеточных линий к обработке ингибитором в группе мутантов по сравнению с клеточными линиями дикого типа. Для соединения формулы (II) клеточные линии, несущие мутации B–Raf, KRAS или N–Ras, продемонстрировали значительно повышенную чувствительность по сравнению с теми, которые являются линиями дикого типа, со значениями p, составляющими 3,09×10^–17, 1,19×10^–4 и 1,26×10^–6 соответственно. Соотношения шансов составляют 28,9, 4,6 и 10,6 соответственно. Для сравнения, более высокая чувствительность к дабрафенибу была значимой только в клеточных линиях, несущих мутации B–Raf, но не с мутациями KRAS или N–Ras, со значениями p, составляющими 1,9×10^–15, 0,11 и 0,25 соответственно.

Пример 5. Противоопухолевая активность соединения формулы (II) в моделях KRAS–мутантного NSCLC

Как ингибирование передачи сигнала, так и противоопухолевую эффективность соединения формулы (II) исследовали на модели Calu–6 с мутацией KRAS in vivo. Ксенотрансплантаты опухоли Calu–6 получали путем имплантации клеток в 50% Matrigel™ подкожно в правый бок самок голых мышей (в возрасте 6–8 недель). Несущих опухоль мышей рандомизировали на группы обработки и вводили однократную пероральную дозу соединения формулы (II) в широком диапазоне размеров дозы (от 10 до 200 мг/кг). Затем опухолевые ткани собирали в нескольких временных точках после введения дозы для получения уровней фосфорилированной и общей MEK1/2 с использованием платформы MesoScale Discovery (MSD) или mRNA DUSP6 с помощью количественной ПЦР (qPCR). Как показано на фигуре 10, обработка соединением формулы (II) приводила к ингибированию фосфорилирования MEK дозозависимым образом как по степени, так и по продолжительности. Соединение формулы (II) в дозах 100 и 200 мг/кг было способно подавлять фосфорилированную MEK (pMEK) на более чем 50% в течение более 16 часов. Впоследствии противоопухолевую эффективность соединения формулы (II) оценивали на той же ксенотрансплантатной модели опухоли (фигура 11). Животным, несущим опухоль, вводили среду–носитель, соединение формулы (II) в дозе 10, 30, 100 или 200 мг/кг, вводимой перорально каждый день (qd) в течение 19 дней. Противоопухолевую активность определяли путем оценки процентной доли объема опухоли в группах обработки по сравнению с объемом опухоли в группе, получавшей среду–носитель (% T/C), или процента регрессии опухоли по сравнению с исходным объемом (% регрессии). Значения объема опухолей и массы тела собирали во время рандомизации и два раза в неделю в течение исследования. Объем опухоли определяли путем измерения с помощью штангенциркуля и рассчитывали с использованием модифицированной формулы эллипсоида, где объем опухоли (TV) (мм³) = [((l x w2) x 3,14159)) / 6], где l представляет собой самую длинную ось опухоли, а w представляет собой перпендикуляр к l. В отношении ингибирования pMEK обработка соединением формулы (II) приводила к дозозависимой противоопухолевой активности, начиная с 30 мг/кг (фигура 11). Обработка с применением 30 мг/кг соединения формулы (II) приводила к 52% T/C, тогда как обработка в дозе 100 и 200 мг/кг приводила к регрессии опухоли на 47% и 88% соответственно, согласуясь с более устойчивым ингибированием сигнального пути при двух более высоких уровнях дозы.

Для дополнительной оценки противоопухолевой активности соединения формулы (II) проводили крупномасштабный скрининг эффективности соединения формулы (II) in vivo на 23 моделях полученных от пациента ксенотрансплантатов (PDX), полученных от пациента с немелкоклеточным раком легкого (NSCLC) (фигура 12). Ответ опухоли представлен в виде каскадной диаграммы с наилучшим средним процентным изменением объема опухоли при обработке соединением формулы (II), и для опухолей отмечали статус мутации RAS или BRAF. Соединение формулы (II), вводимое в дозе 60 мг/кг или 200 мг/кг (▼) в день, приводило к ингибированию роста опухоли в подмножестве опухолей PDX NSCLC, в которых опухоли, несущие мутацию B–Raf, N–Ras или KRAS, преобладали среди опухолей с лучшим ответом. Одна из опухолей с мутацией B–Raf, HLUX1323, содержит мутацию D594N, которая, как было показано, активирует передачу сигналов, опосредованную димеризацией Raf, и соединение формулы (II) приводило к 26% сокращению опухоли в этой модели. Эти данные дополнительно подтверждают противораковую эффективность соединения формулы (II) как в раковых клетках с мутацией Ras, так и с мутацией B–Raf в результате его селективной активности в отношении ингибирования мономеров или димеров Raf и онкогенной передачи сигналов MEK/ERK.

Пример 6. Синергетическое действие соединения формулы (II) с ингибитором MEK

Подавление роста клеток HPAF–II (с мутацией KRAS) измеряли после обработки соединением формулы (II) или траметинибом в качестве отдельных средств или ими двумя в комбинации в широком диапазоне доз. Изоболограммы и показатели синергии получали для оценки активности комбинации. Как показано на фигуре 13, соединение формулы (II) в комбинации с траметинибом оказывало синергетический эффект в отношении ингибирования роста клеток HPAF–II с показателем синергии Loewe, составляющим 11,1.

Чтобы оценить влияние обработки комбинацией на ингибирование передачи сигналов относительно обработки каждым из средств отдельно, голых мышей, несущих ксенотрансплантаты опухолей HPAF–II, обрабатывали однократной дозой соединения формулы (II) в количестве 100 мг/кг, траметинибом в количестве 0,3 мг/кг или двумя ингибиторами в комбинации. Уровни mRNA DUSP6 в качестве меры активности сигнального пути определяли в образцах опухоли, собранных в различные моменты времени после введения дозы. Как показано на фигуре 14, обработка соединением формулы (II) приводила к 83% ингибированию DUSP6 через 4 часа (ч.) после введения дозы по сравнению с контролем со средой–носителем, однако это ингибирование не было длительным, о чем демонстрируют повышенные уровни DUSP6 через 16 и 24 часа после введения дозы. Аналогичным образом, обработка траметинибом приводила к частичному и временному ингибированию DUSP6. Напротив, комбинация соединения формулы (II) и траметиниба приводила к более устойчивому ингибированию DUSP6, демонстрируя более 80% ингибирования даже через 16 часов после введения дозы. Оценивали противоопухолевую эффективность различных обработок на одной и той же ксенотрансплантатной модели опухоли. Несущим опухоль животным вводили среду–носитель, соединение формулы (II) в дозе 100 мг/кг qd, траметиниб в дозе 0,3 мг/кг qd или их комбинацию в течение 10 дней (фигура 15). В отношении ингибирования DUSP6 обработка комбинацией соединения формулы (II) и траметиниба приводила к большей противоопухолевой активности, чем обработка любым из отдельных средств, приводя к 33% регрессии по сравнению с 40% T/C или 54% T/C для соединения формулы (II) или траметиниба соответственно (фигура 15). В совокупности, эти данные предполагают, что комбинированное лечение соединением формулы (II) и траметинибом обеспечивает достижение более сильных и более продолжительных ответов у пациентов с активированным сигнальным путем MAPK вследствие мутаций с приобретением функции в сигнальном пути MAPK. Ожидается также, что соединение формулы (I) в комбинации с траметинибом обеспечит достижение более сильных и более продолжительных ответов, чем лечение любым из средств в отдельности, приводя к усилению противоопухолевой активности у пациентов с активированным сигнальным путем MAPK вследствие мутаций с приобретением функции в сигнальном пути MAPK.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ

Все публикации, патенты и номера доступа, упомянутые в данном документе, настоящим включены в данный документ посредством ссылки в полном их объеме, как если бы каждая отдельная публикация или патент были конкретно и индивидуально указаны как включенные посредством ссылки.

ЭКВИВАЛЕНТЫ

Хотя были обсуждены конкретные варианты осуществления настоящего изобретения, приведенное выше описание является иллюстративным, а не ограничивающим. Многие вариации настоящего изобретения будут очевидны для специалистов в данной области техники после ознакомления с настоящим описанием и нижеприведенной формулой изобретения. Полный объем настоящего изобретения должен определяться посредством ссылки на пункты формулы изобретения наряду с полным объемом их эквивалентов, а также описанием наряду с такими вариациями.

Claims

1. Фармацевтическая комбинация, содержащая соединение формулы (I),

(I),

или его фармацевтически приемлемую соль,

и (b) траметиниб или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, где траметиниба сольват представлен в форме диметилсульфоксидного сольвата, для лечения рака, где рак характеризуется мутацией, выбранной из группы, состоящей из мутации BRAF, NRAS, KRAS и их комбинаций, где соединение формулы (I) вводят в дозе от приблизительно 50 до приблизительно 1200 мг в день и траметиниб вводят в дозе от приблизительно 0,125 мг до приблизительно 10 мг в день.

2. Фармацевтическая комбинация по п. 1, где комбинация предназначена для одновременного, последовательного или раздельного введения.

3. Фармацевтическая комбинация по п. 1 или 2 для лечения рака, необязательно, где рак представляет собой меланому, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), колоректальный рак (CRC), такой как MUTYH-ассоциированный полипоз (MAP), рак яичников, рак шейки матки или аденокарциному протоков поджелудочной железы (PADC).

4. Фармацевтическая комбинация для применения по п. 3, где рак экспрессирует мутацию MAPK, или где рак является NRAS–мутантным или K–RAS–мутантным.

5. Фармацевтическая комбинация для применения по п. 3 или 4, где рак выбран из группы, состоящей из KRAS–мутантного NSCLC (немелкоклеточного рака легкого), NRAS–мутантной меланомы, KRAS–мутантного рака яичника и KRAS–мутантного рака поджелудочной железы (например, KRAS–мутантной аденокарциномы протоков поджелудочной железы (PDAC)).

6. Применение соединения, которое представляет собой соединение формулы (I)

(I),

или его фармацевтически приемлемую соль в комбинированной терапии с траметинибом, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, где траметиниба сольват находится в форме диметилсульфоксида сольвата и, где терапия представляет собой лечение рака, где рак характеризуется мутацией, выбранной из группы, состоящей из мутации BRAF, NRAS, KRAS и их комбинаций, где соединение формулы (I) вводят в дозе от приблизительно 50 до приблизительно 1200 мг в день и траметиниб вводят в дозе от приблизительно 0,125 мг до приблизительно 10 мг в день.

7. Применение по п. 6, где рак представляет собой меланому, немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), колоректальный рак (CRC), такой как MUTYH-ассоциированный полипоз (MAP), рак яичников, рак шейки матки или аденокарцинома протоков поджелудочной железы (PADC).

8. Применение по п. 7, где рак представляет собой меланому с мутацией N-RAS или NSCLC.

9. Применение по п. 8, где NSCLC представляет собой

(a) NSCLC с мутацией KRAS, NSCLC с мутацией BRAF или NSCLC как с мутацией KRAS, так и с мутацией BRAF; или же

(b) NSCLC характеризуется наличием мутации BRAF V600E или мутации BRAF, отличной от V600E.

10. Применение по любому из пп. 6-9, где рак представляет собой рак на поздней стадии или метастатический рак.

11. Применение по п. 7, где рак представляет собой меланому с мутацией BRAF V600 или NSCLC с мутацией BRAF V600.

12. Применение по п. 11, где меланома больше не отвечает на лечение ингибитором BRAF, например, дабрафенибом или вемурафенибом, и/или ингибитором MEK, например, траметинибом или кобиметинибом.

13. Применение по п. 7, где рак представляет собой меланому с мутацией BRAF V600, которая устойчива к лечению комбинацией дабрафениба и траметиниба или к лечению комбинацией вемурафениба и кобиметиниба, или

где рак представляет собой NSCLC с мутацией BRAF V600, который устойчив к лечению комбинацией дабрафениба и траметиниба.

14. Применение по п. 7, где наблюдалось прогрессирование рака, например, NSCLC или меланомы, после стандартного лечения или для него не существует эффективной стандартной терапии.

15. Фармацевтическая комбинация по любому из пп. 3-5, где рак представляет собой рак на поздней стадии или метастатический рак.

16. Фармацевтическая комбинация по п. 3, где рак представляет собой меланому с мутацией BRAF V600 или NSCLC с мутацией BRAF V600.

17. Применение по п. 11, где меланома больше не отвечает на лечение ингибитором BRAF, например, дабрафенибом или вемурафенибом, и/или ингибитором MEK, например, траметинибом или кобиметинибом.

18. Фармацевтическая комбинация по п. 3, где рак представляет собой меланому с мутацией BRAF V600, которая устойчива к лечению комбинацией дабрафениба и траметиниба или к лечению комбинацией вемурафениба и кобиметиниба, или

19. Фармацевтическая комбинация по п. 3, где наблюдалось прогрессирование рака, например, NSCLC или меланомы, после стандартного лечения или для него не существует эффективной стандартной терапии.